Summary
Denne nye modell for ortotopisk bakben transplantasjon i mus, anvende en ikke-sutur mansjett teknikk for super-mikrovaskulær anastomose, gir et kraftig verktøy for in vivo mekanistisk immunologisk forskning relatert til vaskularisert kompositt allotransplantasjon (VCA).
Protocol
Alle forsøkene ble utført i samsvar med Guide for omsorg og bruk av forsøksdyr i National Institute of Health (NIH), og ble godkjent av Johns Hopkins University Animal Care og bruk Committee (JHUACUC). De spesifikke prosedyrer ble utført under godkjente ACUC protokollen MO13M108.
1. Donor Drift
- Administrere analgesi på riktig tidspunkt for hver farmakologisk formulering før operasjonen. Per godkjent dyr omsorg og bruk protokoll bruk 0,1 mg / kg kroppsvekt av buprenorfin subkutant en time før huden snitt.
- Sedate donor med isofluran tilført gjennom et kammer festet til en isofluran fordamper ved 4%; opprettholde sedasjon og bedøvelse med 2% gjennom en nesekonus. Utføre tå klype uttak refleksjon for å overvåke anestesidybden før initiering av prosedyren.
- Bærer masker, engangs isolasjon kjoler og hansker.
- Barbere kirurgisk area, spesielt bakben og lyske, og prep med 10% povidon - jod.
- Bruk et sterilt felt drapere, autoklaveres instrumenter og en høy forstørrelse mikroskop (40X).
- Gjør lyske hud snitt med saks proksimalt til midten av låret området og perifert koble snittet for å avgrense den hind lem fra resten av musen kroppen.
- Identifisere og dissekere lårarterie, vene og nerve. Separer alle tre strukturer ved hjelp av tang og mikro-saks.
- Når den vaskulære pedicle dissekeres dele fartøyene på nivået av lyskeligament ved hjelp av mikro saks.
- Deretter fortsetter å dele de enkelte ventrale (gracilis og mediale lårmusklene) og ryggmuskelgrupper 20 proksimalt på nivå med midten av låret å skille transplantatet fra donor dyret ved hjelp av en saks.
- Transektet femur og kuttet på midten av femoral akselen med saks.
- Avlive dyr av isofluran overdose folfulgt av cervikal dislokasjon. Bekreft opphør av hjerteslag og åndedrett.
- Spyl lem med 2 ml hepariniserte (30 IE) kald (4 ° C) saltløsning ved anvendelse av en 33 G nål spyle montert på en sprøyte (se Materialer tabell).
- Plasser en polyimid mansjetten på femoralvenepunksjon og arterie, henholdsvis.
- Pakk pode inn i vått bomull gasbind, sted i petriskål og oppbevares ved 4 ° C inntil innfelt.
2. Mottaker Drift
- Fjerning av Hind Limb
- Administrere analgesi på riktig tidspunkt for hver farmakologisk formulering før operasjonen. Per godkjent dyr omsorg og bruk protokoll bruk 0,1 mg / kg kroppsvekt av buprenorfin SC 1 time før huden snitt.
- Sedate donor med isofluran tilført gjennom et kammer festet til en isofluran fordamper ved 4%; opprettholde sedasjon og bedøvelse med 2% gjennom en nesekonus. Utfør tå klype tilbaketrekking refleksjon å overvåke depth av anestesi før initiering av prosedyren.
- Bruk veterinær salve på øynene til musen for å hindre tørrhet mens under anestesi.
- Barbere kirurgiske området, spesielt bakben og lyske og prep med 10% povidon - jod.
- Gjør lyske hud snitt med saks proksimalt til midten av låret området og perifert koble snittet for å avgrense den hind lem fra resten av musen kroppen.
- Identifisere og dissekere lårarterie, vene og nerve og skille alle tre strukturer ved hjelp av tang og mikro-saks.
- Når den vaskulære pedicle dissekeres, klemme de femorale fartøyene på nivået av lyskeligament.
