Introduction
Кондиционирования ока форма павловской кондиционирования и модельная система для исследования нейронных механизмов ассоциативного обучения и памяти. Было исследовано у различных видов, включая человека, кроликов, кошек, крыс и мышей. Парадигма включает в себя презентацию двух спаренных стимулов: нейтральный условный раздражитель (CS, например: тональный сигнал, вспышку света, или усов стимуляции), а также Характерная безусловный стимул (США; например, воздушный слоеного к глазу, или периорбитальный шок). США вызывает безусловную, рефлексивный ответ ока (т.е. UR). В конце концов, после нескольких презентаций парного CS-США, субъект учится ассоциировать CS с США. Это обучение проявляется в виде условной реакции (CR), мгновение ока, вызываемый только КС, который предшествует представление США.
Кондиционер в ока формы следа включает стимул свободной интервал в несколько часовundred миллисекунды, отделяющий CS и США (рисунок 1). Трассировка кондиционирования является формой обучения декларативной , поскольку она требует осознания стимула непредвиденных обстоятельств 1. Временной разрыв требует животное , чтобы держать нейронную "след" от сотовой станции в регионах переднего мозга , таких как гиппокамп для того , чтобы США и CS , чтобы стали ассоциироваться 1-6. Наряду с регионах переднего мозга, след кондиционирования также зависит от мозжечка 7.
Кондиционирования ока, поэтому, полезная парадигма для изучения многочисленных аспектов памяти, в том числе приобретения, консолидации и поиска. Во время кондиционирования ока, контрольная группа животных представлена с непарных раздражителей в случайном порядке, чтобы испытать для псевдообусловливании или сенсибилизированных ответов на КС, которые могут быть вызваны американской презентации в одиночку, а не узнал ассоциации CS-США.
Обычно используется apparaЕП для исследования климатизации ока грызунов представляет собой камеру , в которой грызуны могут свободно передвигаться в процессе обучения 8-10. При таком типе устройства, лямки обычно прикрепляется к заставкой, прикрепленной к черепу грызуна. Привязь позволяет за доставку США (а иногда CS) и для передачи ответа животного на эти раздражители (то есть, ответ) 10 ока. Сам фал может быть изменен в зависимости от типа стимулов поставляется и как записывается ответ ока.
Причина использования "свободно движущихся" привязной мышей для кондиционирования ока, что мыши бороться против сдержанности. Хотя другие виды могут быть более склонны к сдержанности, основным преимуществом использования мышей в экспериментах кондиционирования ока является то, что большинство имеющихся генетически модифицированных мутантных штаммов штаммы мыши. В дополнение к борющимся, полный Резtraint мышей приводит к острой нуждой. Препарат мыши голова фиксируется, что сводит к минимуму стресс приведет к увеличению физиологической информации, которую можно получить в процессе кондиционирования ока. Например, эта система позволит визуализации корковых нейронов с 2-фотонной микроскопии 11.
Головные фиксированные препараты использовались в предыдущих экспериментах , для оптической визуализации коры через съемные черепных имплантатов, в естественных условиях электрофизиологических записей в мозге грызунов с тетрода массивов, визуализации кальция двухфотонному, а также в качестве платформы для ока климатизации мышей 11 -16.
В системе головного фиксированной, надежной стимуляции и записи обеспечивается без полного ограничения мыши (рисунок 2). Головной убор, как той, которая используется в свободно движущейся системе прикреплен к черепу мыши. Во время обучения, головной убор прикреплен к разъему, который прикреплен к барам надцилиндрический беговой дорожки для того , чтобы стабилизировать голову грызуна (рисунок 2А). Цилиндрическая беговая дорожка позволяет мыши комфортно отдохнуть, но если мышь так хочет, а также позволяет ему работать или ходить. При использовании этой системы, мыши могут быть обучены с усов вибрации как CS и мягким периорбитальным электрическим током , как США (рисунок 1). США доставляется через провода хирургическим путем размещается под латеральнее кожи к глазу. CS доставляется через гребнем , который прикреплен к 2-слойной прямоугольного привода изгибающий (Фигура 2В). Гребень и гнуть привод затем прикрепляется к магнитным основанием, которое перемещается в надлежащее положение во время тренировки и корректируется для оптимальной доставки для каждого отдельного животного. Гребень позиционируется оседлать выбранных бакенбарды. Во время доставки на сотовой станции, сигнал посылается к изгибающим привода , который перемещает гребень и приводит к вибрации усов 17.
16,18,19. Причина усов стимуляции выбрана для CS в этой экспериментальной парадигмы является зависимость мышиных животных на их вибрисс для соматосенсорной ввода информации во время разведки. Баки стимуляции было показано , быть надежным и эффективным CS 20. Кроме того, учитывая устоявшуюся и организованной кортикальный субстрат системы вибриссы (т.е. ствол коры головного мозга), усов стимуляции как CS обеспечивает элегантный инструмент для картирования корковых изменений и пластичности , связанные с обучением 20,21 кондиционирования ока. Система лобовом фиксированной позволяет точно стимуляции выбранных усов для сравнения ответов между стимулированных нейронов и нейронов, получающих входные сигналы от нестимулированных усов. Наконец, многие штаммы мышей обладают возрастная потеря слуха как относительно молодых взрослых
Здесь представлены уникальные и важные изменения на другие препараты головы фиксировали для кондиционирования, ока включая методы CS и США поставки, а также приобретение ответа ока. Надежность этого аппарата и учебной парадигмы в кондиционированию ока продемонстрирована путем изучения кривых из кондиционированной мышей и относительно плоской кривой обучения от pseudoconditioned контрольных животных (рис 7А).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Все процедуры, связанные с мышами были проведены в соответствии с протоколами, утвержденными Institutional Animal Care Северо-Западного университета и использование комитета на основе руководящих принципов, выпущенных Национальным институтом здравоохранения.
1. Цилиндр (фиг.2А)
- Построить цилиндр , как описано Chettih и др. И Heiney и др. Из длинного цилиндра пены 14-15. Сокращение длины 10 см цилиндра и просверлить отверстие через центр, чтобы соответствовать оси, металлический стержень 12,7 мм (0,5 дюйма.) В диаметре. Установить цилиндр с его осью на металлический оптический макете , как описано Heiney и др. , Или другой поддержки (например, оргстекло) 15.
