Introduction
Utbyte av näringsämnen, gaser och avfallsprodukter under eutherian dräktighet medieras av placenta. I de kvinnliga reproduktionsorganen, livmodern artärerna är de viktigaste ledningarna i blod till livmodern. Efter implantation, dessa filial till specialiserade fartyg kallas spiral artärer som spolen genom decidua basalis mot fetoplacental enheten. Diameter och elasticiteten hos dessa spiral artärer, som är omgivna av leukocyter, i synnerhet livmoder naturliga mördar (UNK) -celler, diktera volym och hastigheten hos blod som finns tillgänglig för placenta 1,2. Rätt hemodynamiska förändringar till följd av ombyggnad av spiral artärerna är avgörande för graviditet framgång.
Även om de bakomliggande mekanismerna skiljer sig i detalj mellan människa och mus graviditet, är det slutliga resultatet av ombyggnad processen i båda arterna dilaterad, hög ledningsförmåga kärl som förlorar sin släta muskelskiktet. Hos möss, UNK-cellerna interferon (IFN-) γ är nödvändig för att framkalla dessa förändringar på omkring mitten av dräktigheten 3-5. Möss som saknar antingen NK-celler eller komponenter i IFN-γ signalväg inte genomgå dessa förändringar och det är förenat med minskad fostertillväxt 6,7, betonar vikten av en tillräcklig blodtillförsel till fetoplacental enheten. Under tidig graviditet, den interstitial och endovaskulär invasion av extravillous trofoblast och deras samverkan med Unk celler är viktiga för att inducera kärlförändringar och främja fostertillväxt 8-10. UNK celler kan iscensätta humana trofoblast invasion genom kemokiner 11 och cytokiner såsom granulocyt makrofag - kolonistimulerande faktor (GM-CSF) 12. Grunt trofoblast invasion är förknippad med minskad arteriell remodeling och graviditetskomplikationer såsom havandeskapsförgiftning 9.
Detta protokoll är baserad på pionjärarbete av Anne Croy som beskrev den viktigaroll i immunsystemet och i synnerhet NK-härledd IFN-γ för framgångsrik kärlremodellering genom immunohistokemi och elegant överföringsexperiment 5,13. Här beskriver vi ett snabbt och ekonomiskt sätt för att bedöma ombyggnad status spiralartärer. Även om vårt labb bedömer rutinmässigt detta i mitten av dräktigheten (dräktighetsdagen (gd) 9,5) 14, tar remodelleringsprocessen mellan gd8.5 och 12,5 15. Tillkomsten av automatiserade glida skannrar har i hög grad underlättat bedömningen av fartyg och lumenområden från avsnitt och vi fann att det är en mer reproducerbar metod än att mäta kärldiameter. Tillsatsen av immunhistokemisk detektion av SMA möjliggör en enkel validering av de resultat som erhållits från stereologisk bedömning. Som med alla stereologisk teknik, är det rekommenderat att utföra bedömningen som förblindad experiment med minst två granskare. För detta ändamål kan ett slumpsteg införas när serie klippating proven så att utredarna bedömer bilderna inte vet varifrån experimentgruppen proverna kommer.
Det övergripande målet med detta protokoll är att tillhandahålla ett pålitligt verktyg för att noggrant bedöma ombyggnad av spiralartärer hos möss med definierade moderns och faderns genotyper, i samband med musmodeller för graviditetsrelaterade komplikationer. Resultaten understryker beroendet UNK celler av denna process, som är nödvändigt för normal fostertillväxt.
Protocol
Alla förfaranden som diskuteras i detta manuskript är förenliga med brittiska hemmakontoret regler och är godkända av Cambridge etikprövningsPanelen.
1. Provtagning
- Ställ in tids parningar med hjälp av 8-12 veckor gamla C57BL / 6-möss med vuxna män (upp till 2 honor per hane) på eftermiddagen. Kontrollera om förekomsten av vaginala pluggar som ett tecken på parning tidigt på morgonen på de följande dagarna. Närvaron av en plugg i morgon varumärkena gd0.5.
