Introduction
그것은 암 세포의 운동성이 같은 행동이 순환 시스템 1에 기저막과 항목을 통해 침입을 용이하게 주어진, 전이 가능성의 예측이라고 설정됩니다. 운동성에 가장 연구가 광범위하게 3 차원 매트릭스에서 세포의 이동 것 실제로 방법이 동일 세포보다 대표 인 것으로 인식되고있다하더라도 세포가, 2 차원 (2D) 환경에서 동작하는 방법에 초점을 맞추었다 생체 2에서 작동합니다. 3 차원 배양 시스템은 점차 성장 역학 및 약물 감수성 3, 세포 형태의 범위 셀룰러 동작을 연구하기 위해 사용된다. 3 차원 환경의 컨텍스트 내에서 암 세포 침입을 모니터링하는 욕구는 3 차원 세포 내로 이러한 타원체 매립 하였다 매달려 드롭 배양법 (4)를 통해 3 차원 세포 집합체 (타원체)의 생성을 포함하는 이전에 확립 된 기술을 합성하게되었다 매트릭스 (ECM) 콜라겐과 기저막 재료 (5)으로 구성. 이 방법은 쉽게 실험 다양한 조건 하에서 내습과 비교하기 위해 이용 될 수있는 간소화 된 방법을 제공함으로써 이전에 확립 된 기술을 개선하고자한다.
체외에서 세포 운동성을 평가하는 전통적인 방법은 스크래치 상처 분석 및 트랜스 웰 분석 (6)이다. 전 분석은 2 차원 환경에서 세포 운동성을 도시 한 생체 침입에 중요한 다양한 기능, 예를 들면 프로테아제 활성 7 그러므로 독립적이다. 트랜스 웰 분석은 웰 인서트가 대향 막 표면에 세포의 모양, 즉 ECM 기재하지만, 단 하나의 파라미터를 더 모델 세포 침윤 코팅 할 수있을 때를 측정하고, 세포 침윤의 많은 뉘앙스 따라서 용이하게 관찰 할 수없는된다. 이러한 기술, 암세포 침윤 타원체 분석 (도 1 <대조적/ 강해>) 만 생리 관련이없는 환경에서 세포 침윤의 실시간 모니터링을 허용하지만, 또한 이러한 집단 대 개인 세포 이동 8로서 가시화 될 중요한 세포주 특정 기능을 허용한다. 이 방법은 표준 3 차원 배양 성장 분석보다 이점을 제공한다. 세포는 이러한 제한이 해제 된 후 침입하는 인센티브되도록 매달려 드롭 방법을 통해 세포 응집체의 생성은 처음에 세포의 움직임을 제한한다. 그 제약 조건이 해제되면 또한, 세포 출구는 편리하게 정량 할 수있는 일정한 방향으로 진행됩니다.
암세포 타원체 분석법에 가장 널리 사용되는 재료는 ECM의 Matrigel하고 이러한 구성 요소들의 각각은 전이 거동에 영향을 미치는 중요한 역할과 구별 갖는 경우 타입 I 콜라겐. 마트 리겔은 Engelbreth-Holm이 운집 마우스 육종 세포에 의해 생산 된 단백질의 분비 혼합물이며, baseme에 충실이러한 라미닌, entactin 및 제 4 형 콜라겐 (9)와 같은 NT를 막 단백질. 이 때문에 마트 리겔은 이제부터라고 "기저막 물질."이 기저막 물질은 세포의 행동 (11) 상에 다양한 효과를 발휘하는 다른 많은 단백질 외에 암세포 침윤 (10) 중 접착 인테그린에 필요한 필수적인 리간드를 제공한다. 비교하면, 일반적으로 힘줄 등 치밀한 콜라겐 구조 (12)의 산으로부터 제조 다이제스트 I 형 콜라겐은, 본체의 결합 조직과 기질지지 조직과 기관의 주요 구조적 요소로서 기능 훨씬 단순 매트릭스 물질이다. 이것은 콜라겐의 물리적 특성은 세포 운동성의 기능의 수를 조절할 수 있음을 입증되었다; 예를 들어, 종양 - 기질 계면에서 콜라겐 섬유의 배향은 기질 (13)에 침입 할 때 그 다음에 피 브릴을 따라 이동하는 암세포를 허용. 여기에 제시된 분석에서는 두 종류의 난 콜라겐과 기저막 재료는 3D 암 세포 - 기질 상호 작용을 연구하는 도구로 사용된다.
