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JoVE Journal Neuroscience
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Neuroscience

में सामाजिक अंतरिक्ष प्रभावित करने की स्थिति Published: November 5, 2015 doi: 10.3791/53242
Automatic Translation
1, 1, 2, 2, 2, 3, 3, 1
1Department of Biology, University of Western Ontario, 2Department of Biology, York College/CUNY, 3Department of Entomology, Cornell University

Abstract

या अन्य छोटे कीड़े - - एक सरल तरीके से यहाँ वर्णित सामाजिक अंतरिक्ष परख ड्रोसोफिला melanogaste आर के सामाजिक संबंधों यों इस्तेमाल किया जा सकता है। जैसा कि हम पहले एक प्रदर्शन के रूप में, एक दो आयामी कक्ष में, हम पहली बार एक तंग समूह के रूप में मक्खियों के लिए मजबूर बाद में उन्हें एक दूसरे से अपने पसंदीदा दूरी लेने की इजाजत दे। मक्खियों तय हो चुका है के बाद, हम मुफ्त ऑनलाइन सॉफ्टवेयर (ImageJ) के साथ एक स्थिर तस्वीर प्रसंस्करण, निकटतम पड़ोसी (या सामाजिक स्पेस) के लिए दूरी मापने। संभावित कारकों को नियंत्रित करने, जबकि निकटतम पड़ोसी के लिए दूरी के विश्लेषण, शोधकर्ताओं ने सामाजिक संबंधों पर आनुवांशिक और पर्यावरणीय कारकों के प्रभाव को निर्धारित करने के लिए अनुमति देता है। ऐसे चढ़ाई क्षमता, दिन, सेक्स के समय, और मक्खियों की संख्या के रूप में विविध कारकों, मक्खियों की सामाजिक रिक्ति को संशोधित कर सकते हैं। हम इस प्रकार इन confounding प्रभाव को कम करने के लिए प्रयोगात्मक नियंत्रण की एक श्रृंखला का प्रस्ताव है। यह परख कर सकते हैंकम से कम दो उद्देश्यों के लिए इस्तेमाल किया जाएगा। सबसे पहले, शोधकर्ताओं (जैसे अलगाव, तापमान, तनाव या विषाक्त पदार्थों के रूप में) अपने पसंदीदा पर्यावरण पारी सामाजिक रिक्ति 1,2 प्रभाव होगा कैसे निर्धारित कर सकते हैं। दूसरा, शोधकर्ताओं सामाजिक व्यवहार 1,3 के इस बुनियादी रूप से आनुवंशिक और तंत्रिका आधार काटना कर सकते हैं। विशेष रूप से, हम इस तरह के मनुष्य 4 में आत्मकेंद्रित के लिए उम्मीदवार जीन के रूप में अन्य जीवों में सामाजिक व्यवहार में शामिल होने के लिए सोचा orthologous जीन की भूमिका का अध्ययन करने के लिए एक नैदानिक ​​उपकरण के रूप में इस्तेमाल किया।

Introduction

सामाजिक संबंधों में एक पूरे के रूप में एक समूह के भीतर व्यक्तियों के समुचित विकास और स्वास्थ्य के लिए महत्वपूर्ण हैं, और इस तरह के फल मक्खियों (ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर) 5,6 के रूप में सरल जीवों के लिए मानव (होमो सेपियन्स) से, कई प्रजातियों भर में मनाया जा सकता है। श्रवण, दृश्य, घ्राण, स्पर्श, या स्वाद: एक व्यक्ति फल मक्खी या मानव हिस्सेदारी आम साधन संवेदी यह हो सकता है कि क्या इन मुलाकातों के दौरान जानकारी, प्रक्रिया के लिए। हम और दूसरों को सामाजिक संबंधों को और विकासवादी हो सकता है शामिल neuronal कोशिकाओं और जीन 7 संरक्षित कि व्यवहार प्रतिक्रियाओं अंतर्निहित एक संभावित साझा neurocircuitry है कि वहाँ परिकल्पना। प्रारंभिक बातचीत हुई है, एक बार बातचीत के व्यक्तियों के बीच सामाजिक अंतरिक्ष या तो वृद्धि (सामाजिक परिहार 8) या कमी (समूह गठन / एकत्रीकरण 5)। अधिक जटिल बातचीत, आक्रमण या प्रेम प्रसंग की तरह है, तो जगह ले सकते हैं।

1-4,9 में इस्तेमाल के रूप में, ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर के स्थिर समूहों में सामाजिक संपर्क का आकलन करने के लिए अंतर-मक्खी दूरी, या सामाजिक अंतरिक्ष quantifies कि एक सीधा प्रोटोकॉल समझाओ। सामाजिक अंतरिक्ष एक मक्खी और अपने निकटतम पड़ोसी 10 के बीच की दूरी का एक उपाय को दर्शाता है। सामाजिक अंतरिक्ष डी का एक दिया आबादी के लिए संगत है प्रयोगात्मक शर्तों (लगभग भीतर 1-2 शरीर की लंबाई औसत) संरक्षित है, और व्यक्तिगत अलगाव 1 में रखा गया है, तो बढ़ रही है, मक्खियों की सामाजिक अनुभव करने के लिए सम्मान के साथ बदलता रहता है जब मेलानोगास्टर। उचित दृष्टि शास्त्रीय odorants या CVA धारणा एक सामान्य सामाजिक दूरी बनाए रखने के लिए आवश्यक है, लेकिन नहीं है। सामाजिक अंतरिक्ष के उपाय इस प्रकार किया जा सकता हैसामाजिक संबंधों का विश्लेषण और डी में सामाजिक व्यवहार यों की एक नैदानिक ​​उपकरण के रूप में इस्तेमाल किया मेलानोगास्टर 1। हम इस मात्रा का ठहराव प्रदर्शन करने के लिए, और किस हद तक आम प्रयोगात्मक चर इस व्यवहार को प्रभावित करने के लिए कैसे विवरण में यहाँ का वर्णन है।

एक हद तक - - क्या सामाजिक अंतरिक्ष को प्रभावित करता है हम परख प्रदर्शन किया गया है, जिसमें चैम्बर, साथ ही मक्खियों की संख्या के उन्मुखीकरण है दिखाते हैं। यह पहले चैम्बर ज्यामिति मक्खियों 11,12 की सहज खोजपूर्ण आंदोलन को प्रभावित करता है कि दिखाया गया था, और वे व्यवस्थित करने के लिए तय है, जहां इस घटना अंततः प्रभाव हो सकता है। बहरहाल, जब तक मक्खी घनत्व (मक्खी / 2 सेमी) और कक्ष उन्मुखीकरण के रूप में ही रखा जाता है, मक्खियों की सामाजिक अंतरिक्ष भी लगातार बना रहता है। इस परख की मजबूती स्वतंत्र प्रयोगशालाओं क के म्यूटेंट द्वारा प्रदर्शित परिणाम नकल कर सकते हैं अलग-अलग कक्ष आकार, आकृति का उपयोग कर, और अभिविन्यास कि इस तथ्य से यह साफ हैवृद्धि सामाजिक अंतरिक्ष है जो ite जीन (आंख रंजकता को प्रभावित करने), (1 में खड़ी त्रिकोण या क्षैतिज चक्र, 3 में airflow के साथ क्षैतिज वर्ग)।

हम पुरुषों, लेकिन नहीं महिलाओं, आगे के अलावा शाम में हैं कि दिखाने के रूप में हमारे परिणाम भी, सामाजिक अंतरिक्ष प्रयोग किया जाता है, जिस पर समय को बनाए रखने के परिणामों की स्थिरता के लिए महत्वपूर्ण है कि संकेत मिलता है। हालांकि, दिन और शाम के समय के बीच देखा मतभेद मक्खियों की गतिविधि मतभेद की वजह से नहीं कर रहे हैं, और हम सामाजिक अंतरिक्ष के साथ सहसंबद्ध नहीं कर रहे हैं कि गतिविधि स्तर का संकेत तर्क पर चर्चा की।

अंत में, वहाँ सफेद उत्परिवर्ती द्वारा संकेत के रूप में सामाजिक अंतरिक्ष के निर्धारण के लिए आनुवंशिक आधार पहले से 1,3 वर्णित है, कर रहे हैं, और हम यहाँ उपस्थित कि मक्खियों के विभिन्न जन्मजात और जंगली पकड़ा प्रकारों के बीच मतभेद।

इसलिए, इस परख एक उत्कृष्ट उपकरण च बनाता हैया आनुवंशिक के प्रभाव के रूप में अच्छी तरह से पर्यावरणीय कारकों का अध्ययन।

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Protocol

घर में बनाया 1. उपकरण और अभिकर्मकों (दूसरों के लिए सामग्री की सूची देखें)

