Summary
Мы опишем протокол для легкой катализируемой генерации перекиси водорода - кофактор для окислительных превращений.
Abstract
Оксидоредуктазы принадлежат к наиболее применяемых промышленных ферментов. Тем не менее, они нуждаются во внешних электронов, поставка которых часто дорогостоящим и сложным. Рециркуляция NADH доноров электронов или NADPH требует использования дополнительных ферментов и жертвенные субстратов. Интересно отметить, что несколько оксидоредуктаз принимают перекись водорода в качестве донора электронов. Будучи недорогими, этот реагент часто снижает стабильность ферментов. Решение этой проблемы заключается непосредственно в космическом пространстве поколение кофактора. Непрерывная подача кофактора при низкой концентрации приводит в действие реакцию без ухудшения стабильности фермента. Эта статья демонстрирует способ свет катализируемых в месте генерации перекиси водорода на примере гема-зависимого декарбоксилазы жирных кислот Olet JE. Декарбоксилазы жирных кислот Olet JE была обнаружена благодаря своей уникальной способности производить с длинной цепью 1-алкенов из жирных кислот, ранее неизвестному ферментативныхреакция. 1-алкенов широко используются добавки для пластификаторов и смазочных материалов. OLET Ю.Е. было показано , принимать электроны из перекиси водорода для окислительного декарбоксилирования. В то время как добавление перекиси водорода повреждает фермента и приводит к низкой урожайности, в месте генерации кофактора обходит эту проблему. Photobiocatalytic система показывает очевидные преимущества в отношении ферментативной активности и урожайности, что приводит к простой и эффективной системы декарбоксилирования жирных кислот.
Introduction
Изменение климата и предсказуемым истощение возобновляемых ресурсов представляет собой серьезную угрозу для нашего общества. В этом контексте, катализ фермент представляет собой до сих пор не использованы в полной мере потенциал для развития устойчивых и "зеленому" химии 1. Оксидоредуктазы обладают способностью катализировать введение и модификацию функциональных групп в мягких условиях реакции и относятся к наиболее важных биокатализаторов 2. Большинство окислительно-восстановительных преобразований требуют питания внешних кофакторов, таких как NAD (P) H. Методы регенерации кофактора были применены в промышленных масштабах. Тем не менее, они по-прежнему приводит к высокой стоимости процесса, что ограничивает их применение в основном для продуктов с высокой добавленной стоимостью. Интересно отметить , что несколько пероксидазы 3,4 и P450 монооксигеназ 5 принимает электроны из перекиси водорода с помощью так называемого перекисного шунта. В то время как H 2 O 2 является дешевым совместно реагент, он , как сообщается , harmfуль для многих ферментов. Устойчивый к образованию на месте низких концентраций перекиси водорода является жизнеспособным подходом для проведения реакции без ухудшения операционной стабильности фермента.
Рисунок 1. Экспериментальная установка из photobiocatalytic декарбоксилирования жирных кислот путем Olet JE. Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.
Использование света в качестве источника энергии для химических и биологических процессов получает все большее внимание в последние годы 6. Свет управляемой генерации перекиси водорода стала простой и надежный метод для подачи пероксида водорода для окислительно - восстановительных преобразований (рисунок 1). Фотокатализатор такие как флавин аденин пнonucleotide (ФМН) позволяет уменьшить молекулярного кислорода до пероксида водорода, который затем используют в качестве кофактора для ферментативной реакции oxyfunctionalization. Возможные доноры электронов являются этилендиаминтетрауксусная кислота (ЭДТА), аскорбат или недорогой формиат. Метод , как правило , применяется для H 2 O 2 -зависимые ферменты, включая пероксидаз 3,4 и P450 монооксигеназ 5.
Недавно мы исследовали применение нового бактериального декарбоксилазы 7 для превращения природных жиров в олефины 8. Это было бы устойчивым маршрутом для синтеза широко используемых химических веществ платформы из биооснове источника. Декарбоксилазы Olet JE из грамположительной бактерии Jeotgalicoccus зр. катализирует окислительное декарбоксилирование жирных кислот и образует 1-алкенов в качестве продуктов. Olet JE тесно связана с бактериальной P450 монооксигеназ и потребности электронов ером перекиси водорода для реакции.
