Introduction
Kärnhöljet (NE) skiljer nukleoplasman från cytoplasman. Den består av en inre och yttre kärn membran (INM och ONM, respektive) som ansluter vid kärntekniska porer. Lumen avgränsas av båda membranen kallas perinukleära utrymmet (PNS). Den ONM är en förlängning av det grova endoplasmatiska retiklet (ER), och INM fäster vid kärnkrafts lamina, en meshwork av kärn typ V intermediära filament som representeras av A- och B-typ laminer 1,2. Linkers av Nucleoskeleton och Cytoskeleton (LINC) komplex är makromolekylära församlingar som spänner över hela kärnhöljet att fysiskt ansluta det inre av kärnan till cytoskelettala filament och molekylära motorer (Figur 1A). De består av interaktioner mellan evolutionärt bevarade motiv som kännetecknar två familjer av integrerade transmembranproteiner i NE: Sun (Sad1 / Unc84) proteiner och Nesprins (Nuclear kuvert SPectRINS). I däggdjur Sun1 och Sun2 are transmembranproteiner av INM vars N-terminala nucleoplasmic regionen interagerar direkt med A- och B-typ laminer 3-5. På andra sidan av INM, inom PNS, Sun proteiner hyser en evolutionär konserve sträcka av ~ 150 C-terminala aminosyrorna kallas SUN domänen. SUN-domäner interagerar direkt med den evolutionära-konserverade KASH (Klarsicht / Anc-1, Syne Homology) domän, den molekylära underskrift Nesprins. Kash domänerna består av en sträcka av ~ 30 C-terminala aminosyror som skjuter in i PNS, följt av en transmembrandomän 6. Minst fyra distinkta Nesprin gener (Nesprin1-4) kodar KASH-proteiner som lokaliserar på NE 7. De cytoplasmiska regionerna Nesprins, vars storlek varierar från ~ 50 kDa (Nesprin4) till en häpnadsväckande 1.000 kDa (Nesprin1 jätten), innehåller flera spek upprepar samt särskilda motiv som möjliggör deras interaktion med cytoskelettala komponenter såsom aktin, plectin och molekylära motorer 8- 13.
<p class = "jove_content"> Studier i ryggradsdjur och ryggradslösa djur har visat att Lamin / Sun / Nesprin / molekylära motorer utgör ett evolutionärt bevarat "axel" kontrollerande kärn migration och förankring. Flera knock-out (KO) musmodeller av LINC komplexa komponenter har beskrivits och var avgörande för att skapa en ram för att förstå rollerna som Sun och Nesprin proteiner vid NE under däggdjurs utveckling 9,14,15. Dessa modeller presentera flera betydande nackdelar, främst: 1) svårigheter att tolka fenotyper på grund av cell icke-självständiga effekter, 2) svårigheten att särskilja fenotypiska bidrag KASH-innehållande vs KASH mindre Nesprin isoformer 16, 3) funktionell redundans Sun och Nesprin proteiner vid NE i flera celltyper kräver komplexa avelsprogram för att inaktivera alla SUN-Kash interaktioner i möss 17 och 4) perinatal dödlighet hos möss med brist för KASH-domänen i bådeNesprins1 och 2 utesluter analys av vuxna fenotyper 18.Detta protokoll beskriver en ny musmodell utformad för att störa alla SOL-kash interaktioner in vivo, i en cell autonom regleras utvecklingsmässigt sätt, och därmed förbigå många av nackdelarna som beskrivs ovan. Denna Cre / lox-baserade musmodell åberopat två viktiga koncept: 1) den KASH domänen av vilken som helst känd Nesprin protein är tillräcklig för att rikta EGFP till NE i cellodlingssystem och 2) SUN domäner interagerar promiscuously med kash domäner, således överexpression av någon KASH domänen kommer att mätta alla endogena SUN domäner och inaktivera LINC komplex i en dominant-negativt sätt 17 (Figur 1B). Detta protokoll beskriver vävnads skörd och processteg som används för att bekräfta avbrott i alla SUN-Kash interaktioner i cerebellära Purkinje celler.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Etik uttalande: Rutiner som involverar djurförsök har godkänts av Institutional Animal Care och användning kommittén (IACUC) vid Washington University i St. Louis.