- Skjær fartøyene distal ved nivået for den overflate-epigastriske arterie.
- Deretter fortsetter å dele de enkelte ventrale (gracilis og mediale lårmusklene) og ryggmuskelgrupper 20 proksimalt på nivå med midten av låret for å separere det native hind limb fra mottaker dyr ved hjelp av saks.
- Skjære over femur i midten av den femorale aksel ved hjelp av en saks.
- Cauterize tidligere transected lårmusklene å hindre blødning av disseksjon nettstedet og dermed mottaker blodtap.
- implantasjon
- Minimalisere fluidtapet ved å skylle den operative feltet med varm saltoppløsning (37 ° C) og injisere 0,3 ml varmt saltvann før og etter operasjonen.
- Plasser pode på en måte som reflekterer den nøyaktige anatomisk posisjon av det native bakbenet ved å justere femur ben av mottakeren og pode og koble dem ved hjelp av en 20 G nål spinal som en intramedullær stang.
- Coapt ventrale og dorsale muskelgruppene ved hjelp av absorberbare sutur materiale (6-0 Polysorb).
- Koble femoral fartøy ved hjelp av ikke-sutur cuff teknikk; i detalj, trekker mottaker side av fartøyet i løpet av mansjetter som tidligere er montert på fartøyet ender av graft. Bruk en 10-0 Nylon sutur og utføre en periferi tie å fikse mottakeren fartøyet på mansjetten.
- Neste løsne klemmene. På dette stadiet visuelt bekrefte mansjett rotasjon og optimal posisjonering for å hindre feil-rotasjon og vridning av skipene.
- Utfør grundig hemostase ved hjelp av elektrokirurgi med særlig fokus på muskel mottakeren donor grensesnitt og bein ender.
- Lukk huden ved hjelp av ikke-absorberbare Nylon suturer (6-0 Ethilon).
- Etablere normotermisk betingelser ved at dyret å komme i sitt bur under en varmelampe. Fortsett regelmessig overvåking i minst fire timer før du returnerer den til boliger anlegget.
- Tilveiebringe postoperativ analgesi med buprenorfin i en dose på 0,1 mg / kg SC hver 6-8 time i 3 dager.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Utføre vaskualisert kompositt allotransplantasjon i en musemodell med et ikke-sutur cuff teknikken gjør det mulig å oppnå gode og langsiktige pode og dyr overlevelse som vist i figur 1. Dessuten er det representerer en pålitelig metode for å skaffe reproduserbare resultater av gradvis allotransplantatavvisning i vaskualisert kompositt allotransplantasjon som dokumentert av bildene som vises i figur 2. H & E histologi av vev hentet fra dyr som gjennomgår avslaget understreker reproduserbare dynamikken i allotransplantatavvisning i denne murine modell (figur 3) videre.