К сожалению, добавление H 2 O 2 к раствору субстрата и фермента приводит к низкой конверсии и плохой воспроизводимости результатов, по- видимому из - за вредного воздействия перекиси водорода на стабильность OLET JE. Генерация гибридного белка с НАДФН-редуктазы RhFred сделал NADPH-зависимой декарбоксилирование возможно. 9 Тем не менее, высокие цены на NADPH и нынешние ограниченные возможности для экономически эффективного восстановления побудило нас исследовать более дешевые доноров электронов. Воодушевленные сходство Olet JE с P450 монооксигеназ, мы использовали свет катализируемой поколение H 2 O 2. Мы были рады получить высокие конверсии (до> 95%) с использованием бесклеточных экстрактов или очищенные растворы фермента.
На примере декарбоксилирования жирных кислот, мы приводим общий протокол для легкой управляемой ЭнзимАИКТ окислительно-восстановительные преобразования с использованием ФМН в качестве фотокатализатора и перекиси водорода в качестве кофактора. Представленные способы включают в себя получение фермента в рекомбинантной клетке Е. палочка, очистка фермента, применение для синтеза 1-алкенов и анализ продуктов реакции.
Protocol
Внимание: Пожалуйста, обратитесь все соответствующие паспорта безопасности материала (MSDS) перед использованием. Некоторые из химических веществ, используемых в этих синтезов остро токсичными и канцерогенными. Все шаги, связанные вредные органические растворители, в частности извлечение продуктов реакции и модифицирования жирных кислот должны выполняться под вытяжкой с использованием средств индивидуальной защиты (защитные очки, перчатки, лабораторный халат, полнометражные брюки, закрытые носок обуви ). Все операции, связанные с использованием генетически модифицированных организмов в этой работе требуют установки, которые утверждены для обработки генетически модифицированных организмов уровня безопасности S1.
1. Экспрессия рекомбинантного декарбоксилазы OLET JE в E. палочки
- Подготовка производственного штамма
- Готовят синтетический ген OLET JE из Jeotgalicoccus и клонировали в вектор экспрессии ПАСК-IBA37plus , как описано. 8 Примечание: Для того, чтобы избежать деградации жирных кислот ферментами из бактериального метаболизма, E. был использован штамм E.coli JW5020 из коллекции Кейо с неблагополучной пути к деградации жирных кислот.
- Выращивание и индукция экспрессии фермента
- Подготовка предварительной культуры путем инокуляции Е. палочка JW5020 OLET мутант из LB-пластинки (содержащей 100 мкг мл -1 ампициллин) в двух 3 мл LB-среды в пробирках. Пипетка ампициллин (100 мкг мл - 1) из исходного раствора в среду для селекции и инкубировать при 37 ° С в течение 15 часов в качалке инкубаторе при 180 оборотах в минуту.
- Добавляют 2 мл предварительных культур к двум 200 мл LB-среде, содержащей ампициллин (100 мкг мл -1), в 1 л колбах. Инкубация протекает при температуре 37 ° С и 180 оборотах в минуту.
- Мониторинг изменений в OD 600 нм после прививки. Когда OD 600 достигает значения между 0,6 сd 0,8 индуцируют экспрессию путем добавления тетрациклин (0,2 мкг мл - 1). Инкубируйте культур в течение 15 ч при температуре 20 ° C и 180 оборотов в минуту.
Примечание: Так как OLET Ю.Е. содержит гем кофактор, добавление δ-амино левулиновая кислоты (0,5 мМ) до индукции необходимо , чтобы обеспечить культуру с предшественником синтеза кофактора.
- лизис клеток
- Выполните следующие шаги на льду. Передача культуры путем декантации или пипеткой в центрифужные пробирки и использовать шкалу, чтобы обеспечить равномерное распределение. Центрифуга культур в течение 20 мин при 12000 х г при 4 ° С.
- Осторожно удалите супернатант и ресуспендируют гранул в 50 мл буфера (Трис 50 мМ, NaCl 200 мМ, рН 7,5) с помощью пипетки и переносят подвеску в конической центрифужной пробирке.
- После центрифугирования в течение 15 мин при 4000 х г при 4 ° С отбросить супернатант, ресуспендируют каждый осадок в 3 мл буферного раствора с помощью пипетки.
- Выполнение лизиса клеток с помощью такnicating решения на льду (три цикла х 30 сек), оставляя 1 мин пауза в между циклами с. Центрифуга растворы в течение 20 мин при 15000 х г при 4 ° С для удаления остатков клеток и перенести надосадочную жидкость в конической центрифужную пробирку, не нарушая гранул с помощью пипетки. Выбросите осадок.
Примечание: Одна фракция растворителя будет использоваться непосредственно для биокатализе после того, как малые молекулы удалены. Вторая фракция будет использоваться для очистки His-меченой Olet JE.