1. Mus Uppfödning och Genotypning
- Ras Tg (CAG-LacZ / EGFP-KASH2) möss med Tg (PCP2-Cre) möss för att producera Tg (PCP2Cre CAG-EGFP / KASH2) 19,20. Obs: Medan resten av detta protokoll fokuserar på användning av Tg (PCP2-Cre) mus linje för att begränsa EGFP-KASH2 uttryck för Purkinje celler i lillhjärnan, kan ett liknande förfarande följas med någon annan Tg (Cre) mus ( Figur 2A).
- Utför genotypning att identifiera valpar hyser både EGFP och Cre transgener som tidigare beskrivits 19.
2. Beredning av material för Dissection och Tissue Collection
- Bered 100 ml av 30% sackaros i PBS (30 g sackaros / 100 ml av 1 x PBS) och förvara vid -20 ° C. Dagen för vävnads harvesting, tina och belastning ~ 30-35 ml sackaroslösning i en 35 ml spruta för transcardial perfusion.
- Bered 40 ml 4% PFA i PBS (10 ml 16% paraformaldehyd och 30 ml PBS). Belastning ~ 30-35 ml 4% PFA i 35 ml spruta för transcardial perfusion.
- Fyll en 10 cm vävnadsodlingsplatta med 10 ml PBS för vävnads dissekering.
- Förbered en ketamin / xylazin cocktail bestående av 16 mg / ml ketamin och 3 mg / ml xylazin.
- Bered en lösning av 70% etanol för dissekering.
3. Dissektion och Tissue Collection
- Med användning av en 1 ml spruta, injicera 500 ul av ketamin / xylazin cocktail per 25 g kroppsvikt och vänta på ~ 15 minuter. Alternativt kan du använda en annan institutionellt godkänd sedering metod som är lämplig för det biologiska systemet av intresse.
- Vid sedering försiktigt klämma bakre tass för att bekräfta bristen på smärtsvar, stift alla tassar på en frigolit bricka med ryggsidan avmus nedåt.
- Spraya buken med 70% etanol och göra ett snitt från den lägre magen till toppen av bröstkorgen för att få tillgång till hjärtat.
- Gör ett litet snitt i högra atrium i hjärtat och för in sprutan innehållande 30% sackaroslösning i den vänstra ventrikeln hos hjärtat.
- Perfundera lösningen vid en hastighet av ~ 2-5 ml per minut. När den är tom, ta bort sprutan och upprepa med 4% PFA-lösning.
- Unpin musen från frigolit facket och halshugga att få tillgång till hjärnan.
- Ta bort skinnet runt huvudet av djuret med hjälp av pincett och sax. Peta ett hål i den bakre delen av skallen med en nål och försiktigt bort skallen med saxar och dissekera pincett.
- När hjärnan är klart tillgängliga, använd pincett för avlägsnande av lillhjärnan och placera den i PBS. Tudelar lillhjärnan i sagittalplanet med en skalpell och överföra till sackaroslösning 30% över natten vid 4 ° C. Obs! För att prepär paraffin, fixa lillhjärnan över natten vid 4 ° C i 4% PFA före vävnads inbäddning och snittning.
4. Vävnadsbearbetning och Sektione
- Bered en uppslamning av torr is och 2-metylbutan. Låt temperaturen i badet för att jämvikt under 5 minuter.
- Fyll en cryomold med OCT-förening och placera en halv av halverad lillhjärnan i formen.
- Med hjälp av en dissekera mikroskop och en pincett ställning lillhjärnan så att halverad yta (nära mittlinjen av lillhjärnan) är vänd uppåt.
- Överför cryomold till torris slammet under 5 min tills oktober föreningen har bildat en solid vit matris runt vävnadsprovet. Anm: De frysta provet kan nu lagras vid -20 ° C om så erfordras.
- Etikett förbehandlade poly-lysin objektglas för uppsamling vävnadssektioner och förbereda Kryostat enligt tillverkarens instruktioner för att samla in 15 | im sektioner av cerebellum. För att samla sektionerna försiktigt kontakta oktober avsnittet med poly-lysin belagda sidan av bilden. För att bevara orienteringen av sektionen, roterar inte sliden under detta steg.
