Introduction
Udvekslingen af næringsstoffer, gasser og affaldsprodukter under eutherian drægtighed medieres af moderkagen. I den kvindelige reproduktive tarmkanalen, livmoderarterierne er de vigtigste ledninger af blod til livmoderen. Efter implantation disse gren til specialiserede fartøjer kaldes spiral arterier, der coil gennem decidua basalis mod fetoplacental enhed. Diameter og elasticitet af disse spiral arterier, som er omgivet af leukocytter, især uterin naturlige dræberceller (UNK) celler, diktere omfanget og hastigheden af blod til rådighed for placenta 1,2. Korrekt hæmodynamiske ændringer som følge af omdannelse af de spiralformede arterier er kritiske for vellykket graviditet.
Mens de underliggende mekanismer varierer i detaljer mellem human og murin graviditet, det endelige resultat af remodelleringsprocessen i begge arter er dilateret, høj ledningsevne vaskulatur, som mister sin glatte muskulatur lag. Hos mus, UNK celleafledt interferon (IFN-) γ er nødvendig for at fremkalde disse ændringer på omkring midten af drægtigheden 3-5. Mus, der mangler enten NK-celler eller komponenter i IFN-γ signalvej undlader at gennemgå disse ændringer, og dette er forbundet med reduceret føtal vækst 6,7, understreger vigtigheden af en tilstrækkelig blodforsyning til fetoplacental enhed. I den tidlige graviditet, det interstitielle og endovaskulær invasion af extravillous trofoblast og deres samspil med unk celler er vigtige for at fremkalde vaskulære forandringer og fremme fostervækst 8-10. UNK celler kan orkestrere trophoblast invasion human gennem chemokiner 11 og cytokiner, såsom granulocyt-makrofag - kolonistimulerende faktor (GM-CSF) 12. Shallow trofoblast invasion er forbundet med reduceret arteriel remodeling og graviditet komplikationer såsom præeklampsi 9.
Denne protokol er baseret på pionerarbejde Anne Croy der beskrev vigtigerolle i immunsystemet og især NK-afledte IFN-γ for en vellykket vaskulær remodellering ved immunohistokemi og elegant transfer eksperimenter 5,13. Her beskriver vi en hurtig og økonomisk måde at vurdere remodeling status spiral arterier. Selvom vores laboratorium rutinemæssigt vurderer dette på midten drægtighed (drægtighed dag (gd) 9.5) 14, remodeling proces finder sted mellem gd8.5 og 12,5 15. Fremkomsten af automatiserede dias scannere har i høj grad lettet vurderingen af fartøjet og lumen områder fra sektioner, og vi fandt dette at være en mere reproducerbar tilgang end at måle fartøj diametre. Tilsætningen af immunhistokemisk påvisning af SMA giver mulighed for en enkel validering af de opnåede resultater fra stereologiske vurdering. Som med alle stereologiske teknikker, anbefales det at foretage en vurdering som et blindet forsøg af mindst to censorer. Til dette formål kan der indføres en randomisering skridt, når serielt skåretTing prøverne, så efterforskerne vurderer dias ikke kender hvorfra forsøgsgruppe prøverne kommer.
Det overordnede mål med denne protokol er at give et pålideligt værktøj til nøje at vurdere ombygningen af spiralformede arterier i mus med definerede mødres og faderlige genotyper, i forbindelse med musemodeller for graviditetsrelaterede komplikationer. Resultaterne understreger afhængigheden af UNK celler af denne proces, som er afgørende for en normal føtal vækst.
Protocol
Alle procedurer diskuteres i dette manuskript er i overensstemmelse med UK hjemmekontor regler og er godkendt af Cambridge etisk panel.
1. Prøvetagning
- Opsætning tidsindstillede parringer hjælp 8-12 uger gamle kvindelige C57BL / 6 mus med voksne mænd (op til 2 hunner pr mandlige) i eftermiddag. Kontrollere tilstedeværelsen af vaginale propper som et tegn på samleje tidligt om morgenen på de følgende dage. Tilstedeværelsen af en prop i morgen markerer gd0.5.
- På gd9.5, aflive dyret ved cervikal dislokation og åbne bughulen. Bemærk, at eutanasi af CO 2 kan forårsage vasodilatation.
- Brug tandtråd til forsigtigt ligere livmoderarterierne (figur 1, stiplede pile). Bind tråden omkring arterierne på spidsen af hvert uterushorn, proximalt til æggestokkene, samt omkring livmoderhalsen.