세포를 3 차원 매트릭스에 매립 한 후 침입이 모니터링 될 수 제어 경로의 억제 또는 자극의 효과. 세포 매달려 방울 또는 긴 치료가 침공을 조절해야합니다 여부에 따라 3D 문화로 전송시 성장하는 동안 전처리 할 수 있습니다. 짧은 치료를 들어, 약물이 컬렉션 후 타원체 서스펜션뿐만 아니라 셀에 충분한 약물 노출을 용이하게하기 위해, 3 차원 배양을 둘러싸 매체와 혼합하는 것을 추천합니다. 다음에, 정상 또는 종양 - 관련 기질 세포는 종양 세포의 침윤을 변조에서의 역할을 평가하는 방법 또는자가 분비 및 주변 분비 신호의 영향 세포 행동 결정하는 매트릭스 물질과 혼합 될 수있다. 이 아이디어는 연구에 나타내었다 곳 (COL)의 공 배양암 매달려 방울의 내피 세포에 회전 타원체 (14) 내의 혈관 네트워크되었다. 암세포 침윤이 다른 기판 (15)에 의해 영향을 마지막으로, ECM 성분은 또한 변경 될 수있다. 아래에 제시된 방법에 따라서 다양한 조건 하에서 암 세포의 침윤을 평가하기위한 프레임 워크를 제공한다. 일반적으로 모든 세포주가 걸려 방울에 타원체를 생성하고 상피 보이는 세포주는 일반적으로 일반 구를 형성하지 않는 것이 발견되었다.
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Protocol
타원체의 1 세대
- PBS를 사용하여 70 %의 합류 ~의 부착 암 세포 배양을 분리하여 드롭 문화를 걸려 위해 단일 세포 현탁액을 준비 0.05 % 트립신 EDTA 용액에 노출 된 다음에 씻으십시오.
- 세포 배양 배지와 트립신 용액을 중화하고 세포 현탁액의 분취 량을 사용하여 세포를 카운트. 주 : 세포주에 달려 특정 세포 배양 배지는 테스트중인. 세포 배양 배지는 일반적으로 DMEM + 10 % FBS이고, ATCC 미디어 권장 사항을 따르십시오. 자세한 내용은 표 재료에서 찾을 수있다.
- 세포 배양 배지를 20 μL 방울 당 500 ~ 1,000 세포 시딩 있도록 희석을 수행한다.
- 10cm 접시를 취득하고 아래로 멸균 PBS의 5 mL를 추가 할 수 있습니다. 참고 :이 단계는 교수형이 증발에서 떨어 보호합니다. 저비용 "세균 등급"요리, 세포 배양 등급 요리 대신에 사용될 수있는 바와 같이, 세포를 계속하지 않을 것이다문화 표면 역할을합니다.
- 뚜껑의 내면에 희석 된 세포 현탁액 20 μL 방울을 전송하는 멀티 채널 피펫을 사용한다.
- 피펫 (40)는 10cm 접시의 뚜껑에 (8 방울의 5 행)을 삭제합니다.
- 배양 접시 위에 뚜껑과 장소를 반전. 스페 로이드를 생성하기 위해 72 시간 동안 37 ℃에서 배양 매달려 드롭 부화.
- 자신감, 아직 통제 된 방식으로 뚜껑을 뒤집습니다. 참고 : 너무 빠르거나 너무 느린 뚜껑을 반전하면 물방울이 이동하는 원인이 될 수 있습니다. 다른 소형 응집체를 생성하기 위해 72 개 이상의 시간을 요구할 수 있지만 어떤 세포주는 48 시간 이내에 구 상체를 형성 할 수있다.
3D 매트릭스에 타원체 2. 임베딩
- 밤새 스페 로이드를 매립하기 전에 4 ℃에서 성장 인자 - 감소 된 기저막 물질의 분취 량을 해동.
- 옵션 : 사전에 ECM와 레이어 우물은 조직 cultu 잠재적 회전 타원체의 상호 작용을 방지하기 위해표면 재.
- 24 웰 플레이트에 웰 당 ECM의 피펫 200 μL.
- ECM은 전체 잘 표면을 커버하도록 판을 기울.