  1. पहले 8 वर्णित के रूप में एक ड्रोसोफिला ठंड संज्ञाहरण तंत्र तैयार करें।
  2. पहले 13 में वर्णित के रूप में एक मक्खी खींचने की मशीन तैयार करें।
  3. सामाजिक अंतरिक्ष कक्षों और धारकों के लिए तैयार।
    1. आदेश या सामाजिक अंतरिक्ष कक्षों बनाने के लिए कांच के शीशे और एक्रिलिक स्पेसर बनाते हैं। प्रत्येक सामाजिक अंतरिक्ष कक्ष 0.3 सेमी की मोटाई के साथ, 16.5 सेमी, 8.9 सेमी का एक आधार की ऊंचाई के साथ, दो सही त्रिकोण एक्रिलिक स्पेसर ((0.3 सेमी की मोटाई के साथ, 17.6 सेमी द्वारा 17.6 सेमी) दो वर्ग कांच के शीशे के होते हैं ), और दो ​​आयताकार रिक्त स्थान (0.3 सेमी की मोटाई के साथ 1.5 सेमी से 9 सेमी) (चित्रा 1 ए)।
    2. यह चित्रा 1 बी में चैम्बर के समान है कि इस तरह के कांच और एक्रिलिक सामाजिक अंतरिक्ष कक्ष इकट्ठे। ऐसा करने के लिए, ऐसा है कि कांच के एक वर्ग फलक के शीर्ष पर एक त्रिकोणीय स्पेसर फ्लैट रखकर शुरू सही कोणत्रिकोणीय स्पेसर के वर्ग फलक के कोनों में से एक के साथ गठबंधन किया है। इसके बाद, पहली बार त्रिकोणीय स्पेसर mirroring, वर्ग फलक के शीर्ष पर दूसरी त्रिकोणीय स्पेसर फ्लैट जगह है।
      नोट: अपने हाथों से तेल और scents के साथ टुकड़े को दूषित करने के रूप में नहीं तो दस्ताने पहनने के लिए सुनिश्चित करें।
    3. कवर नहीं है कि फलक के पक्ष के साथ, वर्ग फलक के शीर्ष पर फ्लैट दो छोटे आयताकार स्पेसर रखें। वर्ग विमान के शीर्ष पर एक्रिलिक स्पेसर अब एक त्रिकोणीय अखाड़ा फार्म चाहिए।
    4. यह नीचे कांच के मूल फलक के ऊपर गठबंधन किया है कि इस तरह की एक्रिलिक spacers के शीर्ष पर कांच का एक दूसरा वर्ग फलक रखें।
    5. सामाजिक अंतरिक्ष कक्ष फार्म एक साथ शीशे और spacers सुरक्षित करने के लिए चार बांधने की मशीन क्लिप का प्रयोग करें। कांच के शीशे के अंदर उन्हें हासिल करने, त्रिकोणीय स्पेसर में से प्रत्येक के लंबे पक्ष पर, कोने के पास एक क्लिप रखें। ये एक ही पक्षों पर, में उन्हें हासिल करने, आयताकार स्पेसर में से प्रत्येक पर, आसन्न कोने में एक क्लिप जगहकांच के शीशे की ओर।
    6. एक समर्थन स्टैंड और सामाजिक अंतरिक्ष चैम्बर काम की सतह के शीर्ष पर अपनी बढ़त पर टिकी हुई है के रूप में बंद करना, एक ईमानदार स्थिति में सामाजिक अंतरिक्ष कक्ष बनाए रखना होगा कि इस तरह के एक कुप्पी दबाना इकट्ठे।
    7. प्रयोग में प्रत्येक दोहराने के लिए, एक सामाजिक अंतरिक्ष कक्ष को इकट्ठा और खड़े समर्थन करते हैं।
  4. परीक्षण किया मक्खियों की चढ़ाई की क्षमता की जांच के लिए एक चढ़ाई परख प्रतिक्रिया तंत्र तैयार करें।
    1. पहले से 14,15 वर्णित के रूप में, एक प्रतिधारा तंत्र का प्रयोग करें।
  5. एक सफेद बेंच कवर के साथ और एक सफेद पृष्ठभूमि के सामने कवर एक काम की सतह पर प्रयोग के प्रदर्शन से सजातीय प्रकाश व्यवस्था की स्थिति सुनिश्चित करें।

2. प्रयोग से पहले मक्खियों की तैयारी

  1. मानक ड्रोसोफिला युक्त बोतलों में मक्खियों के भोजन के लिए उड़ान भरने को बनाए रखें। एक 12 घंटा / प्रकाश अंधेरे चक्र पर 25 डिग्री सेल्सियस पर एक ऊष्मायन कक्ष में रखें।
  2. ई करने के लिए एक से दो दिन पहलेXperiment, इकट्ठा करने और पहले से 8 वर्णित के रूप में सेक्स, ठंड संज्ञाहरण के तहत मक्खियों।
    1. पर ठंड संज्ञाहरण तंत्र टेंशन मत लो -4 डिग्री सेल्सियस। जगह 50 मिलीलीटर की प्लास्टिक ट्यूबों में मक्खियों। पूरी तरह मक्खियों स्थिर बनने के लिए कम से कम 5 मिनट रुको, एक अछूता बर्फ बाल्टी में बर्फ में मक्खियों युक्त प्लास्टिक ट्यूब डूब।
    2. ठंड संज्ञाहरण तंत्र की पॉलीथीन शीट पर मक्खियों रखें। आरटी पर, महिलाओं से पुरुषों को अलग करने के लिए एक stereomicroscope का उपयोग करें। मानक ड्रोसोफिला युक्त शीशियों में, समूहों में, मक्खियों बनाए रखें शीशी प्रति 40 मक्खियों से अधिक न हो, भोजन उड़।
  3. दो घंटे प्रयोग की शुरुआत से पहले, प्रयोग प्रदर्शन किया जाएगा, जहां कमरे का तापमान 24-25 डिग्री सेल्सियस के बीच है और आर्द्रता लगभग 50% है कि सुनिश्चित करते हैं।
  4. भोजन युक्त नया शीशियों में मक्खियों स्थानांतरण, और प्रयोग किया जाएगा, जहां काम की सतह पर दो घंटे के लिए उन्हें जगह है।
    नोट: इन experimen के लिएटीएस, इस्तेमाल मक्खी उपभेदों ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर उपभेदों थे: 1118, डब्ल्यू सी 10 (या डब्ल्यू - कैंटन-एस के लिए 10 बार outcrossed 1118 डब्ल्यू) कैंटन-विशेष या कैंटन-एस (सीएस), ओरेगन और समरकंद मक्खियों हमारी प्रयोगशाला से सभी थे शेयरों में 16; एलवुड मक्खियों लांग आईलैंड, न्यूयॉर्क, संयुक्त राज्य अमेरिका 8 पर, हटिंगटन के एलवुड पड़ोस में पतन 2011 में एकत्र किए गए थे। अन्यथा निर्दिष्ट जब अलावा, प्रस्तुत परिणाम कैंटन-एस (लाल रंग में) मक्खियों के साथ प्राप्त किया गया।

3. प्रयोग प्रदर्शन

  1. (- प्रकाश की शुरुआत के बाद घंटों में समय - Zeitgeber समय ZT 4 से 7 के लिए) 12:00-03:00 प्रयोग करते हैं।
  2. मक्खियों के हस्तांतरण के लिए सामाजिक अंतरिक्ष कक्ष तैयार।
    1. आपके शरीर के लिए निकटतम आयताकार स्पेसर युक्त पक्ष के साथ, एक काम की सतह पर एक सामाजिक अंतरिक्ष कक्ष फ्लैट रखें।
    2. ओ हटायेNE अपने शरीर निकटतम क्लिप और आयताकार spacers के बीच लगभग 1 सेमी के अंतराल बनाने, बाहर की ओर एक आयताकार स्पेसर स्लाइड।
    3. टेप और एक मार्कर का उपयोग करना, लिंग, तनाव, और दोहराने संख्या के साथ एक ऊपरी कोने में सामाजिक अंतरिक्ष कक्ष लेबल। भीतरी त्रिकोणीय क्षेत्र के हिस्से को कवर नहीं करता टेप सुनिश्चित करने के लिए ध्यान रखना।
  3. सामाजिक अंतरिक्ष कक्ष में मक्खियों स्थानांतरण।
    1. स्थानांतरण एक नया, खाली शीशी में भोजन युक्त उनकी शीशी से मक्खियों। महाप्राण खाली शीशी से मक्खियों और सामाजिक अंतरिक्ष कक्ष में उन्हें स्थानांतरित।
      1. वातशोषक की नोक में मक्खियों आकर्षित करने के लिए साँस लेते। सामाजिक अंतरिक्ष कक्ष के आयताकार spacers के बीच 1 सेमी खाई में टिप प्लेस और भीतरी त्रिकोणीय मैदान में मक्खियों के लिए मजबूर करने के लिए एक सुसंगत दर से साँस छोड़ते।
      2. इसके तत्काल बाद आंतरिक त्रिकोणीय क्षेत्र के आधार को बंद करने, वापस जगह में आयताकार स्पेसर स्लाइड, और पीठ पर बांधने की मशीन क्लिप जगह।
    2. प्रयोगात्मक कार्य जगह लेता है, जहां से अलग बेंच पर स्थित है जो एक तेज़ पैड, पर, आयताकार spacers के नीचे की ओर कर रहे हैं कि इस तरह के ईमानदार सामाजिक अंतरिक्ष कक्ष पकड़। सब मक्खियों सुनिश्चित करने के लिए पाउंड तीन बार मैदान की तह तक गिर गया है।
      नोट: मक्खियों नीचे तक गिर गया है सुनिश्चित करने के लिए तंत्र पर एक सुरक्षित पकड़ बनाए रखते हुए सबसे छोटी चैम्बर आकार (चित्रा -1) के बाहर चिपके हुए एक्रिलिक स्पेसर के लिए, काम की सतह पर कोहनी धमाके के कारण।
    3. एक टाइमर शुरू करो।
    4. काम की सतह पर सामाजिक अंतरिक्ष कक्ष रखें और ईमानदार रखने के लिए यह समर्थन स्टैंड और कुप्पी दबाना का उपयोग करें। भीतरी त्रिकोणीय क्षेत्र के किसी भी हिस्से को कवर करने के लिए एक शासक या सामाजिक अंतरिक्ष कक्ष के खिलाफ फ्लैट में जाना जाता लंबाई के एक स्टीकर, लेकिन न रखें।
      1. क्षैतिज स्थिति में प्रयोगों के लिए, समर्थन स्टैंड में सामाजिक अंतरिक्ष चैम्बर जगह नहीं है; बजाय काम की सतह पर सामाजिक अंतरिक्ष कक्ष फ्लैट करना।
      2. मक्खियों तय हो चुका है, जब आम तौर पर लगभग 30 मिनट के बाद, सामाजिक अंतरिक्ष कक्ष के एक तस्वीर ले लो। फ्रेम पूरे भीतरी त्रिकोणीय अखाड़ा, शासक, और लेबल होता है कि सुनिश्चित करें।
      3. प्रत्येक जीनोटाइप और हालत (आदर्श 3 आंतरिक प्रतिकृति और 3 स्वतंत्र दोहराता) के लिए प्रयोग को दोहराने।

