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Neuroscience

Bedingungen, die sozialen Raum, in Published: November 5, 2015 doi: 10.3791/53242
Automatic Translation
1, 1, 2, 2, 2, 3, 3, 1
1Department of Biology, University of Western Ontario, 2Department of Biology, York College/CUNY, 3Department of Entomology, Cornell University

Abstract

Die hier beschriebene sozialen Raum Test kann verwendet werden, um soziale Interaktionen von Drosophila melanogaste r quantifizieren - oder andere kleine Insekten - auf einfache Weise. Wie wir früher gezeigt 1, in einem zweidimensionalen Raum, wir zuerst zwingen die entfernt, um eine feste Gruppe zu bilden, anschließend so ihre bevorzugte Abstand voneinander einnehmen. Nachdem die Fliegen angesiedelt haben, messen wir den Abstand zum nächsten Nachbarn (oder sozialer Raum), die Verarbeitung ein statisches Bild mit kostenlosen Online-Software (ImageJ). Die Analyse der Abstand zum nächsten Nachbarn ermöglicht es den Forschern, die Auswirkungen der genetischen und Umweltfaktoren auf die soziale Interaktion zu bestimmen, bei der Kontrolle für potenzielle Störfaktoren. Diverse Faktoren wie Steigfähigkeit, Tageszeit, Geschlecht und Anzahl der Fliegen, können soziale Abstand von Fliegen zu ändern. Wir schlagen daher vor, eine Reihe von experimentellen Kontrollen, diese verwirrende Auswirkungen zu mildern. Dieser Test kannfür wenigstens zwei Zwecke verwendet werden. Erstens können die Forscher bestimmen, wie ihre Lieblingsklimaverschiebung (wie Isolation, Temperatur, Spannung oder Toxine) werden soziale Abstand 1,2 auswirken. Zweitens können die Forscher die genetischen und neuronalen Grundlagen von dieser Grundform des Sozialverhaltens 1,3 zu sezieren. Insbesondere haben wir es als ein diagnostisches Werkzeug, um die Rolle von orthologen Genen vermutlich im Sozialverhalten in anderen Organismen, wie zum Beispiel Kandidatengene für Autismus bei Menschen 4 einbezogen werden studieren.

Introduction

Soziale Interaktionen sind entscheidend für die richtige Entwicklung und Gesundheit von Personen innerhalb einer Gruppe als Ganzes, und kann auf zahlreiche Arten von Menschen (Homo sapiens) zu einfacheren Organismen wie Fruchtfliegen (Drosophila melanogaster) 5,6 beobachtet werden. Akustische, visuelle, Geruchs-, Tast- oder gustation: Eine individuelle Fruchtfliege oder Mensch haben gemeinsame Mittel zur sensorischen Informationen, die während dieser Interaktionen, sei es zu verarbeiten. Wir und andere Hypothese ist, dass es ein möglicherweise freigegebenen neurocircuitry Basiswert Verhaltensreaktionen auf soziale Interaktionen, und dass die neuronalen Zellen und Genen beteiligt sein könnten evolutionär konservierten 7. Sobald die erste Wechselwirkung stattgefunden hat, wird die soziale Raum zwischen den interagierenden Individuen entweder erhöhen (soziale Vermeidung 8) oder verringern (Gruppenbildung / Aggregation 5). Komplizierter Wechselwirkungen, wie Aggression oder Balz, kann dann.

von Drosophila melanogaster zu bewerten, wie in den folgenden Studien 1-4,9 verwendet. Sozialraum bezieht sich auf ein Maß für die Entfernung zwischen einer Fliege und seine nächsten Nachbarn 10. Sozialen Raum ist konsistent für eine bestimmte Population von D. melanogaster als Versuchsbedingungen werden beibehalten (durchschnittlich etwa in 1-2 Körperlängen) und variiert in Bezug auf die soziale Erfahrung der Fliegen und erhöht, wenn das Individuum isoliert 1 gehalten. Proper Vision ist es notwendig, normale soziale Distanz zu halten, aber nicht klassische Riechstoffe bzw. CVA Wahrnehmung 1. Maß der sozialen Raum kann somitals diagnostisches Werkzeug, um soziale Interaktionen zu analysieren und zu quantifizieren, das soziale Verhalten in D. verwendet melanogaster 1. Wir beschreiben hier in Einzelheiten, wie Sie diese Quantifizierung durchzuführen, und in welchem ​​Umfang gemeinsame experimentelle Variablen beeinflussen dieses Verhalten.

Wir zeigen, dass die Ausrichtung der Kammer, in der der Test durchgeführt wird, sowie die Anzahl der Fliegen - in einem Ausmaß - zu tun beeinflusst sozialen Raum. Es wurde bereits gezeigt, dass die Kammergeometrie wirkt sich spontan explorativen Bewegung Fliegen 11,12, und dieses Phänomen kann letztendlich auswirken, wo sie sich niederlassen wollen. Doch solange die Flugdichte (fly / cm 2) und Kammer Orientierung gleich gehalten wird, bleibt auch der soziale Raum der Fliegen konstant. Die Robustheit dieses Tests wird durch die Tatsache, dass unabhängige Laboratorien mit unterschiedlichen Kammergrößen, die Form und Orientierung kann das Ergebnis durch Mutanten des wh angezeigt replizieren illustriertite-Gen (betrifft Auge Pigmentierung), was einer Steigerung sozialer Raum ist (vertikale Dreieck oder Horizontalkreis in 1, horizontal Platz mit Luftstrom in 3).

Unsere Ergebnisse zeigen auch, dass die Aufrechterhaltung der Zeitpunkt, zu dem der soziale Raum-Experiment durchgeführt wird ist entscheidend für die Konsistenz der Ergebnisse, wie wir zeigen, dass Männer, nicht aber Frauen, weiter auseinander in den Abendstunden gibt. Die Unterschiede zwischen Tages- und Abendstunden zu sehen sind jedoch nicht aufgrund von Aktivitätsunterschiede der Fliegen, und wir Argumente angibt, dass die Aktivitätsniveaus nicht mit sozialen Raum korreliert zu diskutieren.

Schließlich gibt es genetischen Grundlagen für die Bestimmung des sozialen Raums, wie sie in der weißen Mutante angegebenen bereits beschriebenen 1,3, und die Unterschiede zwischen verschiedenen Inzucht und wild gefangenen Stämme von Fliegen, die wir hier präsentieren.

Daher macht dieser Test ein ausgezeichnetes Werkzeug foder die Untersuchung der Auswirkungen von genetischen als auch Umweltfaktoren.