- Монтируют две вертикальные металлические стержни 12,7 мм в диаметре по обе стороны цилиндра.
- Прикрепите два правого угла крепления на металлические стержни.
- Найдите еще два стержня (5 см длиной, 12,7 мм в диаметре) через правый угол крепления. скос-йе концы этих стержней и выровнять их концы над центром цилиндра (рис 2G).
- Дрель и нажмите отверстие через выровненных концах стержней , чтобы соответствовать двум 4-40 винта машины , которые будут держать крылья разъема на месте (рис 2G).
2. Сборка системы Баки стимуляции (рис 2В)
- Вырезать сегмент 10 зуба гребенки от обычной расчески волос.
- Сократить разрез около 2-3 мм шириной и около 5 мм в глубину в верхней части сотов принимать 2-слойный привод прямоугольным изгибом.
- Припой один провод к каждой поверхности гибочного привода. Используйте припои и флюсы, предоставляемого изготовителем. Накройте привод и припой с изоляционной лентой, чтобы защитить мышь и пользователя от электрического тока.
- Скольжение приводную ленту в щель нарезают гребенки, так что гибка полоса привод сидит перпендикулярно к плоскости гребенки. Угол гребень так, что она наклонена на 45 ° и более естественным образом вытекает кривую лицо мыши.
- Закрепите конец привода ленты к верхней части гребня с быстрой установки эпоксидной смолы.
Примечание: Провода, припаянные к изгибающим привода полосы должен быть соединен с реостатом, который обеспечивает 40 вольт на привод. Предыдущие эксперименты показали, что 40 вольт является эффективным для кондиционирования, но не вызывает каких-либо реакций испуга. - Поместите изгибающий привод и гребень на подвижном креплении. Держатель пипетки прикреплен к магнитной основе , как правило , используется для буровых установок электрофизиологических в пробирке работает хорошо.
3. Сборка соединителя, который крепится к Rods над цилиндром (рис 2С, 2Е)
Примечание: Разъем представляет собой 3-D напечатано 7-луночное полосу смоделированную из 221 серии нейлона полосы Amphenol , используемой для привязи Вейс и Disterhoft и Галвез др 10,17.
- Нажмите на первое отверстие в полосе для 0-80 X-1"Винт машины. Это будет служить в качестве крепежного винта, чтобы закрепить головной убор к разъему. Прикрепите 0-80 гайку головки фиксирующего винта с цианакриловой клеем для облегчения поворота винта вручную.
- Оставьте одно отверстие пустой после того, как резьбовое отверстие (чтобы позволить комнате для 0-80 машины гайки) и нажмите пять позолоченных Relia-Tac розетки через оставшиеся пять отверстий.
- Зачистите покрытие выкл пять длинных проводов (провода, полученные из кабеля Ethernet) и припаять к концам гнездах.
Примечание: Первые два провода будут использоваться для записи сигналов электромиографические (ЭМГ), который будет определять ответ следующий фильтрации ока и усиление сигналов от усилителя. Вторые два доставят сигнал шок от стимула изолятором. Последний провод будет служить в качестве заземления. Эти провода будут подключены к системам, используемым для доставки CS таймерной-США. - Убедитесь, что электрическое соединение между проводами и розетками с Multimeter. Поместите мультиметра от настройки непрерывности и удерживайте один из зондов к контакту, а другой зонд к зачищенных концах провода. Штыри и провода электрически соединены, когда сопротивление является низким, и мультиметром издает звук.
- В качестве альтернативы, если мультиметр не имеет параметр непрерывности, измерьте сопротивление между контактами и проводами. Существует электрическая непрерывность, если существует очень мало измерено сопротивление.
- Подготовьте крылья разъема от двух до 220-транзисторов типа. Отрезать эмиттера, базы и коллектора приводит транзистора и выровнять поверхность, поэтому он может быть прикреплен к разъему.
- Обрежьте край лепестка монтажа прорвать отверстие так, язычок может проскользнуть под головку винта.
- Эпоксидные транзисторы к разъему. Отверстие в закладке монтажа будет использоваться для фиксации разъема к выше цилиндра стержней.
- Нанесите эпоксидную смолу на основе проводов прotruding из гнезда и позволить эпоксидной высохнуть. Эпоксидной смолы изолирует и защищает соединения.
4. Подготовка заставкой (Рисунок 2D, 2E)
Примечание: головной убор полоса представляет собой 3-D напечатано 7-луночное полоску смоделированную из серии нейлона полосы Amphenol 221 используется для заставкой Вейс и Disterhoft и Гальвес и др. 10,17. Эта часть не больше не производится на коммерческой основе. Файл принтера можно загрузить с веб-сайта этого журнала.
- Нажмите на первое отверстие в полосе для "машины винта 0-80 х 1 и оставить одно отверстие пустой после первого отверстия.
- Вставьте пять позолоченных штифты через дно оставшиеся пять отверстий (через более узкие концы). Используйте тиски для облегчения толкая булавки в полосу равномерно.
- С помощью тепловой съемник, снимите около 0,5 см от полиимидной покрытия от конца проволоки из нержавеющей стали (0,005 дюйма. В диаметре), припой зачищенный конец WIRE на открытие одного из штифтов и разрезать провод на 0,6-0,7 см.
- Зачистите примерно 0,2 см от конца провода, чтобы позволить току проходить к животному.
- Повторите шаги 4.3-4.4 для остальных трех проводов.
Примечание: Первые два провода будут записывать ответы ЭМГ в то время как вторые два будут служить для доставки шок животному. - В качестве последнего (пятого) провод будет служить в качестве грозотроса, вырублено около 5 см непокрытой проволоки из нержавеющей стали (0,005 дюйма. Диаметра), и припой к остальным штифтом.
- Обеспечение непрерывности между проводами и штырями с помощью мультиметра. (В случае провода заземления, который без покрытия, мультиметра зонд может быть размещен в любом месте вдоль провода.)
5. Хирургическая подготовка (Рисунок 2F)
- Стерилизовать всех хирургических инструментов, в том числе и головной убор. Стерилизовать головной убор, погрузив его в спирте, а затем промыванием стерильным физиологическим раствором.
- Обезболить мышь в индукционной камере с 3-4% -ногоaporized изофлуран, смешанный с расходом 1-2 л кислорода в минуту.
- Выяснить, что животное полностью под наркозом с пальца щепоткой. Мышь полностью под наркозом, когда она рефлекторно не реагирует на носок крайнем случае.