Bemærk: Du må ikke udvise brud skibene, da det kan resultere i kollapsede arterier. <li> Skær livmoderen hurtigt ved hjælp dissektion saks, udskære hele livmoderen distalt til de tre punkter ligeringsfremgangsmåder på spidsen af livmoderhornene og livmoderhalsen. - Placer uterus på en forberedt polystyren stykke, så at begge horn er rettet ind langs den samme lange akse i modsatte retninger fra cervix. Forsigtigt strække den og pin på plads ved hjælp af 2-3 25 G nåle.
- Fordyb polystyren ind i en forberedt 50 ml konisk rør. Top op til 50 ml med 10% formalin. Fix for 5-6 timer ved stuetemperatur.
- Kassér formalinopløsning og erstatte med 50 ml 1x phosphatpufret saltvand (PBS) i 5 minutter.
- Udskære de to livmoderhornene proksimalt til ligeringspunktet i hver ende og proximalt på livmoderhalsen i centrum, klippes overskydende fedt omkring de implantationssteder og vask to gange i PBS i 5 minutter for at fjerne spor af formalin.
- Opbevare prøverne i 70% ethanol ved 4 ° C (i op til to uger) indtil forarbejdning.
ADVARSEL: Ethanol er meget brandfarligt. - Brug et automatiseret behandlingssystem under anvendelse af de parametre, der er angivet i tabel 1. Integrer hornene individuelt i paraffin, således at de kan skæres langs planet vinkelret på den lange akse af livmoderen. Dette sikrer, at det maksimale areal af hver implantationsstedet vil blive udsat for analyse i midten af blokken (figur 2A).
EKSTRA: Dette er en praktisk tidspunkt for randomisering af blokkene, hvis det ønskes. - Ved hjælp af en mikrotom, sender serielle sektioner af 7 um tykkelse fra blokkene. Farv en sektion på hver 49 um interval med hæmatoxylin og eosin (H & E, se afsnit 2.1). Opbevar de resterende afsnit ved stuetemperatur i SMA farvning og andre downstream-applikationer.
| Løsning | Tid | Temperatur |
| 70% Ethanol | 1 time | 40 ° C |
| 100% ethanol | 1 time | 40 ° C |
| 100% ethanol | 1 time | 40 ° C |
| 100% ethanol | 1 time | 40 ° C |
| 100% ethanol | 1 time | 40 ° C |
| 100% ethanol | 1 time | 40 ° C |
| 100% ethanol | 1 time | 40 ° C |
| 1 time | 40 ° C | |
| Xylen | 1 time | 40 ° C |
| Xylen | 1 time | 40 ° C |
| Paraffin | 1 time | 63 ° C |
| Paraffin | 1 time | 63 ° C |
| Paraffin | 1 time | 63 ° C |
| Paraffin | 1 time | 63 ° C |
Tabel 1:. Indstillinger for automatiseret vævsbehandling Oversigt over indstillingen anvendes til behandling af uterusvæv
2. Stereological Vurdering
- H & E farvning
- Afparaffiniser sektioner ved at nedsænke objektglassene monteret i en objektglasstativ i en 100% xylenbad i 10 minutter ved stuetemperatur.
ADVARSEL: Xylen er brændbart og en mistænkt carcinogen, der er giftigt ved kontakt og indånding. Dette arbejde skal udføres i et stinkskab, ved hjælp af personlige værnemidler (PPE). - Fordybe glider i bad indeholdende ren xylen for yderligere 10 min.
- Sekventielt fordybe slides i bade indeholdende 100% ethanol, 95% ethanol, 70% ethanol og renset vand i 5 minutter hver.
- Fordybe objektglas i 50% Gill nr 3 hematoxylin-opløsning, fortyndet med renset vand, i 5 min.
ADVARSEL: Hematoxylin er sundhedsskadeligt ved indtagelse og kontakt til øjnene. Bær passende værnemidler ved håndtering. - Vask slides i en farvning trug under rindende postevand i 10 min.
- Fordybe slides i 1% syre / alkohol-opløsning (1% 10 M saltsyre i 70% ethanol) i 10 sekog vask i en farvning trug under rindende vand.
- Fordybe glider i eosin-opløsning i 30 sek og vask i en farvning trug under rindende postevand i 10 min.