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Protocol

1. Geräte und Reagenzien Erstellt In-house (siehe Liste der Materialien für Others)

  1. Bereiten Sie eine Drosophila kalten Narkosegerät wie zuvor beschrieben, 8.
  2. Bereiten Sie eine Fliege Aspirator wie zuvor beschrieben 13.
  3. Bereiten sozialen Raum Kammern und Inhaber.
    1. Bestellen oder Glasscheiben und Acrylabstandshalter, um die sozialen Raum Kammern erstellen. Jeder Sozialraumkammer besteht aus zwei quadratischen Glasscheiben (17,6 cm x 17,6 cm, mit einer Dicke von 0,3 cm), zwei rechtwinkligen Dreiecks Acryldistanzstücke (mit einer Höhe von 16,5 cm, einer Basis von 8,9 cm, mit einer Dicke von 0,3 cm ) und zwei rechteckige Räume (9 cm × 1,5 cm mit einer Dicke von 0,3 cm) (1A).
    2. Montieren Sie das Glas und Acryl sozialen Raum Kammer, dass sie identisch mit der Kammer in 1B ist. Um dies zu tun, starten Sie, indem Sie eine dreieckige Abstandshalter flach auf einem Quadratglasscheibe, so dass die rechten Winkeldes dreieckigen Abstandshalter ist mit einer der Ecken der quadratischen Scheibe ausgerichtet ist. Als nächstes legen Sie die zweite dreieckige Abstands flach auf der Oberseite des quadratischen Bereich Spiegelung der ersten dreieckigen Abstandshalter.
      HINWEIS: Stellen Sie sicher, Handschuhe zu tragen, um nicht die Stücke mit Ölen und Gerüche von Ihren Händen zu verunreinigen.
    3. Legen Sie zwei kleine rechteckige Abstandshalter flach auf dem Platz Bereich entlang der Seite der Scheibe, die nicht abgedeckt ist. Die Acryl-Abstandshalter auf der Oberseite des quadratischen Ebene sollte jetzt bilden eine dreieckige Arena.
    4. Legen Sie einen zweiten quadratischen Glasscheibe auf der Oberseite der Acrylabstandshalter, so dass sie über der ursprünglichen Glasscheibe unten ausgerichtet ist.
    5. Verwenden Sie vier Binder Clips, um die Scheiben und Abstandshalter zu sichern zusammen, um den sozialen Raum Kammer zu bilden. Platzieren eines Clips in der Nähe der Ecke, über die lange Seite von jedem der dreieckigen Abstandshalter, Sichern sie im Inneren der Glasscheiben. Auf diesen gleichen Seiten, legen Sie einen Clip in der benachbarten Ecke, gegenüber jedem der rechteckigen Abstandhalter und sichern Sie sie inSeite der Glasscheiben.
    6. Bauen Sie ein Stativ und eine Flasche Klemme, so dass die Klemm den sozialen Raum Kammer in einer aufrechten Position zu halten, wie der soziale Raum Kammer ruht auf seinem Rand auf der Oberseite der Arbeitsfläche.
    7. Für jede Wiederholung in dem Experiment, montieren einen sozialen Raum Kammer und unterstützen zu stehen.
  4. Bereiten Sie eine Kletter Assay Antwortgerät, um die Steigfähigkeit der getesteten Fliegen zu überprüfen.
    1. Verwenden Sie einen Gegenstromapparat, wie zuvor beschrieben, 14,15.
  5. Stellen Sie sicher, homogene Lichtverhältnisse, indem das Experiment auf eine Arbeitsfläche mit einer weißen Bank Abdeckung und vor einem weißen Hintergrund.

2. Vorbereitung die Fliegen vor dem Experiment

  1. Pflegen Fliegen in Flaschen mit Standard Drosophila Fliegen Essen. Halten Sie sie in einer Inkubationskabine bei 25 ° C auf einem 12 h Hell / Dunkel-Zyklus.
  2. Ein bis zwei Tage vor der Experiment, sammeln und Sex fliegt unter kaltem Anästhesie, wie zuvor beschrieben, 8.
    1. Chill die kalte Narkosegerät bei -4 ° C. Platz fliegt in 50 ml Kunststoffröhrchen. Vollständig versenken die Kunststoffröhrchen, die Fliegen in Eis in einem isolierten Eiskübel, warten Sie mindestens 5 Minuten für Fliegen unbeweglich zu werden.
    2. Legen Sie die Fliegen an der Polyethylenfolie des kalten Narkosegerät. Bei RT, verwenden Sie ein Stereomikroskop, um Männer von Frauen zu trennen. Pflegen Fliegen, in Gruppen, in Durchstechflaschen mit Standard Drosophila Fliegen Essen, nicht mehr als 40 Fliegen pro Fläschchen.
  3. Zwei Stunden vor Beginn des Experiments zu gewährleisten, dass die Temperatur des Raums, wo das Experiment durchgeführt werden zwischen 24-25 ° C und einer Luftfeuchtigkeit von ca. 50%.
  4. Übertragen Sie die Fliegen in neue Phiolen haltige Speisen, und legen Sie sie für 2 Stunden auf der Arbeitsfläche, wo das Experiment durchgeführt.
    HINWEIS: Für diese experiments, die Fliegenstämme verwendet wurden, waren Drosophila melanogaster Stämme: Canton-Spezial oder Canton-S (CS), w 1118 Cs 10 (oder W - w 1118 Canton-S ausgekreuzt 10 Mal) waren Oregon und Samarkand entfernt alle aus unserem Labor Aktien 16; Elwood Fliegen wurden im Herbst 2011 in der Nachbarschaft von Elwood Huntington auf Long Island, New York, USA 8 gesammelt. Außer, wenn nicht anders angegeben, wurden die Ergebnisse vorgestellt erhalten mit Canton-S fliegt (in den Farben rot).