- Butiksvävnadssnitt vid -20 ° C tills vidare med färgning och bildbehandling.
5. Färgning och avbildning av Cerebellum Sektioner
- Bered följande lösningar före vävnadsfärgning:
~ 50 ml PBS
~ 5-10 ml 4% PFA i PBS
~ 10-20 ml 0,5% Triton X-100, 10% åsna serum i PBS - Tina cerebellära sektioner. Viktigt är att minimera exponeringen för någon källa av kontinuerlig och intensivt ljus för att förhindra blekning av EGFP.
- Med hjälp av en hydrofob barriär penna, rita en rektangel runt vävnadssnitt.
- Post-fix sektionerna med 4% PFA under 5 min. Använd tillräckligt med vätska för att täcka hela området avgränsas av den hydrofoba barriären (vanligtvis ~ 500 l). Med hjälp av ett vakuum eller pipett, reflytta fixativ är särskilt noga med att inte störa vävnadssnitt.
- Med en pipett försiktigt på PBS på bilden utan att störa vävnadssnitt. Efter 5 minuter använda vakuum eller pipetten att försiktigt ta bort vätskan. Upprepa PBS skölj totalt tre gånger.
- Med hjälp av en pipett försiktigt tillämpa lämplig utspädning av primära antikroppar (3 il Calbindin och / eller Nesprin2 antikropp per 900 pl lösning) i 0,5% Triton X-100, 10% åsna serum i PBS. Inkubera i en timme vid rumstemperatur i mörker.
Obs: EGFP-KASH2 kommer att vara synlig genom direkt fluorescensmikroskopi på frusna sektioner och det är inte nödvändigt att använda en anti-EGFP-antikropp. Men om paraffinsektioner har upprättats, avbildning av EGFP-KASH2 kräver immunodetektion med en anti-EGFP antikropp. - Ta antikropplösningen och skölj med PBS tre gånger.
- Bered 1: 1000 utspädningar av Alexa-Fluor sekundära antikroppar i 0,5% Triton X-100,10% åsna serum i PBS och förvara i mörker.
- Försiktigt bort den sista PBS skölj och tillämpa den sekundära antikroppen utspädning under en timme i mörker.
- Ta den sekundära antikroppslösningen, skölj och tvätta avsnitt tre gånger. Om det behövs, tillämpa en nukleär färgning, såsom DAPI (~ 300 nM), under det första PBS programmet.
- Avlägsna PBS-lösningen från runt vävnaden och placera ~ 5-7 | il av montering media på vävnadssnittet. Placera ett täckglas ovanpå vävnadssektionen och sattes åt sidan för ~ 15-30 minuter vid rumstemperatur i mörker.
- Använd ett fluorescensmikroskop utrustat med lämpliga filter för att visualisera EGFP och alla andra våglängder är lämpliga för de sekundära antikroppar som används i steg 5,8 / 5.9. I cerebellär skivor, använd en 20X mål att visa EGFP-KASH2 nukleära fälgar.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Detta protokoll illustrerar användbarheten av Tg (CAG-LacZ / EGFP-KASH2) musmodell för att begränsa EGFP-KASH2 uttryck för cerebellära Purkinje celler med användning av Tg (PCP2-CRE) möss. I Tg (PCP2Cre CAG-EGFP / KASH2) avkomma, är LacZ / V5 öppen läsram skars vid P6 av Cre-rekombinas vilket leder till uttryck av EGFP-KASH2 specifikt riktad mot Purkinje celler (Figur 2A). Som väntat är EGFP-KASH2 riktade till kärnhöljet som indikeras av EGFP-positiva fälg liknande mönster observeras runt kärnan (Figur 2B). För att maximera de fysiologiska fenotyp, är det viktigt att säkerställa att EGFP-KASH2 uttrycks i en majoritet av målceller genom att beräkna procentandelen av EGFP-KASH2 positiva celler som är co-färgades med en cellspecifik antikropp markör. I detta exempel framställdes EGFP-KASH2 uttryckning detekterades hos mer än 70% av Calbindin-positiva Purkinje-celler (figur 2B). I dessa Conditioner, vi inte ser några signifikanta histologiska eller beteende fenotyper i 10 månader gammal Tg (PCP2Cre CAG-EGFP / KASH2) möss 20. Det är viktigt att se till att alla morfologiska eller beteende fenotyp beror inte på ektopisk uttryck av EGFP-KASH2 i en oavsiktlig celltyp / vävnad. I detta avseende kons EGFP-KASH2 inte observerats i granulatcellskiktet eller den molekylära skikt av Tg (PCP2Cre CAG-EGFP-KASH2) cerebella (Figur 2B).