- После того, как животное было полностью под наркозом, вводят дозу бупренорфина гидрохлорида в качестве обезболивающего средства (0,05-2 мг / кг, подкожно), брить верхнюю часть головы животного, поместите его на крытой грелку на основе стереотаксической рамы , констатируют, что животное полностью под наркозом, и закрепите головку к раме. Поддержание потока парообразного изофлуран к животному, переключение на 2% при скорости потока 1-2 л кислорода в минуту. Нанесите небольшое количество глазной мази на роговицу.
- Лечить кожи головы с повидон-йода и спирта в три раза каждый, чередуя между ними.
- С номером 10 или 15 лезвие скальпеля, сделать надрез вдоль средней линии головы, обнажив череп с передней части тон глаза мимо кости (interparietal ~ 1,5-2 см).
- Держите спину закрылки кожи с микро-клипов. Поместите один клип над глазом, один по середине ростральной-каудальной оси и одна на задней части черепа на двустороннем уровне (то есть, используют шесть клипов во всех). Для того чтобы предотвратить заставкой отрыв, разоблачить, как большая часть черепа, насколько это возможно, в том числе и по бокам и сзади. Это приведет к увеличению площади поверхности для нанесения клея фиксирующим цементом.
- Используя скальпель, скрести вдоль верхней части черепа, чтобы удалить надкостницу и обеспечить чистую и сухую рабочую поверхность. Очистите верхнюю часть черепа с 3% -ной перекиси водорода в три раза.
- Просверлите два отверстия в черепе с размером 34 перевернутого конуса или заусенцев 1,6 мм гравюра резца бурового долота, чтобы принять 00-90 винты (0,0625 в. Долго). Винты обеспечит электрическое соединение с землей. Поместите одно отверстие в передней части брегмы, а другой перед Lambda, слева от средней линии, когда кондиционирование RIGHт глаз. Поместите один винт в каждое отверстие. Опустите винт 0,28 мм в череп для каждого полного оборота; два полных оборота достаточно.
- Создать несколько небольших дерн от приблизительно 0,75 мм в диаметре на черепе с целью увеличения площади поверхности и прочности сцепления для цемента.
- Возьмите заполненный головной убор и намотать провод заземления в конфигурации восьмерка вокруг двух винтов. Разрешить некоторые слабеют (~ 1,5 см между шлемом и винтом) в заземляющий провод таким образом, головной убор может быть правильно установлена позже.
Примечание: восьмерка, как правило, обеспечивает хорошее электрическое соединение между проводом и заземляющим винтами. Провод также может быть припаян к винту, чтобы обеспечить электрическое соединение. - Нанесите клей фиксирующих цемент. Следуйте инструкциям производителя для смешивания адгезивных фиксирующих цемента или смешать 4 совка L-порошковой смеси 8 капель основания и 2 капли катализатора в холодном керамической смесительной чашке (обеспечить температуру полосы Oп смешивания блюдо полностью черный.) Холодная температура продлевает рабочее время цемента.
- Покройте череп и винты обильно фиксирующим цементом и дайте высохнуть цемент. Это займет всего несколько минут.
- После того, как цемент высохнет, поместите головной убор в вертикальном положении, с штырьки стоя, над черепом. Держите головной убор на месте с держателем аналогично разъему
Примечание: Смотрите раздел "3. Сборка соединителя" -The держатель должен только быть пять отверстий полоса с позолоченными розетками, чтобы получить штырьки заставкой. Держатель крепится к кронштейну на стереотаксической рамы. Использование держателя и кронштейна облегчает позиционирование заставкой и проводов. - После того, как головной убор был позиционирован, отогните кожи вокруг периорбитальной области и расположить две ударные провода, чтобы позволить 0,2 см зачищенный конец, чтобы отдохнуть под кожей и примерно 2-4 мм непосредственно каудально по отношению к еуе. Не допускайте концы двух проводов касаться друг друга. Расположите два ЭМГ провода на мышечный округлый глазного над глазницы.
- При необходимости отрезать концы проводов, если они слишком долго, и кажется, как будто они могут непосредственно поцарапать орбиту и привести к инфекции. Если отрезать концы провода, убедитесь, что имеется достаточно оголенный провод подвергается. В качестве альтернативы, если провода кажутся слишком долго, согнуть проволоку обратно на базу, где они проходят из заставкой.
- Цемент основание проводов (то есть, конец вблизи шлемом) на месте на черепе с небольшим распространением адгезивных фиксирующих цемента и дать высохнуть (использовать половину части , описанной ранее).
- Удалите микро зажимы и аккуратно сложить лоскуты кожи назад над цементом. Дайте коже осесть естественным образом, чтобы предотвратить напряжение на любом участке кожи, чтобы избежать искажения веко, предотвращение ответа ока,и дистресс животному.
- Уплотнение пораженный участок с зубным цементом, покрывая все от вырезанной кожи к краю верхней части головного убора с цементом. Соблюдайте особую осторожность, чтобы избежать капает цемент на глаз или на контактах заставкой. Частично вылечил цемент может быть сглажена и манипулировать ими с помощью ватного тампона, который смоченной зубным цементом растворителем. Дайте цемент полностью высохнуть, прежде чем снимать держатель заставкой.
- Дайте животному, чтобы оправиться от наркоза на утепленной поверхности перед заменой животное обратно в клетку. Администрирование Metacam (1 мг / кг, SQ), а затем поместить животное обратно в клетку.
- Дайте животному 5-7 дней восстановления перед тестированием или обучения. Поддерживать стандартную послеоперационную помощь животному в соответствии с указаниями вашего учреждения. Животное должно быть проверено по крайней мере один раз в день после того, как он восстановился после операции. Следите за признаками плохого приема пищи и / или питья и вялым поведением. Если больподозревается, обеспечивают Metacam каждые 24 ч (та же доза, как в конце после операции) до тех пор, пока облегчены. Лидокаин могут быть локально применены к ране, если животное царапает или показывает признаки дискомфорта.
6. Размещение мыши на цилиндре и подготовки кадров (рис 2G)
- Для того, чтобы поместить курсор на цилиндр, задержите мышь с коротко рукой, держа ее за хвост одной рукой, а затем захватывая мышь за плечи с большим и указательным пальцами с другой. Заверните остальные пальцы вокруг живота мыши и туловища.
