Protocol
Все процедуры в крови рисования должно быть сделано лицензированных и сертифицированных специалистов. Использование человеческих субъектов для исследования включает в себя одобрение от Institutional Review Board или другим соответствующим органом. Особые меры предосторожности в отношении информированного согласия и защиты идентификации участника должны быть выполнены. Все эксперименты, перечисленные в этом протоколе привлекать обращение человеческой крови и / или продуктов крови и средств личной защиты необходимо носить в любое время. Отходы должны рассматриваться как Biohazard и утилизировать в соответствии с действующими правилами.
1. венепункции
- Определить пациента / участник и подтвердите с существующими записями. Объясните подробно изучить и получить информированное согласие.
- Есть поднос настроить для индивидуального пациента с трубками, отмеченных на плоской устойчивой поверхности.
- Объясните процедуру и сделать место пациента комфортно с рукой поддерживается. Информировать пациента, что он или ше почувствуете небольшое шнура и должны оставаться на месте в течение всей процедуры.
- Прикрепите иглу к адаптеру.
- Вымойте руки и наденьте перчатки.
- Подготовка локтевую ямку для венепункции по очистке 70% изопропилового спирта в концентрических кругов от центра наружу. Разрешить сайт до воздушно-сухого в течение 30 сек.
- Определение соответствующего вены при пальпации.
- Нанесите 3-4 жгут выше в месте прокола, убедившись, что это не слишком туго (в то же время чувствуя пульс радиальный).
- Выполните венепункции, вставив скос иглы 15-30 градусов к коже одним плавным движением. Нажмите пробирку для сбора крови через иглу и сбор 9 мл цельной крови.
- Снимите жгут. Извлеките трубку из иглы.
- Вывод иглу и применить марлевую площадь в месте прокола до удаления иглы. Утилизировать иглы в соответствующем контейнер для биологически опасных.
- Спросите пациента, чтобы сохранить прEssure в месте прокола.
- Этикетка трубы
- Проверьте место прокола, чтобы убедиться, кровотечение остановилось.
- Применить пластырь или ленты на марлевой площади, спросите, если пациент чувствует себя хорошо (нет боли, нет припухлости или светло головокружение)
- Спасибо пациента / участник перед сбросом.
2. L-PRF Подготовка
- Сразу же после венозной сбора крови в красно-превысила сухой стеклянной трубки, поместите его в центрифуге.
- Центрифуга при 400 мкг в течение 12 мин при комнатной температуре, после размещения соответствующего противовеса.
- Удалить трубку в конце цикла. Обратите внимание на три слоя: бедной тромбоцитами плазмы (РРР), обогащенной тромбоцитами фибрин (L-PRF) и РБК база (Рисунок 1).
- Аспирируйте PPP с помощью пипетки. С помощью пинцета осторожно потяните L-PRF, и поместить его в стерильной, перфорированной металлической сетки.
- Использование хирургического скальпеля, очистить большую часть РБК слоя тщательно оставляя баффу пальто нетронутыми.
- Аккуратно сжать сгусток L-PRF (используя стерильную металлическую пластину, приблизительный вес 225 г) в течение 30 сек. Плазмы, обедненной тромбоцитами будет выдавлен.
- Снимите пластину и аккуратно поднимите мембраны L-PRF. L-PRF мембраны готов к использованию в экспериментах 12.
3. Испытание на растяжение одноосное
- Место L-PRF мембраны (п = 6) на фильтровальной бумаге для простоты обращения и удар в "собачьих костей" с использованием заказ металлические штампы (2,75 мм в ширину в самом узком месте их с расчетной длиной 7,5 мм).
- Измерьте толщину каждого образца в трех точках и взять среднее.
- Тщательно заниматься мембраны L-PRF в центре челюсти тисков одноосной системы тестирования.
- Осторожно разорвать поддержку фильтром бумаги, чтобы разоблачить мембраны L-PRF.
- Программа прибор таким образом, чтобы Подвижная головка работает при постоянной скорости (10,0 мм / мин) и начать эксперимент, когда L-Пруф еще влажная.
- Запишите упругости, энергии для разрыва, и напряжение при разрыве от программного обеспечения, сопровождающего одноосной системы тестирования. Эти значения рассчитываются автоматически и не определяется пользователем ввод не требуется. Пожалуйста, смотрите рисунок 3.