- På gd9.5, euthanize djuret genom cervikal dislokation och öppna bukhålan. Observera att dödshjälp av CO 2 kan orsaka vasodilatation.
- Använd tandtråd för att försiktigt ligera livmoderartärerna (Figur 1, streckade pilar). Bind tandtråd runt artärerna vid spetsen av varje livmoderhornet, proximalt till äggstockarna, liksom runt livmoderhalsen.
Obs! Ta inte brista fartygen eftersom det kan leda till kollapsade artärer. <li> Dissekera livmodern snabbt med dissektion sax, excising hela livmodern distalt till de tre ligationspunkterna vid spetsen av livmoderhornen och livmoderhalsen. - Placera livmodern på ett förberett polystyren bit så att båda hornen är inriktade längs samma längdaxel i motsatta riktningar från livmoderhalsen. Sträcka ut den försiktigt och stift på plats med 2-3 25 G nålar.
- Sänk ned polystyren i en förberedd 50 ml koniska rör. Fyll på till 50 ml med 10% formalin. Fix för 5-6 h vid rumstemperatur.
- Kassera formalinlösning och ersätt med 50 ml 1x fosfatbuffrad saltlösning (PBS) under 5 minuter.
- Excidera de båda livmoderhornen proximalt till ligeringen punkt vid varje ände och proximalt till livmoderhalsen i centrum, trimma bort överflödigt fett runt implantationsställen och tvätta två gånger i PBS under 5 min för att avlägsna spår av formalin.
- Förvara proven i 70% etanol vid 4 ° C (för upp till två veckor) tills bearbetningen.
VARNING: Ethanol är mycket brandfarligt. - Använda ett automatiserat behandlingssystem med användning av parametrarna som anges i tabell 1. Bädda hornen individuellt i paraffin, så att de kan skäras längs planet vinkelrätt mot den långa axeln av livmodern. Detta säkerställer att den maximala arean av varje implanteringsstället kommer att exponeras för analys i mitten av blocket (Figur 2A).
VALFRITT: Detta är en lämplig tid poäng för randomisering av blocken, om så önskas. - Med hjälp av en mikrotom, skär seriesektioner av 7 pm tjocklek från blocken. Färga en del vid varje 49 um intervall med hematoxylin och eosin (H & E, se avsnitt 2.1). Förvara de återstående avsnitten vid rumstemperatur under SMA färgning och andra tillämpningar nedströms.
| Lösning | Tid | Temperatur |
| 70% Etanol | 1 tim | 40 ° C |
| 100% etanol | 1 tim | 40 ° C |
| 100% etanol | 1 tim | 40 ° C |
| 100% etanol | 1 tim | 40 ° C |
| 100% etanol | 1 tim | 40 ° C |
| 100% etanol | 1 tim | 40 ° C |
| 100% etanol | 1 tim | 40 ° C |
| 1 tim | 40 ° C | |
| Xylen | 1 tim | 40 ° C |
| Xylen | 1 tim | 40 ° C |
| Paraffin | 1 tim | 63 ° C |
| Paraffin | 1 tim | 63 ° C |
| Paraffin | 1 tim | 63 ° C |
| Paraffin | 1 tim | 63 ° C |
Tabell 1:. Inställningar för automatiserad vävnadsbearbetning Översikt av den inställning som används för bearbetning av uterinvävnad
2. Stereological Bedömning
- H & E-färgning
- Avparaffinera sektioner genom nedsänkning glider monterade i en slid ställ i en 100% xylen bad under 10 min vid rumstemperatur.
VARNING: Xylen är brandfarligt och en misstänkt cancerframkallande som är giftigt genom kontakt och inandning. Detta arbete måste utföras i ett dragskåp, användning av personlig skyddsutrustning (PPE). - Doppa objektglasen i badet som innehåller ren xylen under ytterligare 10 min.
- Sekventiellt fördjupa glasen i bad innehållande 100% etanol, 95% etanol, 70% etanol och renat vatten för 5 min vardera.
- Sänk ned objektglasen i 50% Gill nr 3 hematoxylin-lösning, späddes med renat vatten, under 5 min.