- 조심스럽게 피펫으로 초과 ECM을 제거합니다.
- 3 시간 실온에서 또는 4 박 ° C에서 : 우물이 건조 될 때까지 판을 품어.
- 옵션 : 사전에 ECM와 레이어 우물은 조직 cultu 잠재적 회전 타원체의 상호 작용을 방지하기 위해표면 재.
- 조직 배양 접시의 뚜껑을 틸팅 및 미디어를 풀링하여 타원체를 수집한다. 1.5 ml의 microcentrifuge 관에 회전 타원체와 미디어를 전송합니다.
- 타원체가 microcentrifuge 관의 바닥에 정착하는 10 분을 허용합니다. 타원체는 눈으로 볼 수 있어야합니다.
- . 감기 (4 ° C를) 100 ㎕ 내가 별도의 사전 냉각 튜브에 콜라겐 유형의 기저막 재료의 100 μl를 혼합 조기 응고에서 중 젤을 방지하기 위해 4 ° C에서 혼합물을 유지합니다.
- 작은 볼륨을 전송하는 경우 사전 냉장 피펫 팁을 사용합니다.
- 때주의를 줘I가 기포 형성을 방지하기 기저막 재료 및 콜라겐 형 혼합. 주 :이 겔에 매립 될 경우 기포 프로토콜 뒷부분 이미징을 방해 할 수있다.
- microcentrifuge 관의 40 μL 바닥 부분에서 타원체를 대기음, 나는 혼합물을 콜라겐 기저막 재료 / 유형과 결합. 혼합 할 때 기포 형성을 방지하기 위해주의해야합니다. 주 : 용액 100 μL 콜라겐 유형 I 및 타원체 40 μL 4 3D 배양 독립적 충분한 물질을 생성, 100 μL 기저막 재료 함유. 이 스케일 업 또는 다운 할 수 있습니다.
- 피펫 24 웰 플레이트에 웰의 중심에 점성 혼합물의 40 μl를 삭제합니다. 웰의 측면에 실행 혼합을 방지하기 위해 플레이트를 수평으로 유지. 참고 : 24 웰 플레이트에 하나의 열 - 4 웰 - 각 조건 테스트 할 것을 권장합니다.
- 판 INT 배치OA 37 ° C 배양기에서 30 분 동안 그대로 둡니다. 3D 문화는이 기간 동안 중합합니다.
- 서서히 세포 배양 배지 1 ㎖로 3 차원 배양 잠수함.
- 또한 겔 중합을 촉진하기 위해 우물에 그것을 추가 할 때 미디어가 따뜻한 있는지 확인합니다.
- 중요한 단계 : 부드럽게 3D 문화에 미디어를 추가 할 수 있습니다. 우물에 너무 빨리 미디어를 피펫은 조직 배양 표면에서 3D 문화의 분리로 이어질 수 있습니다.
3. 모니터링 및 회전 타원체 침공 분석
- 연구자에 의해 결정 시간 지점에서 주변의 3D 매트릭스로 회전 타원체에서 이미지 침공. 20 배 대물 렌즈와 거꾸로 현미경을 사용하여 사진을 획득. 주의 : 이상적 시간 - 포인트는 테스트되는 세포주에 따라 다를 것이다. 더 침습적 세포주는 곧 도금 후 타원체에서 자신의 출구를 시작하고, 따라서, 초기 사진을 취할 것입니다도금 후 몇 시간 이내의. 일반적으로, 사진은 (도금 후) 0 시간, 24 시간, 48 시간에서 가져옵니다. 침략은 일반적으로 도금 후 24 시간 내지 48을 마칩니다.
- 이미지 J. 같은 영상 분석 소프트웨어를 사용하여 침입 능력을 정량
- 회전 타원체의 가장자리에서 셀 거리로 침략을 분석합니다.
- 반경 및 / 또는 최대 침략 거리를 표시하기 위해 직선 그리기 도구를 사용합니다.
- 길이 측정을 표시하는 "측정"을 상단 메뉴의 "분석"을 선택한 후 클릭합니다.
- 회전 타원체 외부 총 침략 영역으로 침략을 분석합니다.
- 회전 타원체 및 / 또는 총 침략 영역의 경계를 추적 자유형 그리기 도구를 사용합니다.
