Protocol
Alla förfaranden bloddragnings bör göras av licensierade och certifierade proffs. Användning av försökspersoner för forskning innebär godkännande från Institutional Review Board eller annan lämplig myndighet. Särskilda försiktighetsåtgärder rörande informerat samtycke och skydd deltagare identifiering måste följas. Alla försök som anges i detta protokoll innebär hantering av humanblod och / eller blodprodukter och lämplig personlig skyddsutrustning måste bäras vid alla tillfällen. Avfallet bör betraktas som biologiskt och omhändertas enligt gällande bestämmelser.
1. Venpunktion
- Identifiera patienten / deltagaren och bekräfta med befintliga register. Förklara studien i detalj och få ett informerat samtycke.
- Har ett fack som inrättats för enskilda patienten med rör markerade på en plan och stabil yta.
- Förklara förfarandet och göra patienten sätet bekvämt med armen stöds. Informera patienten om att han eller she kommer att känna en liten nypa och bör förbli stilla under hela förfarandet.
- Fäst nålen på adaptern.
- Tvätta händerna och handskar.
- Förbered armvecket för venpunktion genom rengöring med 70% isopropylalkohol i koncentriska cirklar från mitten och utåt. Låt webbplats till lufttorka i 30 sek.
- Identifiera lämplig ven genom palpation.
- Applicera stasen 3-4 i över punktionsstället se till att det inte är för hårt (men fortfarande känner radiella puls).
- Genomför venpunktionen genom att föra in avfasning av nålen 15-30 grader på huden i en jämn rörelse. Skjut bloduppsamlingsrör genom nålen och samla 9 ml helblod.
- Ta bort tryckförband. Ta bort röret från nålen.
- Dra ut nålen och tillämpa gasväv torget vid stickstället innan nålen avlägsnas. Kassera nålen i en lämplig behållare för riskavfall.
- Be patienten att bibehålla prEssure på injektionsstället.
- Märk rören
- Kontrollera stickstället för att vara säker har slutat blöda.
- Applicera plåster eller tejp över gasväv torget, frågar om patienten känner sig okej (ingen smärta, svullnad eller yrsel)
- Tack patienten / deltagaren före utsläpp.
2. L-PRF Förberedelse
- Omedelbart efter venös blodprovs i den röda topp torrt glasrör, placera den i centrifugen.
- Centrifugera vid 400 xg under 12 minuter vid RT efter att ha placerat en lämplig motvikt.
- Ta bort röret i slutet av cykeln. Lägg märke till tre skikt: plättfattig plasma (PPP), trombocytrik fibrin (L-PRF) och RBC bas (Figur 1).
- Aspirera PPP med hjälp av en pipett. Använda pincett dra försiktigt L-PRF ut och placera den i en steril, perforerad metallnät.
- Med hjälp av kirurgisk skalpell, skrapa den största delen av RBC skikt noggrant lämnar buffy kappa intakt.
- Komprimera försiktigt L-PRF koagel (med hjälp av sterila metallplattan, ungefärlig vikt 225 g) under 30 sekunder. Blodplättsfattig plasma kommer att pressas ut.
- Avlägsna plattan och försiktigt lyfta L-PRF-membran. L-PRF membranet är klar för användning i experiment 12.
3. enaxiala dragprovning
- Placera L-PRF-membran (n = 6) på ett filterpapper för enkel hantering och slå in "hund ben" med hjälp av skräddarsydda metall dör (2,75 mm bred vid sitt smalaste punkt med en mätsträcka av 7,5 mm).
- Mäta tjockleken på varje prov vid tre ställen och ta medelvärdet.
- Försiktigt ingrepp med den L-PRF-membran i mitten av käft greppen på enaxlig testsystem.
- Försiktigt riva Uppgiftslämnaren pappersstödet för att exponera L-PRF-membran.
- Programmera instrumentet så att det rörliga huvud arbetar vid en konstant hastighet (10,0 mm / min) och starta försöket när L-PRF fortfarande är våt.
- Anteckna elasticitetsmodul, energi för att bryta, och brottöjning från programvaran som medföljer enaxlig testsystem. Dessa värden beräknas automatiskt och ingen användardefinierad inmatning erfordras. Vänligen se fig 3.
4. Sutur Retentionstid Styrka
- Placera L-PRF-membran (n = 3) på ett filterpapper för enkel hantering och skär i rektangulära prover som mäter (10 mm x 25 mm) med hjälp av en kirurgisk skalpell.