- С рука не сдерживая мышь, прикрепите разъем к шлемом на голове мыши и поверните фиксирующий винт.
- Поместите мышь мягко на цилиндр и удерживать его на месте в то время как имеется разъем к раме. Используйте два винта, чтобы закрепить разъем к выше цилиндра баров.
- После того, как разъем был прикреплен к раме блока цилиндров, Releаза трюме на мыши. Дайте мышь один день двух сессий привыкания к цилиндру. Разрешить каждому привыкания сессию ту же длительность каждого сеанса кондиционирования.
- Запись скорость спонтанного мигают во время привыкания и предварительно подвергать мышей к нитевидных вибрации CS для того, чтобы свести к минимуму возникновение испуга ответов. Примените CS, как во время фактического сеанса кондиционирования, но без электрического удара США.
- Примените усов стимуляции CS путем размещения системы Piezo близко (около 0,5 см) до условной стороне (правая сторона) мыши, в то время как скользя зубцы расчески над отдельными усов. Убедитесь в том, что одни и те же усы стимулируются изо дня в день, помещая систему Piezo в том же положении, изо дня в день.
- Начните обучение мыши на классической кондиционирования. Доставка двух сессий обучения в день в течение пяти дней. Оставьте около двух часов между каждой тренировки.
- К условной группе, гастрономвер тридцать испытаний на каждую сессию длинной 250 мсек усов вибрации CS (60 Гц) в паре с длинной 100 мс электрический импульс США (0,3 мА - 3 мА, доставленных из WPI A385R стимула изолятором). Отделить CS и США с 250 мс длительный стимул интервалом без следа , чтобы сделать задачу зависит от гиппокампа (рис 1) 23.
- Регулировка интенсивности электрического удара для каждого животного так, что моргание вызывается. Отдельные судебные процессы со случайным intertrial интервалом в 30-60 сек (в среднем на 45 сек, общей продолжительностью 30 минут за один сеанс.)
- Доставка тридцать непарный CS в одиночку и США в одиночку испытания каждый (в общей сложности шестидесяти испытаний) к pseudoconditioned группе, используя те же параметры стимула, как указано для условной группы. Убедитесь в том, что только в одиночку CS и американские испытания pseudorandomized таким образом, что нет стимула не представлена более чем в два раза подряд. Отделите каждое испытание со средним intertrial интервалом 22,5 сек.
- DeПечень фоновый шум на уровне 65 дБ на протяжении привыкания и тренировки для того, чтобы замаскировать любой шум вибрации, создаваемой с помощью усов стимулятора.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
8-10 недель мышей C57BL6 / J самцов были обучены на след кондиционирования на ока цилиндрической беговой дорожке аппарата головного фиксированной. 8 мышей были обучены с парными CS-американских презентаций (кондиционерами группа) и 9 мышей были обучены с непарных CS и США презентаций (pseudoconditioned группа).
Пример записи ЭМГ ответа от кондиционированной мыши кондиционированной показаны на рисунках 3 и 4. EMG записи для каждого испытания были исправлены и интегрированы с 10 мс постоянной времени. На рисунке 5 показана выпрямленный и интегрированный следы ответа EMG усредненные во всех испытаниях для каждого из 10 сеансов для обоих условного (А) и pseudoconditioned (B) мыши. Эволюция условных реакций можно видеть на рисунке 5А, с ответами становится больше ближе к возникновению США. Эта эволюция не видел яп pseudoconditioned ответов на рисунке 5В.
Эволюция своевременна, и , таким образом, хорошо заученные условные рефлексы также можно увидеть на рисунке 6. Рисунок 6 показывает гистограммы времени пика ответа после начала CS. Существует начальный пик на графике между 0 - 150 мс после начала CS. Этот начальный пик можно увидеть уже в сессии 1. С большим количеством учебных занятий, есть разработка второго пика на графике между 400-500 мс среди условных животных, что указывает на развитие более своевременными условных реакций.
7А показывает усредненные процента адаптивных условных реакций , записанных с условными и pseudoconditioned мышей. Адаптивные условные реакции считаются имеющими значительную активность, которая присутствует по меньшей мере, 20 мс BEFруда США начала (то есть, по меньшей мере , 4 SD больше средней активности представляют 250 мс до начала CS). За время тренировок, обусловленное мышах показали постепенное изучение парадигмы формирования путем выставления более условных адаптивные реакции с каждой тренировкой , так что условный мыши имели значительно более адаптивные ответы , чем обусловлена pseudoconditioned мышей (групп, F (1,15) = 20,62, р <.0005; сессии, F (1,9) = 9,987, р <0,0001; группы * сеансов, F (1,9) = 5,977, р <0,0001). Обратите внимание, что pseudoconditioned группа обычно выставляется псевдо CRs менее чем на 20% испытаний.
Рисунок 7B показывает усредненный условный зону реакции (площадь под кривой выпрямленного и комплексного ответа EMG) для обоих условных и pseudoconditioned мышей в течение десяти учебных занятий. Запланированные сравнения с повторяющейся мер ANOVA над LAST четыре сеанса (т.е. сеансов 7-10, как только условная группа достигла критерия обучения в размере 60% CR) показывают значительное основной эффект группы, что указывает , что область CR был в кондиционированной группе больше , чем в pseudoconditioned записи для группы обучения критерий (группы, F (1,14) = 5,733, р <0,05; сессия, F (1,3) = 0,486, нс; группы * сессия, F (1,3) = 0,432, нс).
На фиг.7С показаны усредненные процент альфа (испуга) ответы , записанные с условными и pseudoconditioned мышей. Альфа-ответы активность в течение 50 мс CS начала, которые были по крайней мере 4SD выше средней базовой активности. За время тренировок, кондиционерами и pseudoconditioned мышей обычно выставлялись альфа ответов на менее чем 25% испытаний, без каких - либо существенных различий между условными и pseudoconditioned мышей (группы, F (1,15) = 2,502, нс). Thе повторные измерения ANOVA было, однако, показывают значительное взаимодействие групп и сессий в связи с уменьшением pseudoconditioned ответов и содержание альфа - ответов на около 25% для кондиционированного мышей (группы * сеансов, F (1,9) = 2.074, р <0,05). Увеличение альфа-ответов во время сессии 10, скорее всего, в связи с коротким началом латентности хорошо развитой ЧР.