VARNING: Hematoxylin är skadligt vid förtäring och kontakt med ögonen. Bära lämplig skyddsutrustning vid hantering. - Tvätta objektglasen i en färgningstråg under rinnande kranvatten under 10 minuter.
- Doppa objektglasen i en% syra / alkohol-lösning (1% 10 M saltsyra i 70% etanol) under 10 sekoch tvätta i en färgningstråg under rinnande kranvatten.
- Doppa objektglasen i eosin-lösning för 30 sek och tvätta i en färgningstråg under rinnande kranvatten under 10 minuter.
- Inom ett dragskåp, sekventiellt fördjupa glasen i bad innehållande 70% etanol, 95% etanol och 100% etanol under 5 min vardera.
- Doppa objektglasen i bad innehållande xylen under 10 minuter.
- Mount täck använder en xylen baserat monteringsmedel. Torka horisontellt och grundligt i ett dragskåp innan visualisera bilderna under ett mikroskop.
- Avparaffinera sektioner genom nedsänkning glider monterade i en slid ställ i en 100% xylen bad under 10 min vid rumstemperatur.
- Stereologisk Bedömning av fartygets storlek och Remodeling Status
- För varje implanteringsstället, avgöra vilka sektioner är nära den midsagittal punkten. Den chorioallantoic infästning mellan fostret och utveckla moderkakan fungerar som en bra indikator på midsagittal punkten.
- Välj 3 sektioner på 49 um intervall nära midsagittal poäng för analysen. Skanna valda bilder. För att undvika incLuding vener, vilka har visat sig vara mer perifert belägna i implantationsställen 16, begränsa analysen på den centrala 2/4 av varje implanteringsstället (Figur 2A).
- För att bedöma lumen storlek, rita runt insidan av kärlen och registrera Området denna form. För den totala fartygsstorlek, dra runt yttervägg av fartyget, inklusive endotelceller, pericyter och intramural leukocyter.
Obs: Förhållandet mellan totala fartygsstorlek att lumen är ett mått på ombyggnad status av ett fartyg. Eftersom fartygen spolen genom planet som sektionen skars längs, kan det finnas flera tvärsnitt av samma artär i en bild. Undvik att mäta samma artär flera gånger. - Spela mätningarna från de 5 fartyg i varje implanteringsstället med de största och rund lumen. Mät varje implantationsstället i tre exemplar (tre sektioner åtskilda 49 | im från varandra). Medelvärdet av dessa 15 mätningar represeNTS medeldiametern av de största fartygen.
- För att undvika överrepresentation av större fartyg i vissa prov, mäta samma antal fartyg i varje implanteringsstället.
3. Kvalitativ Assessment Använda Immunhistokemi
- Avparaffinering och Rehydrering
- Avparaffinera sektioner genom nedsänkning glider monterade i en heatproof bild rack in i en 100% xylen bad under 10 min vid rumstemperatur.
- Doppa objektglasen i badet som innehåller ren xylen under ytterligare 10 min.
- Sekventiellt fördjupa glasen i bad innehållande 100% etanol, 95% etanol och 70% och renat vatten för 5 min vardera.
- Antigenåtervinning
- Bered en 10 mM natriumcitratbuffert i renat vatten och justera till pH 6 med användning av 10 M saltsyra.
- Fyll en heatproof behållare som rymmer 600 ml med 400 ml natriumcitratbuffert och placera i en inhemsk tryckkokare som innehåller tillräckligt watär att dränka halv av behållaren. Sätt fast locket på tryckkokaren och värm tills kokning.
- Placera bilden rack in i natriumcitratbuffert och tätt fixera locket på tryckkokaren. När tryck, låt koka i 3 minuter.
- Minska trycket i tryckkokaren och avlägsna den inre behållaren. Låt objektglasen svalna i natriumcitratbuffert för 10 min vid rumstemperatur.
- Tvätta objektglasen i ett bad innehållande renat vatten i 5 minuter.
- Omsluter sektionerna med hjälp av en hydrofob barriär penna.