- 지역 측정을 표시하는 "측정"을 상단 메뉴의 "분석"을 선택한 후 클릭합니다.
- 이미지의 스택에 대한 측정을 만드는 데 투자 수익 (ROI) 관리자 도구와 같은 플러그인을 사용합니다.
- 회전 타원체의 가장자리에서 셀 거리로 침략을 분석합니다.
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Representative Results
회전 타원체 침입 분석을 이용하여 (도 1), 암 세포주의 패널뿐만 아니라, 기저막 재료 및 타입 I 콜라겐으로 이루어진 3 차원 매트릭스로 주입 후에 나타나는 셀 출구의 양 구 상체를 형성하는 능력에 대해 시험 하였다 (표 1). 이 결과는 모든 암 세포주가 시험 관내 상피 형태를 갖는 세포주 정규 매끄러운 골재를 생산하는 경향이 잘 형성된 타원체를 생성 함을 입증한다하지. 검정에 침입하는 상이한 세포주의 능력은 또한 변수였다. 4T1, E0771, 및 U-87 MG 같은 침습적 인 것으로 확립 세포주를 분석에서 회전 타원체 출구의 높은 정도를 나타낸다. 예상 된 바와 같이 덜 공격적인 세포주, MCF-7과 같이, BT474 및 MCF10DICS.com가 침입하지 않았다. 예기치 그러나, A-431, 357 COLO PL 세포 침윤에 의해 디스플레이의 부재였다. 이들 중 일부에 대한 데이터의 일례선 (그림 2) 표시됩니다. 4T1 세포 및 E0771, 내습 이미 침공 매트릭스 내로 주입 개시 직후, U-87 MG 들어 3D 행렬로 타원체 매립 후 24 시간 발음 하였다.
세포 침윤의 질적 평가는 상기 이미지 분석 소프트웨어에 정량에 의해 지원 될 수있다. 침략의 정도를 정량을위한 두 개의 서로 다른 전략 (그림 3)를 포함하고, 선택한 전략은 침략의 유형 목격에 따라 달라집니다. ImageJ에에서, 침습성 거리 영역 침습 또는 제 1 비교 값을 측정 화소로서 생성 된 후에 소프트웨어의 그리기 도구를 사용하여 경계가된다. 현미경 사진 이렇게하면, ROI 관리자 도구와 같은 플러그인 효율 측정을 용이하게하기 위해 권장보다 효율적인 데이터 수집이 가능하도록 스택으로 가져올 수 있지만.
| 세포주 | 암의 종류 | 구 형성능 | 분석 침략 | |
| 4T1 | 유방 | 쥐 | +++ | ++ |
| A-431 | 표피 비슷한 | 사람의 | +++ | - |
| BT-474 | 유방 | 사람의 | ++ | - |
| COLO 357 PL | 이자 | 사람의 | ++ | - |
| E0771 | 유방 | 쥐 | +++ | +++ |
| 된 LNCaP | 전립선 | 사람의 | + | - |
| MCF-7 | 유방 | 사람의 | +++ | - |
| MCF10DCIS.com | 유방 | 사람의 | ++ | - |
| MDA-MB-231 | 유방 | 사람의 | - | ? |
| PANC-1 | 이자 | 사람의 | + | ++ |
| PC-3 | 전립선 | 사람의 | - | ? |
| SK-BR-3 | 유방 | 사람의 | - | ? |
| U-87 MG | 아교 모세포종 | 사람의 | +++ | +++ |
표 1. 테스트 다른 세포주에 의해 구 형성과 침략 셀 라인은 구형 형성 능력과 침략에 따라 채점됩니다.
그림 1 :. 회전 타원체 침공 분석의 비주얼 워크 플로우는 타원체는 72 시간 동안 조직 배양 접시의 뚜껑에 매달려 미디어 방울 생성됩니다. 다음으로, 상품을 모으고 있으며, 스페 로이드 TRANSF 아르 기저막 재료와 내가 콜라겐 타입의 4 ° C를 혼합물에 있죠. 구형의 부유 다음, 점성 혼합물이 3 차원 배양에 고화 37 ° C에서 30 분 주어진다 후 24- 웰 플레이트의 웰에 피펫 팅한다. 따뜻한 매체는 웰에 첨가한다. 타원체에서 셀 종료 후 시간이 지남에 따라 모니터링됩니다.