Slutligen är det viktigt att bekräfta omfattningen av LINC komplexa störningar i celler som uttrycker EGFP-KASH2. Detta kan åstadkommas med hjälp av hög kvalitet anti-Nesprin antikroppar för att understryka sin förskjutning från NE av celler som uttrycker EGFP-KASH2. Såsom visas i fig 3, är endogent Nesprin2 förskjuten från kärnhöljet av Purkinje-celler som uttrycker EGFP-KASH2 (fig 3 övre panelen, gula pilar) medan Purkinje-celler som inte uttrycker EGFP-KASH2 retai endogen Nesprin2 vid kärnhöljet (fig 3 övre panel, vit pil). Som väntat kontrollkull, som inte uttrycker Cre-rekombinas, visa Nesprin2 vid kärnhöljet av hela Purkinje-cellpopulationen (fig 3 undre vita pilar). Flera rapporter har nu bekräftat uttrycket av EGFP-KASH2, tillsammans med förskjutningen av endogena Nesprins, i ytterligare vävnader och celltyper såsom skelett muskelfibrer och kon fotoreceptorer 19,21.
Figur 1. LINC komplex ansluta kärnan till cytoskelettet och störs av överuttryck av EGFP-KASH2. (A) Visning av LINC komplex som förbinder inre kärnan till cytoplasman cytoskelettet. Observera att SUN domäner interagerar promiskuöst med Kash domänerfrån alla Nesprins (Nesprins 1-4). (B) Uttryck av EGFP-KASH2 förskjuter endogena Nesprins från kärnhöljet till akuten, i en dominant negativ sätt, vilket kopplar kärnan från den omgivande cytoplasma cytoskelettet.
Figur 2. Överuttryck av EGFP-KASH2 specifikt riktad mot cerebellära Purkinje celler. (A) Uppfödning av Tg (CAG-LacZ / EGFP-KASH2) till Tg (PCP2-Cre) möss resulterar i Tg (PCP2Cre CAG-EGFP-KASH2) avkommor där Cre-rekombinas uttrycks specifikt i cerebellära Purkinje-celler. Vid uttryck (P6), translokerar Cre rekombinas in i kärnan där det skär ut LacZ ORF och inducerar EGFP-KASH2 uttryck. (B) Tg (PCP2Cre CAG-EGFP-KASH2) möss specifikt uttrycker EGFP-KASH2 i cerebellära Purkinje celler identiferat med Calbindin (färgad i rött). Observera att båda cerebellära granulat nervceller och intern av molekylskiktet är negativa för EGFP-KASH2 uttryck. Förkortningar: Mol: Molekyl skikt, PCL: Purkinje cellager och GCL: Granule cellager.