- Mäta tjockleken av varje prov (i genomsnitt 3).
- Gör ett litet hål i centrum av provet med användning av det rostfria stålet ortodontiska ligaturtråd (220 | j, m i diameter).
- Passera ligaturtråden genom hål för att bilda en slinga och fäst den med dragprovningsmaskin. Placera kanten av den L-PRF-membranet till den nedre käften greppet 13.
- Programmera instrumentet så att det rörliga huvud arbetar vid en konstant hastighet (10 mm / min) och startexperimentet.
- Anteckna elasticitetsmodul, energi för att bryta, och brottöjning från programvaran som medföljer enaxlig testsystem. Dessa värden beräknas automatiskt och ingen användardefinierad inmatning erfordras. Vänligen se fig 3.
5. morfologisk undersökning
- Förbered L-PRF prover för SEM-undersökning med hjälp av en 10 mm dermal biopsistans och placera dem i en 24-brunnar.
- Tvätta proven med PBS och fixera med 2,5% glutaraldehyd (i PBS) i 20 minuter.
- Torka proverna genom nedsänkning i sekventiellt ökande koncentrationer av etanol (50%, 70%, 80%, 90% och 100%) under 5 minuter vardera.
- Behandla med 0,5 ml av 100% HMDS (hexametyldisilazan) för 5 minuter. Lufta O / N för att avlägsna överskott av HMDS 14.
- Mount prov på stubbar med hjälp av en dubbelhäftande tejp, sputter-kappa platina för 70 sek och undersöka i ett svepelektronmikroskop som arbetade vid ett accelbete spänning på 20 kV (eller lämplig inställning).
6. Genipin Tvärbindning av L-PRF, Trypsin känslighet och Ninhydrin analys
- För att framställa genipin tvärbunden L-PRF, skölj membran med PBS och blöt i 4 ml av en% genipin lösning (i 70% etanol) och 48 timmar. Skölj med PBS före experiment för att avlägsna överskott genipin 15, 16.
- Bedöma stabiliteten i genipin tvärbindning av L-PRF av dess motståndskraft mot nedbrytning genom trypsin. Placera L-PRF-membran (n = 3) och genipin tvärbunden L-PRF i 500 ul av 0,01% trypsin och inkuberades vid 37 ° C under 3 dagar med en daglig förändring av trypsin.
- Väg prover på dag 1 före enzym exponering och på dag 3. Skillnaden i början och slut vikt representerar enzymatisk nedbrytning 17.
- Kvantifiera mängden av tvärbindning i genipin behandlad L-PRF (G-PRF) genom ninhydrin analys. Först förbereda standard curve med hjälp av glycin (1 mM-0,031 mM) kurva för att fastställa sambandet mellan fri aminosyra koncentration (FAA) och absorbans.
- Värme PRF prover med 1 ml 2% (vikt / volym) ninhydrin för 15 minuter vid 100 ° C.
- Låt lösningen svalna till RT och tillsätt 1,5 ml 50% etanol.
- Analysera absorbansen vid 570 nm med användning av en lämplig spektrofotometer.
- Bestäm tvärbindning procentsats enligt formeln nedan 15
7. MTS cellprolifereringsanalys
- Väx MC3T3 (mus calvarial preosteoblaster) i Minimum Essential Medium -alfa modifiering (aMEM) i T-75 flaskor tills en 80% sammanflytande monolager erhålls.
- Bered en färsk, steril L-PRF-membran (öppna L-PRF röret inuti cellen kultur huva) och för över membran på en ny cellodlingsskål.
- Aspirera media från flaskan och skölj monoskiktet med PBS, tillsätt 5 ml 0,05% trypsin och placera kolven i 37 ° C inkubator under 5 min, pipett innehållet i kolven i ett centrifugrör och centrifugera vid 400 xg under 5 min.
- Dekantera supernatanten, knacka försiktigt på röret för att bryta cellpelleten och återsuspendera med 4 ml färsk α MEM, befria en blandning av cellsuspension (50 ^) och trypanblått (50 pl) i hemocytometer och räkna antalet celler
- Seed 4x10 5 celler inom 10 mm glaskloningsringar placeras ovanpå L-PRF membran för att behålla cellerna i membranen (ringarna kan tas bort efter 24 timmar).
- Vid dag 4, skölj konstruktioner med PBS tre gånger i 10 min.
- Tillsätt 1 ml av serumfritt medium och 200 | il MTS-reagens till varje brunn och inkubera i 2 h vid 37 ° C.