      4. सामाजिक अंतरिक्ष डाटा का विश्लेषण

      1. ImageJ 17 में निम्न मैक्रो आयात करें
        1. ImageJ यहाँ उपलब्ध है: http://rsbweb.nih.gov/ij/।
        2. आप मैक्रो सबफ़ोल्डर में, नाम 'Measure_Distances.txt' ImageJ / plugins फ़ोल्डर में एक फ़ाइल में नीचे मैक्रो को बचाने, और मदद> अद्यतन मेनू आदेश का उपयोग करके प्लगइन्स मेनू में एक 'उपाय दूरियां' कमांड बना सकते हैं। '
        3. एक .txt में कॉपी अनुपूरक डेटा में प्रदान की जाती हैं और मूल रूप से 3 में प्रकाशित किया गया है कि मैक्रो को फ़ाइल।
      2. एक कंप्यूटर के लिए तस्वीरें अपलोड, और एक pictu खोलनेImageJ का उपयोग कर रहे हैं।
        1. के स्टीकर के लिए (एक ही दृष्टिकोण तस्वीर में शासक पर 1 सेमी निशान 0 सेमी से एक रेखा खींचने से एक पैमाने पर बनाने, और विश्लेषण टैब के अंतर्गत, उस दूरी के लिए 1 सेमी के पैमाने स्थापित करने के लिए सेट स्केल सुविधा का चयन नाम से जाना जाता लंबाई)। तस्वीर के पैमाने को लागू करने से पहले वैश्विक विकल्प चुनें।
        2. संभव के रूप में चित्र के बाकी के रूप में ज्यादा दूर करते हुए, यह मक्खियों के सभी शामिल हैं कि इस तरह की छवि टैब के तहत फसल सुविधा का उपयोग कर चित्र को काटें।
        3. छवि टैब के तहत प्रकार विकल्प से 8 बिट का चयन करके चित्र काले और सफेद बनाने।
        4. छवि टैब की समायोजित विकल्प के अंतर्गत थ्रेसहोल्ड की सुविधा के लिए जा रहा द्वारा तस्वीर से सभी पृष्ठभूमि शोर निकालें। बढ़ाने के लिए या प्रत्येक मक्खी के शरीर स्पष्ट रूप से छवि में किसी भी अन्य चिह्नों के बिना देखा जा सकता है, ताकि इसके विपरीत दूर करने के लिए स्लाइडर्स खींचें। नहीं मक्खियों हैं कि चिह्नों देखते हैं, तो आयताकार उपकरण के साथ उन पर कब्जा करने और उन्हें हटा दें।
        5. ठीक करनाविश्लेषण टैब के अंतर्गत निर्धारित माप उपकरण का उपयोग करके माप। एरिया, मास, केन्द्रक के केंद्र, और प्रदर्शन लेबल का चयन करें। इसके बाद, विश्लेषण कण मक्खियों का प्रतिनिधित्व सभी काले धब्बे की एक क्रमांकित सूची बनाने के लिए विश्लेषण टैब के अंतर्गत इस सुविधा का चयन करें।
          1. जब कणों का विश्लेषण का उपयोग; सेट आकार 0.01-0.1 (पिक्सेल इकाई का चयन न करें); घेरा 0.00-1.00; शो की रूपरेखा; परिणाम प्रदर्शित, और प्रबंधक को जोड़ें।
          2. प्रत्येक काला टीका (प्रत्येक कण) मूल चित्र को क्रमांकित सूची की तुलना द्वारा, मूल तस्वीर में हैं कि मक्खियों का सही प्रतिनिधित्व है कि सुनिश्चित करें।
            नोट: एक साथ बहुत करीब हैं कि कुछ मक्खियों एक कण के रूप में गिना जा रहा है, स्वयं द्विआधारी छवि पर दो मक्खियों अलग करने के लिए एक सफेद रेखा खींचना।
        6. ईए से, सेमी में, दूरी युक्त एक नई सूची बनाने के लिए प्लगइन्स टैब में दूसरा मैक्रोज़ विकल्प के अंतर्गत सूची दूरियां मैक्रो - सूची का चयन किया जाता है, जबकि निकटतम पड़ोसी का उपयोगचर्चा उनके निकटतम पड़ोसी के लिए उड़ान भरने के लिए।
      3. ImageJ से निकटतम पड़ोसी दूरी कॉपी और एक स्प्रेडशीट कार्यक्रम के एक स्तंभ में पेस्ट करें।
        1. एक ही स्प्रेडशीट पर प्रत्येक दोहराने से डेटा के सभी संकलन और जीनोटाइप और हालत से आयोजन।
      4. सांख्यिकीय सॉफ्टवेयर का उपयोग कर डेटा विश्लेषण करते हैं। इस प्रयोग में, ग्राफ़ पैड चश्मे (MacOSX के लिए 6 संस्करण, GraphPad सॉफ्टवेयर, सैन डिएगो कैलिफोर्निया संयुक्त राज्य अमेरिका, www.graphpad.com) एक तरह से एनोवा, और Kruskal वालिस टेस्ट की Tukey और Dunnet के बाद तदर्थ परीक्षणों का संचालन करने के लिए इस्तेमाल किया गया था।
      5. दूरियों का वितरण एक गैर पैरामीट्रिक वितरण एक प्रकार है, और डेटा बॉक्स और Tukey की मूंछ (outliers समाप्त करने के लिए) के रूप में प्रतिनिधित्व कर रहे हैं।

      5. घुस परख (नियंत्रण व्यवहार)

      1. क्षमता 14,15,18 चढ़ाई परीक्षण मक्खियों के लिए एक नियंत्रण के रूप में एक चढ़ाई परख का प्रयोग करें।
        1. प्रतिधारा तंत्र का उपयोग करें कि इस तरह के तीन परीक्षणों गएक समानांतर में चला जा।
      2. विपरीत स्थानों में ताजा खाली शीशियों के साथ प्रतिधारा तंत्र के निचले भाग में 1 सेंट, 3 में 100 भोले मक्खियों तीन अलग-अलग परीक्षण शीशियों में (पहले परीक्षण नहीं किया गया है कि मक्खियों), और उन्हें तस्वीर करने के लिए स्थानांतरण 50 और पिछले स्लॉट्स,।
      3. तंत्र के निचले भाग में खाली स्थान में ताजा है, खाली शीशियों रखें।
      4. प्रयोग आरंभ करने के लिए, सब मक्खियों प्रत्येक ट्यूब के नीचे हैं, जैसे कि तंत्र नीचे तीन बार ठोकर।
      5. 15 सेकंड के लिए टाइमर शुरू (शीर्ष शीशी तक पहुंचने के लिए 3-7 दिन पुरानी कैंटन-एस की ~ 100% के लिए पर्याप्त समय - चित्रा 3F देखें)।
      6. एक स्लॉट से शीर्ष शीशियों विस्थापित करने के लिए, जवाबी मौजूदा तंत्र के ऊपरी हिस्से स्लाइड।
      7. नीचे शीशियों में सब मक्खियों लाने के लिए, नीचे तंत्र दोहन से मक्खियों लीजिए।
        1. 1 और 2 ट्यूब (या 3 और 4 वें, 5 वें वें) को ऊपर तक पहुँच नहीं था कि मक्खियों और शीर्ष शीशी पहुंच गया है कि मक्खियों को क्रमशः अनुरूप हैं।
      8. प्रदर्शन सूचकांक (पीआई) की गणना।
        1. प्रत्येक शीशी में मक्खियों की संख्या की गणना।
        2. पीआई ऊपरी ट्यूब पर चढ़ाई करने में सक्षम मक्खियों का प्रतिशत है।
        3. पीआई के साधन एक सामान्य वितरण 1 पालन करें, और डेटा मतलब (SEM) के लिए मतलब प्लस या माइनस मानक त्रुटि के स्तंभ रेखांकन के रूप में प्रतिनिधित्व कर रहे हैं।
          नोट: वैकल्पिक रूप से, पीआई पुराने मक्खियों के लिए कम शीशी (के ऊपरी हिस्से तक पहुंचने में सक्षम मक्खियों के प्रतिशत के रूप में गणना की जा सकती, 5 सेकंड में 12 दिन पुरानी संक्रमित संक्रमित और गैर बीच क्षमता चढ़ाई में एक फर्क यों के लिए पर्याप्त समय है एक भी तस्वीर से मात्रा निर्धारित कैंटन-एस: परिणाम देखें)। दूसरों को भी क्षमता 19-22 चढ़ाई यों के लिए उपयुक्त हैं कि डराना प्रेरित नकारात्मक geotaxis में प्रदर्शन के विभिन्न उपायों का इस्तेमाल किया है।