4. Шов сохранение прочности
- Место L-PRF мембраны (N = 3) на фильтровальной бумаге для простоты обращения и нарезать прямоугольными образцов размером (10 мм х 25 мм) с использованием хирургического скальпеля.
- Измерить толщину каждого образца (в среднем 3).
- Делают крошечное отверстие в центре образца с использованием нержавеющей стали ортодонтического лигатуры провод (220 мкм в диаметре).
- Пропустите проволоку через лигатуры пинхол, чтобы сформировать петлю и закрепите его на разрывной машине. Поместите край мембраны L-PRF к нижней челюсти захвата 13.
- Программирование прибора таким образом, чтобы Подвижная головка работает с постоянной скоростью (10 мм / мин) и началаэксперимент.
- Запишите упругости, энергии для разрыва, и напряжение при разрыве от программного обеспечения, сопровождающего одноосной системы тестирования. Эти значения рассчитываются автоматически и не определяется пользователем ввод не требуется. Пожалуйста, смотрите рисунок 3.
5. морфологическое исследование
- Подготовка образцов L-PRF для экспертизы SEM с использованием 10 мм кожной биопсии удар и поместить их в 24-луночного планшета.
- Промыть образцов с PBS и исправить с 2,5% глутарового альдегида (в PBS) в течение 20 мин.
- Обезвоживают образцы погружением в последовательно возрастающих концентрациях этанола (50%, 70%, 80%, 90% и 100%) в течение 5 мин каждый.
- Treat 0,5 мл 100% гексаметилдисилазана (более гексаметилдисилазана) в течение 5 мин. Проветривать O / N, чтобы удалить избыток ГМДС 14.
- Образцы монтирования на окурки, используя двухсторонний скотч, брызгать слюной, пальто платины на 70 сек и изучать в сканирующем электронном микроскопе работает на разгоначества напряжение 20 кВ (или другой параметр).
6. генипин Сшивание L-PRF, трипсин восприимчивости и нингидринового анализе
- Чтобы приготовить генипин поперечно-сшитого L-PRF, промыть мембраны с PBS и замочить в 4 мл 1% раствора генипин (в 70% этаноле) в течение 48 ч. Промыть PBS до экспериментов, чтобы удалить лишнюю генипин 15, 16.
- Оценка стабильности генипин сшивания L-PRF его устойчивость к деградации трипсином. Место L-PRF мембраны (N = 3) и генипин сшитый L-PRF в 500 мкл 0,01% трипсина и инкубировали при 37 ° С в течение 3 дней с ежедневной сменой трипсина.
- Взвешивание образцов на 1 день до фермента экспозиции и в день 3. Разница в начале и в конце вес представляет ферментативной деградации 17.
- Определения количества поперечных сшивок в генипин лечение L-PRF (G-PRF) нингидрином анализа. Сначала подготовьте стандартный CURVе с помощью глицин (1 мМ 0,031 мМ) кривая установить взаимосвязь между концентрацией свободных аминокислот (FAA) и поглощения.
- Образцы тепла PRF с 1 мл 2% (вес / объем) нингидрином в течение 15 мин при 100 ° С.
- Дайте раствору остыть до комнатной температуры и добавить 1,5 мл 50% -ного этанола.
- Анализ оптическую плотность при 570 нм с помощью подходящего спектрофотометра.
- Определить процент сшивки по следующей формуле 15
7. МТС клеточной пролиферации Пробирной
- Растут MC3T3 (мыши свода черепа преостеобластами) в минимальной поддерживающей модификации Средняя -альфа (αMEM) в Т-75 колб, пока не получается 80% сливной монослоя.
- Подготовьте свежий, стерильный L-PRF мембрану (открыть L-PRF трубку внутри капот культуре клеток) и передать мембрану на новую клеточной культуры блюдо.
- Аспирируйте средств массовой информации из колбы и промыть монослой с PBS, добавляют 5 мл 0,05% трипсина и поместить колбу в 37 ° С инкубатор в течение 5 мин, пипетки содержимое колбы в пробирку для центрифугирования и центрифуги при 400 мкг в течение 5 минимум
- Декантировать супернатант осторожно нажмите на трубу, чтобы сломать осадок клеток и повторно приостанавливать 4 мл свежего альфа MEM, обойтись смесь суспензии клеток (50 мкл) и трипанового синего (50 мкл) в гемоцитометра и посчитать количество ячейки
- Семя 4x10 5 клеток в пределах 10 мм стеклянная клонирования колец, размещенных в верхней части L-PRF мембран сохраняют клетки в мембранах (кольца могут быть удалены после 24 часов).