- Tvätta objektglasen genom nedsänkning i PBS under 5 minuter.
- Blockering endogen peroxidasaktivitet och icke-specifika bindnings
- Inkubera sektioner med 3% väteperoxid utspätt i renat vatten i en fuktig kammare under 30 min vid rumstemperatur.
VARNING: Väteperoxid är mycket irriterande för ögon, hud och vid förtäring. Bär lämplig skyddsutrustning. - Slå bort överskott av väteperoxid lösning och tvätta slides två gånger genom nedsänkning i Tris-buffrad saltlösning (TBS) under 2 min vardera.
- Inkubera sektioner med musimmunglobulin blockeringsreagens från musen på mus sats framställd enligt tillverkarens instruktioner.
- Tvätta objektglasen två gånger i TBS under 2 minuter vardera.
- Inkubera sektioner med 3% väteperoxid utspätt i renat vatten i en fuktig kammare under 30 min vid rumstemperatur.
- Immun av glattmuskelaktin
- Bered antikroppsutspädningslösning (medföljer i satsen) och inkubera med sektioner under 5 min vid rumstemperatur, eller enligt tillverkarens instruktioner.
- Späd 1: 100 mus-anti-human-glattmuskelaktin (Dako M0851) i antikroppsutspädningslösning. Späd mus IgG2a isotyp kontroll av antikroppsutspädningslösning, se till att slut immunglobulinkoncentrationen är likvärdig i båda lösningarna.
- Slå bort överskottsantikroppsutspädningslösning och täckdelarna med antingen utspädda antikropps eller isotyp kontroll lösningar. Inkubera i en fuktig kammare under 30 min vid rumstemperatur.
- Tvätta objektglasen två gånger i TBS för2 min vardera.
- Späd biotinylerad anti-mus sekundär antikropp och inkubera avsnitt för 10 min vid rumstemperatur, eller i enlighet med tillverkarens instruktioner.
- Tvätta objektglasen en gång vardera med TBS och PBS under 2 minuter, respektive.
- Förbered 3,3'-Diaminobenzidine (DAB) lösning enligt tillverkarens instruktioner. Täck sektioner med DAB-lösning och inkubera under upp till fyra minuter, vilket säkerställer att övervaka sektioner för att undvika överskott av färgutveckling.
VARNING: DAB är brandfarligt och en misstänkt cancerframkallande som är giftigt genom kontakt och inandning. Bära lämplig skyddsutrustning vid hantering. - Doppa objektglasen i renat vatten när önskad intensitet färgning uppnås.
- Kontrast med 50% Gill nr 3 hematoxylin under 20 sekunder och tvätta i en färgningstråg under rinnande kranvatten tills vattnet är klart.
- Uttorkning och Montering
- Inom ett dragskåp, sekventiellt fördjupa glasen i bad innehållande 70% ethanol, 95% etanol och 100% etanol under 5 min vardera.
- Doppa objektglasen i bad innehållande xylen under 10 minuter.
- Mount täck använder en xylen baserat monteringsmedel. Torka horisontellt och grundligt i ett dragskåp före visualisera glasen under ett mikroskop
Representative Results
Rag2 - / - IL2rg - / - möss saknar alla mogna lymfocyter, inklusive NK-celler 17, och deras livmoder artärerna inte genomgå kärlförändringar ses i kongena vildtyp C57BL / 6 (WT) möss i mitten av dräktigheten 5,14. Som ett resultat av denna reducerade remodeling Rag2 - / - IL2rg - / - möss visar betydligt mindre luminala ytareor, som indikerar totala mindre fartyg, som kan visualiseras på H & E-färgade snitt och kvantifierade stereologically (Figur 2). Dessutom är den relativa väggtjockleken (fartyg till lumen-kvoten) högre i spiral artärerna i dessa möss, vilket tyder på minskad tillförsel av blod och högre blodhastighet.
Denna kvantitativ bedömning bekräftades med hjälp av immunhistokemisk detektion av SMA. Det är kännetecknande för WT möss för att förlora de flesta av SMA inom kärl mediaav spiralartärerna i mitten av dräktigheten. Om detta NK cell driven process inte sker förblir SMA i media av fartygen och kan lätt upptäckas immunohistokemiskt som ringar runt blodkärlen (Figur 3).