- Удаление небольших молекул клеточных экстрактов
- Перед использованием неочищенного экстракта в биокатализе удалить небольшие молекулы, которые могут помешать образованию перекиси водорода или переноса электронов пипеткой 3 мл экстракта бесклеточной в блок центрифуга фильтр с 10 кДа мембрану и центрифуге при 4000 мкг при 4 ° С. Ресуспендируют оставшегося белка в 3 мл трис-HCl-буфера.
- Очистка Olet
- Нанесите 3 мл смеси растворителей второго клеточного экстракта Его спиновых колонках пур Ni-NTA, которые уравновешивают до того уравновешивающим буфером (трис 20 мМ, NaCl 300 мМ, 10 мМ имидазола).
- Уплотнение колонны с нижним вилок и верхними винтовыми колпачками и трясти их слегка, пока смола не распределяется равномерно с бесклеточной экстракта. Выдержите Загруженные колонки в течение 30 мин в воздушной шейкере при температуре 4 ° С.
- Вымойте колонки с 1 мл промывочного буфера (Трис 20 мМ, NaCl 300 мМ, 20 мМ имидазола, рН 7,4) путем центрифугирования при 700 мкг в течение 2 мин. Повторите этот шаг дважды.
- Поместите колонки в новую коническую центрифужную пробирку и добавляют 1 мл элюирующего буфера (Трис 20 мМ, NaCl 300 мМ, 250 мМ имидазола, рН 7,4) Olet JE. Центрифуга при 700 мкг в течение 2 мин и повторить этот шаг в два раза.
Примечание: имидазола будет связываться с никелем и таким образом удалить Olet JE из колонки. - Трансфер вымывание в блок центрифуг фильтра (10 кДа MEMбрана) и центрифуге при 4000 х г при 4 ° С для удаления имидазола.
- Проверьте чистоту фермента с помощью SDS-PAGE (15%). 9 Смесь 3 мкл элюирования с SDS-буфером (конечная концентрация 1 раз) и инкубировать раствор при 95 ° С в течение 5 мин для денатурации. Впоследствии применять общую сумму на ДСН-ПААГ. Выполнить гель при 35 мА, используя коммерческий стандарт белка. Обнаружение белка в 50 кДа.
- Для определения концентрации белка используют коммерчески доступный бычий сывороточный альбумин-набора. 50 мкл разбавленных образцов белка (1: 100, 1: 200, 1: 500) и стандартный БСА (0, 20, 30, 40,50, 60, 80, 100 мг мл - 1) в 96-луночный планшет , Добавить 200 мкл реагента Брэдфорда, измеряют оптическую плотность при длине волны 595 нм через 15 мин с флуориметре и расчета концентрации с использованием стандартной кривой.
2. Свет катализируемой Биотрансформация
- Биокаталитические реакции без добавления перекиси водорода
- Приготовьте 10 мл исходного раствора 10 мМ стеариновой кислоты (М г 284,5 г моль -1) добавлением 10% (об / об) Tergitol и 0,0284 г стеариновой кислоты в дистиллированной воде. Раствор нагревают в камере для нагрева до 60 ° С до тех пор, жирная кислота полностью не растворится.
- Биокатализ и отбор проб
- Приготовьте два 2 мл реакционных смесей, содержащих 50 мМ ЭДТА, 0,01 мМ FMN, 0,5 мМ стеариновой кислоты в Трис-HCl-буфере. Добавьте магнитной мешалкой в течение достаточного подачи кислорода и помещают стеклянные трубки в ванну с водой, нагревают до 25 ° C.
- Добавить 200 мкг мл -1 очищенного фермента или 10% (об / об) клеток экстракт для каждой из реакционных смесей и освещают их с прозрачной стеклянной лампы (120 Вт) в расстоянии 15 см от реакционных труб.
- Взять 200 мкл образцов в определенные моменты времени (0, 10, 30, 60 и 120 мин и в течение ночи) прекращени реакции с 20 мкл 37% -ной HCl. Добавьте 5 мкл миристиновой кислоты (10 мМ маточного таклюция) в качестве внутреннего стандарта.
- Анализ продуктов реакции
- Для экстракции добавляют 500 мкл этилацетата к образцам дважды, инвертировать пробирки и центрифугируют в течение 1 мин при 13000 х г.
- Взлет 400 мкл надосадочной жидкости и дайте растворитель полностью испарится.