3. Durchführung des Experiments

  1. Führen Sie das Experiment von 12.00 bis 03.00 Uhr (Zeitgeber-Zeit - die Zeit in Stunden nach dem Beginn der Licht - der ZT 4 bis 7).
  2. Bereiten Sie den sozialen Raum Kammer für den Transfer von Fliegen.
    1. Legen Sie einen sozialen Raum Kammer flach auf eine Arbeitsfläche, mit der Seite enthalten rechteckige Abstandshalter, die am nächsten zu Ihrem Körper.
    2. Entfernen Sie one Clip nächst Ihren Körper und schieben Sie eine rechteckige Abstandshalter nach außen, wodurch ein Abstand von ca. 1 cm zwischen den rechteckigen Abstandhalter.
    3. Mit Klebeband und eine Markierung, zu kennzeichnen den sozialen Raum Kammer in einer oberen Ecke mit Sex, Dehnung, und wiederholen Sie die Nummer. Achten Sie darauf, das Band nicht Teil des inneren dreieckigen Arena Fall Rechnung zu tragen.
  3. Übertragen Sie die Fliegen in den sozialen Raum Kammer.
    1. Transfer fliegt von ihrem Fläschchen, das Essen in ein neues, leeres Fläschchen. Saugen Sie fliegt von der leeren Durchstechflasche und überführen sie in der sozialen Raum Kammer.
      1. Atmen Sie ein, um die Fliegen in die Spitze der Saugvorrichtung zu ziehen. Setzen Sie die Spitze in die 1 cm Abstand zwischen den rechteckigen Abstandshalter der sozialen Raum Kammer und Ausatmen mit einer konsistenten Rate, um die Fliegen in den inneren dreieckigen Arena zu erzwingen.
      2. Unmittelbar schieben Sie die rechteckige Abstandshalter wieder an seinen Platz und schloss die Basis des inneren dreieckigen Arena, und platzieren Sie den Binder Clip wieder ein.
    2. Auf einem stampfenden Unterlage, die auf unterschiedlichen Bank als dort, wo die experimentelle Arbeit erfolgt befindet, halten Sie die sozialen Raum Kammer aufrecht, so dass die rechteckige Abstandshalter auf der Unterseite. Pfund dreimal alle Fliegen zu gewährleisten, hat an der Unterseite der Arena gefallen.
      HINWEIS: Aufgrund der Acryldistanz ragte aus dem kleinsten Kammergröße (1D), schlagen die Ellbogen auf die Arbeitsfläche und gleichzeitig einen sicheren Halt am Gerät, um sicherzustellen, die Fliegen wurden auf den Boden gefallen ist.
    3. Starten Sie einen Timer.
    4. Setzen Sie den sozialen Raum Kammer auf der Arbeitsfläche und verwenden Sie das Stativ und Kolben Klammer, um sie aufrecht zu halten. Legen Sie ein Lineal oder einen Aufkleber der bekannten Länge flach gegen den sozialen Raum Kammer, aber nicht zur Deckung etwaiger Teil des inneren dreieckigen Arena.
      1. Für horizontal Experimenten, stellen Sie den sozialen Raum Kammer in dem Stützgestell; stattdessen legen den sozialen Raum Kammer flach auf die Arbeitsfläche.
      2. Wenn die Fliegen niedergelassen haben, in der Regel nach etwa 30 Minuten, nehmen Sie ein Bild von der sozialen Raum Kammer. Stellen Sie sicher, dass der Rahmen enthält die gesamte innere dreieckige Arena, das Lineal, und das Etikett.
      3. Wiederhole das Experiment für jeden Genotyp und Zustand (idealerweise 3 internen Wiederholungen und 3 unabhängige Wiederholungen).

      4. Analyse der Sozialraumdaten

      1. Importieren Sie die folgenden Makros in ImageJ 17
        1. ImageJ finden Sie hier: http://rsbweb.nih.gov/ij/.
        2. Sie können einen Befehl 'Messen Sie Entfernungen "im Plugins-Menü zu erstellen, indem Sie die Makros unter in einer Datei mit dem Namen' Measure_Distances.txt 'im Ordner ImageJ / plugins, in der Makro-Unterordner, und mit der Hilfe> Update Menüs Befehl."
        3. Kopieren Sie in einer TXT-Datei, die Makros, die in Zusatzdaten zur Verfügung gestellt werden und wurden ursprünglich in 3 veröffentlicht.
      2. Laden Sie die Bilder auf einen Computer, und öffnen Sie eine picture mit ImageJ.
        1. Eröffnen Sie ein Maßstab durch eine Linie von der 0 cm bis 1 cm Markierungen auf dem Lineal in das Bild, und auf der Registerkarte Analysieren, wählen Sie die Set-Skala Funktion, um eine Skala von 1 cm für den Abstand eingestellt (gleiche Ansatz für den Aufkleber von bekannt Länge). Wählen Sie die globale Option, bevor die Waage auf dem Bild.
        2. Schneiden Sie das Foto mit der Crop-Funktion unter der Registerkarte Bild, so dass es alle der Fliegen, während das Entfernen so viel von dem Rest des Bildes wie möglich.
        3. Machen Sie das Bild schwarz und weiß, indem Sie 8-Bit aus dem Optionstyp auf der Registerkarte Bild.
        4. Entfernen Sie alle Hintergrundgeräusche aus dem Bild, indem Sie auf der Schwelle Funktion unter der Option Anpassen der Registerkarte Bild. Ziehen Sie die Regler zu erhöhen oder zu entfernen Sie den Kontrast, so dass der Körper jedes fly deutlich ohne weitere Markierungen im Bild zu sehen ist. Wenn es Markierungen, die nicht fliegen, fangen sie mit dem Rechteckwerkzeug und löschen.
        5. Stellen Sie dieMessungen mit Hilfe der Messungen Tool Set unter der Registerkarte Analysieren. Wählen Bereich, Schwerpunkt, Centroid und Anzeigebezeichnung. Als nächstes wählen Sie die Analyze Partikel verfügen auf der Registerkarte Analysieren, um eine nummerierte Liste aller schwarzen Flecken, die Fliegen zu erstellen.
          1. Bei Verwendung Analysieren Teilchen; Set-Größe von 0,01 bis 0,1 (Wählen Sie keine Pixeleinheit); Rundheit von 0,00 bis 1,00; Show Konturen; Ergebnisse darstellen, und fügen Sie den Manager.
          2. Stellen Sie sicher, dass jeder schwarze Punkt (jedes Teilchen) ist eine genaue Darstellung der Fliegen, die im Originalbild sind, durch den Vergleich der nummerierten Liste zu dem Originalbild.
            HINWEIS: Wenn einige Fliegen, die sehr nahe beieinander liegen als ein Teilchen gezählt, manuell zeichnen eine weiße Linie, die zwei Fliegen auf dem binären Bild zu trennen.
        6. Während die Liste ausgewählt ist, verwenden Sie den Nearest Neighbor - Liste Entfernungen Makro im Rahmen des zweiten Makros Optionen auf der Registerkarte Plugins, um eine neue Liste der Entfernungen enthält erstellen, in cm, von EAch zu fliegen, um ihre nächsten Nachbarn.
      3. Kopieren Sie die nächsten Nachbarn Entfernungen von ImageJ und fügen Sie ihn in eine Säule mit einem Tabellenkalkulationsprogramm.
        1. Kompilieren Sie alle Daten von jeder Wiederholung auf denselben Tabellenkalkulation und die Organisation von Genotyp und Zustand.
      4. Führen Sie die Datenanalyse unter Verwendung von Statistik-Software. In diesem Experiment Graph Pad Prism (Version 6 für MacOSX, GraphPad Software, San Diego Kalifornien USA, www.graphpad.com) wurde verwendet, um one-way ANOVA und Kruskal-Wallis-Tests, Tukey und Dunnet Post-Hoc-Tests durchzuführen.
      5. Die Verteilung der Abstände folgt eine nichtparametrische Verteilung 1, und Daten werden als Box und Tukey-Whisker (Ausreißer zu eliminieren) vertreten.