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Representative Results

सामाजिक अंतरिक्ष कक्ष ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर के सामाजिक व्यवहार यों के लिए एक उपकरण के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है। एक्रिलिक spacers और कांच के शीशे कई संभावित confounding संकेतों की उपस्थिति के बिना स्थिर समूहों के रूप में कर सकते हैं मक्खियों, जिसमें एक दो आयामी क्षेत्र प्रदान करता है कि एक आंतरिक त्रिकोणीय अखाड़ा फार्म एक साथ काटा गया है। मक्खियों ऊर्ध्वाधर क्षेत्र के लिए स्थानांतरित कर रहे हैं, वे नीचे टैप किया जा रहा से चौंका, और वे एक भागने व्यवहार से प्रतिक्रिया कर रहे हैं: नकारात्मक geotaxis। वे एक तंग समूह के लिए मजबूर ईमानदार त्रिकोण के शीर्ष करने के लिए चढ़ाई, और फिर आगे ले जाने के लिए एक दूसरे के रूप में, और क्षेत्र का पता लगाने के लिए करने के लिए समय प्रदान की जाती हैं। 20 से 40 मिनट के बाद, वे आगे बढ़ बंद करो, और एक स्थिर समूह का गठन किया है। प्रत्येक मक्खी और अपने निकटतम पड़ोसी के बीच की दूरी को अपने पसंदीदा सामाजिक अंतरिक्ष के एक मात्रा का ठहराव प्रदान करने के लिए एक तस्वीर से मापा जा सकता है। मक्खियों करीब वे कर रहे हैं अपने पड़ोसियों के लिए और अधिक सामाजिक माना जाता है।

उड़नाघनत्व के तहत क्षमता के बिंदु तक चैम्बर में सामाजिक अंतरिक्ष में एक भूमिका निभा नहीं है। बड़ा खड़ी उन्मुख कक्ष में 20-70 मक्खियों के एक बड़े समूह के लिए, सामाजिक अंतरिक्ष समूह घनत्व (2A चित्रा, बी) के स्वतंत्र है। सामाजिक अंतरिक्ष कक्ष में केवल 10 या 15 मक्खियों के साथ, सामाजिक अंतरिक्ष में वृद्धि करने के लिए अग्रणी है, सबसे अधिक संभावना एक स्थिर सामाजिक समूह बनाने के लिए पर्याप्त व्यक्तियों वहाँ नहीं है (2A चित्रा, बी)। हालांकि, मक्खियों की एक बड़ी संख्या का परीक्षण कर हमेशा के लिए सुविधाजनक नहीं है - उत्परिवर्ती व्यक्तियों की संख्या सीमित है जहां कुछ निश्चित परिस्थितियों में, शोधकर्ताओं ने सामाजिक अंतरिक्ष कक्ष के मानक आकार के लिए काफी बड़े मक्खियों के समूह इकट्ठा करने में सक्षम नहीं हो सकता है। मक्खियों के छोटे समूहों का उपयोग सामाजिक अंतरिक्ष बढ़ाता की सुविधा के लिए, शोधकर्ताओं ने दो आयामी क्षेत्र के क्षेत्र में छोटा होता है कि इस तरह के सामाजिक अंतरिक्ष कक्ष में हेरफेर कर सकते हैं लेकिन मक्खी प्रति क्षेत्र लगातार बना रहता है। सामाजिक के दो प्रकार, डी चित्रा 1C में दिखाया गया हैअंतरिक्ष कक्षों छोटे समूहों के लिए संशोधित लेकिन बड़े कक्ष के रूप में एक ही घनत्व को बनाए रखने। इस तरीके में, मक्खी घनत्व रखते हुए, और चैम्बर आकार एक समान सामाजिक रिक्ति (चित्रा -2) प्राप्त करने की अनुमति देता है को कम करने।

एक ही समग्र रुझान एक क्षैतिज स्थिति (चित्रा 2 डी) में रखा सामाजिक अंतरिक्ष कक्षों के लिए सही पकड़। हालांकि, हम मक्खियों इस तरह के एक क्षैतिज सेटिंग में अलग आगे हो जाते हैं कि निरीक्षण कर सकते हैं, और वे आसानी से एक व्यवस्थित नहीं है। केवल 15 और 20 मक्खियों समूहों है कि 40 मक्खियों (एफ igure 2 डी) के साथ समूहों की तुलना में अधिक से अधिक सामाजिक अंतरिक्ष दिखा रहे हैं।

कि भीड़भाड़ मक्खियों के बड़े समूहों में देखा निकटतम पड़ोसी को कम दूरी के लिए जिम्मेदार नहीं थे इस बात की पुष्टि करने के लिए, प्रत्येक से दूरी अन्य सभी मक्खियों के लिए उड़ान भरने 9, के रूप में मापा गया था। निकटतम पड़ोसी के लिए दूरी बनाम सब मक्खियों के लिए दूरी, बढ़ाता एक समूह behavi का आकलन करने की अनुमति देता हैया, बजाय एक समूह के भीतर व्यक्तियों के व्यवहार की। जैसी कि उम्मीद थी, समूह में मक्खियों की राशि के रूप में वृद्धि हुई सब मक्खियों के लिए दूरी, न कि व्यक्तिगत मक्खियों के समूह के ही एक प्रतिबिंब है, अधिक से अधिक था। इस प्रवृत्ति को दोनों खड़ी है और क्षैतिज स्थिति में सामाजिक अंतरिक्ष कक्षों (चित्रा 2 ई, एफ) के लिए मनाया गया। इसलिए, बड़े समूहों से मक्खियों के कारण अंतरिक्ष प्रतिबंध को अपने पड़ोसी के लिए एक करीब दूरी रखने के लिए मजबूर नहीं कर रहे थे। चैम्बर में 15 से अधिक मक्खियों देखते हैं जब इसके बजाय, मक्खियों तंग सामाजिक समूहों के रूप में।

अन्य व्यवहार परीक्षण के रूप में, सामाजिक अंतरिक्ष कक्ष का उपयोग करने के लिए एक सीमा खड़ी यह कोई geotaxis या चढ़ाई impairments के साथ मक्खियों की आवश्यकता है। उदाहरण के लिए, गुआंगज़ौ एस Providencia 23 सामाजिक रिक्ति के उन्मुखीकरण के आधार पर विभिन्न सामाजिक रिक्ति परिणाम एक चढ़ाई दोष के अधिकारी और प्रदर्शन rettgeri ग्राम नकारात्मक जीवाणु के साथ एक सप्ताह के लिए संक्रमित मक्खियोंकक्षों। परीक्षण खड़ी प्रदर्शन किया गया था, जब संक्रमित मक्खियों की सामाजिक अंतरिक्ष संक्रमित मक्खियों कक्ष (चित्रा 3) के शीर्ष पर एक स्थिर समूह के रूप में करने में सक्षम नहीं थे, शायद इसलिए क्योंकि नियंत्रण की सामाजिक अंतरिक्ष से अधिक था। एक ही परिस्थितियों में मक्खियों तो क्षैतिज उन्मुख सामाजिक अंतरिक्ष कक्षों में परीक्षण किया गया है, जब हरकत क्षमता क्षैतिज तैनात सामाजिक अंतरिक्ष कक्षों (चित्रा 3 बी) में सामाजिक अंतरिक्ष के लिए एक कारक की शायद कम यह दर्शाता है कि कोई महत्वपूर्ण मतभेद थे। संक्रमित मक्खियों नेत्रहीन नियंत्रण से चढ़ाई करने के लिए कम कर रहे हैं, वहीं इस चढ़ाई परख (चित्रा 3 सी) का उपयोग मात्रा निर्धारित किया जा सकता है। 5 सेकंड के बाद, नियंत्रण मक्खियों का लगभग 44% शीर्ष कम शीशी में से आधे से और संक्रमित मक्खियों के केवल 32% तक चढ़ गए। यह जो कर सकते हैं, इस परख में सब मक्खियों खराब (वे शायद ही कभी शीर्ष शीशी, कम शीशी का केवल ऊपरी भाग तक पहुँचने) चढ़ाई कि ध्यान देने योग्य हैवे मक्खियों 22 उम्र बढ़ने के कारण चढ़ाई में एक दोष प्रदर्शन करने के लिए शुरू करने के समय है, जो बाद के eclosion, 12 दिनों कर रहे हैं कि इस तथ्य से समझा जा सकता है।