- Inden et stinkskab, sekventielt fordybe slides i bade indeholdende 70% ethanol, 95% ethanol og 100% ethanol i 5 minutter hver.
- Fordyb dias i bad, der indeholder xylen i 10 min.
- Mount dækglas under anvendelse af en xylen-baserede montering medium. Tør vandret og grundigt i et stinkskab før visualisering dias under et mikroskop.
- Afparaffiniser sektioner ved at nedsænke objektglassene monteret i en objektglasstativ i en 100% xylenbad i 10 minutter ved stuetemperatur.
- Stereologisk Vurdering af Vessel Størrelse og Remodeling status
- For hver implantationsstedet, bestemme, hvilke sektioner er tæt på midsagittal punkt. Chorioallantois fastgørelse mellem fosteret og moderkagen tjener som en god indikator for midsagittal punkt.
- Vælg 3 sektioner på 49 um intervaller tæt på midsagittal punkt for analysen. Scan udvalgte dias. For at undgå including vener, som har vist sig at være mere perifert beliggende i implantationssteder 16, begrænse analysen på den centrale 2/4 af hver implantationsstedet (figur 2A).
- For at vurdere lumenstørrelsen, tegne rundt inde i beholderne og registrere Arealet af denne form. For den samlede skibsstørrelse, tegne rundt om den ydre væg af beholderen, herunder endotelceller, pericytter og murene leukocytter.
Bemærk: Forholdet mellem den samlede fartøj størrelse til lumen er en proxy for ombygningen status af et fartøj. Som skibene spole gennem planet, at afsnittet blev skåret langs, kan der være flere tværsnit af den samme arterie i et objektglas. Undgå at måle det samme arterie flere gange. - Optag målingerne fra de 5 skibe i hvert implantation site med de største og roundest lumen. Mål hver implantationssted i tre eksemplarer (tre sektioner anbragt 49 um fra hinanden). Gennemsnittet af disse 15 målinger represents middeldiameteren af de største skibe.
- For at undgå overrepræsentation af større fartøjer i nogle prøver, måler det samme antal fartøjer i hver implantation site.
3. Kvalitativ Assessment Brug Immunohistokemi
- Afparaffinering og Rehydrering
- Afparaffiniser sektioner ved at nedsænke objektglassene monteret i en heatproof objektglasstativet i en 100% xylenbad i 10 minutter ved stuetemperatur.
- Fordybe glider i bad indeholdende ren xylen for yderligere 10 min.
- Sekventielt fordybe slides i bade indeholdende 100% ethanol, 95% ethanol og 70% og renset vand i 5 minutter hver.
- Antigen Retrieval
- Der fremstilles en 10 mM natriumcitrat-buffer i renset vand og justeres til pH 6 under anvendelse af 10 M saltsyre.
- Fyld en heatproof beholder, der kan rumme 600 ml med 400 ml natriumcitratpuffer og sted i en indenlandsk trykkoger indeholder tilstrækkeligt watER at oversvømme halvdelen af beholderen. Løst fastgøre låget på trykkogeren og varme, indtil kogning.
- Sted objektglasstativet i natriumcitratbuffer og stramt løse låg trykkogeren. Når tryk, lad det koge i 3 min.
- Tag trykket af trykkogeren, og fjern den indre beholder. Tillad slides afkøle i natriumcitratbuffer i 10 minutter ved stuetemperatur.
- Vask glider i et bad indeholdende renset vand i 5 minutter.
- Omringe sektioner ved hjælp af en hydrofob barriere pen.
- Vask slides ved nedsænkning i PBS i 5 minutter.
- Blokering Endogen peroxidase og ikke-specifik binding
- Inkuber sektioner med 3% hydrogenperoxid fortyndet i renset vand i en befugtet kammer i 30 minutter ved stuetemperatur.
ADVARSEL: Brintoverilte er meget irriterende på øjne, hud og ved indtagelse. Bær passende personlige værnemidler. - Bank overskydende hydrogenperoxidopløsning og vask SLIdes to gange ved nedsænkning i Tris-bufret saltvand (TBS) i 2 minutter hver.
- Inkuber sektioner med muse-immunoglobulin blokerende reagens fra musen på musen kit fremstillet ifølge producentens anvisninger.
- Vask glider to gange i TBS i 2 minutter hver.
- Inkuber sektioner med 3% hydrogenperoxid fortyndet i renset vand i en befugtet kammer i 30 minutter ved stuetemperatur.