- Mät absorbansen från 200 l alikvoter vid 490 nm.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Svepelektronmikroskopbild av L-PRF koagulera vid olika sektioner (översta, mellersta och nedre) är skikt visas i figur 2. Såsom kan ses, är den övre delen består främst av fibrin nätverk utan celler. Mellanskiktet är berikad med blodplättar med tecken på deras aktivering och degranulering. Det undre skiktet har en blandning av leukocyter och röda blodkroppar inneslutna i en fibrinmatris.
De mekaniska egenskaperna utvärderades i två lägen: enaxlig dragprovning och sutur behålla hållfasthetstest. Resultaten visar viskoelastiska beteende L-PRF. Även om elasticitetsmodulen är låg (0,47 MPa), är membranet tuffa (brottenergi, 5 N · mm) och har förmåga att genomgå betydande deformering (217%, figur 3). Data från sutur retentionstid testning, en indikator på förmågan hos membranet som skall sutureras till vävnaderna, föreslog en signifikant tuff ennd deformerbart material (modul-0,2 MPa, drag 140% och energi att bryta 3,2 N.mm) i L-PRF (Figur 4).
En av begränsningarna av fibrin produkter i regenerativ medicin är dess korta biologiskt liv. Tillverkad av endogena fibrin är mottagliga L-PRF att enzymnedbrytning och genomgår fibrinolys. För att utvärdera motståndskraften hos L-PRF att enzymmedierad nedbrytning, var färsk L-PRF kastades trypsinbehandling (0,01%) och inkuberades vid 37 ° C Vi observerade fullständig nedbrytning av L-PRF inom tre dagar. Genipin tvärbindning av L-PRF-membran minskade nedbrytning med nästan 60% (Figur 5).
Förmågan hos L-PRF-membran för att stödja celltillväxt utvärderades genom odling mus calvarial osteoblaster på tvärbundna och icke tvärbundna membran. Otvärbundna proppar gick nedbrytning till olika nivåer medan genipin tvärbundna membranen behöll sin struktur och stödde cell tillväxt (Figur 6).
Figur 1. Stegen i genereringen av L-PRF. (A) Efter centrifugering av helblod i ett glasrör, kommer tre skikt att synliggöras. (B) Efter dekantering PPP, L-PRF tas bort med hjälp av en steril pincett . (C) Den röda blodkroppar bas är skrapas bort med en skalpell och lagd på en perforerad metallbricka (D). Efter ett lätt tryck är PPP pressas ut och en fast L-PRF-membran bildas. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 3. Stress-töjningskurvor efter mekanisk belastning av L-PRF i enaxlig dragprovning läge (A) och Suture behålla styrka (B). Den laddningsmönster för varje prov visas i annan färg. De enaxlade drag testdata (A) tyder på en låg modul, en stor elastisk deformation och en snabb misslyckande. Vid utvidgning av en sutur (B), L-PRF representerar ett membran som är hård (ytan under kurvan) samt uttänjbar. Bra klustring av data tyder på minimal variation mellan prover. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 4. Fotografier av faktiska fel i sutur retentionstid hållfasthetsprovning. En 220 | j, m tjockt rostfritt stål ortodontisk ligaturtråd leddes genom mitten av L-PRF och bundna till den övre käftdelen av dragprovningsmaskin. Den andra änden fästes till det nedre greppet och sträcktes med en konstant hastighet. Lägg märke till förlängning av membranet och dess motstånd mot riva, vilket tyder på utmärkt motståndskraft L-PRF.om / filer / ftp_upload / 53221 / 53221fig4large.jpg "target =" _ blank "> Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 5. Nedbrytning av L-PRF-membran efter inkubation i 0,01% trypsin. Alla L-PRF-membran upplöstes helt i trypsin inom 3 dagar medan genipin tvärbunden L-PRF var 60% mer stabil. Detta visar att kemisk tvärbindning kan vara en hållbar strategi för att förbättra livslängden för L-PRF-membran när den placeras in vivo.