      5. Klettern Assay (Führungsverhalten)

      1. Verwenden Sie einen Kletter Test als Kontrolle, um Testfliegen Steigfähigkeit 14,15,18.
        1. Verwenden Sie die Gegenstromapparat, so dass drei Versuche cparallel ein ausgeführt werden.
      2. Transfer 50 bis 100 naiv Fliegen (Fliegen, die vorher nicht getestet wurden) in drei verschiedenen Teströhrchen, und rasten sie in der 1., 3. und letzten Schlitze an der Unterseite des Gegenstromapparat, mit frischen leeren Ampullen in den gegenüberliegenden Stellen.
      3. Legen Sie frische, leere Durchstechflaschen in den leeren Slots an der Unterseite des Geräts.
      4. Tippen Sie unten das Gerät drei Mal, so dass alle Fliegen sind an der Unterseite eines jeden Rohres, um das Experiment zu initiieren.
      5. Starten Sie den Timer für 15 Sekunden (Zeit, die ausreichend für ~ 100% der 3-7 Tage alten Canton-S, um die Top-Ampulle zu erreichen - siehe Abbildung 3F).
      6. Schieben Sie den oberen Teil des Gegenstromgerät, um die Randflaschen um einen Schlitz zu verdrängen.
      7. Sammeln Sie fliegt durch Tippen auf das Gerät nach unten, bis alle Fliegen in den unteren Durchstechflaschen zu bringen.
        1. 1 und 2. Rohre (oder 3. und 4., 5. und 6.) entsprechen jeweils den Fliegen, die nicht erreichte nach oben und die Fliegen, die die Top-Ampulle erreicht.
      8. Berechnen Sie die Performance Index (PI).
        1. Zählen Sie die Anzahl der Fliegen in jedem Fläschchen.
        2. Der PI ist der Prozentsatz von Fliegen in der Lage, auf dem oberen Rohr zu klettern.
        3. Die mittels der PI einer Normalverteilung folgen 1, und Daten werden als Spalten Graphen der Mittelwert plus oder minus Standardfehler auf den Mittelwert (SEM) dargestellt.
          HINWEIS: Alternativ kann die PI als der Prozentsatz von Fliegen in der Lage, den oberen Teil des unteren Ampulle (für ältere Linie erreichen, berechnet werden kann, ist 5 sec die Zeit, die ausreicht, um einen Unterschied in der Steigfähigkeit zwischen infizierten und nicht quantifizieren infiziert 12 Tage alt Canton-S aus einem Standbild quantifiziert: siehe Ergebnisse). Andere haben verschiedene Maßnahmen der Leistung in Schreck-induzierten negativen Geotaxis, die auch angemessen zu quantifizieren Steigfähigkeit von 19 bis 22 verwendet.

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Representative Results

Der soziale Raum Kammer kann als Werkzeug verwendet, um das Sozialverhalten von Drosophila melanogaster zu quantifizieren. Acrylabstandshaltern und Glasscheiben zusammengeklemmt, um eine innere Dreiecks Arena, die einen zweidimensionalen Bereich, in dem Fliegen können stabile Gruppen ohne die Anwesenheit von vielen potentiell verwirrende Cues Formular bilden. Beim Fliegen auf die vertikale Arena übertragen, werden sie von herunter abgegriffen erschreckt, und sie durch eine Escape-Verhalten zu reagieren: negativ Geotaxis. Sie klettern an die Spitze des aufrechten Dreiecks, in eine enge Gruppe gezwungen, und dann Zeit, um weiter zu bewegen bilden sich gegenseitig, und die Arena zu erkunden ist. Nach 20 bis 40 Minuten, stoppen sie sich bewegen, und eine stabile Gruppe gebildet. Der Abstand zwischen jeder Fliege und seinen nächsten Nachbarn können von einem Bild gemessen werden, um eine Quantifizierung ihrer bevorzugten sozialen Raum zu schaffen. Fliegen werden als mehr soziale, je näher sie an ihre Nachbarn.

FliegeDichte keine Rolle im sozialen Raum in der Kammer zu spielen, bis zu dem Punkt der Unterkapazität. Für eine große Gruppe von 20 bis 70 Fliegen im größeren vertikal ausgerichteten Kammer ist der soziale Raum unabhängig von der Gruppe Dichte (2A, B). Mit nur 10 oder 15 Fliegen im sozialen Raum Kammer, gibt es wahrscheinlich nicht genug Menschen, um eine stabile soziale Gruppe bilden, was zu einer Zunahme der sozialen Raum (2A, B). , Testen einer großen Anzahl von Fliegen ist jedoch nicht immer praktisch - in bestimmten Fällen, in denen die Anzahl der mutierten Personen beschränkt ist, können die Forscher nicht in der Lage, um Gruppen von Fliegen groß genug für die Standardgröße des sozialen Raumkammer zu sammeln. Zur Erleichterung der Quantifizierung sozialer Raum mit kleinen Gruppen von Fliegen können die Forscher den sozialen Raum Kammer zu manipulieren, so dass der Bereich der zweidimensionalen Arena ist kleiner, aber Fläche pro fly konstant bleibt. Gezeigt in 1C, D sind zwei Arten von sozialenRaumkammern für kleinere Gruppen modifiziert aber die gleiche Dichte wie der größeren Kammer aufrechtzuerhalten. Auf diese Weise halten die Flugdichte, und die Verringerung der Kammergröße ermöglicht den Erhalt einer ähnlichen sozialen Abstand (2C).

Die gleichen allgemeinen Trends gelten für sozialen Raum Kammern in einer horizontalen Position (2D) platziert. Jedoch können wir beobachten, dass die Fliegen sind in der Regel weiter voneinander in einer solchen horizontalen Einstellung sein, und sie sich nicht absetzen leicht 1. Gruppen, die nur 15 und 20 entfernt haben, weisen einen größeren sozialen Raum als Gruppen bis 40 Fliegen (B ild 2D).

Um zu bestätigen, dass Überbelegung nicht für die geringeren Abstände zum nächsten Nachbarn in größeren Gruppen von Fliegen gesehen verantwortlich, der Abstand von jeweils fliegen zu allen anderen entfernt wurde, wie in 9 gemessen. Quantifizierung der Abstand zu allen Fliegen, in Abhängigkeit vom Abstand zum nächsten Nachbarn, ermöglicht die Beurteilung einer Gruppe behavioder anstelle von dem Verhalten der Individuen innerhalb einer Gruppe. Wie erwartet, ist der Abstand zu allen Linie erhöht, wenn die Menge von Fliegen in der Gruppe größer war, ein Spiegelbild der Gruppe, die sich nicht von den einzelnen Fliegen. Dieser Trend wurde sowohl vertikal als auch horizontal positioniert Sozialraumkammern (2E, F) beobachtet. Daher wurden die Fliegen aus größeren Gruppen nicht gezwungen, einen näheren Abstand zu ihren Nachbarn aus Platzgründen zu halten. Stattdessen Fliegen bilden engere soziale Gruppen, wenn es mehr als 15 Fliegen in der Kammer.