- Immunodetektion af glatmuskelactin
- Antistoffortynder opløsning (tilvejebragt i kit) udarbejde og inkuberes med sektioner i 5 minutter ved stuetemperatur, eller i henhold til producentens anvisninger.
- Fortynd 1: 100 muse-anti-humant glatmuskelactin (DAKO M0851) i antistoffortyndingsmiddel opløsning. Fortynd muse-IgG2a isotypekontrol i antistoffortyndingsmiddel løsning, der sikrer, at den endelige immunglobulinkoncentrationen er tilsvarende i begge opløsninger.
- Bank overskydende antistoffortynder løsning og omfatter sektioner med enten fortyndet antistof eller isotypekontrol løsninger. Inkuber i et fugtigt kammer i 30 minutter ved stuetemperatur.
- Vask glider to gange i TBS i2 minutter hver.
- Fortynd biotinyleret anti-muse-sekundært antistof og inkuberes sektioner i 10 minutter ved stuetemperatur, eller i henhold til producentens instruktioner.
- Vask glider én gang med TBS og PBS i 2 min.
- 3,3'-diaminobenzidin (DAB) Der fremstilles ifølge producentens anvisninger. Omfatte sektioner med DAB-opløsning og inkuberes i op til 4 min, hvilket sikrer at overvåge sektioner for at undgå overskydende farveudvikling.
ADVARSEL: DAB er brændbart og en mistænkt carcinogen, der er giftigt ved kontakt og indånding. Bær passende værnemidler ved håndtering. - Fordybe objektglassene i renset vand, når det ønskes farvningsintensiteten er nået.
- Kontrastfarve med 50% Gill nr 3 hæmatoxylin i 20 sek og vask i en farvning trug under rindende vand, indtil vandet er klart.
- Dehydrering og montering
- Inden et stinkskab, sekventielt fordybe dias i bade indeholdende 70% ethanol, 95% ethanol og 100% ethanol i 5 minutter hver.
- Fordyb dias i bad, der indeholder xylen i 10 min.
- Mount dækglas under anvendelse af en xylen-baserede montering medium. Tør vandret og grundigt i et stinkskab før visualisering dias under mikroskop
Representative Results
Rag2 - / - IL2rg - / - mus mangler alle modne lymfocytter, herunder NK-celler 17, og deres uterine arterier undlader at gennemgå de vaskulære forandringer set i kongene vildtype C57BL / 6 (WT) mus omkring midten af drægtigheden 5,14. Som følge af denne reducerede remodeling rag2 - / - IL2rg - / - mus viser signifikant mindre luminale overflade områder, hvilket indikerer generelt mindre fartøjer, der kan visualiseres på H & E-farvede sektioner og kvantificerede stereologically (figur 2). Endvidere relative vægtykkelse (fartøj til lumen ratio) er højere i de spiralformede arterier i disse mus, hvilket tyder på nedsat blodforsyning og højere blodets hastighed.
Denne kvantitativ vurdering blev bekræftet ved hjælp af immunhistokemisk påvisning af SMA. Det er karakteristisk for WT mus for at miste det meste af SMA inde i det vaskulære medieraf spiral arterier i midten af drægtigheden. Hvis dette NK-celle-drevet proces ikke finder sted, SMA forbliver i medierne af beholderne og kan let påvises immunhistokemisk som ringe omkring blodkarrene (Figur 3).
Figur 1: Mouse livmoderen ved gd9.5, skematisk oversigt tegning, som viser de relative positioner af livmoderhornene, cervix (blå) og de vigtigste livmoderarterier (rød).. Angivet er den lange akse af livmoderhornene (pile) og ligationsprodukterne punkter (stiplede pile). Sektionerne til immunhistokemi skæres langs planet af visningen.
Figur 2:. Stereologisk vurdering af arteriel remodellering medio drægtighed (A) Eksempel Assessment af luminale og samlede fartøj områder på H & E-farvede sektioner fra WT hunner i den centrale 2/4 af decidua basalis (afgrænset af lodrette sorte stiplede linjer) ved gd9.5. I skibe på højere forstørrelse, den røde stiplede linje afgrænser samlede fartøj areal, gul stiplet linje afgrænser lumen område. Bar = 500 um (venstre), 50 um (højre). Den lange akse af livmoderen er en horisontal linie i denne orientering. (B) Kvantificering af luminale områder (venstre panel) og forholdet mellem luminal område til total kontrol område (højre panel) fra WT (C57BL / 6) og rag2 - / - Il2rg - / - mus (på C57BL / 6 baggrunden). Hvert datapunkt repræsenterer middelværdien af 15 målinger (5 målinger per sektion, 3 sektioner pr implantationssted). Søjler repræsenterer gennemsnit af n = 11-13 implantationssteder fra 4 graviditeter per gruppe; p-værdi fra en to-halet, uparret Mann-Whitney-test. WT: vildtype.