Figur 6. Effekt av L-PRF tvärbindning på cellviabilitet. Representativa bilder av fyra dagars odling av MC3T3 celler på icke tvärbunden L-PRF (A), genipin-tvärbunden L-PRF (B) ennd vävnadsodlingsplast (C). Otvärbunden L-PRF ned i kultur till variabel omfattning och visade cellaktivitet som liknar plast. Genipin tvärbunden L-PRF behöll sin struktur och stöd robust cellöverlevnad. Till höger är kvantifierade data (+ SD) från oberoende experiment med tre replikat. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Autologa blodplättskoncentrat är lovande inom regenerativ medicin 18 på grund av överflödet av tillväxtfaktorer. Men dessa preparat saknade ofta en definierad struktur som gör kirurgisk manipulation mycket svårt. Många gånger är de suspensioner och geler inte kvarhålles på ett effektivt sätt vid platsen för leverans, vilket resulterar i oförutsägbara utfall. L-PRF representerar ett stort framsteg i utvecklingen av trombocytkoncentrat att det är i huvudsak en fast fibrin membran med infångade blodplättar. Dessa fasta membran har utmärkta köregenskaper, och kan säkert sys på ett anatomiskt önskad plats under öppna operationer. Men dess fysikaliska och biologiska egenskaper är relativt okända.
L-PRF bildar konsekvent när stegen ovan beskrivna strikt (Figur 1). En av de viktigaste faktorerna i att generera en bra L-PRF-membran är timig dröjsmål mellan blodprovstagning och centrifugering. Framgången för L-PRF-tekniken beror helt på hur snabb blodinsamling och omedelbar överföring till centrifugen 19, vanligtvis inom en minut. Det är omöjligt att skapa en välstrukturerad L-PRF koagel (med dess specifika cellinnehåll, matris arkitektur och tillväxtfaktor frisättningsprofil), om blod skörd förlängs och inte homogen; ett litet osammanhängande, spröd massa av fibrin med okänd halt bildas istället.
Det har accepterat att mechanobiological interaktioner mellan celler och extracellulära matrix (ECM) har en avgörande inverkan på alla aspekter av cellens beteende inklusive migration, proliferation och differentiering 20,21. L-PRF, en unik typ av blodpropp bildas under särskilda omständigheter och består av komplexa, förgrenade nätverk av fibrin. L-PRF fungerar som en provisorisk ECM som vänds till funktionell vävnad under läkning. Att utsättas för mechanical krafter, framgångsrika läkande resultat är beroende av den strukturella integriteten av L-PRF och därmed belysa deras fysikaliska egenskaper är viktig. Vi utförde enaxlig dragprovning (för att identifiera de inneboende materialegenskaper) och sutur behålla testning (för att identifiera fel egenskaper) på färsk L-PRF. Till skillnad från PRP gel eller levrat blod som inte har en definierade strukturer, L-PRF liknar tät bindväv med överlägsna hanteringsegenskaper. Vi rapporterar en elasticitetsmodul av 0,470 MPa (SD = 0,107) för L-PRF membran och sträcka två gånger sin ursprungliga längd innan brott (stam av 215%). Dessa uppgifter överensstämmer med publicerad litteratur 22,23 som rapporterade låg styvhet (1-10 MPa) och hög stam (upp till 150%) innan den går. Skillnaden i värden kan bero på användningen av fibrinnätverket jämfört med användningen av AFM-analys av enstaka fibrin fiber i studierna ovan.
Suture behålla styrka är ett kirurgisktviktig parameter av transplantatmaterial och det definieras som den kraft som är nödvändig för att dra en sutur från transplantatet eller orsaka väggen av transplantatet att misslyckas. Våra experiment används rak över förfarandet (enligt ANSI 24). Den kraft som krävs för att dra ligaturtråden genom L-PRF av 3,23 N.mm (SD = 0,329). Sammantaget fann vi L-PRF vara mekaniskt starkt, kan stödja belastningar och förmåga att sträcka dubbelt så mycket på spänning och behåller suturer ganska bra (deformeras avsevärt innan rivning).
Bristen på stabilitet och strukturell integritet L-PRF i biologiska miljöer är en viktig begränsning i dess användning i vävnadsteknik. Vi försökte ta itu med det här problemet genom att kemiskt tvärbindande L-PRF använder genipin. Till skillnad gluteraldehyd som förknippas med toxicitet, är genipin en naturligt förekommande biologiskt nedbrytbar molekyl med låg cytotoxicitet. Efter genipin behandling, membranen var signifikant stabila i trypsin och Supported cellproliferation under 4 dagar. Men endast 20% av L-PRF tvärbunden med genipin (bestäms av ninhydrin analys). Dessa data tyder på att medan kemisk tvärbindning är en hållbar strategi, andra alternativ måste undersökas.