Рисунок 7D показывает усредненный процент отклика с коротким временем ожидания , записанную с обеих групп мышей. Короткие ответы латентности отражается активность между 50-70 мсек после начала CS, который был 4SD выше средней базовой активности. А повторные измерения ANOVA показали , что условные животные выставлены более короткие ответы задержку , чем pseudoconditioned животных в течение десяти учебных сессий (групп, F (1,15) = 5.377, р <0,05; сессия, F (1,9) = 3.920, р <.0005; группы * сессия, F (1,9) = 3,158, р <0,005). Tего может отражать более раннее начало времени ЧР, а условная группа выставлены большие CRs с каждой тренировкой.
Рисунок 1:. Ядерность Paradigm кондиционирования ока в следовых кондиционирования ока, безобидные условный раздражитель (CS) в паре с умеренно вредном безусловный раздражитель (США) предназначены для индукции ответа ока. CS и США разделены стимула свободной временной разрыв, что делает парадигме гиппокамп-зависимой 23. В парадигме описанном здесь 250 мс длиной усов вибрации CS в паре с 100 мс долго периорбитальный шок США. CS и США разделены длинной 250 мс временной промежуток. Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.
Рис . 2: Глава фиксированной Подготовка A, головка фиксированной настройки для ока кондиционирования с цилиндром, усов стимулятора, и разъем указано B, усов стимулятора с изгибом приводом двухслойным и гребнем указано.. C, разъем с отдельными частями указано: фиксирующий винт, 7-луночное полоса, провода припаяны к гнездам и эпоксидной смолы , чтобы сохранить провода, крылья , преобразованные из TO-220 типа транзистора Д, головной убор с индивидуальным. части указывается: 7-луночное полосу, булавки и провода припаяны в контакты, в том числе без покрытия из нержавеющей стали провода заземления, а также индивидуальный шок и ЭМГ проволоки из нержавеющей стали, с 0,2 см полиимидной покрытием зачищенных от конца Е. , конфигурация для каждого отверстия в 7-луночного полоса для обоих разъем иголовной убор. F, Мышь с хирургическим имплантированным заставкой. G, Мышь помещают на цилиндр, готовый быть обучен. Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.
Рис . 3: Пример записи ЭМГ Синие линии очерчивают презентации CS (длиной 250 мс). Красные линии очерчивают презентации США, который показывает артефакт, который исходит от поражения электрическим током (100 мс). CS и США разделены на 250 мс стимула-свободный интервал. В рамках этого стимула свободный интервал ЭМГ активность выше амплитуды ( по отношению к исходному уровню) , который очерчивает CR. Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть большую версию этого рисунка. </ А>
Рис . 4: Пример ЭМГ и соответствующие оптические инфракрасные записи отражения Запись ЭМГ является столь же точным , как оптический инфракрасный датчик отражения в обнаружении условную начала реакции (синяя линия), время ожидания до пика отклика (красная линия), и безусловная ока начала реакции ( розовая линия). Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.
Рисунок 5: Усредненные. Следы Усредненные ока выпрямляется и интегральные следы реакции в течение одного ока кондиционированной мыши (A) и один pseudoconditioned мыши (B). Каждая кривая представляет собой среднее значениереакция мыши для всех испытаний в течение одной сессии. Синий секция представляет собой реакцию во время усов вибрации CS презентации. Красная секция представляет собой реакцию во время стимула интервалом без следа. В А, шок США индуцированное артефакт , который присутствует во время темно - серой области после интервала трассировки. B показывает ответы только на нитевидных вибрации CS. Представление только CS и США в одиночку испытаний был pseudorandomized в псевдообусловливании. Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.
. Рисунок 6: Гистограммы пик времени отклика гистограмм времени до пика отклика для всех обусловленным (п = 8; синие полосы) и 8 pseudoconditioned (красные столбики) животных для всех трМОГВ во всех сессиях (данные из одного pseudoconditioned мыши была исключена, чтобы позволить провести прямое сравнение числа ответов между группами). Фиолетовый бары указывают, где условные и pseudoconditioned животные перекрываются. Пик времени отклика рассчитывается как время наибольшего пика выпрямленного и интегрированной ЭМГ между CS и США начала. Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.
Рисунок 7: Кривые отклика кондиционированного животных (n = 8; синие кривые) и pseudoconditioned животных (п = 9; красные кривые). А, процент Усредненные Адаптивная условные реакции (± SEM) для условных и pseudoconditioned животных в течение 10 учебных занятий. B, усредненная площадь (± SEM) ЧР для условногои pseudoconditioned животных в течение 10 учебных занятий. C, Процент Усредненные альфа отклика (± SEM) для условных и pseudoconditioned животных более 10 учебных занятий. D, процент Усредненные с коротким временем ожидания ответов (± SEM) для условных и pseudoconditioned более 10 сеансов. Пожалуйста , нажмите здесь для просмотра увеличенной версии этой фигуры.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Классическая кондиционирования ока форма ассоциативного обучения, который является полезным инструментом для понимания нейронных субстратов, лежащих в основе обучения и памяти. Предыдущие методы, используемые для кондиционирования в ока грызунов, таких как мыши участвуют в камеру, которая позволяла животному свободно передвигаться. Головка фиксированной подготовки к ока климатизации мышей, с использованием устройства , описанного Chettih и др. И Heiney и др. , А в последнее время используется в свет вызывал след ока климатизации Siegel и др. , Имеет ряд преимуществ, таких как разрешение наверняка процедуры и эксперименты должны быть выполнены во время кондиционирования , которые ока не было возможно , или был ограничен в прошлом (например, в естественных условиях двухфотонного визуализации кальция) 14-16. Этот тип препарата также облегчает использование других методов , таких как электрофизиологию в естественных условиях с тетрода массивами. По мере появления мышей, чтобы стать distressed от ограничений, эта головка фиксированной препарат был разработан, чтобы держать головы в безопасности при одновременном снижении количества ограничений требуемого. В то время как этот препарат позволяет мышам передвигаться на цилиндрической беговой дорожке, а другие также успешно собирают поведенческие данные из мышей головы фиксировали на устойчивой платформе 24.