Figur 3. Störningar av endogena LINC komplex i cerebellära Purkinje celler. Single konfokal plan som visar uttryck av EGFP-KASH2 som förskjuter endogen Nesprin2 (färgad i rött) från kärnhöljet av Purkinje-celler (gula pilar överst). Observera att Purkinje celler som saknar EGFP-KASH2 uttryck upprätthålla endogen Nesprin2 på deras kärnhöljet (vit pil överst). I Tg (CAG-LacZ / EGFP-KASH2) kontrollkull ingen EGFP signal observeras och Nesprin2 detekteras vid kärnhöljet alla Purki
Detta protokoll illustrerar användbarheten avTg (CAG-LacZ / EGFP-KASH2) musmodell för att begränsa EGFP-KASH2 uttryckning till cerebellära Purkinje-celler med användning Tg (PCP2-Cre) möss. I Tg (PCP2Cre CAG-EGFP / KASH2) avkomma, är LacZ / V5 öppen läsram skars vid P6 av Cre-rekombinas vilket leder till uttryck av EGFP-KASH2 specifikt riktad mot Purkinje celler (Figur 2A). Som väntat är EGFP-KASH2 riktade till kärnhöljet som indikeras av EGFP-positiva fälg liknande mönster observeras runt kärnan (Figur 2B). För att maximera de fysiologiska fenotyp, är det viktigt att säkerställa att EGFP-KASH2 uttrycks i en majoritet av målceller genom att beräkna procentandelen av EGFP-KASH2 positiva celler som är co-färgades med en cellspecifik antikropp markör. I detta exempel framställdes EGFP-KASH2 uttryckning detekterades hos mer än 70% av Calbindin-positiva Purkinje-celler (figur 2B). Under dessa förhållanden, har vi inte iaktta någon betydande histologiska eller behavioral fenotyper i 10 månader gammal Tg (PCP2Cre CAG-EGFP / KASH2) möss 20. Det är viktigt att se till att alla morfologiska eller beteende fenotyp beror inte på ektopisk uttryck av EGFP-KASH2 i en oavsiktlig celltyp / vävnad. I detta avseende kons EGFP-KASH2 inte observerats i granulatcellskiktet eller den molekylära skikt av Tg (PCP2Cre CAG-EGFP-KASH2) cerebella (Figur 2B).
Slutligen är det viktigt att bekräfta omfattningen av LINC komplexa störningar i celler som uttrycker EGFP-KASH2. Detta kan åstadkommas med hjälp av hög kvalitet anti-Nesprin antikroppar för att understryka sin förskjutning från NE av celler som uttrycker EGFP-KASH2. Såsom visas i fig 3, är endogent Nesprin2 förskjuten från kärnhöljet av Purkinje-celler som uttrycker EGFP-KASH2 (fig 3 övre panelen, gula pilar) medan Purkinje-celler som inte uttrycker EGFP-KASH2 behålla endogen Nesprin2 vid kärnhöljet (figur 3 (fig 3 undre vita pilar). Flera rapporter har nu bekräftat uttrycket av EGFP-KASH2, tillsammans med förskjutningen av endogena Nesprins, i ytterligare vävnader och celltyper såsom skelett muskelfibrer och kon fotoreceptorer 19,21.
Figur 1. LINC komplex ansluta kärnan till cytoskelettet och störs av överuttryck av EGFP-KASH2. (A) Visning av LINC komplex som förbinder inre kärnan till cytoplasman cytoskelettet. Observera att SUN domäner interagerar promiskuöst med Kash domäner från alla Nesprins (Nesprins 1-4). (B) Uttryck of EGFP-KASH2 förskjuter endogena Nesprins från kärnhöljet till akuten, i en dominant negativ sätt, vilket kopplar kärnan från den omgivande cytoplasma cytoskelettet. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 2. Överuttryck av EGFP-KASH2 specifikt riktad mot cerebellära Purkinje celler. (A) Uppfödning av Tg (CAG-LacZ / EGFP-KASH2) till Tg (PCP2-Cre) möss resulterar i Tg (PCP2Cre CAG-EGFP-KASH2) avkommor där Cre-rekombinas uttrycks specifikt i cerebellära Purkinje-celler. Vid uttryck (P6), translokerar Cre rekombinas in i kärnan där det skär ut LacZ ORF och inducerar EGFP-KASH2 uttryck. (B) Tg (PCP2Cre CAG-EGFP-KASH2) Möss specifikt uttrycker EGFP-KASH2 i cerebellära Purkinje celler som identifieras med Calbindin (färgad i rött). Observera att båda cerebellära granulat nervceller och intern av molekylskiktet är negativa för EGFP-KASH2 uttryck. Förkortningar: MOL: Molecular lager, PCL: Purkinje cellager och GCL. Granule cellager Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 3. Störningar av endogena LINC komplex i cerebellära Purkinje celler. Single konfokal plan som visar uttryck av EGFP-KASH2 som förskjuter endogen Nesprin2 (färgad i rött) från kärnhöljet av Purkinje-celler (gula pilar överst). Observera att Purkinje celler som saknar EGFP-KASH2 uttryck upprätthålla endogen Nesprin2 på deras kärnhöljet (Annandage pil upp). I Tg (CAG-LacZ / EGFP-KASH2) kontrollkull ingen EGFP signal observeras och Nesprin2 detekteras vid kärnhöljet av alla Purkinje celler (vita pilar botten). Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Den mest kritiska steget för att framgångsrikt studera betydelsen av LINC komplex in vivo med hjälp av Tg (CAG-LacZ / EGFP-KASH2) modell är att identifiera en lämplig Cre mus linje (s). Faktum är att om Cre är aktiv i andra celltyper som är involverade i liknande banor, kan den försvårar tolkningen av resultaten. Därför är det viktigt att undersöka närliggande celler, så som visas här i de molekylära och granulatcellskikt i cerebellum (Figur 2B). Likaså är det viktigt att identifiera en Cre-stam med utbredd Cre uttryck över celltypen av intresse för att maximera eventuella fysiologiskt relevanta fenotyper. Det är också viktigt att göra en grundlig karaktärisering av uttrycksmönstret för LINC komplexa komponenter under utvecklingen av systemet av intresse. I själva verket är en nackdel med Tg (CAG-LacZ / EGFP-KASH2) musmodell att det inte ger någon information om vilka Sun proteiner eller Nesprins varianter är involverade i det biologiska systemet under övervägande. Dock kan den här frågan lösas genom att utföra en rigorös karakterisering både avskriften och proteinnivåer. I själva verket har sådana studier gjorts vid ett flertal tillfällen, vilket ledde till viktiga rön om betydelsen av specifika LINC komplexa komponenter under CNS utveckling och homeostas 21,22.
Slutligen medan detta protokoll är fokuserad på användning av fasta CNS vävnader, Tg (CAG-LacZ / EGFP-KASH2) möss kan användas för att isolera och kultur primära celler för att studera effekten av att störa LINC-komplex in vitro. Med hjälp av detta system, är det möjligt att isolera och rena primära kulturer av EGFP-KASH2-positiva celler för tillämpningar såsom time-lapse video mikroskopi. Detta kringgår låga transfektion effektivitet eller Lentiviral produktion som krävs för primära odlingssystem, såsom neuroner.
Sammanfattningsvis, Tg (CAG-LacZ / EGFP-KASH2) möss öppna upp nya och spännande möjligheter att studera det roligaInsatser av LINC komplex in vivo under embryonala och postnatal däggdjurs utvecklingsprocesser i en mängd olika vävnader och celltyper för att ta itu med grundläggande cellbiologiska frågor.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Författarna har ingenting att lämna ut.
Acknowledgments
Författarna tackar personalen på morfologi och Imaging kärna, i Molecular Genetics kärna (Ögonkliniken och Visual Sciences) och mus Genetics Kärna vid Washington University i St Louis School of Medicine. Författarna stöds av små bidrag programmet från McDonnell Centrum för Cellular och Molecular Neurobiology, Hope Center for neurologiska sjukdomar, National Eye Institute (# R01EY022632 till DH), en National Eye Institute Center Kärna Grant (# P30EY002687) och en obegränsad bidrag från Forskning kring att förebygga blindhet till Ögonkliniken och Visual Sciences.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Sucrose | Sigma Aldrich | S0389 | |
| 10x PBS | Gibco | 14200-075 | |
| 16% Paraformaldehyde Solution | Electron Microscopy Sciences | 15710 | |
| OCT Compound | Tissue-Tek | 4583 | |
| Adhesion Slides | StatLab | M1000W | |
| Donkey Serum | Sigma Aldrich | D9663 | |
| Triton X-100 | Sigma Aldrich | T9284 | |
| ImmuEdge Pen | Vector Laboratories | H-4000 | |
| Anti-Calbindin Antibody | Sigma Aldrich | C9848 | |
| Anti-EGFP Antibody | Abcam | ab13970 | |
| Anti-Nesprin2 Antibody | Previously described in Ref. 21 | ||
| Fluorescent Mounting Media | Dako | S3023 | |
| 2-methyl butane | Sigma Aldrich | O3551 |
References
- Hutchison, C. J. Lamins: building blocks or regulators of gene expression? Nature reviews. Molecular cell biology. 3, 848-858 (2002).