Baserat på dessa upptäckter, är det klart att L-PRF är en ny biomaterial med unika egenskaper: förutsägbara beredning från autologt blod, enkelhet protokoll, definierad arkitektur, imponerande mekaniska egenskaper och förekomst av tillväxtfaktorer från aktiverade blodplättar. Blodet tillåts koagulera under fysiologiska betingelser med ingen exponering för antikoagulantia exogent trombin och kalciumklorid. Alla dessa egenskaper gör L-PRF lovande biomaterial för tillämpningar inom regenerativ medicin.
En av de kliniska frågor att ta itu med i tillämpningen av L-PRF är heterogenitet i kvaliteten på blodplättar och blodkomponenter. För närvarande är mycket lite förstås omL-PRF genereras från patienter med koagulationsrubbningar eller patienter med läkemedel som påverkar blodets koagulation (heparin, warfarin eller trombocythämmare). Svaren på dessa frågor kommer utan tvekan att öka vår förståelse av healing samt bidra till att främja området för personlig medicin.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Författarna har ingenting att lämna ut och bekräfta att det inte finns några kända intressekonflikter i samband med denna publikation.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Needle 19G | BD | 305186 | |
| Needle Disposal Container | Fisherbrand | 14-827-122 | |
| Red-Topped Glass Collection Tube | BD | 8020129 | |
| Gauze Pads | Tyco | 5750 | |
| Bandage | Johnson & Johnson | 5005989 | |
| Surshield | Terumo | SV*S19BL | Safety winged infusion set |
| Blood Collection Assembly | BD | 303380 | |
| Tourniquets | BD | 367203 | |
| Brand Luer Adapter | Vacutainer | L42179 | |
| Intra-Spin System | Intra-Lock International | ISS110 | Centrifuge and Xpression L-PRF FabricationKit |
| Pipettes (Serological & Micro) | Corning | ||
| Scalpel | Exelint | 29552 | |
| MTS Bionix 200 | MTS Systems Corporation | Material testing systems | |
| MTS Test Works 4 | MTS Systems Corporation | ||
| Whatman Filter Paper | Whatman | 1004 070 | |
| SS Orthodontic ligature wire | Patterson Dental | 628-4228 | |
| 200 Proof Ethanol | Koptec | V1001 | |
| Hexamethyldisilazane (HMDS) | Aldrich | 440191 | |
| Aluminium Mounting Stubs | Ted Pella | 16324 | |
| Double Sided Carbon Tape | PELCO Tabs | 16084-1 | |
| Scanning Electron Microscope | JEOL | LV 5610 | |
| Trypsin | HyClone | SH30042.01 | |
| Cell Culture Incubator | Thermo Fisher Scientific Inc | 51026282 | |
| Antibiotic-Antimicotic | Gibco | 15240-062 | |
| Genipin | Wako | 078-03021 | |
| Cell Culture Media | Gibco | 12000-022 | Minimum Essential Medium-Alpha |
| MTS Reagent | Promega | G1118 | |
| PMS Reagent | Sigma | P9625 | |
| Spectrophotometer | BioTek | Epoch Spectrophotometer | |
| 10mm Glass Cloning Rings | Corning | 3166-10 | |
| T-75 Flask | Corning | 430641 | |
| DPBS | Corning | 55-031-PB | |
| Ninhydrin 98% | Aldrich | 454044 | |
| 24 Well Plate | Corning | 3987 | |
| Biopsy Punch | Acu Punch | P1025 | |
| Digital Micrometer | Pittsburgh | 68305 | |
| Glutaraldehyde | Sigma | G6257 | |
| 12 Well Plate | Corning | 3336 | |
| 96 Well Plate | Corning | 3596 |
References
- Marx, R. E., et al. Platelet-rich plasma Growth factor enhancement for bone grafts. Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod. 85 (6), 638-646 (1998).
- Rodriguez, I. A., Growney Kalaf, E. A., Bowlin, G. L., Sell, S. A. Platelet-rich plasma in bone regeneration: Engineering the delivery for improved clinical efficacy. BioMed Res In. 2014, (2014).
- Del Corso, M., et al. Current Knowledge and Perspectives for the Use of Platelet-Rich Plasma (PRP) and Platelet-Rich Fibrin (PRF). in Oral and Maxillofacial Surgery Part 1: Periodontal and Dentoalveolar Surgery. Curr Pharm Biotechno. 13 (7), 1207-1230 (2012).
- Mazzucco, L., Balbo, V., Cattana, E., Guaschino, R., Borzini, P. Not every PRP-gel is born equal Evaluation of growth factor availability for tissues through four PRP-gel preparations: Fibrinet, RegenPRP-Kit, Plateltex and one manual procedure. Vox San. 97 (2), 110-118 (2009).