- Дериватизации карбоновых кислот в trimethylsilylcarboxylic кислоты путем добавления 200 мкл N - метил - N - (триметилсилил) ацетамид трифтор (MSTFA). Выдержите раствор при 60 ° С в течение 30 мин с целью превращения гидроксильных групп в триметилсилил эфиров.
- Определение конверсии с помощью GC / FID
Примечание: Определить, образование 1-гептадецен (RT: 8.34 мин), α- и β-гидрокси стеариновой кислоты (RT: 12,05 и 12,1 мин) и уменьшение субстрата (RT: 11,15 мин) с помощью GC / FID.- Установите температурный профиль, описанный ниже заданной температуры впрыска до 340 ° C. Держатьначальная температура печи при 90 ° С в течение 3,5 мин , а затем возрастает с 45 ° C мин -1. При температуре 220 ° С, поддерживать температуру в течение 2 мин. После повторного увеличения до 45 ° С мин -1, поддерживать температуру при 280 ° С в течение 2 мин , а затем возрастает с 60 ° С мин -1.
ПРИМЕЧАНИЕ: Максимальная температура 330 ° С выдерживают в течение 1,44 мин. - Вводят 4 мкл образца, с отношением разделенного 5, чтобы получить быстрое улетучивание и гомогенное перемешивание с носителем газа гелия.
Примечание: В зависимости от повышения температуры подложки и продукты поступают в газовую фазу. Вещества, детектируются GC детектором / FID после прохождения колонки в определенное время удерживания и отображаются в виде пиков на экране. Обратите внимание на формирование пика на мониторе. - Вычислить концентрацию образованного продукта по следующей формуле:
Примечание: коэффициент калибровки определен специально для этой колонки для каждого субстрата и продукта путем расчета стандартной кривой от известных количеств дериватизированная веществ и их соответствующей площади пика.
- Установите температурный профиль, описанный ниже заданной температуры впрыска до 340 ° C. Держатьначальная температура печи при 90 ° С в течение 3,5 мин , а затем возрастает с 45 ° C мин -1. При температуре 220 ° С, поддерживать температуру в течение 2 мин. После повторного увеличения до 45 ° С мин -1, поддерживать температуру при 280 ° С в течение 2 мин , а затем возрастает с 60 ° С мин -1.
- Определение пиков олефинов и бета-гидрокси кислоты с помощью ГХ / МС.
- Определение пиков олефинов и бета-гидрокси кислоты с помощью ГХ / МС. Установить температурный профиль. Установите температуру впрыска до 250 ° С. Держа температуру печи при 100 ° С в течение 5 мин , а затем возрастает с 20 ° C мин -1.
Примечание: Максимальная температура держится в течение 7,5 мин. - Установите температуру детектора масс-спектрометра до 250 ° C и при сканировании от 50 до 500 м / г в режиме электронного удара.
Примечание: ударная ионизация Electron удаляет один электрон, что приводит к образованию катион-радикала, который будет передан вперед для масс-спектрального анализа. Из-за высоких intramolar энергии ковалентных связей в рамкахМолекула перерыв создания фрагментов нижней т / г. Эти фрагменты образуют отпечаток пальца специфическую для вещества. - Вводят 1 мкл образца. Обнаружение 1-гептадецен после 11,4 мин времени удерживания с помощью соответствующего отпечатка пальца (рисунок 2).
- Определение пиков олефинов и бета-гидрокси кислоты с помощью ГХ / МС. Установить температурный профиль. Установите температуру впрыска до 250 ° С. Держа температуру печи при 100 ° С в течение 5 мин , а затем возрастает с 20 ° C мин -1.
Примечание: коэффициент калибровки определен специально для этой колонки для каждого субстрата и продукта путем расчета стандартной кривой от известных количеств дериватизированная веществ и их соответствующей площади пика. Representative Results
В то время как добавление перекиси водорода к реакционной смеси приводит к низкой до умеренной конверсии (<10%), в месте образование перекиси водорода увеличили конверсию до конверсии 80%. Анализ с помощью ГХ / МС показывает образование олефинов из жирных кислот (рисунок 2).
Рисунок 2. (A) Температурный профиль для измерений ГХ / МС. (B) отпечаток пальца 1-гептадецен элюирования через 11,4 мин. (C) Характерные вторичные ионы C п H 2n-1 фрагмент концевых олефинов примерным , показанного на 1-гептадецен. Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.