Есть, однако, некоторые проблемы, которые возникают при использовании системы головки цилиндра фиксированной. Одна из проблем в том, что, когда один изначально ставит неподготовленный мышь на цилиндре, то, возможно, потребуется некоторое время, чтобы научиться отдыхать, ходить, или работать на новое устройство. Большинство мышей быстро научиться отдыхать, ходить, или работать на цилиндре с комфортом. Две сессии привыкания помогают приучить мышей к цилиндру и к середине второй сессии, большинство мышей удобны на цилиндре. Еще одна проблема, которая возникает головной убор авульсия. Там были некоторые проблемы с этим в прошлом в течение нескольких дней тренировок, но использование клея фиксирующим Cement имеет смягчены проблемы с головной убор отрывом. Применение адгезивных фиксирующих цемента привело 0% головной убор avulsions из более чем 50 операций, так как с помощью этой техники. При правильном использовании и достаточного распространения цемента на черепе, исследователи не должны столкнуться ни один вопрос с головной убор отрывом. И, наконец, представляя CS во время привыкания сессий, может быть некоторое беспокойство по поводу латентного торможения. Понятно, однако, что мыши выдерживались успешно (рисунок 7). Следует отметить, что интенсивность вибрации нитевидных может быть изменена путем изменения количества напряжения, передаваемых с помощью реостата. Если мыши не в состоянии узнать, напряжение может быть увеличено, чтобы поддерживать успешную кондиционирования в то же время сводя к минимуму испуга ответов. Исследователи также могут изменить тип поражения электрическим током США, который доставляется к животному. Поражение электрическим током США может быть один электрический импульс длительностью 100 мс, как сообщили здесь. В качестве альтернативы, в качестве йе стимул разъединитель используется в данном протоколе способен передавать двухфазные импульсы, исследователи могут также использовать 120 Гц 6 двухфазные пар импульсов на 1 мс за один импульс для эффективного поражения электрическим током, а также США.
Буле и др. Указывают на вероятность того, что некоторые "условные реакции" могут возникнуть в результате испуга (альфа) ответов на КС или коротких ответов латентности (SLR) 25. ответы Альфа считаются быстрые затворы веко в пределах 50 мс задержки после начала CS. Мыши часто держат их закрытыми глазами на протяжении всего судебного процесса, после этого альфа-ответ. Зеркалки, с другой стороны, имеют задержку 50-70 мс от начала CS и обычно возникают после нескольких CS-американских пар. Короткое время ожидания до начала как альфа и SLRs и тот факт, что зеркалки может возникнуть после нескольких CS-американских пар показывают, что они, вероятно, не движимый гиппокампа-мозжечковая схемы. Эти наблюдения , рассмотренные Буле и др. , Тherefore просить вопрос о том, являются ли CRs записанные здесь рефлексами. Как показано на рисунке 7С и 7D показывают, ни альфа - ответы , ни зеркалки составляют большинство АСБ записанных, предполагая , что адаптивные CRs опосредованы переднего мозга и мозжечка. Гистограммы на рисунке 6 , которые показывают время ожидания до пика ответа ока следующим CS начала также указывает на то, что в то время как некоторые испытания могут включать в себя раннее начало альфа или короткий ответ задержки, с большим количеством тренировочных испытаний, пик ответа ока на самом деле происходит позже и ближе к возникновению США, что указывает на развитие своевременных обусловленных ответов. Как упоминалось ранее, нитевидные кристаллы стимуляции и интенсивность шока были ослаблены до уровня, который не был поразительный или чрезмерно аверсивный, но оставались эффективными в производстве адаптивных условных реакций. Наконец, как показывает рисунок 7В, размер ЧР (измеренный как площадь под кривойкривая выпрямленного и комплексного ответа, как показано на рисунке 5) находится в условной группе больше , чем в pseudoconditioned группе сразу условная группа достигла критерия обучения 60%, что означает , что эти ответы требуют несколько сеансов , чтобы узнать, в отличие от зеркальных камер и альфа ответы.
Буле и др. Также отметили, что измерения ЭМГ, в то время как точный метод моргания в более крупных животных , таких как кролики, а не являются , как практичны в мелких грызунов , таких как мыши 25. Они рекомендуют использовать методики измерений магнитного расстояния (MDMT), чтобы избежать обнаружения ложных положительных сигналов, запись ЭМГ могут указывать. Техника MDMT, в то время впечатляет своей чувствительности и качеству распознавания моргания, а также представляет неудобство того , чтобы обезболить животное каждый день тренировки для того , чтобы прикрепить чип 26. Это само по себе может посрамить обучения ставки. Мы находим, что сигналы ЭМГзаписанные с процедурами, описанными здесь легко получаются, высокого временного разрешения, надежной и относительно легко измерить и проанализировать.
На рисунке 4 показана репрезентативная EMG сигнал детектирования мигает с соответствующим сигналом от отражающий инфракрасное излучение оптического датчика , расположенного вблизи глаз мыши во время тренировки. Существует четкая корреляция в моргания между сигналом ЭМГ и оптическим датчиком, обозначая точность распознавания моргания с помощью записи ЭМГ. Преимуществом записей ЭМГ является то, что она позволяет наибольшей временным разрешением. Несмотря на то, разрешение уменьшается путем интегрирования по 10 мс постоянной времени, можно также проанализировать исходные данные ЭМГ для обнаружения моргания глазной активности. Количество Шип является одним параметром , который может быть использован для обнаружения CRs 18. Одним из недостатков записи ЭМГ является то, что сигналы, несомненно, будут загрязнены электрическим артефакта, поступающей из США электрическим током (см
Препарат головы фиксировали описанный здесь похож на представленный Heiney и др. 15 Есть, однако, некоторые заметные отличия от их элегантной системы. Например, способ, описанный здесь для записи ответов являются ока провода, помещенные под кожу над глазом для записи ЭМГ активности. Эта методика позволяет надежной и стабильной записи веко деятельности и, таким образом, ответа ока. Правильное размещение и фиксация этих проводов обеспечивает качество записи, которые длятся в течение по крайней мере две недели, в течение всего эксперимента. Преимущество использования ЭМГ проводов, а не высокая-скорость камеры, которые используются Heiney и др. , в том , что EMG записи имеют чрезвычайно высокое временное разрешение, и не требуют ежедневного позиционирования и калибровки , что камера требует 15. Камера, однако, предлагают прямое визуальное определение веко закрытия.