Figur 1. Allograft Overlevelse i et fullt H2-særpregede Mouse Strain Kombinasjon [Balb / c (H2K d) inn C57BL6 (H2K b)]. Mens alle syngene transplmaur (n = 10) ble akseptert lang sikt, ubehandlede allografts (n = 10) ble akutt avvist innenfor og gjennomsnitt på 8 - 9 dager. Skin avvisning grad 3 i henhold til Banff kriterier ble ansett fullstendig avvisning i denne studien. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 2. Kliniske Avslag Funksjoner og Dynamics av et fullt H2-særpregede [Balb / c (H2K d) inn C57BL6 (H2K b)] Murine ortotopiske Hind Limb Transplant. (A) Klinisk Grade 0, (B) Klinisk Grade 1, ( C) klinisk Grad 2, (D) klinisk grad 3, og (E) klinisk grad 4 avvisning, (F) langsiktige overlevende allograft (POD 100) behandlet med en costimulasjon blokade (antiCD40 mAb + CTLA4Ig) basert regime. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 3. H & E Farging av hud og muskel i en syngene Transplant (A) og Allogen Transplant (B) på POD 8 samt H & E Farging av fotbladet hud og muskel i en syngene Transplant (C) og Allogen Transplant på POD 8 (D ) (Skala:. 0,1 mikrometer) klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Vaskularisert Composite allotransplantasjon, slik som overekstremitetene og ansiktet transplantasjon for rekonstruksjon av ødeleggende vev defekter, har utviklet seg som et gyldig behandlingsalternativ for pasienter som ikke amendable til konvensjonelle rekonstruktive prosedyrer. Tekniske fremskritt innen rekonstruktiv mikrokirurgi, samt en enorm erfaring med potente immunsuppressive og immunmodulerende behandling i organtransplantasjon, gjør nå at langsiktig allograft overlevelse i dette unike pasientpopulasjonen 3,21. Men betydelige bivirkninger av langvarig immunsuppresjon som kreves for allograft vedlikehold og overlevelse fortsatt begrense bredere anvendelse av disse livsbejaende, men ikke rednings rekonstruktiv modaliteter 3,22,23. Videre suksess for VCAs i motsetning til faste organtransplantater er også avhengig av tidsriktig regenerering av mottaker nerver inn i allograft å re-innerverer begge muskler for motorisk funksjon, samtsensoriske komponenter for berøring og temperatur følelse å gjenvinne funksjon. Fra en immunologisk perspektiv, som i alle transplantasjonsmedisin, det overordnede målet i rekonstruktiv transplantasjon er å oppnå en tilstand av operasjonell toleranse åpner for aksept av en allograft uten behov for langsiktig vedlikehold immunsuppresjon 23. I denne forbindelse har mus utviklet seg til å representere den viktigste in vivo-modellsystemet i transplantasjon immunologi forskning for å undersøke måter for å oppnå alloantigen spesifikk toleranse i et intakt immunsystem. Videre mus H2-komplekset er svært lik den humane MHC-komplekset. Dermed innavlede og genotypet musestammer tillate å modellere kliniske scenarier av relaterte og ikke-relaterte levende og avdød donor innstillinger ved hjelp av ulike grader av alloantigen mismatching fra en syngene til et fullt allogen belastning kombinasjon. Tilgjengeligheten av transgene dyr og spesifikke knockout dyr i tillegg alleOWS etterforskning av rollene og effekter av individuelle molekylære stier og reguleringsmekanismer på immun aksept og avvisning ved å gi mulighet for selektiv aktivering eller nedbryting av celle eller proteinkomponenter. Dette Parallelt med en bred tilgjengelighet av diagnostiske og terapeutiske midler (f.eks., Antistoffer) unikt utviklet for musen system for in vitro og in vivo studier 24. Samlet disse aspektene gjør muse-system "gullstandarden" for grunnleggende transplantasjon immunologi forskning.