Wie für andere Verhaltenstests, vertikal ist eine Beschränkung der Verwendung des Sozialraumkammer, dass es Fliegen ohne Geotaxis oder Klettern Beeinträchtigungen erfordert. Zum Beispiel fliegt Canton-S infizierte für eine Woche mit dem Gram-negative Bakterium Providencia rettgeri 23 besitzen eine Kletter Defekt und weisen unterschiedliche soziale Abstand Ergebnisse abhängig von der Ausrichtung des sozialen AbstandKammern. Wenn der Test wurde vertikal durchgeführt wird, der soziale Raum der infizierten Fliegen war größer als sozialen Raum der Kontrollen, wahrscheinlich, weil die infizierten Fliegen waren nicht in der Lage, eine stabile Gruppe an der Oberseite der Kammer (3A) zu bilden. Wenn die Fliegen unter den gleichen Bedingungen wurden dann in den horizontal ausgerichteten sozialen Raum Kammern getestet, gab es keine signifikanten Unterschiede, was darauf hinweist, dass die Fortbewegung Fähigkeit ist wahrscheinlich weniger ein Faktor für den sozialen Raum in den horizontal angeordneten Sozialraumkammern (3B). Während die infizierten Fliegen sind optisch weniger in der Lage zu klettern als die Kontrollen, kann dies mit Hilfe der Kletter Assay (3C) quantifiziert werden. Nach 5 sec, etwa 44% der Kontrollfliegen kletterte auf die obere Hälfte der unteren Fläschchen und nur 32% der infizierten Fliegen. Bemerkenswert ist, dass alle Fliegen in diesem Test zu klettern schlecht (sie erreichen selten nach oben Fläschchen, nur den oberen Teil des unteren Fläschchen), denendurch die Tatsache erklärt werden, dass sie sich 12 Tage nach dem Schlüpfen, die beim Fliegen zu starten, um einen Defekt im Klettern durch Alterung 22 weisen ist.

Jedoch für die Stämme, die kein Klettern Defekt, beide Orientierungen der Kammern führte zu den gleichen Ergebnissen, wie wir früher gezeigt haben 1. Bei diesem Versuch wurde die gleiche Zunahme der sozialen Raum für Canton-S und w 1118 Cs 10 in der vertikalen Dreieck oder den horizontalen kreisförmigen Kammern (- Re-Analyse in der Box und Whisker der in 1 veröffentlichten Daten Abbildung 3D, E) gesehen. Es gab keinen Unterschied in der Steigfähigkeit zwischen Canton-S und w 1118 Cs 10 angibt, es war nicht ein Faktor für den Unterschied in der sozialen Raum zwischen Stämmen in beiden Kammerausrichtung (15 Sek Wahl - 3F). Wenn gegeben 5 Sek Wahl 17% ± 3,3 von CS und 14% ±2.5 von w 1118 Cs 10 erreicht den oberen Fläschchen (statistisch nicht verschieden, Daten nicht gezeigt).

Forscher mit dem sozialen Raum Kammer muss auch sicherstellen, dass sie ihre Experimente zur gleichen Tageszeit zu wiederholen. Sowohl für Canton-S und w 1118 Cs 10 männlichen Fliegen, die Zeit des Tages betroffenen sozialen Interaktionen. Im Vergleich zu der Tagesstunden (Zeitgeber-Zeit - die Zeit in Stunden nach dem Beginn der Licht - ZT4 zu ZT7), die in der Abend getestet Fliegen (ZT11 zu ZT12 - kurz vor dem Licht aus) zeigte einen viel größeren sozialen Raum für beide Genotypen, obwohl ihre relative Raumdifferenz beibehalten wurde - dh, w 1118 Cs 10 Fliegen sind noch weniger soziale als Canton-S fliegt am Abend (4A). Interessant ist, dass nur der soziale Raum der Canton-S Männern, aber nicht tHut der Frauen steigt am Abend, obwohl es einen Trend zu größeren Variation der sozialen Raum für weibliche Fliegen in den Abend (4B). Wir haben zuvor unabhängig machte die gleichen Bemerkungen 24.

Wie wir bereits mit einem Oregon-R Linie um die Wirkung von Bisphenol A (BPA) 2-Studie berichtet, ist der soziale Raum Raum auch empfindlich auf den genetischen Hintergrund von Drosophila. Hier zeigen wir, dass Elwood, ein vor kurzem gefangen Wildtyp-Linie, war sozialer Raum im Vergleich zu Canton-S und Samarkand, aber nicht Oregon (Abbildung 5) erhöht. Die sozialen Räumen von Samarkand und Oregon unterschieden sich nicht signifikant voneinander, aber beide größer als der soziale Raum der Canton-S (Bild 5). Diese Daten zeigen, dass in einer bestimmten Umgebung, unterschiedliche Inzucht und Wildtyp-Stämme einen anderen sozialen Raum, was auf eine genetische Komponente auf das Verhalten. Es zeigt auch, dass die sensitivity dieses Tests erfordert somit, dass Fliegen in die entsprechenden genetischen Hintergründen vor dem Experimentieren ausgekreuzt werden. Dies wird dazu beitragen, die Unterschiede zu gewährleisten, oder umgekehrt die Ähnlichkeiten, im sozialen Raum gesehen, aufgrund der Faktor, die getestet sind.

Abbildung 1
Abbildung 1. Sozialraumkammerkomponenten und Anordnung. (A) Freiraumkammern verschiedener Abmessungen können unter Verwendung der gleichen Glasscheiben mit einer Höhe von 16,5 cm aufgebaut sein (17,6 cm × 17,6 cm × 0,3 cm) und Acrylabstandshalter in der Form von rechtwinkligen Dreiecken (eine Base von 8,9 cm, und einer Dicke von 0,3 cm - durch einen kleinen Buchstaben a) und Rechtecke (9 cm × 1,5 cm × 0,3 cm angegeben. - durch einen kleinen Buchstaben b angezeigt) (B) Die größte soziale Raum Kammer, wie in 1 beschrieben, eignet sich für 30-40 Fliegen. Es hat Innen dimensionen von 16,5 cm mal 16,5 cm mal 14,5 cm, was einer Fläche von 86,45 cm 2 und die zu einer Fläche von 2,16 cm 2 pro fly 40 Fliegen. (C) Ein Kammergröße optimal für 20 Fliegen. Es hat Innenabmessungen von 16,5 cm mal 14,5 cm mal 5,96 cm, so dass eine Fläche von 43,25 cm 2 und führt zu einer Fläche von 2,16 cm 2 pro Fliege. (D) kleinere Kammer, optimal 15 entfernt. Es hat Innenabmessungen von 10,2 cm mal 8,9 cm mal 8,9 cm, was einer Fläche von 32,45 cm 2 und die zu einer Fläche von 2,16 cm 2 pro Fliege. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Figur zu sehen.