Figur 1: Mouse livmoder på gd9.5, schematisk översikt Ritning som visar de relativa lägena för livmoderhornen, livmoderhalsen (blå) och huvudlivmoderartärer (röd).. Indikerat är den långa axeln av livmoderhornen (pilar) och ligeringsprodukterna punkter (streckade pilar). Sektionerna för immunohistokemi skärs längs planet för vyn.
Figur 2:. Stereologisk bedömning av arteriell ombyggnad i mitten av dräktigheten (A) Exempel assessment av luminal och den totala fartygs områden på H & E färgade snitt från WT honor i centrala 2/4 av decidua basalis (avgränsade med vertikala svarta streckade linjer) vid gd9.5. I kärlen vid högre förstoring, streckad röd linje avgränsar total kärl-området, gul streckad linje avgränsar lumen område. Bar = 500 ^ m (till vänster), 50 pm (höger). Den långa axeln av livmodern är en horisontell linje i denna orientering. (B) Kvantifiering av luminala områden (till vänster) och förhållandet mellan luminal område till total fartyg område (högra panelen) från WT (C57BL / 6) och Rag2 - / - Il2rg - / - möss (på C57BL / 6 bakgrund). Varje datapunkt representerar medelvärdet av 15 mätningar (5 mätningar per sida, 3 sektioner per implanteringsställe). Barer representerar medelvärdet av n = 11-13 implantationsställen från 4 graviditeter per grupp; p-värde från en två-tailed, oparade Mann-Whitney test. WT: vildtyp.
Figur 3:. Immunohistokemisk detektion av aktin i glatt muskulatur i decidua basalis Representativa SMA färgning på WT (överst) och Rag2 - / - IL2rg - / - möss (på C57BL / 6 bakgrund, botten) vid gd9.5. Bar = 100 pm. WT: vildtyp.
Discussion
Protokollet som presenteras här är utformad för att åstadkomma en reproducerbar metod för att bedöma de vaskulära förändringar som är nödvändiga för en framgångsrik graviditet. Kritiskt för framgången av denna utvärdering är kvaliteten på vävnadssnitt. Både exakt bestämma graviditetslängd av implantationsställen liksom tillförlitligt ligering livmodern artärerna är avgörande steg. Förändringar i parametrar såsom tidpunkten för fixering, vävnadsbehandlingsprotokoll, etc, kan också påverka resultatet. För en opartisk stereologisk bedömning, är det viktigt att mäta samma antal fartyg i varje implanteringsstället. Det rekommenderas att mäta 5 fartyg per implanteringsstället och varje implanteringsstället i tre exemplar. Medelvärdet av dessa 15 mätningar representerar medelstorleken av de 5 största fartygen.
Med hänvisning till data från alymphoid Rag2 - / - IL2rg - / - möss som visas här, vi hittade denna protocol användbara för ett antal modeller av bristande moderns immunförsvar, inklusive en av hämmade NK-celler 14. Defekter i artär ombyggnad har också visats i modeller av nedsatt trofoblaster invasion 18 och de metoder som beskrivs här kan vara till hjälp för att bedöma kärl i dessa fall. Vi optimerade och validerat detta protokoll för utredning av decidual kärlremodellering i mitten av dräktigheten i mus, men det är också tänkbart att anpassa detta protokoll för att arbeta i andra modellsystem (t.ex. råttor) eller till och med i andra organ. Medan vi finner att NK-beroende ombyggnad kan kraftigt bedömas på gd9.5, kan det ändras till andra tidpunkter såsom gd12.5, när moderns kärl är helt ombyggd. Vid denna tidpunkt, är endovaskulär trofoblast invasion djupare 16 och denna tidpunkt kan vara mer lämpade för undersökningar av rollen som trofoblast för kärlförändringar. Om ytterligare kvantitativa avläsningar önskas,utredare kan också öka antalet sektioner färgade för SMA och bedöma andelen delvis ombyggda fartyg inom varje implanteringsstället.