Selv om det har vært ulike små 13,16,18,20,25,26 og store dyre 14,27-29 modellene som er beskrevet for VCA som nylig gjennomgått av Brandacher et al. 30 bare svært få er faktisk aktuelt for grunnleggende mekanistisk immunologisk forskning 16 , 24,30. På grunn av den lille kar diameteren på mus femoral arterie og vene, krever avansert kirurgisk og super-microsurgical opplæring og kompetanse til å utføre vellykket anastomose som en nøkkelkomponent for orthotopic bakben transplantasjon. Mens grundig og forsiktig disseksjon av de anatomiske strukturene er like kritisk relevant i denne modellen som i tidligere publiserte modeller 20,31,32, har mansjetten teknikk vist en mindre bratt læringskurve i forhold til sutur anastomose av sub-millimeter fartøy 16,25 og kan oppnås i et par måneder trening med strenge daglige praksis. Basert på vår erfaring, vil en utrent microsurgeon trenger 30 -50 elle forsøk på å skaffe tilstrekkelige og pålitelige ferdigheter til å utføre denne modellen med høy suksessrate. For den erfarne og høyt utdannet microsurgeon 15 - 30 forsøk skulle være tilstrekkelig for å mestre denne mansjett-baserte mus bakben transplantasjon model.The redusert kompleksitet av prosedyren presentert her er videre reflektert av det faktum at denne tilnærmingen krever begrensede kar lengde og således disseksjon. Vi fant ta than donor fartøyer på inguinale ligament og mottakerfartøy i nivå med de overflate-epigastriske fartøyene gir tilstrekkelig lengde, til tross for den vanlige oppfatningen at mansjetten teknikken krever omfattende tilleggslengde for å være anvendelig. For eksempel, beskriver en tidligere publisert metode nødvendigheten av å høste giver fartøy på nivå med den ytre iliac fartøy og mottakerfartøy på nivået av popliteal fartøyene 32. Videre, med mansjetten teknikk, utføring av anastomosen krever mindre tid sammenliknet med sutur teknikk og fører til en generell redusert driftstid. I erfarne hender, kan både giver- og mottaker prosedyrer være ferdig i et gjennomsnitt på 90 min. Dette er en betydelig forbedring sammenlignet med tidligere rapporterte metoder som utvidet varighet av anestesi mottaker var en viktig faktor for suksess og perioperativ overlevelse; gjør nødvendigheten av en to-kirurg nærme seg en forutsetning 31-33.Videre er minimal til ingen blødning fra anastomose ytterligere bidrar til betydelig redusert blodtap og derved reduserer behovet for fluid gjenoppliving av mottakerne, slik som tidligere beskrevet som en determinant for suksess i denne modellen 33. Endelig representerer mansjetten teknikken en metode med en vesentlig kostnadsfordel i forhold til de høye kostnadene ved 11-0 mikro-suturmateriale. Således representerer den ikke-sutur mansjett teknikk den mest kritiske trinn i den underliggende protokollen. I en elegant studie av Tung et al., Diverse forskjellig myo- og osteomyocutaneous flaps, inkludert en vaskularisert lyske hud klaff har blitt beskrevet basert off av musen femoral fartøy pedicle 32. Mens metoden presenteres her fokuserer utelukkende på transplantasjon av hele mus hind lem, kan de presenterte prinsippene lett oversettes og brukes i ulike andre anatomiske klaff design. Bemerkelsesverdig er det faktum at mens tidligere forfattere angir automutilationeller autofagi av pode som en betydelig komplikasjon ved postoperativ overlevelse 31,32 dette har ikke blitt observert i vår erfaring. I tillegg rask gjenoppretting og begrenset svekkelse av dyrets evne til fôring og stell understreker at orthotopic innfelt av transplantert ben påfører bare minimal mottaker sykelighet.
Modellen som er beskrevet i denne publikasjonen video innfører i tillegg forskjellige fordeler til musen innstilling i forhold til tidligere publiserte teknikker. Først og fremst, som tidligere er rapportert av vår gruppe 16, mansjetten teknikken kan anvendes i fartøy med en lumen diameter som er mindre enn en millimeter, slik at for ortotopisk transplantasjon av en baklabb allograft. Denne tilnærmingen gir grunnlag for å bruke denne modellen kombinert i både immunologiske samt funksjonelle studier av nerve regenerering relatert til VCA 16,25. Nerve regenerering er av sentral betydning for field rekonstruktiv transplantasjon, da disse er ikke-livreddende prosedyrer hvis suksess er først og fremst bestemt av restaurering av funksjonelle og estetiske defekter.