हम पहले से 1 से पता चला है के रूप में हालांकि, कोई चढ़ाई दोष है कि उपभेदों के लिए, कक्षों की दोनों झुकाव, एक ही परिणाम के लिए नेतृत्व किया। इस प्रयोग में, सामाजिक अंतरिक्ष में ही वृद्धि खड़ी त्रिकोण या क्षैतिज परिपत्र कक्षों (- 1 में प्रकाशित आंकड़ों के बॉक्स में पुनर्विश्लेषण और गलमुच्छा चित्रा 3 डी, ई) में सीएस 10 केंटन-S के लिए और 1118 डब्ल्यू देखा गया था। (- चित्रा 3F 15 सेकंड पसंद) यह या तो चैम्बर अभिविन्यास में प्रकारों के बीच सामाजिक अंतरिक्ष में अंतर के लिए एक कारक नहीं था यह दर्शाता सीएस 10 केंटन-एस के बीच और 1118 डब्ल्यू क्षमता चढ़ाई में कोई अंतर नहीं था। सीएस के 3.3 और 14% ± ± 17% 5 सेकंड विकल्प दिया तो1118 सीएस 10 ऊपरी शीशी में पहुँच w के 2.5 (सांख्यिकीय अलग नहीं, नहीं दिखाया डेटा)।

सामाजिक अंतरिक्ष कक्ष का उपयोग शोधकर्ताओं ने यह भी है कि वे दिन के एक ही समय में अपने प्रयोगों को दोहराने यह सुनिश्चित करना चाहिए। सीएस दोनों कैंटन-S के लिए और 1118 डब्ल्यू 10 पुरुष, सामाजिक संबंधों को प्रभावित किया, दिन के समय गुज़र जाता है। (ZT11 ZT12 - बस से पहले बंद रोशनी) शाम में परीक्षण मक्खियों - (- प्रकाश की शुरुआत के बाद घंटों में समय ZT7 को ZT4 Zeitgeber समय) दिन के समय की तुलना में जब दोनों जीनोटाइप के लिए एक बहुत बड़ा सामाजिक अंतरिक्ष से पता चला है, उनके रिश्तेदार अंतरिक्ष अंतर संरक्षित किया गया था, हालांकि - यानी, 1118 डब्ल्यू सी 10 मक्खियों अभी भी कैंटन-एस शाम (चित्रा 4 ए) में मक्खियों की तुलना में कम सामाजिक कर रहे हैं। दिलचस्प है, केवल सामाजिक कैंटन-एस पुरुषों की जगह है, लेकिन नहीं टीशाम (चित्रा 4 बी) में मादा मक्खियों के लिए सामाजिक अंतरिक्ष की बड़ी भिन्नता की ओर एक प्रवृत्ति थी, हालांकि महिलाओं की टोपी, शाम में बढ़ जाती है। हम पहले स्वतंत्र रूप से एक ही टिप्पणियों 24 बना दिया है।

हम पहले से Bisphenol एक (BPA) 2 के प्रभाव का अध्ययन करने के लिए एक ओरेगन आर लाइन का उपयोग कर सूचना दी, सामाजिक अंतरिक्ष कक्ष भी ड्रोसोफिला की आनुवंशिक पृष्ठभूमि के प्रति संवेदनशील है। यहाँ, हम एलवुड, एक हाल ही में पकड़े गए जंगली प्रकार लाइन, कैंटन-एस और समरकंद लेकिन नहीं ओरेगन (चित्रा 5) की तुलना में सामाजिक अंतरिक्ष में वृद्धि हुई थी कि पता चलता है। समरकंद और ओरेगन के सामाजिक रिक्त स्थान काफी एक दूसरे से अलग है लेकिन कैंटन-एस (चित्रा 5) के सामाजिक अंतरिक्ष से दोनों अधिक से अधिक नहीं थे। ये आंकड़े एक दिया माहौल में, अलग जन्मजात और जंगली प्रकार उपभेदों व्यवहार के लिए एक आनुवंशिक घटक का संकेत है, एक अलग सामाजिक जगह है कि दिखा। यह भी एसई इंगित करता है किइस परीक्षण के nsitivity इस प्रकार मक्खियों से पहले प्रयोग के लिए उपयुक्त आनुवंशिक पृष्ठभूमि में outcrossed होने की आवश्यकता है। इस मतभेद को सुनिश्चित करने में मदद मिलेगी, या इसके विपरीत सामाजिक अंतरिक्ष में देखा समानताएं हैं, कारक परीक्षण किया जा रहा करने के कारण कर रहे हैं।