- В день 4, промыть конструкции с PBS трижды в течение 10 мин.
- Добавить 1 мл бессывороточной среды и 200 мкл реагента MTS в каждую лунку и инкубируют в течение 2 ч при 37 ° С.
- Измерить поглощение от 200 мкл аликвоты при 490 нм.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Микроскоп сканирующий электронный образ сгустка L-PRF на различных участках (верхняя, нижняя и средняя) слой показано на фиг.2. Как можно видеть, верхняя часть состоит преимущественно из фибрина сети без каких-либо клеток. Средний слой обогащен тромбоцитов с признаками их активации и дегрануляции. Нижний слой имеет смесь лейкоцитов и эритроцитов, захваченных в фибрин матрицы.
Механические свойства были оценены в двух режимах: одноосное растяжение тестирования и испытания на прочность удерживания шва. Полученные результаты показывают, вязкоупругий поведение L-PRF. Даже если модуль упругости низкий (0,47 МПа), мембрана является жестким (энергия сломать, 5 Н · мм) и способен претерпевает значительные деформации (217%, рисунок 3). Данные испытаний удерживающей шва, является показателем способности мембраны быть пришит к ткани, предложил значительно жесткаяй деформируемый материал (модуль-0,2 МПа, деформации 140% и энергия сломать-3.2 N.mm) в L-PRF (Рисунок 4).
Одним из ограничений фибрина продуктов в регенеративной медицине является короткой биологической жизни. Изготовлен из эндогенного фибрина, L-PRF подвержен деградации фермента и подвергается фибринолиз. Для того чтобы оценить сопротивление L-PRF фермента опосредованной деградации-свежий L-PRF был подвергнут обработке трипсином (0,01%), и инкубировали при 37 о С. Мы наблюдали полную деградацию L-PRF в течение трех дней. Генипин сшивание L-PRF мембран уменьшилась деградации почти на 60% (рис 5).
Способность L-PRF мембран поддерживать рост клеток оценивали путем культивирования мышиных остеобластов свода черепа на сшитых и несшитых мембран. Несшитые сгустки прошли деградации различных уровнях в то время как генипин сшиты мембраны сохранили свою структуру и поддерживает CРост ELL (Рисунок 6).
Рисунок 1. Этапы генерации L-PRF. (А) после центрифугирования цельной крови в стеклянной трубке, три слоя будут видны. (Б) после декантации PPP, Г-PRF удаляется с помощью стерильного пинцета . (С) Красная базовая клеток крови после зачистки с помощью скальпеля и положил на перфорированной металлической пластине (D). После осторожного сжатия, ППС выдавливается и фирма L-PRF мембрана образована. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 3. Кривые напряжение-деформация следующие механической нагрузки L-PRF в одноосном режиме испытания на растяжение (A) и силы удержания швов (B). Загрузка структура каждого образца представлены в различном цвете. Одноосного растяжения данные тестирования (A) указывает на низкий модуль, большая упругая деформация и быстрое провал. По живота швом (B), L-PRF представляет собой мембрану, жестко (площадь под кривой), а также эластичный. Хорошо кластеризации данных свидетельствует минимальное изменение между образцами. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 4. Фотографии фактического отказа в тестировании шов прочности удержания. Толстый нержавеющей стали ортодонтическое вязь провод 220 мкм прошли через середину L-PRF и привязанные к верхней челюсти члена в разрывной машине. Другой конец был прикреплен к нижним зажимом и растягивается с постоянной скоростью. Обратите внимание на удлинение оболочки и ее устойчивости к разорвать, предполагая, отличную устойчивость L-PRF.ом / файлы / ftp_upload / 53221 / 53221fig4large.jpg "целевых =" _blank "> Нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 5. Деградация L-PRF мембран после инкубации в 0,01% трипсина. Все мембраны L-PRF полностью распалась в трипсин в течение 3 дней в то время как генипин сшитого L-PRF были 60% более стабильной. Это показывает, что химическая сшивка может быть жизнеспособной стратегией, чтобы улучшить долговечность L-PRF мембран при размещении в естественных условиях.