Den heterotop innfelt i en osteomyocutaneous klaff som stammer fra bakbenet er en ekstra modell tilgjengelig for kirurgen 15. I denne tilnærmingen er imidlertid kirurgisk fjerning av strukturer av potensiell interesse, slik som spiker og snau huden av fotbladet, begrenser allsidigheten av denne metoden i forhold til ortotopisk transplantasjon av en anatomisk uendret baklabb allograft. Dette er av spesiell interesse i rekonstruktiv transplantasjon som disse strukturer har blitt beskrevet som mål for atypiske avstøtingsprosesser hos pasienter påføre mekanisk stress til deres hånd allografter 34. Naturlig unikt for en vaskularisert sammensatt vev allograft er bein komponent, som vascularized bein inneholder levedyktig benmarg og er en constantly fornye kilden av komponenter og forløpere for donorimmunsystemet. Mens dette ble forsiktig betraktet som en mulig kilde for transplantat-mot-vert-sykdom (GvHD), har dette ikke vært observert både i dyremodeller 35,36 så vel som mennesker 37. Mye til den motsatte faktisk, som vist i prekliniske og kliniske studier 36 38-40, kombinasjonen av organtransplantasjon med donor benmargstransplantasjon eller transfusjon av valgte benmarg-avledede celleprodukter faktisk viser fordelaktige effekter med hensyn til mengden av immunsuppresjon som trengs 21 ; noen protokoller har også vist operative toleranse uten behov for narkotika-immunsuppresjon 41.
Modellen og metoden vist av denne publikasjonen ga 100% langtids dyr overlevelse i syngene giver - mottaker kombinasjoner (figur 1), så vel som demonstrert et godt karakteriserte mønstre av pode Acceptance og avvisning i allogene strekk kombinasjonene som er beskrevet i figurene 2 og 3. Dessuten, på huden som en synlig primært mål for avvisning i VCA, følger et reproduserbart mønster av 4 forskjellige kliniske situasjoner med avvisning å korrelere med de for human VCA som beskrevet av Banff 2007 arbeids klassifisering av hud inneholder VCA 42, noe som gjør denne modellen spesielt oversett. Således er dette meget pålitelig musemodell for rekonstruktiv transplantasjon fremfor alt, introduserer tilgjengeligheten av et allsidig immunologisk modellsystem av genetisk definerte innavlede og transgene musestammer som åpner mulighetene for diagnostiske og intervensjonsstudier med translasjonell innvirkning på klinisk VCA.
Behovet for grunnleggende mikroferdigheter før du tar fatt på å mestre den beskrevne teknikken kan betraktes som en begrensning for denne modellen, men det er det samme største hinderet for en hvilken som helst mus mikro modell. tos, denne videoen protokollen er først og fremst ment å gi den erfarne microsurgeon med en alternativ tilnærming til mikrovaskulær anastomose i en murine in vivo modell for vaskualisert kompositt allotransplantasjon. Videre gir modellen for transplantasjon av en intakt vaskulariserte benmarg komponent, så vel som anvendelse av en funksjonell modell i nerveregenerering forskning.
I konklusjonen, etablerte vi en ny, allsidig og pålitelig musemodell for orthotopic bakben transplantasjon ved hjelp av en ikke-sutur cuff teknikk som åpner døren til grunnleggende mekanistisk, samt translasjonsforskning knyttet til noen aspekter av VCA.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Acknowledgments
Dette arbeidet ble støttet av hæren, marinen, NIH, Air Force, VA og helsedirektoratet for å støtte AFIRM II innsats under Award No. W81XWH-13-2-0053. US Army Medical Research oppkjøpsaktivitet, 820 Chandler Street, Fort Detrick MD 21702-5014 er tildeling og administrasjon av oppkjøpet kontor. Meninger, tolkninger, konklusjoner og anbefalinger er de av forfatteren og ikke nødvendigvis godkjent av det amerikanske forsvarsdepartementet.