Figur 3:. Immunhistokemisk påvisning af glatmuskelactin i decidua basalis repræsentant SMA farvning på WT (øverst) og rag2 - / - IL2rg - / - mus (på C57BL / 6 baggrund, nederst) på gd9.5. Bar = 100 um. WT: vildtype.
Discussion
Protokollen præsenteres her er designet til at give en reproducerbar metode til at vurdere de vaskulære ændringer, der er nødvendige for en vellykket graviditet. Kritisk for succes i denne evaluering er kvaliteten af de vævssnit. Både præcist at bestemme gestationsalder af implantationssteder samt pålidelig ligere livmoderarterierne, er afgørende skridt. Ændringer i parametre såsom tidspunktet for fiksering, tissue-behandlingsprotokol, etc., kan også påvirke resultatet. For en fordomsfri stereologiske vurdering, er det vigtigt at måle det samme antal fartøjer i hver implantation site. Det anbefales at måle 5 fartøjer pr implantationssted og hver implantation websted i tre eksemplarer. Gennemsnittet af disse 15 målinger repræsenterer middelstørrelse af de 5 største skibe.
På baggrund af data fra alymphoid rag2 - / - IL2rg - / - mus vist her, fandt vi denne protocol anvendelig til en række modeller af utilstrækkelig maternel immunfunktion, herunder en af inhiberede NK-celler 14. Defekter i arteriel remodeling har også vist sig i modeller for forringet trophoblast invasion 18 og de teknikker der er beskrevet her, kan være nyttigt at vurdere vaskulaturen i disse tilfælde. Vi optimeret og valideret denne protokol for undersøgelse af decidua vaskulær remodellering medio drægtighed i mus, men det er også tænkeligt at tilpasse denne protokol til at arbejde i andre modelsystemer (f.eks rotter) eller endog i andre organer. Mens vi finder, at NK-afhængige ombygning kan håndfast vurderes på gd9.5, kan det ændres til andre tidspunkter såsom gd12.5, når moderens vaskulatur er fuldstændig renoveret. På dette tidspunkt, endovaskulær trofoblast invasion er dybere 16 og dette tidspunkt kan være mere egnet til undersøgelser af den rolle, trofoblast for vaskulære forandringer. Hvis der ønskes yderligere kvantitative udlæsninger,undersøgere kan også øge antallet af snit farvet for SMA og vurdere procentdelen af delvist gentegnet fartøjer inden for hver implantationsstedet.
En begrænsning af denne protokol er den beskrivende karakter af histologiske undersøgelser. Funktionelle assays, dog kun langsomt ved at blive tilgængelige (såsom Doppler ultralyd 19). Disse teknikker kræver teknisk ekspertise og meget højere udgifter til erhvervelse og vedligeholdelse af udstyr, men har den fordel, at en langsgående in vivo udlæsning for effekten af de ændringer, der kan observeres histologisk. En mulig ulempe ved alle stereologiske undersøgelser er subjektivitet efterforskerne. Til dette formål kan ved hjælp af to uafhængige censorer, der analyserer alle prøver selvstændigt bidrage til at undgå dette problem. Mens protokollen beskrevet her giver indsigt i, hvor meget blod kan nå fetomaternal interface, kan det være fordelagtigt at kombinere det med komplementary tilgang vurdere den samlede mængde blod på et givet tidspunkt i vaskulaturen gennem plastik kaster 16.
Styrken ved denne protokol er, at den kombinerer to uafhængige tilgange. Vaskulær ændringer først vurderes kvantitativt ved stereologi og resultatet er derefter valideres kvalitativt immunhistokemi. Pålideligheden af resultaterne kan styrkes yderligere ved randomisering prøverne. De forberedt til denne protokol prøver kan nemt bruges til også at undersøge andre parametre af graviditeten såsom decidualisation, udvikling af mesometrial lymfoide aggregat af graviditet (MLAp) eller immunodetektion af celler af interesse, til nøje at vurdere en graviditet fænotype ved midgestation.