चित्र 1
चित्रा 1। सामाजिक अंतरिक्ष कक्ष घटकों और व्यवस्था। (ए) के विभिन्न आयामों की सामाजिक अंतरिक्ष कक्षों 16.5 सेमी की ऊंचाई के साथ (सही त्रिकोण के आकार में और एक्रिलिक स्पेसर (17.6 0.3 सेमी द्वारा द्वारा 17.6 सेमी) एक ही कांच के शीशे का प्रयोग कर बनाया जा सकता है, 8.9 सेमी का एक आधार, और 0.3 सेमी की मोटाई - एक छोटे से पत्र एक) और आयत (0.3 सेमी से 1.5 सेमी से 9 सेमी ने संकेत दिया -। एक छोटा सा पत्र ख द्वारा इंगित) (बी) के सबसे बड़े सामाजिक अंतरिक्ष कक्ष, एक के रूप में वर्णित के लिए उपयुक्त है 30-40 मक्खियों। यह भीतरी मंद है86.45 2 सेमी की एक क्षेत्र को दे रही है, और 40 मक्खियों के लिए उड़ान भरने के अनुसार 2.16 सेमी 2 के एक क्षेत्र के लिए अग्रणी 14.5 सेमी से 16.5 सेमी से 16.5 सेमी की ensions,। (सी) 20 मक्खियों के लिए एक कक्ष आकार इष्टतम। यह 43.25 2 सेमी की एक क्षेत्र को दे रही है, और मक्खी प्रति 2.16 सेमी 2 के एक क्षेत्र के लिए अग्रणी 5.96 सेमी से 14.5 सेमी से 16.5 सेमी की आंतरिक आयाम है। (डी) छोटे कक्ष, 15 मक्खियों के लिए इष्टतम। यह 32.45 2 सेमी की एक क्षेत्र को दे रही है, और मक्खी प्रति 2.16 सेमी 2 के एक क्षेत्र के लिए अग्रणी, 8.9 सेमी से 8.9 सेमी से 10.2 सेमी की आंतरिक आयाम है। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्र 2
चित्रा 2। चैम्बर और समूह आकार नहीं, बल्कि घनत्व के अभिविन्यास, सामाजिक अंतरिक्ष प्रभावित करते हैं। डेटा एक बॉक्स में प्रतिनिधित्व कर रहे हैंऔर 1 सेंट चतुर्थक (25 वें प्रतिशत) का प्रतिनिधित्व बॉक्स और 3 चतुर्थक (75 वें प्रतिशत), मंझला का प्रतिनिधित्व बॉक्स में लाइन, और Tukey की मूंछ के साथ कक्ष में निकटतम पड़ोसी के लिए दूरी के गलमुच्छा साजिश । (एबी) प्रतिनिधि डेटा एक ही आकार के एक कक्ष के भीतर मक्खियों की संख्या में वृद्धि स्थिर सामाजिक अंतरिक्ष माप की ओर जाता है कि पता चलता है। 10 से 70 केंटन-एस पुरुष मक्खियों का समूह बड़ा खड़ी सामाजिक अंतरिक्ष कक्ष में रख दिया और 30 मिनट के लिए व्यवस्थित करने के लिए अनुमति दी गई थी; प्रत्येक मक्खी का निकटतम पड़ोसी के लिए दूरी दर्ज किया गया था। कम से कम 15 मक्खियों होने समूह बड़े कक्ष में 20 से अधिक मक्खियों होने समूहों की तुलना में काफी अधिक सामाजिक अंतरिक्ष था। (ए) समूह 10 एन = 9 का, 20 एन = 9, 30 एन = 8, 40, एन = 8, Kruskal -Wallis परीक्षण पी <0.0001, डन एकाधिक तुलना परीक्षण: प्रत्येक अक्षर के समूहों सांख्यिकीय अलग एक # बी पी <0.0001 से संकेत मिलता है (बी) <।/ 15 एन = 6, 40 एन = 8, 50 एन = 5, 60 एन = 6, 70 एन = 5, Kruskal वालिस परीक्षण पी <0.0001, एक # बी पी <0.001 के मजबूत> समूह। (सी) जब चैम्बर के आकार की मक्खी घनत्व (बड़े कक्ष में क्रमश माध्यम में छोटे में 15, 20 या 40, मक्खी प्रति 2.16 सेमी 2 के घनत्व पर हर बार बनाए रखने के लिए निकाला जाता है खड़ी परीक्षण किया है, जब कोई महत्वपूर्ण अंतर मनाया जाता है। (डी ) लेकिन इन सामाजिक अंतरिक्ष कक्षों क्षैतिज रखा जाता है जब 15 या 20 मक्खियों 40 मक्खियों (15 एन के समूह = 3, 20 एन = 4, 40 एन = 4, Kruskal के साथ समूहों की तुलना में निकटतम पड़ोसी के लिए एक से अधिक दूरी के लिए किया था जो था समूहों -Wallis परीक्षण पी <0.0001, डन एकाधिक तुलना एक # बी पी <0.01) परीक्षा। (ई-एफ) के सब मक्खियों के लिए दूरी 15 के समूहों, 20 के लिए मापा गया था, और 40 पुरुष कैंटन-एस मक्खियों खड़ी दोनों में रखा गया है और क्षैतिज कक्षों केंद्रित। चैम्बर में मक्खियों की अधिक से अधिक राशि, अधिक से अधिक दूरी सभी के लिएमक्खियों ((ई): के समूहों के 15 एन = 6, 20 एन = 6, 40 एन = 3, Kruskal वालिस परीक्षण पी <0.0001, डन एकाधिक तुलना एक # बी पी <0.01 परीक्षण, (एफ): 15 एन के समूहों = 6, 20 एन = 6, 40 एन = 3, Kruskal वालिस परीक्षण पी <0.0001, डन एकाधिक तुलना एक # b # सी पी <0.0001 टेस्ट)। नोट: 3 अलग भौगोलिक क्षेत्रों और इस प्रकार विभिन्न प्रयोगशाला सेटिंग्स में में प्राप्त (ए, बी और सीएफ) शो डेटा (ए) क्षेत्र 1: यूसीएलए, लॉस एंजिल्स, सीए, (बी) क्षेत्र 2:। न्यूयॉर्क कॉलेज, न्यूयॉर्क, एनवाई; (सीएफ) क्षेत्र 3:। पश्चिमी विश्वविद्यालय, लंदन, पर यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्र तीन
चित्रा 3. अभिविन्यास ओच सामाजिक अंतरिक्ष कक्ष geotaxis समस्याओं confounding के लिए नियंत्रित करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है (एक - सी):। या तो पी से संक्रमित किया गया है कि 40 पुरुष कैंटन-एस मक्खियों का समूह सात दिनों के लिए rettgeri या एक नियंत्रण या तो खड़ी (ए) एक सामाजिक अंतरिक्ष कक्ष में डाल दिया है या क्षैतिज (बी) तैनात है और 30 मिनट के लिए व्यवस्थित करने के लिए अनुमति दी गई थी के रूप में मीडिया के साथ इंजेक्शन। प्रत्येक मक्खी का निकटतम पड़ोसी के लिए दूरी दर्ज किया गया था। डेटा 1 सेंट चतुर्थक (25 वें प्रतिशत) का प्रतिनिधित्व बॉक्स और 3 चतुर्थक (75 वें प्रतिशत), बॉक्स में लाइन के साथ, चैम्बर में निकटतम पड़ोसी के लिए दूरी की एक बॉक्स और गलमुच्छा साजिश में प्रतिनिधित्व कर रहे हैं मंझला, और Tukey मूंछ का प्रतिनिधित्व। (ए) प्रतिनिधि आंकड़ों से पता चलता पी से संक्रमित हैं कि मक्खियों के लिए सामाजिक अंतरिक्ष में वृद्धि rettgeri और एक खड़ी तैनात सामाजिक अंतरिक्ष कक्ष में रखा गया,मीडिया के साथ इंजेक्शन की तुलना में (Wilcoxon रैंक परीक्षण: प्रत्येक अक्षर के समूहों सांख्यिकीय अलग पी <0.0001 से संकेत मिलता है, एन = 6) (बी) के प्रतिनिधि डेटा पी से प्रभावित नहीं है सामाजिक अंतरिक्ष से पता चलता है। (p> 0.1, एन = 5 Wilcoxon रैंक परीक्षण) (सी) एक प्रतिधारा तंत्र दोनों संक्रमित और मीडिया पर नियंत्रण मक्खियों की चढ़ाई व्यवहार का आकलन करने के लिए इस्तेमाल किया गया था। मक्खियों एक क्षैतिज स्थिति में सामाजिक अंतरिक्ष कक्ष में रखा जाता है जब rettgeri संक्रमण। दो वेल्च के सुधार के साथ टी परीक्षण पूंछ; एन = 6 5 सेकंड चुनाव पर शीशी के शीर्ष छमाही में मक्खियों का%: संक्रमित मक्खियों ग्राफ प्रदर्शन सूचकांक ± SEM के मतलब का प्रतिनिधित्व करते हैं, उनके मीडिया नियंत्रण (मक्खियों ~ की तुलना में अधिक खराब 12 दिन पुरानी चढ़ाई 60 मक्खियों ~ की, प्रत्येक अक्षर के समूहों सांख्यिकीय अलग पी = 0.08) से संकेत मिलता (डी - एफ):। त्रिकोणीय या परिपत्र या तो खड़ी है और क्षैतिज तैनात कक्षों, के साथ) कैंटन-एस (सीएस की सामाजिक अंतरिक्ष तुलना करने के लिए इस्तेमाल किया गयाकि 1118 डब्ल्यू सी 10 (डब्ल्यू) के। डेटा 1 सेंट चतुर्थक (25 वें प्रतिशत) का प्रतिनिधित्व बॉक्स और 3 चतुर्थक (75 वें प्रतिशत), बॉक्स में लाइन के साथ, चैम्बर में निकटतम पड़ोसी के लिए दूरी की एक बॉक्स और गलमुच्छा साजिश में प्रतिनिधित्व कर रहे हैं मंझला का प्रतिनिधित्व करने के लिए, और Tukey की मूंछ। दोनों सामाजिक अंतरिक्ष कक्ष झुकाव और आकार, 1118 डब्ल्यू सी 10 में कैंटन-एस ((डी), खड़ी त्रिकोण की तुलना में एक अधिक से अधिक सामाजिक अंतरिक्ष था: Kruskal वालिस परीक्षण, प्रत्येक अक्षर सांख्यिकीय अलग समूहों पी <0.0001, (ई), क्षैतिज वृत्त का संकेत: Kruskal वालिस परीक्षण, प्रत्येक अक्षर के समूहों सांख्यिकीय अलग से संकेत मिलता है पी <0.01)। (एफ)) एक प्रतिधारा तंत्र सीएस 10 दोनों कैंटन-एस की और 1118 डब्ल्यू चढ़ाई व्यवहार का आकलन करने के लिए इस्तेमाल किया गया थाउपभेदों (3-5 दिन पुरानी मक्खियों, ग्राफ मतलब प्रदर्शन सूचकांक ± SEM प्रतिनिधित्व करते हैं: शीर्ष शीशी में मक्खियों के% 15 सेकंड के चुनाव पर)। सीएस 10 या तो कैंटन-एस के बीच या 1118 डब्ल्यू क्षमता में कोई अंतर नहीं था। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्रा 4
चित्रा 4। पुरुषों के सामाजिक अंतरिक्ष शाम के दौरान बढ़ जाती है। (ए) प्रतिनिधि डेटा "दिन पुरुष के बीच एक वृद्धि की सामाजिक अंतरिक्ष शाम के समय के दौरान मिड-डे घंटे की तुलना में (पहले बंद रोशनी करने के लिए" शाम "ZT 11-12,) (मक्खियों से पता चलता है "ZT 4-7)। सीएस 10 से 40 केंटन-एस मक्खियों की और 1118 डब्ल्यू समूहमक्खियों दिन के समय या शाम के समय या तो के दौरान एक सामाजिक अंतरिक्ष कक्ष में रख दिया और 30 मिनट के लिए व्यवस्थित करने के लिए अनुमति दी गई। प्रत्येक मक्खी का निकटतम पड़ोसी के लिए दूरी दर्ज किया गया था। दोनों जीनोटाइप के लिए, शाम में वृद्धि की सामाजिक अंतरिक्ष मक्खियों और दबाव के बीच मतभेद (एन = 6-7, Kruskal वालिस परीक्षण पी <0.0001, डन एकाधिक तुलना परीक्षण की परवाह किए बिना दिन के समय का रखा गया था: प्रत्येक अक्षर के समूहों सांख्यिकीय अलग पी संकेत मिलता < बड़ा आंतरिक बदलाव के लिए एक गैर-महत्वपूर्ण प्रवृत्ति महिलाओं में देखा जाता है, हालांकि 0.01)। (बी) गुआंगज़ौ एस मक्खियों सेक्स केवल पुरुषों द्वारा अलग हो गए थे जब Kruskal (शाम (टी पी <0.01) में सामाजिक अंतरिक्ष में वृद्धि से पता चला है -Wallis परीक्षण, प्रत्येक अक्षर के समूहों सांख्यिकीय अलग पी <0.0002) से संकेत मिलता है। डेटा 1 सेंट चतुर्थक (25 वें प्रतिशत) का प्रतिनिधित्व बॉक्स और 3 के साथ, चैम्बर में निकटतम पड़ोसी के लिए दूरी की एक बॉक्स और गलमुच्छा साजिश में प्रतिनिधित्व कर रहे हैंआरडी चतुर्थक (75 वें प्रतिशत), मंझला का प्रतिनिधित्व बॉक्स में लाइन, और Tukey की मूंछ। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्रा 5
चित्रा 5। मक्खियों की आनुवंशिक पृष्ठभूमि 40 केंटन-एस, समरकंद, ओरेगन के समूह। सामाजिक अंतरिक्ष को प्रभावित करता है, और एलवुड मक्खियों एक सामाजिक अंतरिक्ष कक्ष में रख दिया और 30 मिनट के लिए व्यवस्थित करने के लिए अनुमति दी गई। प्रत्येक मक्खी का निकटतम पड़ोसी के लिए दूरी दर्ज किया गया था। समूहों का वितरण अलग हैं (Kruskal वालिस परीक्षण, पी <0.0001), एक आम पत्र बांटने नहीं समूहों काफी अलग हैं। डेटा एक बॉक्स और गलमुच्छा पी में प्रतिनिधित्व कर रहे हैं1 सेंट चतुर्थक (25 वें प्रतिशत) का प्रतिनिधित्व बॉक्स और 3 चतुर्थक (75 वें प्रतिशत), मंझला का प्रतिनिधित्व बॉक्स में लाइन, और Tukey की मूंछ के साथ कक्ष में निकटतम पड़ोसी के लिए दूरी की बहुत (Dunnet की एकाधिक तुलना परीक्षण, पी <0.05 [डी], पी <0.001 [क, ख, ग], ऐसा है कि 1-2 आंतरिक प्रतिकृति के साथ 3 स्वतंत्र दोहराता है, एलवुड और समरकंद एन = 3, ओरेगन और गुआंगज़ौ एस एन = 4 के लिए )। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