En begränsning av detta protokoll är beskrivande karaktär histologiska undersökningar. Funktionella analyser, dock endast långsamt blir tillgängliga (t.ex. Doppler ultraljud 19). Dessa tekniker kräver teknisk expertis och mycket högre kostnader för att förvärva och underhåll av utrustning, men har fördelen att tillhandahålla en längsgående in vivo avläsning för effekten av de förändringar som kan observeras histologiskt. En möjlig nackdel med alla stereologisk undersökningar är subjektivitet utredarna. För detta ändamål kan med hjälp av två oberoende granskare som analyserar alla prover oberoende bidra till att undvika det här problemet. Medan det protokoll som beskrivs här ger insikt i hur mycket blod kan nå fetomaternal gränssnittet, kan det vara fördelaktigt att kombinera den med komplementary metod för att bedöma den totala mängden blod vid varje given tidpunkt i kärlsystemet genom plasten kastar 16.
Styrkan i detta protokoll är att den kombinerar två oberoende metoder. Kärl förändring först kvantitativt utvärderas av stereology och resultatet sedan valideras kvalitativt med hjälp av immunohistokemi. Tillförlitligheten av resultaten kan förstärkas ytterligare genom randomisering proven. Proven förberedda för detta protokoll kan enkelt användas för att även undersöka andra parametrar av graviditeten såsom decidualisation, utveckling av mesometrial lymfoid aggregat av graviditet (MLAp) eller immunodetektion av celler av intresse, att strikt utvärdera en graviditet fenotyp på midgestation.
Arteriell ombyggnad är ett kritiskt steg för okomplicerade graviditeter hos kvinnor och misslyckande av dessa förändringar ligger till grund för stora obstetrisk syndrom (GOS), nämligen havandeskapsförgiftning, fostertillväxt begränsning ochdödfödsel. Vi presenterar här tekniker för att noggrant bedöma en graviditet fenotyp i musmodeller som efterliknar vissa egenskaper hos patofysiologi GOS.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| C57BL/6 mice (8-12 weeks old) | Charles River | ||
| Dental floss | |||
| Polystyrene | Used for holding tissue in place | ||
| Straight dissection scissors | EMS | 72940 | |
| 25 G needles | BD | 300600 | Used for holding tissue in place |
| 50 ml conical tubes | Falcon | 352070 | |
| Formalin solution, neutral buffered, 10% | Sigma | HT501128-4L | |
| Phosphate buffered saline | Sigma | P3813-10PAK | |
| Ethanol | Sigma | 32221-2.5L | |
| Paraffin | Sigma | 327204-1KG | |
| Xylene | Fisher Scientific | X/0250/17 | |
| Automated tissue processor | Sakura | 6032 | |
| Microtome | Leica | RM2245 | |
| Slide rack | Sigma | Z710989 | |
| Coplin jar | Sigma | S5891 | |
| Purified water | |||
| Hematoxylin solution, Gill No. 3 | Sigma | GHS332-1L | |
| Eosin Y solution | Sigma | HT110116-500ML | |
| Fume hood | |||
| Xylene-based mounting media | VWR | 361254D | |
| Slide scanner | Hamamatsu | NanoZoomer | |
| Slide scanner software | Hamamatsu | NDP viewer | |
| Sodium citrate tribasic dihydrate | Sigma | 32320 | Make 10 mM solution and adjust pH to 6 |
| Pressure cooker | Used for antigen retrieval | ||
| Heating plate | Used for antigen retrieval | ||
| Hydrophobic barrier pen | Vector | H-4000 | |
| Hydrogen peroxide | Fisher Scientific | H/1800/15 | |
| Tris buffered saline | Sigma | T6664-10PAK | |
| Mouse on mouse kit | Vector | BMK-2202 | Significantly reduces background |
| Mouse anti-human smooth muscle actin | DAKO | M0851 | Cross-reacts with mouse |
| IgG2a isotype control | DAKO | X0943 | |
| Humidified chamber | Sigma | H6644 | |
| 3,3’-Diaminobenzidine solution | Sigma | D4293-5SET | |
| Hydrochloric acid | Fisher Scientific | H/1050/PB17 |
References
- Burton, G. J., Woods, A. W., Jauniaux, E., Kingdom, J. C. Rheological and physiological consequences of conversion of the maternal spiral arteries for uteroplacental blood flow during human pregnancy. Placenta. 30 (6), 473-482 (2009).