Рисунок 6. Влияние L-PRF сшивки на жизнеспособность клеток. Типичные изображения 4 дней культуры клеток на MC3T3 несшитых L-PRF (а), генипин-сшитые L-PRF (б)й тканевой культуры пластика (С). Несшитые L-PRF разлагается в культуре разной степени и показал активность клеток, похожий на пластик. Генипин сшитый L-PRF сохранили свою структуру и поддерживает выживание надежную клеток. Справа количественно данные (+ SD) от независимых экспериментов с тремя повторами. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Аутологичные концентраты тромбоцитов перспективных в области регенеративной медицины 18 из-за обилия факторов роста. Тем не менее, эти препараты часто не хватало определенную структуру, что делает хирургического вмешательства очень трудно. Много раз, суспензии и гели не фактически сохраняет в месте доставки, в результате чего непредсказуемым результатам. L-PRF представляет огромный прогресс в развитии концентратов тромбоцитов в том, что он, по существу, фирма фибрина мембрана с захваченными тромбоцитов. Эти твердые мембраны обладают отличными характеристиками управляемости, и может быть надежно зашивают на анатомически нужное место во время открытых операций. Тем не менее, его физические и биологические свойства относительно неизвестны.
L-PRF образуют последовательно, когда шаги, описанные выше, строго придерживались (рис 1). Одним из важных аспектов в создании хорошей L-PRF мембраны является Tiмне задержать между ничьей крови и центрифугирования. Успех L-PRF техники полностью зависит от скорости сбора крови и немедленной передачи в центрифугу 19, как правило, в течение одной минуты. Невозможно создать хорошо структурированный L-PRF сгусток (с его конкретного содержания клеток, матрица архитектуры и рост выпуска фактором профиль), если сбор крови продлевается и не однородным; небольшой некогерентного, рыхлая масса фибрина с неизвестным содержанием формируется вместо этого.
Было принято считать, что mechanobiological взаимодействия между клетками и внеклеточной матрицы (ECM) имеют решающее влияние на все аспекты поведения клеток в том числе миграции, пролиферации и дифференцировки 20,21. L-PRF, уникальный тип сгусток крови, формируется при определенных обстоятельствах и состоит из комплекса, разветвленной сети фибрина. L-PRF функции как предварительной ECM, который перевернулся в функциональную ткань во время лечения. Подвергаясь мechanical силы, успешные результаты исцеления зависят от структурной целостности L-PRF и, следовательно, выяснения их физические свойства имеет важное значение. Мы провели тестирование на разрыв одноосной (для выявления внутренних свойств материала) и тестирование хранения шов (для определения характеристик отказов) на свежем L-PRF. В отличие от PRP геля или запекшейся кровью, что не имеют определенных структур, L-PRF напоминает плотной соединительной ткани с превосходными характеристиками управляемости. Мы сообщаем модуль упругости 0,470 МПа (SD = 0,107) для L-PRF мембран и растянуть в два раза его первоначальной длиной до отказа (штамм 215%). Эти данные соответствуют с опубликованной литературе 22,23, который сообщил низкую жесткость (1-10 МПа) и высокого напряжения (до 150%), прежде чем нарушать. Разница в величинах может быть связано с использованием фибрина сети по сравнению с использованием АСМ анализа одного фибрина волокна в указанных выше исследований.
Сила удержания швов является хирургическимВажным параметром трансплантационных материалов и определяется как силы, необходимой, чтобы вытащить шов от трансплантата или вызвать стенка трансплантата на провал. Наши эксперименты используются прямой по процедуре (как определено ANSI 24). Усилие, необходимое для тянуть провод лигатуры через L-PRF 3,23 N.mm (SD = 0,329). В целом, мы обнаружили, что L-PRF быть механически прочным, способным выдержать нагрузки и способность растягиваться в два раза больше по напряженности и сохраняет швов хорошо (значительно деформирует прежде, чем рвать).
Отсутствие стабильности и структурной целостности L-PRF в биологических средах является основным ограничением в использовании в тканевой инженерии. Мы стремились решить этот вопрос путем химического сшивания L-PRF с помощью генипин. В отличие от gluteraldehyde что связано с токсичностью, генипин является естественным биологически молекула с низким цитотоксичности. После генипин лечения, мембраны были значительно устойчив в трипсина и Supported пролиферацию клеток в течение 4 дней. Тем не менее, только 20% L-PRF был сшит с генипин (определяется нингидрина анализа). Эти данные показывают, что в то время как химический сшивающий является жизнеспособной стратегией, другие альтернативы должны быть исследованы.