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Discussion

इस प्रोटोकॉल में, सामाजिक अंतरिक्ष की मात्रा का ठहराव के लिए एक विस्तृत प्रक्रिया में वर्णित किया गया था। प्रयोग सुनिश्चित करने के लिए कुछ महत्वपूर्ण कदम सफल रहे हैं: 1) की सफाई और 2) मक्खियों से पहले कम से कम एक दिन एकत्र कर रहे हैं, यह सुनिश्चित तंत्र के भीतरी कक्ष बंद अपने खुद के तेल और scents रखने के लिए, तंत्र की स्थापना जब हमेशा दस्ताने का उपयोग प्रयोग ठंड संज्ञाहरण के किसी भी संभावित प्रभाव को कम करने के लिए, 3) प्रयोग से पहले 2 घंटा मक्खियों भूखे नहीं कर रहे हैं, और खुद को साफ कर दिया है सुनिश्चित करने के लिए ताजा भोजन युक्त नया शीशियों प्रदान करते हैं, 4) इन 2 घंटे के दौरान, चलो मक्खियों को जलवायु के अनुकूल बनाना उनकी प्रयोगों प्रदर्शन जब नए माहौल, 5) तापमान और आर्द्रता की स्थिति पर ध्यान दें; 6), प्रयोग चल रहा है जबकि सामाजिक अंतरिक्ष कक्षों को परेशान नहीं करने के लिए सुनिश्चित करें कि 24-25 डिग्री सेल्सियस और 50% आर्द्रता के बीच लगातार उन्हें रखने के लिए कोशिश करते हैं और 7) अधिमानतः Zeitgeber समय ZT4 बीच, दिन के एक ही समय में प्रयोग करते हैं और ZGT7।

सामाजिक अंतरिक्ष में लंबे समय से मुलाकात की एक न्यूनतम समूह आकार के रूप में वहाँ, कक्ष के भीतर मक्खियों के घनत्व पर ही निर्भर है, और समूह के आकार पर निर्भर नहीं है।मक्खियों की परवाह किए बिना समूह के सदस्यों की राशि की कि वे आपस में एक ही सामाजिक रिक्ति बनाए रखना होगा। हालांकि, उम्मीद के रूप में चैम्बर में सब मक्खियों, के लिए दूरी समूह आकार, साथ ही चेंबर उन्मुखीकरण से प्रभावित है। यह (चित्रा 3 डी 3E की तुलना में) क्षैतिज अभिविन्यास के बावजूद (मक्खियों के रूप में आसानी से व्यवस्थित नहीं है) का उपयोग करने के लिए चुनौतीपूर्ण किया जा रहा है, और हमारे हाथ में जीनोटाइप के बीच कम हो जुदाई के लिए अग्रणी है कि नोट के लिए महत्वपूर्ण है, कस्बा एट अल। 3 सफलतापूर्वक एक क्षैतिज इस्तेमाल किया , वर्ग कक्ष। उनके प्रयोगों में, निकटतम पड़ोसी के लिए दूरी हमारे खड़ी उन्मुख सामाजिक अंतरिक्ष परिणामों के समान था। हालांकि, उनके चैम्बर में, मक्खियों 'सामाजिक समूह रिक्ति हमारे ऊर्ध्वाधर चैम्बर के बजाय हमारे क्षैतिज चैम्बर के समान होने के लिए योगदान हो सकता है कि एक सतत airflow नहीं था। खड़ी कक्षों का उपयोग करने के लिए एक सीमा MOBILI है कि ड्रोसोफिला परीक्षण करने की क्षमता हैTy दोष। सामाजिक अंतरिक्ष कक्ष मोबाइल होने की मक्खियों की आवश्यकता है ताकि वे वे होने की इच्छा अपने पड़ोसी से क्या दूरी पर चुना जा सकता है। मक्खियों स्थिर थे या किसी तरह से घाटे था, वे कक्ष में ठीक से स्थिर समूहों के रूप में करने में सक्षम नहीं हो सकता है। गरीब हरकत के लिए एक संभावित उपाय तो क्षैतिज कक्षों का उपयोग करने के लिए, या मक्खियों तस्वीर लेने से पहले व्यवस्थित करने के लिए और अधिक समय की अनुमति होगी। शोधकर्ताओं ने यह भी खड़ी सामाजिक अंतरिक्ष कक्ष उचित है देखने के लिए चढ़ाई करने की क्षमता और मक्खियों के संभावित geotactic दोष का आकलन करना चाहिए। इन दोनों में से किसी में घाटा न हो, तो क्षैतिज तैनात कक्षों उन से बचने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है।

मक्खी की गतिविधि या समग्र सहनशक्ति और स्वास्थ्य चढ़ाई सामाजिक अंतरिक्ष की माप को प्रभावित करेगा, तो ध्यान से,, हम गतिविधि या हरकत स्तरों सामाजिक अंतरिक्ष के साथ सहसंबद्ध नहीं दिखा रहे हैं। एक अन्य अध्ययन में, हम हरकत कम हो जाती है कि एक उपचार, (BPA खिला) भी सामाजिक कमी दिखाने के लिए किअंतरिक्ष 2। लेकिन झुर्रीदार की म्यूटेंट (एक आत्मकेंद्रित उम्मीदवार जीन neurobeachin की ड्रोसोफिला ortholog) प्रदर्शन सक्रियता और बढ़ सामाजिक अंतरिक्ष 4। अंत में, सफेद उत्परिवर्ती मक्खियों हरकत में कोई वृद्धि के बिना, सामाजिक अंतरिक्ष 1,3 में वृद्धि प्रदर्शित या 18 geotaxis। संक्षेप में, गतिविधि के स्तर और सामाजिक रिक्ति के कई संयोजनों दो व्यवहार के बीच कोई संबंध का संकेत है, अब तक देखा गया है। वास्तव में, सामाजिक अंतरिक्ष जरूरी अलग अंतर्निहित तंत्रिका circuitry, सुझाव इस तरह के सामाजिक परिहार 8,25 के रूप में या तो अन्य सामाजिक व्यवहार, सहसंबंधी नहीं है। उदाहरण के लिए, झुर्रीदार / neurobeachin प्रदर्शन की म्यूटेंट सामाजिक अंतरिक्ष वृद्धि हुई है और सामाजिक परिहार 4 कम; लेकिन सफेद सामाजिक अंतरिक्ष में वृद्धि हुई है, और बहुत मजबूत सामाजिक परिहार 4 गया है दोनों।

दिन के समय सामाजिक अंतरिक्ष को प्रभावित करता है के रूप में, पुरुषों में कम से कम, यह critica हैउनके प्रयोगों प्रदर्शन कर रहे हैं और प्रयास सभी प्रयोगों के लिए एक समय लगातार बनाए रखने के लिए किया जाता है जब शोधकर्ताओं ने दिन के समय के प्रति सजग हैं कि एल। के लिए जिम्मेदार होना चाहिए कि अन्य कारणों से आयु, लिंग, और मक्खियों के संभोग स्थिति शामिल हैं। हम सामाजिक दूरी पुरुषों और महिलाओं दोनों के लिए 1, दोनों mated व्यक्ति की तुलना में कुंवारी में बढ़ जाती है कि पता है, और हम अब पुरुषों शाम (चित्रा 4 बी) में महिलाओं की तुलना में कम है कि करीब हैं दिखा। दिन के दौरान एकल मक्खियों की गतिविधि के स्तर में तनाव विशिष्ट सेक्स मतभेद पहले से है कि उनके प्रेमालाप व्यवहार 26,27 से संबंधित हो सकता है दिन के समय की तुलना में सुबह और शाम में उच्च हरकत गतिविधि पुरुषों का प्रस्ताव, वर्णित किया गया है। हालांकि हमारे मामले में, लिंगों अलग हो रहे हैं, लेकिन मक्खियों बांटा जाता है, और हम उनके सामाजिक अंतरिक्ष को मापने के समय तक, मक्खियों तय हो चुका है। पुरुष के जोड़े में circadian ताल रखा है कि फुजी एट अल। 27 रिपोर्टमहिला जोड़े की लय एकल मक्खियों की कि जैसे लगते हैं, जब एक साथ, स्पष्ट चोटियों के बिना, एक अनिश्चित दैनिक लय है। तो, शाम को पुरुषों में वृद्धि हुई रिक्ति शायद प्रेमालाप व्यवहार या हरकत गतिविधि में विशेष वृद्धि में वृद्धि से संबंधित है, और इस व्यवहार के यौन द्विरूपता अंतर्निहित कारण आगे की जांच किए जाने की आवश्यकता नहीं है।