E. палочки. Очищенный раствор фермента показали четкую корреляцию между концентрацией фермента и конверсии. Повышение концентрации светособирающей молекулы ФМН приводят к повышению конверсии. Тем не менее, увеличение концентрации выше 10 мМ не приводит к дальнейшему ускорению реакции, что указывает, что количество перекиси водорода не достаточно доступны и больше не является ограничивающим фактором.
В дополнение к декарбоксилировании жирных кислот, OLET Ю.Е. также катализирует гидроксилирование в бета-положении. При превращении стеариновой кислоты, декарбоксилирование примерно в три раза быстрее, чем гидроксилирования. В типичном эксперименте с использованием раствора 0,5 мМ стеариновой кислоты и 10 мкМ ФМН, 99% субстрата было превращено в смеси 1-гептадецен и 2-гидроксистеариновой кислоты с соотношением3.3: 1 (рисунок 3) 8. Исследование спектра подложки светового приводом биокатализе показал , что для жирных кислот с длинными ацильных цепей, OLET Ю.Е. преимущественно катализирует декарбоксилирование, в то время как относительное количество гидроксильных-жирных кислот в смеси продуктов увеличивается с более короткой длиной цепи. Жирные кислоты короче миристиновой кислоты (С14) не претерпевал декарбоксилирование.
Рисунок 3. Газовый хроматографический анализ OLET JE -опосредованной декарбоксилирование стеариновой кислоты (11,15 мин) в 1-гептадецен (8,4 мин), α-гидрокси стеариновой кислоты (12,04 мин) β-гидрокси стеариновой кислоты (12,1 мин). Изменение площадей пиков от образцов , взятых в течение времени течение 2 часов показана. Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы вива большую версию этой фигуры.
Неожиданно оказалось, что ненасыщенные кислоты олеиновая кислота (С18: 1D9 цис) и линолевой кислоты (С18: 2d9d12) не были приняты в качестве подложек, указывая , что скрученный конфигурация цис - двойных связей , не могут быть размещены в продуктивный связывания режима в ферменте. Добавление олеиновой кислоты (10%) также предотвратить превращение стеариновой кислоты. Интересно отметить , что стеариновая кислота (С18: 1D9 транс) был преобразован OLET JE, но с немного более низкой активностью затем стеариновой кислоты.
Discussion
Свет управляемой генерации перекиси водорода может быть применен для целого ряда окислительно - восстановительных преобразований, в том числе peroxygenases 3, chloroperoxidases 10 и P450 Монооксигеназы 5. Это простой и практически подход. В долгосрочной перспективе, использование видимого света открывает перспективу, чтобы использовать солнечный свет для химических превращений, которая является устойчивой альтернативой для богатых энергией реакций.
Метод применим очищенным ферментом или с экстрактом бесклеточной. В то время как последний требует меньше затрат и работы, следует отметить, что малые молекулы, в неочищенном экстракте может помешать световом катализируемой конверсии. Стать реальный подход заключается в удалении этих мелких компонентов , с micromembrane (т.е., с помощью центрифугирования в центробежном блоке фильтров или с помощью диализа). Концентрация молекулы светособирающего ФМН определяет концентрацию перекиси водорода. В зависимости от AFFINIти оксидоредуктазы, эта концентрация имеет решающее значение для ферментативной активности. Еще одним важным фактором является концентрация жертвенного донора электронов ЭДТА. Наиболее важным параметром, однако, является операционная стабильность и активность фермента.
Olefinization жирных кислот является элегантный реакция для превращения биологической основе жирных кислот в олефины, которые принадлежат к основным товарам для химической промышленности. Свет приводом биокаталитическая декарбоксилирование можно проводить при комнатной температуре и при нейтральном значении рН, который предлагает явные преимущества с точки зрения устойчивости.