- Fernández-Barbero, J. E., et al. Flow cytometric and morphological characterization of platelet-rich plasma gel. Clin Oral Implants Re. 17 (6), 687-693 (2006).
- Li, Z., Guan, J. Hydrogels for cardiac tissue engineering. Polymer. 3 (2), 740-761 (2011).
- Zhu, J., Cai, B., Ma, Q., Chen, F., Wu, W. Cell bricks-enriched platelet-rich plasma gel for injectable cartilage engineering – an in vivo experiment in nude mice. J Tissue Eng Regen Med. 7 (10), 819-830 (2013).
- Dohan, D. M., et al. Platelet-rich fibrin (PRF): a second-generation platelet concentrate. Part I: technological concepts and evolution. Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod. 101 (3), e37-e44 (2006).
- Dohan, D. M., et al. Platelet-rich fibrin (PRF): a second-generation platelet concentrate. Part II: platelet-related biologic features. Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod. 101 (3), e45-e50 (2006).
- Choukroun, J., et al. Platelet-rich fibrin (PRF): a second-generation platelet concentrate. Part V: histologic evaluations of PRF effects on bone allograft maturation in sinus lift. Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod. 101 (3), 299-303 (2006).
- Dohan Ehrenfest, D. M., Bielecki, T., et al. Do the Fibrin Architecture and Leukocyte Content Influence the Growth Factor Release of Platelet Concentrates? An Evidence-based Answer Comparing a Pure Platelet-Rich Plasma (P-PRP) Gel and a Leukocyte- and Platelet-Rich Fibrin (L-PRF). Curr Pharma Biotechno. 13 (7), 1145-1152 (2012).
- Dohan Ehrenfest, D. M., Rasmusson, L., Albrektsson, T. Classification of platelet concentrates: from pure platelet-rich plasma (P-PRP) to leucocyte- and platelet-rich fibrin (L-PRF). Trends Biotechno. 27 (3), 158-167 (2009).
- Mine, Y., et al. Suture Retention Strength of Expanded Polytetrafluoroethylene (ePTFE) Graft. Acta Med Okayam. 64 (2), 121-128 (2010).
- Braet, F., De Zanger, R., Wisse, E. Drying cells for SEM , AFM and TEM by hexamethyldisilazane: a study on hepatic endothelial cells. J Micros. 186 (1), 84-87 (1997).
- Yuan, Y., et al. The effect of cross-linking of chitosan microspheres with genipin on protein release. Carbohydr Poly. 68 (3), 561-567 (2007).
- Sell, S. A., et al. Cross-linking methods of electrospun fibrinogen scaffolds for tissue engineering applications. Biomed Mater. 3 (4), (2008).
- Gorczyca, G., et al. Preparation and characterization of genipin cross-linked porous chitosan-collagen-gelatin scaffolds using chitosan-CO2 solution. Carbohydr Poly. 102, 901-911 (2014).
- Rozman, P., Semenic, D. Chapter 15. The Role of Platelet Gel in Regenerative Medicine. Advances In Regenerative Medicine. Wislet-Gendebien, S. abine , In Tech. 319-349 (2011).
- Dohan Ehrenfest,, Lemo, D. M., Jimbo, N. Selecting a relevant animal model for testing the in vivo effects of Choukroun’s platelet-rich fibrin (PRF): Rabbit tricks and traps. Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod. 110 (4), 413-416 (2010).
- Guilak, F., Baaijens, F. P. Functional tissue engineering: Ten more years of progress. J Biomec. 47 (9), 1931-1932 (2014).
- Guilak, F., Butler, D. L., Goldstein, S. A., Baaijens, F. P. Biomechanics and mechanobiology in functional tissue engineering. J Biomec. 47 (9), 1933-1940 (2014).
- Collet, J. P., Shuman, H., Ledger, R. E., Lee, S. The elasticity of an individual fibrin fiber in a clot. Proc Natl Acad Sci. 102 (26), 9133-9137 (2005).
- Liu, W., et al. Fibrin fibers have extraordinary extensibility and elasticity. Science. 313 (5787), 634 (2006).
- American National Standard. Chapter 8: Test methods for vascular prostheses. Association for the Advancement of Medica lnstrumentation Guidance document: Cardiovascular Implants - Tubular vascular prostheses. , ANSI/AAMI/ISO. 33-34 (2001).