Figur 2
Abbildung 2. Ausrichtung der Kammer und Gruppengröße, aber nicht Dichte beeinflussen sozialen Raum. Die Daten werden in einem Kasten dargestelltund Whisker-Plot der Abstand zum nächsten Nachbarn in der Kammer, mit der Box, die das 1. Quartil (25. Prozent) und das 3. Quartil (75-Prozent), die Linie in der Box, die den Median und Tukey-Whisker . (AB) Repräsentative Daten zeigen, dass die Erhöhung der Zahl von Fliegen in einer Kammer der gleichen Größe führt zu stabilen sozialen Raum Messungen. Gruppen von 10 bis 70 Canton-S männlichen Fliegen wurden in der größeren vertikalen sozialen Raum Kammer gestellt und man ließ sie für 30 Minuten absetzen; der Abstand zum nächsten Nachbar jedes Fliege wurde aufgezeichnet. Gruppen mit weniger als 15 Fliegen hatten deutlich mehr sozialen Raum als Gruppen mit mehr als 20 Fliegen in der großen Kammer. (A) Gruppen ab 10 n = 9, 20 n = 9, 30 n = 8, 40, n = 8, Kruskal -Wallis Test p <0,0001, Dunn Mehrfachvergleichstest: jeder Buchstabe anzugeben Gruppen statistisch eine # b p <0,0001 (B) <./ strong>, Gruppen ab 15 n = 6, 40 n = 8, 50 n = 5, 60 n = 6, 70 n = 5, Kruskal-Wallis-Test p <0,0001, einem # b p <0,001. (C) Wenn die Größe der Kammer eingestellt wird, um die Flugdichte (bzw. 15 in kleinen, 20 in der mittleren oder 40 in großen Kammer, jedes Mal bei einer Dichte von 2,16 cm 2 pro Fliege aufrechtzuerhalten, wird kein signifikanter Unterschied beobachtet, wenn vertikal getestet. (D ) Aber wenn diese sozialen Raum Kammern horizontal platziert Gruppen, die 15 oder 20 entfernt hatte einen größeren Abstand zum nächsten Nachbarn gegenüber Gruppen mit 40 Fliegen (Gruppen ab 15 n = 3, 20 n = 4, 40 n = 4, Kruskal hatten -Wallis Test p <0,0001, Dunn Mehrfachvergleichstest eine # b p <0,01). (E-F) Der Abstand zu allen Fliegen wurde für Gruppen von 15, 20 gemessen und 40 männliche Canton-S Fliegen sowohl platziert vertikal und horizontal ausgerichteten Kammern. Je größer die Menge der Fliegen in der Kammer ist, desto größer ist der Abstand zu allenFliegen ((E): Gruppen ab 15 n = 6, 20 n = 6, 40 n = 3, Kruskal-Wallis-Test p <0,0001, Dunn Mehrfachvergleichstest eine # b p <0,01; (F): Gruppen ab 15 n = 6, 20 n = 6, 40 n = 3, Kruskal-Wallis-Test p <0,0001, Dunn Mehrfachvergleichstest eine # b # c p <0,0001). Hinweis: (A, B und CF) zeigen Daten in 3 verschiedenen geographischen Regionen und damit unterschiedliche Labor-Einstellungen erhalten (A) Region 1: UCLA, Los Angeles, CA, (B) Region 2:. Yorker College, NY, NY; (CF) Region 3:. Western University, London, ON Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Figur zu sehen.

Figur 3
Abbildung 3. Orientierung of der soziale Raum Kammer kann verwendet werden, um zum Verwechseln Geotaxis Probleme unter Kontrolle (A - C):. Gruppen von 40 männlichen Canton-S Fliegen, die entweder mit P. infiziert waren rettgeri für sieben Tage oder mit Medien als eine Kontrolle wurden in einem sozialen Raum Kammer entweder vertikal (A) gestellt oder waagerecht (B) angeordnet und für 30 min absetzen injiziert. Der Abstand zum nächsten Nachbar jedes Fliege wurde aufgezeichnet. Die Daten werden in einer Box und Whisker-Plot der Abstand zum nächsten Nachbarn in der Kammer vertreten, mit der Box, die das 1. Quartil (25. Prozent) und das 3. Quartil (75-Prozent), die Linie in der Box die den Median und Tukey Backenbart. (A) Repräsentative Daten zeigt eine Zunahme der sozialen Raum zum Fliegen, die mit P. infiziert sind rettgeri und in einer vertikal angeordneten sozialen Raum Kammer gebracht,im Vergleich zu der Injektion mit Medien (Wilcoxon-Rank-Test: jeder Buchstabe anzugeben Gruppen statistisch p <0,0001, n = 6) (B) Repräsentative Daten zeigt, sozialen Raum nicht durch P. betroffen. rettgeri Infektion beim Fliegen werden in einer horizontal angeordneten Sozialraumkammer (Wilcoxon-Rank-Test: p> 0,1, n = 5) (C) Ein Gegenstromapparatur wurde verwendet, um Klettern Verhalten beider infiziert und Medienkontrolle Fliegen zu bewerten.. Infizierten Fliegen klettern schlechter als ihre Mediensteuerungen (fliegt ~ 12 Tage alt, Graphen stellen meine Performance-Index ± SEM:% von Fliegen in der oberen Hälfte des Fläschchens bei 5 sec Wahl; zwei seitigen t-Tests mit Welch Correction; n = 6 von ~ 60 Fliegen, jeder Buchstabe anzugeben Gruppen statistisch p = 0,08) (D - F):. Vertikal und horizontal positioniert Kammern entweder dreieckig oder kreisförmig, wurden verwendet, um den sozialen Raum der Canton-S (CS vergleichen) mitdass der w 1118 Cs 10 (W). Die Daten werden in einer Box und Whisker-Plot der Abstand zum nächsten Nachbarn in der Kammer vertreten, mit der Box, die das 1. Quartil (25. Prozent) und das 3. Quartil (75-Prozent), die Linie in der Box die den Median und Tukey-Whisker. Sowohl in sozialer Raum Kammer Orientierungen und Formen, w 1118 Cs 10 hatte einen größeren sozialen Raum als Canton-S ((D), vertikale Dreieck: Kruskal-Wallis-Test, jeder Buchstabe anzugeben Gruppen statistisch p <0,0001, (E), Horizontalkreis: Kruskal-Wallis-Test, jeder Buchstabe anzugeben Gruppen statistisch unterschiedlich p <0,01). (F)) Ein Gegenstromapparatur wurde verwendet, um Kletterverhalten sowohl Canton-S und w 1118 Cs 10 beurteilenStämme (fliegt 3-5 Tage alt, Graphen stellen Mittelleistungsindex ± SEM:% der Fliegen in Top-Ampulle auf 15 sec Wahl). Es gab keinen Unterschied in der Fähigkeit, entweder zwischen Canton-S oder W 1118 Cs 10. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Figur zu sehen.