Еще одно различие между этими двумя системами является способ CS доставки. Эта конкретная подготовка мыши голова фиксируется использует усов стимуляцию как условный раздражитель. Результаты показывают , что мыши могут быть эффективно обусловлено с усов стимуляции как CS, так же , как кролики головы фиксировали могут быть выдержаны с усов вибрацией 27. Heiney и др. Показали , стимуляция усов площадку как эффективный CS, направляя слабую затяжку воздуха к усов площадку 15. Хотя обе методики демонстрируют эффективное кондиционирование, помещая гребень над выбранными усов и вибрирующих гребень позволяет способность стимулировать индивидуальную whiskeг строк или даже отдельные усов. Этот метод был использован в предыдущих исследованиях , чтобы позволить животным , чтобы служить их собственным контролем (то есть, вынужденное усов ряд сравнивали с результатами ряда стимулированных усов) 20.
Таким образом, голова фиксированной подготовка к усов-сигнализировал кондиционирования позволяет ока для обеспеченного черепной платформы для выполнения передовых методов и экспериментов, которые ранее невозможно или трудно выполнить. Мягкая стимуляция усов был использован в качестве условного раздражителя и мягкий электрический шок был использован в качестве безусловного раздражителя. Ответы были ока записаны с проводами, помещенных под кожу за веко. Расписание обучения была продемонстрирована на мышах с прямой стимуляции выбранных усов как CS и периорбитальной электрическим током, как США, и никакого обучения не было видно, у мышей, которые были даны случайные презентации КС и США. Запись ЭМГ при условии надежного и отннительно простой метод для записи ответов и наблюдения ока, как ответы изменились через тренировки.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих финансовых интересов.
Acknowledgments
Эта работа финансировалась Министерством обороны США (W81XWH-13-01-0243) и Национального института здоровья (R37 AG008796). Мы благодарим Алана Бейкера в машинном цехе Северо-Западного университета для создания цилиндра устройства головки фиксированной. Мы благодарим доктора Shoai Хаттори за его руководство в среде MATLAB и Solidworks. Мы благодарим доктора Джона Сила для LabView программного обеспечения, которое контролируемого эксперимента.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Exervo TeraNova Foam Roller 36" x 6" | Amazon | B002ONUM0E | For cylinder |
| Plexiglas | Custom-made; 1 cm thick | ||
| Metal Rods (12.7 mm diameter) | Custom-made | ||
| 4-40 machine screw (.25 in. long) | Amazon Supply | B00F33Q8QO | For cylinder |
| Classic Design Hair Comb | Conair | 93505WG-320 | For whisker stimulation |
| 2-Layer Rectangular Bending Actuator | Piezo Systems | T220-A4-303X | For whisker stimulation |
| Solder and Flux Kit | Piezo Systems | MSF-003-NI | For whisker stimulation |
| Magnetic Base | Thor Labs | MB175 | For whisker stimulation |
| Threaded rod for magnetic base | Custom-made | ||
| Strips based on 221 series nylon strip connectors from Electronic Connector Corp. | Custom-made, based on Weiss and Disterhoft, 2008 | ||
| TO-220 Style Transistor | Amazon Supply | B0002ZPZYO | For connector; for the wings |
| Relia-Tac Sockets | Electronic Connector Corp. | 220-S02 | For connector |
| Relia-Tac Pins | Electronic Connector Corp. | 220-P02 | For headpiece |
| 0-80 stainless steel machine screw (1 in. long) | Amazon Supply | B000FN68EE | Locking Screw |
| 0-80 stainless steel machine screw hex nut (5/32 in. thick) | Amazon Supply | B000N2TK7Y | Locking Screw Head |
| Loctite Super Glue-Liquid | Loctite | 1365896 | Cyanoacrylic glue; for the locking screw |
| Quick Setting Epoxy | Ace Hardware | 18613 | For connector and whisker stimulation system |
| Ethernet Cable Wires | Ethernet cable can be taken apart to use the individual wires for the connector | ||
| Polyimide coated stainless steel wires (2 in. long, .005 in. diameter) | PlasticsOne | 005sw/2.0 37365 S-S | For headpiece, EMG and shock wires |
| Stainless steel uncoated wire (.005 in. diameter) | AM Systems | 792800 | For headpiece, ground wires |
| Tenma Variable Autotransformer | Tenma | 72-110 | For the whisker stimulation; rheostat to adjust current to the bending actuator |
| Amplifier | A-M Systems | 1700 | Amplifier for filtering and amplifying EMG signals |
| WPI A385R stimulus isolator | World Precision Instruments | 31405 | For the electrical shock |
| Isothesia (Isoflurane) | Henry Schein: Animal Health | 50031 | For surgery; anesthesia |
| Buprenex Injectable CIII | Reckett Benckiser Pharmaceuticals Inc | NDC 12496-0757-1 | For surgery; analgesic |
| Akwa Tears: Lubricant Ophthalmic Ointment | Akorn | NDC 17478-062-35 | Artificial tear ointment to prevent dry eyes while under anesthesia |
| Povidine-Iodine Prep Pads | PDI | NDC 10819-3883-1 | For surgery; antiseptic |
| Alcohol Prep Pads | May be purchased from any standard pharmacy | ||
| Stainless steel surgical scalpel handles (no.3) | Integra Miltex | 4-7. | For surgery |
| Stainless steel surgical scalpel blades | Integra Miltex | 4-310 or 4-315 | For surgery; number 10 or 15 scalpel blade |
| 3% Hydrogen Peroxide | May be purchased from any standard pharmacy | ||
| Micro Clip | Roboz | RS-5459 | For surgery, to hold back skin |
| 00-90 stainless steel machine screw (0.0625 in. long) | Amazon Supply | B002SG89X4 | For surgery, to wrap ground wire around |
| Professional Rotary Tool | Walnut Hollow | 29637 | Hand drill for surgery, to drill holes in skull |
| Inverted Cone Burr | Roboz | RS-6282C-34 | Inverted cone burr size 34; for surgery, to drill holes in skull |
| Engraving Cutter Drill Bit | Dremel | 106 | Engraving cutter; 1.6 mm bit; for surgery, to drill holes in skull |
| C&B Metabond-Quick! Cement System "B" Quick Base | Parkell | S398 | For surgery; adhesive luting cement system; important to prevent headpiece avulsion |
| C&B Metabond-Quick! Cement System Clear L-Powder | Parkell | S399 | For surgery; adhesive luting cement system; important to prevent headpiece avulsion |
| C&B Metabond-Quick! Cement System "C" Universal TBB Catalyst 0.7 ml | Parkell | S371 | For surgery; adhesive luting cement system; important to prevent headpiece avulsion |
| C&B Metabond-Quick! Cement System Ceramic Mixing Dish with temperature strip | Parkell | S387 | For surgery; adhesive luting cement system; important to prevent headpiece avulsion |
| Swiss Tweezers, style #5 | World Precision Instruments | 504506 | For surgery |
| Puritan Cotton-Tipped Applicators | VWR International | 10806-005 | For surgery |
| Dental Caulk Grip Cement Kit | Dentsply | 675570 | For surgery; dental cement |
References
- Clark, R. E., Squire, L. R. Classical conditioning and brain systems: the role of awareness. Science. 280 (5360), 77-81 (1998).