- Pijnenborg, R., Vercruysse, L., Hanssens, M. The uterine spiral arteries in human pregnancy: facts and controversies. Placenta. 27 (9-10), 939-958 (2006).
- Ashkar, A. A., Croy, B. A. Interferon-gamma contributes to the normalcy of murine pregnancy. Biol Reprod. 61 (2), 493-502 (1999).
- Ashkar, A. A., Croy, B. A. Functions of uterine natural killer cells are mediated by interferon gamma production during murine pregnancy. Semin Immunol. 13 (4), 235-241 (2001).
- Ashkar, A. A., Di Santo, J. P., Croy, B. A. Interferon gamma contributes to initiation of uterine vascular modification, decidual integrity, and uterine natural killer cell maturation during normal murine pregnancy. J Exp Med. 192 (2), 259-270 (2000).
- Ashkar, A. A., et al. Assessment of requirements for IL-15 and IFN regulatory factors in uterine NK cell differentiation and function during pregnancy. J Immunol. 171 (6), 2937-2944 (2003).
- Barber, E. M., Pollard, J. W. The uterine NK cell population requires IL-15 but these cells are not required for pregnancy nor the resolution of a Listeria monocytogenes infection. J Immunol. 171 (1), 37-46 (2003).
- Colucci, F., Boulenouar, S., Kieckbusch, J., Moffett, A. How does variability of immune system genes affect placentation. Placenta. 32 (8), 539-545 (2011).
- Pijnenborg, R., Vercruysse, L., Brosens, I.
- Colucci, F., Kieckbusch, J. Maternal uterine natural killer cells nurture fetal growth: in medio stat virtus. Trends Mol Med. 21 (2), 60-67 (2015).
- Hanna, J., et al. Decidual NK cells regulate key developmental processes at the human fetal-maternal interface. Nat Med. 12 (9), 1065-1074 (2006).
- Xiong, S., et al. Maternal uterine NK cell-activating receptor KIR2DS1 enhances placentation. J Clin Invest. 123 (10), 4264-4272 (2013).
- Croy, B. A., Zhang, J., Tayade, C., Colucci, F., Yadi, H., Yamada, A. T. Analysis of uterine natural killer cells in mice. Methods Mol Biol. 612, 465-503 (2010).
- Kieckbusch, J., Gaynor, L. M., Moffett, A., Colucci, F. MHC-dependent inhibition of uterine NK cells impedes fetal growth and decidual vascular remodelling. Nat Commun. 5, (2014).
- Zhang, J., Chen, Z., Smith, G. N., Croy, B. A. Natural killer cell-triggered vascular transformation: maternal care before birth. Cell Mol Immunol. 8 (1), 1-11 (2010).
- Adamson, S. L., et al. Interactions between trophoblast cells and the maternal and fetal circulation in the mouse placenta. Dev Biol. 250 (2), 358-373 (2002).
- Colucci, F., Soudais, C., Rosmaraki, E., Vanes, L., Tybulewicz, V. L. J., Di Santo, J. P. Dissecting NK cell development using a novel alymphoid mouse model: Investigating the role of the c-abl proto-oncogene in murine NK cell differentiation. J Immunol. 162 (5), 2761-2765 (1999).
- Hu, D., Cross, J. C. Ablation of Tpbpa-positive trophoblast precursors leads to defects in maternal spiral artery remodeling in the mouse placenta. Dev Biol. 358 (1), 231-239 (2011).
- Zhang, J. H., Croy, B. A. Using Ultrasonography to Define Fetal-Maternal Relationships: Moving from Humans to Mice. Comparative Med. 59 (6), 527-533 (2009).