Forfatterne ønsker å takke Jessica Izzi, DVM, Caroline Garrett, DVM og Julie Watson, DVM for deres utmerkede veterinær støtte i denne studien.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Suture, 6-0 Nylon | MWI | 31849 | |
| Suture, 6-0 Polysorb | MWI | 72667 | |
| Suture, 10-0 Nylon | Aero Surgical | TK-107038 | |
| Polyimide Tubing, Size 25 | Vention Medical | 141-0023 | |
| Polyimide Tubing, Size 27 | Vention Medical | 141-0015 | |
| Microvascular Clamps (Single) | Synovis | 00396 | |
| Microvascular Clamps (Double) | Synovis | 00414 | |
| Micro-Scissors | Synovis | SAS-18 | |
| Micro-Forceps | Synovis | FRS-15 RM-8 | |
| Micro-Dilators | Synovis | FRS-15 RM-8d.1 | |
| Micro-Needledriver | Synovis | C-14 | |
| Micro-Clamp Applicator | Synovis | CAF-4 | |
| Micro-Flushing Needle | Hamilton | 10MM, 30°, 33G | |
| Lactated Ringers Solution | Fisher Scientific | NC9968051 | |
| Buprenorphine | DEA Number required; Obtained from hosptial pharmacy. | ||
| Enrofloxacin; Baytril | Bayer Health Care | 186599 | |
| Heparin | Obtained from hosptial pharmacy |
References
- Khalifian, S., et al. Facial transplantation: the first 9 years. Lancet. , (2014).
- Petruzzo, P., Dubernard, J. M. The International Registry on Hand and Composite Tissue allotransplantation. Clin. Transpl. , 247-253 (2011).
- Shores, J. T., Brandacher, G., Lee, W. A. Hand and Upper Extremity Transplantation: An Update of Outcomes in the Worldwide Experience. Plast. Reconstr. Surg. , (2014).
- Levi, D. M., et al. Transplantation of the abdominal wall. Lancet. 361, 2173-2176 (2003).
- Strome, M., et al. Laryngeal transplantation and 40-month follow-up. N.Engl.J. Med. 344, 1676-1679 (2001).
- Rose, K. G., Sesterhenn, K., Wustrow, F. Tracheal allotransplantation in man. Lancet. 1, 433 (1979).
- Hofmann, G. O., et al. Allogeneic vascularized transplantation of human femoral diaphyses and total knee joints--first clinical experiences. Transplant. Proc. 30, 2754-2761 (1998).
- Hu, W., et al. A preliminary report of penile transplantation. Eur. Urol. 50, 851-853 (2006).
- Brannstrom, M., et al. Livebirth after uterus transplantation. Lancet. , (2014).
- Sarhane, K. A., et al. Diagnosing skin rejection in vascularized composite allotransplantation: advances and challenges. Clin. Transplant. 28, 277-285 (2014).
- Schneeberger, S., Khalifian, S., Brandacher, G. Immunosuppression and monitoring of rejection in hand transplantation. Tech. Hand Up. Extrem. Surg. 17, 208-214 (2013).
- Lee, W. P., et al. Relative antigenicity of components of a vascularized limb allograft. Plast. Reconstr. Surg. 87, 401-411 (1991).
- Sucher, R., et al. Hemiface allotransplantation in the mouse. Plast. Reconstr. Surg. 129, 867-870 (2012).
- Ibrahim, Z., et al. A modified heterotopic swine hind limb transplant model for translational vascularized composite allotransplantation (VCA) research. J Vis Exp. , (2013).
- Oberhuber, R., et al. Murine cervical heart transplantation model using a modified cuff technique. J Vis Exp. , (2014).
- Sucher, R., et al. Mouse hind limb transplantation: a new composite tissue allotransplantation model using nonsuture supermicrosurgery. Transplantation. 90, 1374-1380 (2010).
- Maglione, M., et al. A novel technique for heterotopic vascularized pancreas transplantation in mice to assess ischemia reperfusion injury and graft pancreatitis. Surgery. 141, 682-689 (2007).
- Sucher, R., et al. Orthotopic hind-limb transplantation in rats. J Vis Exp. , (2010).
- Zou, Y., Brandacher, G., Margreiter, R., Steurer, W. Cervical heterotopic arterialized liver transplantation in the mouse. J. Surg. Res. 93, 97-100 (2000).
- Zhang, F., et al. Development of a mouse limb transplantation model. Microsurgery. 19, 209-213 (1999).