Figur 4
Figur 4. Sozialen Raum der Männer ist in den Abendstunden erhöht. (A) Repräsentative Daten zeigt eine erhöhte soziale Raum zwischen männlichen fliegt in den Abendstunden im Vergleich zum Mittagsstunden ("Abend" ZT 11-12, vor Licht aus) ("day "ZT 4-7). Gruppen von 40 Canton-S Fliegen und w 1118 Cs 10Fliegen wurden in einem sozialen Raum Kammer während entweder tagsüber oder Abendstunden gelegt und man ließ sie für 30 Minuten absetzen. Der Abstand zum nächsten Nachbar jedes Fliege wurde aufgezeichnet. Für beide Genotypen, fliegt erhöhten sozialen Raum in den Abend und die Unterschiede zwischen Stämme wurden unabhängig von der Tageszeit gehalten (n = 6-7, Kruskal-Wallis-Test p <0,0001, Dunn Mehrfachvergleichstest: jeder Buchstabe anzugeben Gruppen statistisch p < 0,01). (B) Bei der Canton-S Fliegen wurden nach Geschlecht nur Männer getrennt haben eine Zunahme der sozialen Raum in den Abend (t p <0.01) gezeigt, obwohl eine nicht-signifikanten Trend für größere interne Variante ist bei Frauen gesehen (Kruskal -Wallis Test, jeder Buchstabe anzugeben Gruppen statistisch p <0,0002). Die Daten werden in einer Box und Whisker-Plot der Abstand zum nächsten Nachbarn in der Kammer vertreten, mit der Box, die das 1. Quartil (25. Prozent) und die 3rd Quartil (75-Prozent), die Linie in der Box, die den Median und Tukey-Whisker. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Figur zu sehen.

Figur 5
Abbildung 5. Genetischer Hintergrund der Fliegen wirkt sozialen Raum. Gruppen von 40 Canton-S, Samarkand, Oregon, und Elwood Fliegen wurden in einem sozialen Raum Kammer gestellt und man ließ sie für 30 Minuten absetzen. Der Abstand zum nächsten Nachbarn jedes fly wurde aufgezeichnet. Verteilungen der Gruppen unterschiedlich sind (Kruskal-Wallis-Test, p <0,0001), sind Gruppen einen gemeinsamen Brief nicht teilen signifikant unterschiedlich. Die Daten werden in einer Box und Whisker p repräsentiertViele der Entfernung zum nächsten Nachbarn in der Kammer, mit der Box, die das 1. Quartil (25. Prozent) und das 3. Quartil (75-Prozent), die Linie in der Box, die den Median und Tukey-Whisker (Dunnet ist Mehrfachvergleichstest, p <0.05 [d], p <0.001 [a, b, c], 3 unabhängige Wiederholungen mit 1-2 internen Wiederholungen, so dass für Elwood und Samarkand n = 3, Oregon und Canton-S n = 4 ). Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Figur zu sehen.

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Discussion

In diesem Protokoll wurde ein detailliertes Verfahren für die Quantifizierung von sozialen Raum beschrieben. Einige wichtige Schritte, um das Experiment zu gewährleisten erfolgreich sind: 1) immer Schutzhandschuhe verwenden bei der Reinigung und die Einrichtung der Vorrichtung, die eigenen Öle und Düfte aus der Innenkammer der Vorrichtung zu halten, 2) sicherzustellen, Fliegen werden mindestens einen Tag gesammelt, bevor das Experiment damit die möglichen Auswirkungen von kaltem Narkose zu verringern, 3) 2 h vor dem Experiment liefern neue Durchstechflaschen mit frischen Lebensmitteln zu gewährleisten, die Fliegen sind nicht verhungert, und haben sich zu reinigen, 4) Während diesen 2 Stunden, lassen Sie die Fliegen zu akklimatisieren, ihre neue Umgebung, 5), beachten Sie die Temperatur- und Feuchtigkeitsbedingungen bei der Durchführung von Experimenten; versuchen, sie konsistent zwischen 24-25 ° C und 50% Luftfeuchtigkeit zu halten, 6), stellen Sie sicher, um die sozialen Raum Kammern nicht stören während der Ausführung des Experiments, und 7) führen das Experiment zur gleichen Tageszeit, vorzugsweise zwischen Zeitgeber Zeit ZT4 und ZGT7.

Sozialraum ist nur abhängig von der Dichte des in der Kammer entfernt, und nicht abhängig von der Grösse der Gruppe, solange es eine minimale Gruppengröße erfüllt.Fliegen werden den gleichen sozialen Abstand zwischen sich unabhängig von der Menge an Mitgliedern der Gruppe zu halten. Allerdings ist Abstand zu allen Fliegen in der Kammer, wie erwartet, durch die Gruppengröße als auch der Kammer Orientierung betroffen. Es ist wichtig zu beachten, dass trotz der horizontalen Ausrichtung herausfordernd zu bedienen (Fliegen nicht so leicht absetzen) und was zu einer verringerten Abstand zwischen Genotypen in der Hand (Abbildung 3D Vergleich zu 3E), Burg et al. 3 erfolgreich eine horizontale , quadratische Kammer. In ihren Experimenten, die Entfernung zum nächsten Nachbarn war sehr ähnlich wie unsere vertikal ausgerichteten sozialen Raum Ergebnisse. Doch in ihrer Kammer, gab es einen kontinuierlichen Luftstrom, der die soziale Gruppenabstand der Fliegen am meisten ähnlich wie unsere vertikale Kammer statt unserer Horizontalkammer beigetragen haben kann. Eine Einschränkung der Verwendung vertikalen Kammern ist die Fähigkeit, die Drosophila mobili haben testenty Beeinträchtigungen. Der soziale Raum Kammer erfordert die Fliegen, mobil zu sein, so dass sie in welcher Entfernung von ihren Nachbarn sie sein wollen wählte. Wenn Fliegen waren unbeweglich oder ein Defizit in irgendeiner Weise, können sie nicht in der Lage, stabile Gruppen richtig in der Kammer zu bilden. Eine potenzielle Heilmittel für schlechte Fortbewegung wäre, dann horizontal Kammern oder um mehr Zeit für die Fliegen um vor der Aufnahme absetzen können. Die Forscher müssen auch prüfen, Steigfähigkeit und mögliche geotactic Beeinträchtigungen von Fliegen zu sehen, ob die vertikale soziale Raum Kammer geeignet ist. Wenn es Defizite in einer von diesen, können horizontal angeordnet Kammern verwendet werden, um sie zu vermeiden.