पुरुषों और महिलाओं के बीच सामाजिक संपर्क में मतभेद देखा जा सकता है तो ध्यान में रखते, मक्खियों हमेशा प्रयोग के लिए सेक्स से अलग किया जाना चाहिए। उम्र मक्खियों के सामाजिक संबंधों को प्रभावित करता है कि कैसे अंत में, हम वर्तमान में अभी तक पता नहीं है। इसलिए, हम सामाजिक अंतरिक्ष प्रयोगों 22 से अधिक एक सप्ताह पुरानी मक्खियों में प्रभावित होने के लिए जाना जाता है चढ़ाई गतिविधि सहित विभिन्न व्यवहार प्रदर्शन, के रूप में, सात दिन से अधिक पुराने मक्खियों के साथ प्रदर्शन कर रहे हैं कि सलाह देते हैं।

सामाजिक अंतरिक्ष के लिए एक अंतिम विचार मंझला में मनाया विविधताओं हैसामाजिक दूरी। सामाजिक अंतरिक्ष माप (लॉस एंजिल्स, सीए सहित विभिन्न स्थानों से लिया गया: चित्रा 2A; न्यूयॉर्क, एनवाई: चित्रा 2 बी, चित्रा 3 डी, चित्रा 4, चित्रा 5, लंदन, पर चित्रा -2 सी एफ, इथाका, एनवाई: चित्रा 3 ए, बी, एक ही कैंटन-एस पृष्ठभूमि में सभी)। भौगोलिक स्थानों, या प्रयोगशाला सेटिंग्स के बीच निरंतर नहीं थे कि अज्ञात चर, मंझला सामाजिक दूरी को प्रभावित किया। संभव कारक विभिन्न खाद्य पदार्थों, ऊंचाई, अपने आप में वायुमंडलीय दबाव, और वायुमंडलीय दबाव 28 में परिवर्तन शामिल हैं। Medians के स्थानों के बीच स्थिर नहीं थे, medians के अत्यधिक स्थिर और प्रतिलिपि प्रस्तुत कर रहे हैं एक स्थान के भीतर; और सामाजिक अंतरिक्ष माप में देखा प्रवृत्तियों और पैटर्न स्थानों के बीच ही बने रहे। इसलिए, जब तक शोधकर्ताओं ने आंतरिक रूप से निरंतर स्थिति बनाए रखने के रूप में, वे हो जाएगासामाजिक अंतरिक्ष में अंतर का पता लगाने के लिए ble।

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Materials

Name Company Catalog Number Comments
Stereo Zoom Microscope  Nikon   SMZ-645 Any other standard scope for fly handling would work
Small paint brushes  for pushing flies
Jazz-mix Fisher 33545 any other standard drosophila food would work
Mini-Alarm Timer/Stopwatch
 Sharpie pens
Adhesive Tape
Medium size binder clips Staples to hold the chambers together: 1-1/4" (32mm) medium clips with 5/8" capacity
small SupportStands Carolina  707161 to hold the chambers in a vertical orientation
Buret clamps Carolina 707362
Digital Camera Nikon  Coolpix S8000  to take the still pictures
small ruler to be able to scale the picture
trifold board and white bench cover to provide a white background, and a homogeneous light.
pounding pad any mouse pad works.
Prism 6 GraphPad Software Inc. Prism 6 for Mac OS X Any statistical analysis software with t-test, one-way and two ANOVA would work

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References

  1. Simon, A. F., et al. A simple assay to study social behavior in Drosophila.: measurement of social space within a group. Genes Brain Behav. 11, 243-252 (2012).
  2. Kaur, K., Simon, A. F., Chauhan, V., Chauhan, A. Effect of bisphenol A on the behavior of Drosophila melanogaster. - Potential use of Drosophila as a model in the study of neurodevelopmental disorders. Behavioural Brain Research. , (2015).
  3. Burg, E. D., Langan, S. T., Nash, H. A. Drosophila social clustering is disrupted by anesthetics and in narrow abdomen ion channel mutants. Genes Brain Behav. 12, 338-347 (2013).
  4. Wise, A., et al. The autism candidate gene Neurobeachin (Rugose) mutants in Drosophila exhibit neuro-developmental disorders, aberrant synaptic properties, altered locomotion, impaired adult social behavior and activity patterns. J Neurosci. , 1-9 (2015).
  5. Parrish, J. K., Edelstein-Keshet, L. Complexity, pattern, and evolutionary trade-offs in animal aggregation. Science. 284, 99-101 (1999).
  6. Sokolowski, M. B. Social interactions in ‘‘simple’’ model systems. Neuron. 65, 780-794 (2010).
  7. Rittschof, C. C., Robinson, G. E. Genomics: moving behavioural ecology beyond the phenotypic gambit. Animal Behaviour. 92, 263-270 (2014).
  8. Fernandez, R. W., et al. Straightforward assay for quantification of social avoidance in Drosophila melanogaster. JoVE. (94), e52011 (2014).
  9. Hahn, N., et al. Monogenic heritable autism gene neuroligin impacts Drosophila. social behaviour. Behav Brain Res. 252, 450-457 (2013).
  10. Mogilner, A., Edelstein-Keshet, L., Bent, L., Spiros, A. Mutual interactions, potentials, and individual distance in a social aggregation. J Math Biol. 47, 353-389 (2003).
  11. Liu, L., Davis, R. L., Roman, G. Exploratory activity in Drosophila requires the kurtz nonvisual arrestin. Genetics. 175, 1197-1212 (2007).
  12. Soibam, B., et al. Open-field arena boundary is a primary object of exploration for Drosophila. Brain Behav. 2, 97-108 (2012).
  13. Ejima, A., Griffith, L. C. Ch. 30. Drosophila Neurobiology - A laboratory Manual., Ch. , Cold Spring Harbor Press. 475-481 (2010).
  14. Benzer, S. Behavioral mutants of Drosophila melanogaster. isolated by countercurrent distribution. PNAS. 58, 1112-1119 (1967).
  15. Connolly, J. B., Tully, T. Drosophila: A practical approach. Roberts, D. B. 1, 2nd, IRL Press. 265-317 (1998).
  16. Simon, A. F., Shih, C., Mack, A., Benzer, S. Steroid control of longevity in Drosophila melanogaster. Science. 299, 1407-1410 (2003).
  17. Rasband, W. S. ImageJ. , US National Institutes of Health. Maryland, U.S.A. (1997).
  18. Simon, A. F., et al. Drosophila, vesicular monoamine transporter mutants can adapt to reduced or eliminated vesicular stores of dopamine and serotonin. Genetics. 181, 525-541 (2009).
  19. Barone, M. C., Bohmann, D. Assessing neurodegenerative phenotypes in Drosophila .dopaminergic neurons by climbing assays and whole brain immunostaining. JoVE. (74), e50339 (2013).
  20. Ali, Y. O., Escala, W., Ruan, K., Zhai, R. G. Assaying locomotor, learning, and memory deficits in Drosophila. models of neurodegeneration. JoVE. , e2504 (2011).
  21. Gargano, J. W., Martin, I., Bhandari, P., Grotewiel, M. S. Rapid iterative negative geotaxis (RING): a new method for assessing age-related locomotor decline in Drosophila. Exp Gerontol. 40, 386-395 (2005).
  22. Simon, A. F., Liang, D. T., Krantz, D. E. Differential decline in behavioral performance of Drosophila melanogaster. with age. Mech Ageing Dev. 127, 647-650 (2006).
  23. Khalil, S., Jacobson, E., Chambers, M. C., Lazzaro, B. P. Systemic bacterial infection and immune defense phenotypes in Drosophila melanogaster. JoVE. , (2015).
  24. Fernandez, R. W., Akinleye, A. A., Nurilov, M., Rouzyi, Z., Simon, A. F. 54th Annual Drosophila Research Conference, Washinton D.C., , (2013).
  25. Suh, G. S. B., et al. A single population of olfactory sensory neurons mediates an innate avoidance behaviour in Drosophila. Nature. 431, 854-859 (2004).
  26. Helfrich-Förster, C. Differential control of morning and evening components in the activity rhythm of Drosophila melanogaster.--Sex-specific differences suggest a different quality of activity. J. Biol. Rhythms. 15, 135-154 (2000).
  27. Fujii, S., Krishnan, P., Hardin, P. E., Amrein, H. Nocturnal male sex drive in Drosophila. Curr Biol. 17, 244-251 (2007).
  28. Pellegrino, A. C., et al. Weather forecasting by insects: modified sexual behaviour in response to atmospheric pressure changes. PLoS One. 8, e75004 (2013).

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McNeil, A. R., Jolley, S. N., Akinleye, A. A., Nurilov, M., Rouzyi, Z., Milunovich, A. J., Chambers, M. C., Simon, A. F. Conditions Affecting Social Space in Drosophila melanogaster. J. Vis. Exp. (105), e53242, doi:10.3791/53242 (2015).

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