Основываясь на этих выводах, то ясно, что L-PRF роман биоматериала с уникальными свойствами: предсказуемой препарата из собственной крови, простота протокола, определенного архитектуры, впечатляющие механических свойств и обилием факторов роста из активированных тромбоцитов. Кровь давали свернуться при физиологических условиях без каких-либо воздействия антикоагулянтов, экзогенного тромбина и хлорида кальция. Все эти характеристики делают L-PRF перспективным биоматериала для использования в регенеративной медицине.
Одним из клинических вопросов для решения в применении L-PRF является неоднородность качества тромбоцитов и компонентов крови. В настоящее время очень мало известно оL-PRF генерируется из пациентов с расстройствами коагуляции или больных на препараты, которые влияют на свертываемость крови (гепарин, варфарин или ингибиторы тромбоцитов). Ответы на эти вопросы, несомненно, улучшит наше понимание заживления, а также внести свой вклад в продвижение поле персонализированной медицины.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Авторы не имеют ничего раскрывать и убедитесь, что нет никаких известных конфликтов интересов, связанных с данной публикации.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Needle 19G | BD | 305186 | |
| Needle Disposal Container | Fisherbrand | 14-827-122 | |
| Red-Topped Glass Collection Tube | BD | 8020129 | |
| Gauze Pads | Tyco | 5750 | |
| Bandage | Johnson & Johnson | 5005989 | |
| Surshield | Terumo | SV*S19BL | Safety winged infusion set |
| Blood Collection Assembly | BD | 303380 | |
| Tourniquets | BD | 367203 | |
| Brand Luer Adapter | Vacutainer | L42179 | |
| Intra-Spin System | Intra-Lock International | ISS110 | Centrifuge and Xpression L-PRF FabricationKit |
| Pipettes (Serological & Micro) | Corning | ||
| Scalpel | Exelint | 29552 | |
| MTS Bionix 200 | MTS Systems Corporation | Material testing systems | |
| MTS Test Works 4 | MTS Systems Corporation | ||
| Whatman Filter Paper | Whatman | 1004 070 | |
| SS Orthodontic ligature wire | Patterson Dental | 628-4228 | |
| 200 Proof Ethanol | Koptec | V1001 | |
| Hexamethyldisilazane (HMDS) | Aldrich | 440191 | |
| Aluminium Mounting Stubs | Ted Pella | 16324 | |
| Double Sided Carbon Tape | PELCO Tabs | 16084-1 | |
| Scanning Electron Microscope | JEOL | LV 5610 | |
| Trypsin | HyClone | SH30042.01 | |
| Cell Culture Incubator | Thermo Fisher Scientific Inc | 51026282 | |
| Antibiotic-Antimicotic | Gibco | 15240-062 | |
| Genipin | Wako | 078-03021 | |
| Cell Culture Media | Gibco | 12000-022 | Minimum Essential Medium-Alpha |
| MTS Reagent | Promega | G1118 | |
| PMS Reagent | Sigma | P9625 | |
| Spectrophotometer | BioTek | Epoch Spectrophotometer | |
| 10mm Glass Cloning Rings | Corning | 3166-10 | |
| T-75 Flask | Corning | 430641 | |
| DPBS | Corning | 55-031-PB | |
| Ninhydrin 98% | Aldrich | 454044 | |
| 24 Well Plate | Corning | 3987 | |
| Biopsy Punch | Acu Punch | P1025 | |
| Digital Micrometer | Pittsburgh | 68305 | |
| Glutaraldehyde | Sigma | G6257 | |
| 12 Well Plate | Corning | 3336 | |
| 96 Well Plate | Corning | 3596 |
References
- Marx, R. E., et al. Platelet-rich plasma Growth factor enhancement for bone grafts. Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod. 85 (6), 638-646 (1998).
- Rodriguez, I. A., Growney Kalaf, E. A., Bowlin, G. L., Sell, S. A. Platelet-rich plasma in bone regeneration: Engineering the delivery for improved clinical efficacy. BioMed Res In. 2014, (2014).
- Del Corso, M., et al. Current Knowledge and Perspectives for the Use of Platelet-Rich Plasma (PRP) and Platelet-Rich Fibrin (PRF). in Oral and Maxillofacial Surgery Part 1: Periodontal and Dentoalveolar Surgery. Curr Pharm Biotechno. 13 (7), 1207-1230 (2012).
- Mazzucco, L., Balbo, V., Cattana, E., Guaschino, R., Borzini, P. Not every PRP-gel is born equal Evaluation of growth factor availability for tissues through four PRP-gel preparations: Fibrinet, RegenPRP-Kit, Plateltex and one manual procedure. Vox San. 97 (2), 110-118 (2009).