Zu beachten ist, wenn Klettern Aktivität oder Gesamtdurchhaltevermögen und die Gesundheit der Fliege wird die Messung der sozialen Raum beeinflussen, zeigen wir, dass Aktivität oder Fortbewegungsebenen werden nicht mit sozialen Raum korreliert. In einer anderen Studie zeigen wir, dass eine Behandlung, die Fortbewegung abnimmt, (Fütterung BPA) verringern auch sozialePlatz 2. Aber Mutanten rugose (a Drosophila Ortholog des Autismus Kandidatengen Neurobeachin) Display Hyperaktivität und erhöhte soziale Raum 4. Schließlich zeigen weiße mutierten Fliegen eine Erhöhung der sozialen Raum 1,3, ohne Erhöhung der Fortbewegung oder Geotaxis 18. Kurz gesagt, wurden verschiedene Kombinationen von Aktivitätsniveau und sozialen Abstand bisher beobachtet, was keine Korrelation zwischen den beiden Verhaltensweisen. In der Tat, sozialen Raum nicht unbedingt korrelieren mit anderen sozialen Verhaltensweisen entweder, wie soziale Vermeidung 8,25, was auf verschiedenen zugrunde liegenden neuronalen Schaltkreise. Zum Beispiel Mutanten rugose / Neurobeachin Display erhöhten sozialen Raum und verringerte Sozialvermeidung 4; sondern weiß ist sowohl erhöhten sozialen Raum, und sehr starke soziale Vermeidung 4.

Als Tageszeit beeinflusst sozialen Raum, zumindest bei Männern, ist es critical dass Forscher bewusst von der Tageszeit, wenn die Experimente durchgeführt, und Anstrengungen unternommen, um eine konstante Zeit für alle Experimente erhalten. Andere Überlegungen, die berücksichtigt werden sollten, sind Alter, Geschlecht und Gegenstand der Fliegen. Wir wissen, dass soziale Distanz in Jungfrau im Vergleich zum gepaart einzelnen, sowohl für Männer und Frauen 1, und wir zeigen, dass Männer sind weniger dicht als die Weibchen in den Abend (4B). Stammspezifische Unterschiede in Geschlecht Aktivitätsniveaus einzelner Fliegen im Laufe des Tages wurde bereits beschrieben, vorgeschlagen, dass Männer höhere Bewegungsaktivität in der morgens und abends im Vergleich zu der Tageszeit könnte ihre Balzverhalten 26,27 bezogen werden. Doch in unserem Fall sind die Geschlechter getrennt, aber die Fliegen gruppiert sind, und durch die Zeit, die wir ihren sozialen Raum zu messen, haben die Fliegen angesiedelt. 27 Bericht, dass zirkadianen Rhythmus in Paaren von männlichen gehalten Fujii et al.zusammen eine erratische Tagesrhythmus, ohne klare Spitzen, wenn der Rhythmus der weiblichen Paare ähneln, dass von einzelnen Fliegen. Also, der erhöhte Abstand bei Männern in den Abend ist wahrscheinlich nicht zu einer Erhöhung der Balzverhalten oder spezifische Erhöhung der Bewegungsaktivität bezogen, und der Grund der Geschlechtsdimorphismus dieses Verhalten zugrunde liegenden muss weiter untersucht werden.

Mit diesem in Betracht, entfernt, immer nach Geschlecht für das Experiment getrennt, so Unterschiede in der sozialen Interaktion zwischen Männchen und Weibchen eingesehen werden kann. Schließlich haben wir zur Zeit noch nicht wissen, wie Alter wirkt sich auf die sozialen Interaktionen von Fliegen. Wir empfehlen daher, dass der soziale Raum Experimente werden mit Fliegen, die nicht älter als sieben Tage durchgeführt, wie verschiedene Verhalten Aufführungen, darunter Klettern Aktivität bekannt sind, um bei Fliegen mehr als eine Woche alt 22 beeinflusst werden.

Eine letzte Überlegung für soziale Raum ist die Variationen in Median beobachtetsoziale Distanz. Sozialraummessungen wurden von verschiedenen Standorten einschließlich (Los Angeles, CA wurde: 2A, New York, NY: 2B, Abbildung 3D, Abbildung 4, Abbildung 5, London, ON: 2C-F, Ithaca, NY: Abbildung 3A, B, alle in der gleichen Canton-S Hintergrund). Unbekannte Variablen, die nicht zwischen geographischen Orten oder Labor-Einstellungen konstant waren, beeinflusst den Median soziale Distanz. Mögliche Faktoren sind verschiedene Lebensmittel, Höhe, Luftdruck in sich selbst, und die Änderung der Atmosphärendruck 28. Obwohl die Mediane waren nicht konstant zwischen den Standorten, an einem Standort die Mediane sehr konstant und reproduzierbar sind; und die Trends und Muster in den sozialen Raum Messungen gesehen gleich geblieben unter Standorte. Daher ist, wie lange, wie die Forscher pflegen intern konstanten Bedingungen, werden sie in eineBLE, um Unterschiede im sozialen Raum zu erkennen.

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Materials

Name Company Catalog Number Comments
Stereo Zoom Microscope  Nikon   SMZ-645 Any other standard scope for fly handling would work
Small paint brushes  for pushing flies
Jazz-mix Fisher 33545 any other standard drosophila food would work
Mini-Alarm Timer/Stopwatch
 Sharpie pens
Adhesive Tape
Medium size binder clips Staples to hold the chambers together: 1-1/4" (32mm) medium clips with 5/8" capacity
small SupportStands Carolina  707161 to hold the chambers in a vertical orientation
Buret clamps Carolina 707362
Digital Camera Nikon  Coolpix S8000  to take the still pictures
small ruler to be able to scale the picture
trifold board and white bench cover to provide a white background, and a homogeneous light.
pounding pad any mouse pad works.
Prism 6 GraphPad Software Inc. Prism 6 for Mac OS X Any statistical analysis software with t-test, one-way and two ANOVA would work

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References

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Neuroscience Ausgabe 105, Soziale Interaktion Sozialraum Sozialraumkammer soziale Gruppe Neurogenetik Neurowissenschaften
Bedingungen, die sozialen Raum, in<em&gt; Drosophila melanogaster</em
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McNeil, A. R., Jolley, S. N., Akinleye, A. A., Nurilov, M., Rouzyi, Z., Milunovich, A. J., Chambers, M. C., Simon, A. F. Conditions Affecting Social Space in Drosophila melanogaster. J. Vis. Exp. (105), e53242, doi:10.3791/53242 (2015).

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