- Schneeberger, S., et al. Upper-extremity transplantation using a cell-based protocol to minimize immunosuppression. Ann. Surg. 257, 345-351 (2013).
- Azari, K., Brandacher, G. Vascularized composite allotransplantation. Curr Opin Organ Transplant. 18, 631-632 (2013).
- Pomahac, B., Gobble, R. M., Schneeberger, S. Facial and hand allotransplantation. Cold Spring Harb. Perspect. Med. 4, (2014).
- Chong, A. S., Alegre, M. L., Miller, M. L., Fairchild, R. L. Lessons and limits of mouse models. Cold Spring Harb. Perspect. Med. 3, a015495 (2013).
- Lin, C. H., et al. The neck as a preferred recipient site for vascularized composite allotransplantation in the mouse. Plast. Reconstr. Surg. 133, 133e-141e (2014).
- Shapiro, R. I., Cerra, F. B. A model for reimplantation and transplantation of a complex organ: the rat hind limb. J. Surg. Res. 24, 501-506 (1978).
- Leto Barone, A. A., et al. The gracilis myocutaneous free flap in swine: an advantageous preclinical model for vascularized composite allograft transplantation research. Microsurgery. 33, 51-55 (2013).
- Mathes, D. W., et al. A preclinical canine model for composite tissue transplantation. J. Reconstr. Microsurg. 26, 201-207 (2010).
- Barth, R. N., et al. Prolonged survival of composite facial allografts in non-human primates associated with posttransplant lymphoproliferative disorder. Transplantation. 88, 1242-1250 (2009).
- Brandacher, G., Grahammer, J., Sucher, R., Lee, W. P. Animal models for basic and translational research in reconstructive transplantation. Birth Defects Res C Embryo Today. 96, 39-50 (2012).
- Foster, R. D., Liu, T. Orthotopic hindlimb transplantation in the mouse. J. Reconstr. Microsurg. 19, 49 (2002).
- Tung, T. H., Mohanakumar, T., Mackinnon, S. E. Development of a Mouse Model for Heterotopic Limb and Composite-Tissue Transplantation. J. Reconstr. Microsurg. 17, 267-274 (2001).
- Zhang, F., Shi, D. Y., Kryger, Z., Moon, W. Development of a mouse limb transplantation model. Microsurgery. 19 (5), 209-213 (1999).
- Schneeberger, S., et al. Atypical acute rejection after hand transplantation. Am. J. Transplant. 8, 688-696 (2008).
- Mathes, D. W., et al. Stable mixed hematopoietic chimerism permits tolerance of vascularized composite allografts across a full major histocompatibility mismatch in swine. Transpl. Int. 27, 1086-1096 (2014).
- Yamada, Y., et al. Use of CTLA4Ig for induction of mixed chimerism and renal allograft tolerance in nonhuman primates. Am. J. Transplant. 14, 2704-2712 (2014).
- Sachs, D. H., Kawai, T., Sykes, M. Induction of tolerance through mixed chimerism. Cold Spring Harb. Perspect. Med. 4, a015529 (2014).
- Kawai, T., et al. HLA-mismatched renal transplantation without maintenance immunosuppression. N. Engl. J. Med. 358, 353-361 (2008).
- Kawai, T., Sachs, D. H. Tolerance induction: hematopoietic chimerism. Curr Opin Organ Transplant. 18, 402-407 (2013).
- Kawai, T., Sachs, D. H., Sykes, M., Cosimi, A. .B. HLA-mismatched renal transplantation without maintenance immunosuppression. N. Engl. J. Med. 368, 1850-1852 (2013).
- Leventhal, J., et al. Chimerism and tolerance without GVHD or engraftment syndrome in HLA-mismatched combined kidney and hematopoietic stem cell transplantation. Sci. Transl. Med. 4, 124-128 (2012).
- Cendales, L. C., et al. The Banff 2007 working classification of skin-containing composite tissue allograft pathology. Am. J. Transplant. 8, 1396-1400 (2008).