- Stuurman, N., Heins, S., Aebi, U. Nuclear lamins: their structure, assembly, and interactions. Journal of structural biology. 122, 42-66 (1998).
- Crisp, M., et al. Coupling of the nucleus and cytoplasm: role of the LINC complex. The Journal of cell biology. 172, 41-53 (2006).
- Haque, F., et al. SUN1 interacts with nuclear lamin A and cytoplasmic nesprins to provide a physical connection between the nuclear lamina and the cytoskeleton. Molecular and cellular biology. 26, 3738-3751 (2006).
- Hodzic, D. M., Yeater, D. B., Bengtsson, L., Otto, H., Stahl, P. D. Sun2 is a novel mammalian inner nuclear membrane protein. The Journal of biological chemistry. 279, 25805-25812 (2004).
- Starr, D. A.
- Mellad, J. A., Warren, D. T., Shanahan, C. M. Nesprins LINC the nucleus and cytoskeleton. Current opinion in cell biology. 23, 47-54 (2011).
- Fridolfsson, H. N., Starr, D. A. Kinesin-1 and dynein at the nuclear envelope mediate the bidirectional migrations of nuclei. The Journal of cell biology. 191, 115-128 (2010).
- Meyerzon, M., Fridolfsson, H. N., Ly, N., McNally, F. J., Starr, D. A. UNC-83 is a nuclear-specific cargo adaptor for kinesin-1-mediated nuclear migration. Development. 136, 2725-2733 (2009).
- Padmakumar, V. C., et al. Enaptin, a giant actin-binding protein, is an element of the nuclear membrane and the actin cytoskeleton. Experimental cell research. 295, 330-339 (2004).
- Roux, K. J., et al. Nesprin 4 is an outer nuclear membrane protein that can induce kinesin-mediated cell polarization. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106, 2194-2199 (2009).
- Wilhelmsen, K., et al. a novel outer nuclear membrane protein, associates with the cytoskeletal linker protein plectin. The Journal of cell biology. 171, 799-810 (2005).
- Wilson, M. H., Holzbaur, E. L. Nesprins anchor kinesin-1 motors to the nucleus to drive nuclear distribution in muscle cells. Development. 142, 218-228 (2015).
- Yu, J., et al. KASH protein Syne-2/Nesprin-2 and SUN proteins SUN1/2 mediate nuclear migration during mammalian retinal development. Human molecular genetics. 20, 1061-1073 (2011).
- Zhang, X., et al. Syne-1 and Syne-2 play crucial roles in myonuclear anchorage and motor neuron innervation. Development. 134, 901-908 (2007).
- Zhang, J., et al. Nesprin 1 is critical for nuclear positioning and anchorage. Human molecular genetics. 19, 329-341 (2010).
- Stewart-Hutchinson, P. J., Hale, C. M., Wirtz, D., Hodzic, D. Structural requirements for the assembly of LINC complexes and their function in cellular mechanical stiffness. Experimental cell research. 314, 1892-1905 (2008).
- Zhang, X., et al. SUN1/2 and Syne/Nesprin-1/2 complexes connect centrosome to the nucleus during neurogenesis and neuronal migration in mice. Neuron. 64, 173-187 (2009).
- Razafsky, D., Hodzic, D. Temporal and tissue-specific disruption of LINC complexes in vivo. Genesis. 52, 359-365 (2014).
- Razafsky, D., Hodzic, D. A variant of Nesprin1 giant devoid of KASH domain underlies the molecular etiology of autosomal recessive cerebellar ataxia type I. Neurobiology of disease. 78, 57-67 (2015).
- Razafsky, D., Blecher, N., Markov, A., Stewart-Hutchinson, P. J., Hodzic, D. LINC complexes mediate the positioning of cone photoreceptor nuclei in mouse retina. PloS one. 7, e47180 (2012).
- Razafsky, D. S., Ward, C. L., Kolb, T., Hodzic, D. Developmental regulation of linkers of the nucleoskeleton to the cytoskeleton during mouse postnatal retinogenesis. Nucleus. 4, 399-409 (2013).