그림 2 :. A-431 및 MCF-7 세포가하지 않는 반면, 분석 데이터의 예 4T1는, E0771, 그리고 U-87 MG 세포는 타원체로부터 침략을 보여줍니다. 4T1과 E0771 세포에 의한 최대의 침공 이후 발생하면서 U-87 세포의 침략은 대부분 24 시간 후 발음. 가장 침습적 E0771 및 U-87 MG 세포주를 들어, 셀 출구 달리 덜 침습적 선 관찰 타원체 크기의 증가를 상쇄하기 위해 나타난다. 스케일 바, 200 μm의.OM / 파일 / ftp_upload / 53409 / 53409fig2large.jpg "대상 ="_ 빈 ">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
도 3 :. 침윤 정량 침윤 예 이미지 J 소프트웨어를 사용하여 이미지 분석에 의해 정량 할 수있다. 회전 타원체에서 나오는 긴 침습 거리의 함수로서 침윤 () 계산. (b)는 회전 타원체를 떠나 세포에 의해 침략 총 면적. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
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Discussion
본 연구는 회전 타원체 침윤 분석 (표 1) 암 세포주 패널의 성능을 평가 하였다. 일반적으로, 우리는 회전 타원체 형성 세포 간 접합이 존재 타원체 형상 구조의 형성을 촉진 더 상피 생긴 세포주에서 향상되는 것을 발견한다. MDA-MB-231 세포와 같은 상피 - 간엽 전환을받은 알려진 세포주, 그들의 감소 E-, N- 및 P-cadherin의 발현 16에 가장 가능성이 매달려 드롭 문화 타원체를 형성하지 않는다.
회전 타원체 침공 분석의 단계 중 일부는 프로토콜에 가까운 부착을 필요로한다. 그것은 기저막 콜라겐 혼합물을 피펫 팅 할 때 빨리 작동하도록 절대적으로 중요하며, 이것은 하나의 상온에서 고화하기 시작하므로 작동하면서 4 ° C 부근의 혼합물을 유지하는 것이 중요하다. 또한, 수용성 콜라겐 제제는 산성이며, 되어온 겔에 의해 유도수산화 나트륨 염 및 소량의 이온을 37 ℃로 가온 하였다. 우리 손에 단순히 기저막 물질과 콜라겐 같은 부피를 혼합하여 기저막 성분이 콜라겐을 중화 할 수 있기 때문에 승온시는 겔 유능한 렌더링한다. 작은 기저막의 비율 경우 콜라겐이 계획되어, 콜라겐 중합을 촉진하는 기저막 혼합물을 첨가하기 전에 중화 될 것이다. 형성되면, 대부분의 타원체는 해리에 저항하고, 3D 문화를 포함하는 것이 점성 혼합물에 재 부유 살아남을 것입니다. 이러한 이미징을 방해 할 수로 부유 단계 동안, 하나는, 기포의 형성을 제한하는 처리 발휘한다. 겔이 고체화 후 웰에 배양 배지를 추가 할 때, 그것은 천천히 피펫이 하나의 접시로부터 분리으로부터 3D 배양을 방지하는 것이 중요하다.
주변 3D 행렬로 암세포의 출구가있다 generally는 E0771과 U-87 MG 세포가 여기에 조사 세포주 (그림 2)의 패널에서 대부분의 침략을 보여 줄의 침략 능력과의 상관 관계. 흥미롭게도,이 두 라인은 침략의 다양한 모드를 나타낸다. E0771 세포가 점진적이고 집단적인 방식으로 침입 반면, U-87 MG 세포 회전 타원체에서 개인과 빠른 종료를 표시합니다. 회전 타원체 침공 분석 따라서 하나의 기판을 침입하는 라인에서 사용하는 다른 모드를 비교할 수 있습니다.