- Thompson, R. F., Kim, J. J. Memory systems in the brain and localization of a memory. PNAS. 93 (24), 13438-13444 (1996).
- Solomon, P. R., Vander Schaaf, E. R., Thompson, R. F., Weisz, D. J. Hippocampus and trace conditioning of the rabbit's classically conditioned nictitating membrane response. Behav Neurosci. 100 (5), 729-744 (1986).
- Moyer, J. R., Deyo, R. A., Disterhoft, J. F. Hippocampectomy disrupts trace eye-blink conditioning in rabbits. Behav Neurosci. 104 (2), 243-252 (1990).
- Weiss, C., Bouwmeester, H., Power, J. M., Disterhoft, J. F. Hippocampal lesions prevent trace eyeblink conditioning in the freely moving rat. Behav Brain Res. 99 (2), 123-132 (1999).
- Weiss, C., Disterhoft, J. F. Exploring prefrontal cortical memory mechanisms with eyeblink conditioning. Behav Neurosci. 125 (3), 318-326 (2011).
- Aiba, A., et al. Deficient cerebellar long-term depression and impaired motor learning in mGluR1 mutant mice. Cell. 79 (2), 377-388 (1994).
- Skelton, R. W. Bilateral cerebellar lesions disrupt conditioned eyelid responses in unrestrained rats. Behav Neurosci. 102 (4), 586-590 (1988).
- Takehara, K., Kawahara, S., Takatsuki, K., Kirino, Y. Time-limited role of the hippocampus in the memory for trace eyeblink conditioning in mice. Brain Res. 951 (2), 183-190 (2002).
- Weiss, C., Disterhoft, J. F. Evoking blinks with natural stimulation and detecting them with a noninvasive optical device: A simple, inexpensive method for use with freely moving animals. J Neurosci Meth. 173, 108-113 (2008).
- Royer, S., et al. Control of timing, rate and bursts of hippocampal place cells by dendritic and somatic inhibition. Nature. 15 (5), 769-775 (2012).
- Goldey, G. J., et al. Removable cranial windows for long-term imaging in awake mice. Nature Protoc. 9 (11), 2515-2538 (2014).
- Lovett-Barron, M., et al. Dendritic inhibition in the hippocampus supports fear learning. Science. 343 (6173), 857-863 (2014).
- Chettih, S. N., McDougle, S. D., Ruffolo, L. I., Medina, J. F. Adaptive timing of motor output in the mouse: the role of movement oscillations in eyelid conditioning. Front in Integ Neurosci. 5 (72), (2011).
- Heiney, S. A., Wohl, M. P., Chettih, S. N., Ruffolo, L. I., Medina, J. F. Cerebellar-Dependent Expression of Motor Learning during Eyeblink Conditioning in Head-Fixed Mice. J Neurosci. 34 (45), 14845-14853 (2014).
- Siegel, J. J., et al. Trace Eyeblink Conditioning in Mice is Dependent upon the Dorsal Medial Prefrontal Cortex, Cerebellum, and Amygdala: Behavioral Characterization and Functional Circuity. eNeuro. , (2015).
- Galvez, R., Weiss, C., Cua, S., Disterhoft, J. A novel method for precisely timed stimulation of mouse whiskers in a freely moving preparation: application for delivery of the conditioned stimulus in trace eyeblink conditioning. J Neurosci Meth. 177 (2), 434-439 (2009).
- Gruart, A., Sánchez-Campusano, R., Fernández-Guizán, A., Delgado-Garcìa, J. M. A Differential and Timed Contribution of Identified Hippocampal Synapses to Associative Learning in Mice. Cereb Cortex. , (2014).
- Weiss, C., et al. Impaired Eyeblink Conditioning and Decreased Hippocampal Volume in PDAPP V717F Mice. Neurobiol Dis. 11 (3), 425-433 (2002).
- Galvez, R., Weiss, C., Weible, A. P., Disterhoft, J. F. Vibrissa-signaled eyeblink conditioning induces somatosensory cortical plasticity. J Neurosci. 26 (22), 6062-6068 (2006).
- Galvez, R., Weible, A. P., Disterhoft, J. F. Cortical barrel lesions impair whisker-CS trace eyeblink conditioning. Learn & Memory. 14 (1), 94-100 (2007).
- Johnson, K. R., Zheng, Q. Y., Erway, L. C. A Major Gene Affecting Age-Related Hearing Loss Is Common to at Least Ten Inbred Strains of Mice. Genomics. 70 (2), 171-180 (2000).
- Tseng, W., Guan, R., Disterhoft, J. F., Weiss, C. Trace eyeblink conditioning is hippocampally dependent in mice. Hippocampus. 14 (1), 58-65 (2004).
- Joachimsthaler, B., Brugger, D., Skodras, A., Schwarz, C. Spine loss in primary somatosensory cortex during trace eyeblink conditioning. J Neurosci. 35 (9), 3772-3781 (2015).
- Boele, H. J. Cerebellar and extracerebellar involvement in mouse eyeblink conditioning: the ACDC model. Front in Cell Neurosci. 3 (19), (2010).
- Koekkoek, S. K. E., Den Ouden, W. L., Perry, G., Highstein, S. M., De Zeeuw, C. I. Monitoring kinetic and frequency-domain properties of eyelid responses in mice with magnetic distance measurement technique. J Neurophysiol. 88 (4), 2124-2133 (2002).
- Ward, R. L., Flores, L. C., Disterhoft, J. F. Infragranular barrel cortex activity is enhanced with learning. J Neurophysiol. 108 (5), 1278-1287 (2012).