- Fernández-Barbero, J. E., et al. Flow cytometric and morphological characterization of platelet-rich plasma gel. Clin Oral Implants Re. 17 (6), 687-693 (2006).
- Li, Z., Guan, J. Hydrogels for cardiac tissue engineering. Polymer. 3 (2), 740-761 (2011).
- Zhu, J., Cai, B., Ma, Q., Chen, F., Wu, W. Cell bricks-enriched platelet-rich plasma gel for injectable cartilage engineering – an in vivo experiment in nude mice. J Tissue Eng Regen Med. 7 (10), 819-830 (2013).
- Dohan, D. M., et al. Platelet-rich fibrin (PRF): a second-generation platelet concentrate. Part I: technological concepts and evolution. Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod. 101 (3), e37-e44 (2006).
- Dohan, D. M., et al. Platelet-rich fibrin (PRF): a second-generation platelet concentrate. Part II: platelet-related biologic features. Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod. 101 (3), e45-e50 (2006).
- Choukroun, J., et al. Platelet-rich fibrin (PRF): a second-generation platelet concentrate. Part V: histologic evaluations of PRF effects on bone allograft maturation in sinus lift. Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod. 101 (3), 299-303 (2006).
- Dohan Ehrenfest, D. M., Bielecki, T., et al. Do the Fibrin Architecture and Leukocyte Content Influence the Growth Factor Release of Platelet Concentrates? An Evidence-based Answer Comparing a Pure Platelet-Rich Plasma (P-PRP) Gel and a Leukocyte- and Platelet-Rich Fibrin (L-PRF). Curr Pharma Biotechno. 13 (7), 1145-1152 (2012).
- Dohan Ehrenfest, D. M., Rasmusson, L., Albrektsson, T. Classification of platelet concentrates: from pure platelet-rich plasma (P-PRP) to leucocyte- and platelet-rich fibrin (L-PRF). Trends Biotechno. 27 (3), 158-167 (2009).
- Mine, Y., et al. Suture Retention Strength of Expanded Polytetrafluoroethylene (ePTFE) Graft. Acta Med Okayam. 64 (2), 121-128 (2010).
- Braet, F., De Zanger, R., Wisse, E. Drying cells for SEM , AFM and TEM by hexamethyldisilazane: a study on hepatic endothelial cells. J Micros. 186 (1), 84-87 (1997).
- Yuan, Y., et al. The effect of cross-linking of chitosan microspheres with genipin on protein release. Carbohydr Poly. 68 (3), 561-567 (2007).
- Sell, S. A., et al. Cross-linking methods of electrospun fibrinogen scaffolds for tissue engineering applications. Biomed Mater. 3 (4), (2008).
- Gorczyca, G., et al. Preparation and characterization of genipin cross-linked porous chitosan-collagen-gelatin scaffolds using chitosan-CO2 solution. Carbohydr Poly. 102, 901-911 (2014).
- Rozman, P., Semenic, D. Chapter 15. The Role of Platelet Gel in Regenerative Medicine. Advances In Regenerative Medicine. Wislet-Gendebien, S. abine , In Tech. 319-349 (2011).
- Dohan Ehrenfest,, Lemo, D. M., Jimbo, N. Selecting a relevant animal model for testing the in vivo effects of Choukroun’s platelet-rich fibrin (PRF): Rabbit tricks and traps. Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod. 110 (4), 413-416 (2010).
- Guilak, F., Baaijens, F. P. Functional tissue engineering: Ten more years of progress. J Biomec. 47 (9), 1931-1932 (2014).
- Guilak, F., Butler, D. L., Goldstein, S. A., Baaijens, F. P. Biomechanics and mechanobiology in functional tissue engineering. J Biomec. 47 (9), 1933-1940 (2014).
- Collet, J. P., Shuman, H., Ledger, R. E., Lee, S. The elasticity of an individual fibrin fiber in a clot. Proc Natl Acad Sci. 102 (26), 9133-9137 (2005).
- Liu, W., et al. Fibrin fibers have extraordinary extensibility and elasticity. Science. 313 (5787), 634 (2006).
- American National Standard. Chapter 8: Test methods for vascular prostheses. Association for the Advancement of Medica lnstrumentation Guidance document: Cardiovascular Implants - Tubular vascular prostheses. , ANSI/AAMI/ISO. 33-34 (2001).