침략을 분석하는 다른 방법은 그림 3에 제시 및 분석의 바람직한 방법은 침략의 모드에 따라 달라질 수 있습니다. 사용과 관계없이 분석의 종류,이 분석은 타원체의 다수의 아웃 침공 신속한 정량 할 수 있도록 설계되었다. 다음, 4 독립적 인 복제 문화를 만들려면이 혼합물을 분취 3D 문화의 혼합물로 회전 타원체의 풀링의 establi로 연결주어진 실험 조건 (그림 1)에 대해 모니터링 할 수있는 여러 타원체의 shment. 분석은 "N"으로 인해 큰 전위에 따라서 통계적 비교를 쉽게 수정할 수있는이며 동일한 종류의 타원체 공유 표현형 최소 가변성을 나타낼 것으로 보인다. BT-474과 MCFDCIS 세포와 같은 덜 공격적 세포주가 더 공격적인 라인보다 훨씬 작은 크기가 매끄러운, 소형 구체를 형성합니다. 결과적으로 매달려 방울로 초기 셀 시드 중에, 시작 셀 번호가 적절히 조절 될 필요가있다.
일부 전이성 세포 라인은 우리의 기대에 대해 수행이 분석에서 침략 행위가 발생하지 않았다. 주목할만한 예는 A-431과 콜로 357 PL 세포를 포함한다. 기인 타원체가 ECM에 포함 된 기질의 유형이 라인에 의해 표시 내습의 부족이라고 할 수있다. 사실, 다른 사람은 기저막의 짝을 보여 주었다리알 (예를 들어, 마트 리겔) 및 콜라겐 마이그레이션 (18)에 대해 서로 다른 매트릭스 메탈로 요구 사항 아마도 인해 셀 (17)의 침공에 서로 다른 영향을 미칠 수 있습니다. 따라서 콜라겐의 비율 조정 : 기저막 물질은 분석 결과를 수정하는 또 다른 방법은, 여기서 추가적으로 의해 침윤을 향상 할 수함으로써, 총 혼합물의 1/3 기저막 재료 성분을 줄이고, 콜라겐의 양의 증가를 허용 일부 세포 유형. 이 아이디어는 콜라겐 섬유 형성이 콜라겐 (19) 중화 pH를 4 ℃ 예비 배양 기간을 확장하여 승진했다 내가 존재하는 섬유를 콜라겐 유방 organoids의 침략 능력과 유형의 수와 양의 상관 관계를 발견 최근 연구에 예시되어있다.
어떤 세포주가 기대에 반하는 행동 발견은이 분석의 한계 중 일부를 도시한다. O 아웃 감시 암세포 침윤 비록FA가 더 중요한 생리 차원 운동성 분석보다 그것이 달리, 생체 내에서 발견 된 일부 생물학적 복잡성을 생략 모델 시스템이 여전히 콜라겐과 기저막 재료로 이루어진 혼합물에 3D 회전 타원체. 예를 들어, 전이성 능력은 이와 같이, 기질은 다양한 인자가 뿌리깊 전이 과정에 영향을 미칠 수 있다는 것을 인식하는 것이 중요하다 동소 이소성 대 (20) 종양 성장을 지원할 구별 미세 환경에 의해 조절 될 수있다. 이러한 요소의 수는 여기에 제시된 침공 분석에서 결석 및 관찰 된 불일치의 일부를 설명 할 수 있었다.
요약하면, 여기에 제시된 암세포 타원체 침윤 분석은 생물학적으로 중요한 환경에서 침입을 모니터링하기위한 유연한 프레임 워크는, 세포 침윤의 메커니즘의 발견을 지원 제공하며, 잠재적 인 신규 한 항 - 전이성 치료법의 개발에 도움을 줄 수있다.
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Acknowledgments
NIH 보조금 P30의 CA051008 및 CA009686 T32 (ATR)에 의해 지원됩니다.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Matrigel Growth Factor Reduced | Corning | CB-40234 | |
| Collagen Type I, Rat Tail, 100 mg | Millipore | 08-115 | |
| DMEM | Life Technologies | 11995-065 | |
| RPMI 1640 Medium | Life Technologies | 11875-093 | |
| PBS | Life Technologies | 10010-023 | |
| 0.05% Trypsin-EDTA | Life Technologies | 25300-054 | |
| Fetal Bovine Serum, Heat Inactivated | Omega Scientific | FB-12 | |
| 100 mm TC-treated Dishes | Corning Incorporated | 430167 | |
| 24-well TC-treated Plates | NEST Biotechnlology | 702001 | |
| Olympus IX-71 Inverted Microscope | |||
| Cell lines were maintained in DMEM + 10% FBS, with the expection of BT-474 and LNCaP cells, which were mantained in RPMI + 10% FBS. |
References
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