Наши результаты показывают , что на месте образование перекиси водорода представляет собой стратегию для питания кофактора без ухудшения стабильности фермента, что приводит к высокой конверсии. Современные методы регенерации кофактора используют сельскохозяйственные продукты или бензиновые на основе химических веществ. Легкие реакции, вызванные появляются как возобновляемые альтернативы. БудущееИсследование будет посвящено способам замещения жертвенного ЭДТА реагента дешевыми молекул и уменьшить количество молекул ФМН светособирающего.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Chemicals | |||
| Ampicillin | Sigma Aldrich | 69-52-3 | |
| Bradford reagent | Roth | K015.1 | |
| BSA | Sigma Aldrich | 90604-29-8 | |
| DMSO | Sigma Aldrich | 67-68-5 | |
| Ethyl acetate | Fisher Chemical | 141-78-6 | |
| Ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) | Roth | 8043.1 | |
| Riboflavin 5-monophosphate sodium salt hydrate | Sigma Aldrich | 130-40-5 | |
| Hydrochlorid acid 37% | Sigma Aldrich | 7647-01-0 | |
| Hydrogen peroxide 30% | Sigma Aldrich | 7722-84-1 | |
| δ-Amino levulinic acid | Sigma Aldrich | 5451-09-2 | |
| N-Methyl-N-(Trimethylsilyl)trifluoro acetamide (MSTFA) | Sigma Aldrich | 24589-78-4 | |
| Myristic acid >99% | Sigma Aldrich | 208-875-2 | |
| Imidazole | Sigma Aldrich | 288-32-4 | |
| Sodium chloride | Fisher Chemical | 7647-14-5 | |
| Stearic acid >99% | Sigma Aldrich | 57-11-4 | |
| Tetracycline | Sigma Aldrich | 60-54-8 | |
| Tergitol | Sigma Aldrich | MFCD01779855 | |
| Tris(hydroxymethyl)-aminomethan | Sigma Aldrich | 77-86-1 | |
| Device | |||
| Incubator shaker | G-25CK | New Brunswick Scientific | |
| Ecotron | Infors HT | ||
| Centrifugation | Labofuge 400R | Heraeus | |
| RC 5B Plus | Sorvall | ||
| Fresco 17 | Thermo Scientific | ||
| Centrifugation rotors | SS34 | Sorvall | |
| SLA | Sorvall | ||
| Clean bench | Envirco | Ceag Schirp Reinraum technik | |
| Column GC-FID | CP-Sil 5CB (30 m x 0.25 mm x 0.25 µm) | Agilent Technologies | |
| Column GC-MS | FactorFour Capillary Coloumn (VF-5 ms + 5 m EZ Guard) | Varian | |
| GC-FID | GC-2010 plus | Shimadzu | |
| GC-MS | IST-40 | Varian | |
| Magnetic stirrer | RCT classic | IKA | |
| pH meter | SevenEasy | Mettler toledo | |
| Sonicator | Branson Sonifier 250 | Branson | |
| Spectral photometer | FLUOstar Omega | BMG Labtech | |
| Equipment | |||
| Affinity chromatography column | His Pur Ni-NTA spin column | Thermo Scientific | |
| Centricon | Vivaspin turbo 15 | VWR International | |
| Microtiter plates | 96 Well Multiply®PCR Plates | Sarstedt |
References
- Kourist, R., Domìnguez de Marìa, P., Miyamoto, K. Biocatalytic strategies for the asymmetric synthesis of profens - recent trends and developments. Green Chem. , 2607-2618 (2011).
- Holtmann, D., Fraaije, M. W., Arends, I. W., Opperman, D. J., Hollmann, F. The taming of oxygen: biocatalytic oxyfunctionalisations. Chemical Comm. 50, 13180-13200 (2014).
- Churakova, E., et al. Specific photobiocatalytic oxyfunctionalization reactions. Ang. Chem. In. Ed. 123, 10904-10907 (2011).
- Hollmann, F., Arends, I., Buehler, K. Biocatalytic Redox Reactions for Organic Synthesis: Nonconventional Regeneration Methods. ChemCatChem. 2, 762-782 (2010).
- Girhard, M., Kunigk, E., Tihovsky, S., Shumyantseva, V. V., Urlacher, V. B. Light-driven biocatalysis with cytochrome P450 peroxygenases. Biotechnol. Appl. Biochem. 60, 111-118 (2013).
- Bartsch, M., et al. Photosynthetic production of enantioselective biocatalysts. Microb. Cell. Fact. 14, 53 (2015).
- Rude, M. A., et al. Terminal olefin (1-alkene) biosynthesis by a novel P450 fatty acid decarboxylase from Jeotgalicoccus species. Appl. Environ. Microbiol. 77, 1718-1727 (2011).
- Zachos, I., et al. Photobiocatalytic decarboxylation for olefin synthesis. Chem. Comm. 51, 1918-1921 (2015).
- Liu, Y., et al. Hydrogen peroxide-independent production of α-alkenes by OleTJE P450 fatty acid decarboxylase. Biotechnol. Biofuels. 7, 28 (2014).
- Perez, D. I., Grau, M. M., Arends, I. W., Hollmann, F. Visible light-driven and chloroperoxidase-catalyzed oxygenation reactions. Chem. Comm. 40 (44), 6848-6850 (2009).