Arteriel remodeling er et afgørende skridt for ukomplicerede graviditeter i kvinder og svigt af disse ændringer underbygger de store obstetriske syndromer (GO), nemlig præeklampsi, fostervækst begrænsning ogdødfødsel. Vi præsenterer her teknikker til nøje at vurdere en graviditet fænotype i musemodeller, der efterligner nogle karakteristika for patofysiologien af GOS.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| C57BL/6 mice (8-12 weeks old) | Charles River | ||
| Dental floss | |||
| Polystyrene | Used for holding tissue in place | ||
| Straight dissection scissors | EMS | 72940 | |
| 25 G needles | BD | 300600 | Used for holding tissue in place |
| 50 ml conical tubes | Falcon | 352070 | |
| Formalin solution, neutral buffered, 10% | Sigma | HT501128-4L | |
| Phosphate buffered saline | Sigma | P3813-10PAK | |
| Ethanol | Sigma | 32221-2.5L | |
| Paraffin | Sigma | 327204-1KG | |
| Xylene | Fisher Scientific | X/0250/17 | |
| Automated tissue processor | Sakura | 6032 | |
| Microtome | Leica | RM2245 | |
| Slide rack | Sigma | Z710989 | |
| Coplin jar | Sigma | S5891 | |
| Purified water | |||
| Hematoxylin solution, Gill No. 3 | Sigma | GHS332-1L | |
| Eosin Y solution | Sigma | HT110116-500ML | |
| Fume hood | |||
| Xylene-based mounting media | VWR | 361254D | |
| Slide scanner | Hamamatsu | NanoZoomer | |
| Slide scanner software | Hamamatsu | NDP viewer | |
| Sodium citrate tribasic dihydrate | Sigma | 32320 | Make 10 mM solution and adjust pH to 6 |
| Pressure cooker | Used for antigen retrieval | ||
| Heating plate | Used for antigen retrieval | ||
| Hydrophobic barrier pen | Vector | H-4000 | |
| Hydrogen peroxide | Fisher Scientific | H/1800/15 | |
| Tris buffered saline | Sigma | T6664-10PAK | |
| Mouse on mouse kit | Vector | BMK-2202 | Significantly reduces background |
| Mouse anti-human smooth muscle actin | DAKO | M0851 | Cross-reacts with mouse |
| IgG2a isotype control | DAKO | X0943 | |
| Humidified chamber | Sigma | H6644 | |
| 3,3’-Diaminobenzidine solution | Sigma | D4293-5SET | |
| Hydrochloric acid | Fisher Scientific | H/1050/PB17 |
References
- Burton, G. J., Woods, A. W., Jauniaux, E., Kingdom, J. C. Rheological and physiological consequences of conversion of the maternal spiral arteries for uteroplacental blood flow during human pregnancy. Placenta. 30 (6), 473-482 (2009).
- Pijnenborg, R., Vercruysse, L., Hanssens, M. The uterine spiral arteries in human pregnancy: facts and controversies. Placenta. 27 (9-10), 939-958 (2006).
- Ashkar, A. A., Croy, B. A. Interferon-gamma contributes to the normalcy of murine pregnancy. Biol Reprod. 61 (2), 493-502 (1999).
- Ashkar, A. A., Croy, B. A. Functions of uterine natural killer cells are mediated by interferon gamma production during murine pregnancy. Semin Immunol. 13 (4), 235-241 (2001).
- Ashkar, A. A., Di Santo, J. P., Croy, B. A. Interferon gamma contributes to initiation of uterine vascular modification, decidual integrity, and uterine natural killer cell maturation during normal murine pregnancy. J Exp Med. 192 (2), 259-270 (2000).
- Ashkar, A. A., et al. Assessment of requirements for IL-15 and IFN regulatory factors in uterine NK cell differentiation and function during pregnancy. J Immunol. 171 (6), 2937-2944 (2003).
- Barber, E. M., Pollard, J. W. The uterine NK cell population requires IL-15 but these cells are not required for pregnancy nor the resolution of a Listeria monocytogenes infection. J Immunol. 171 (1), 37-46 (2003).
- Colucci, F., Boulenouar, S., Kieckbusch, J., Moffett, A. How does variability of immune system genes affect placentation. Placenta. 32 (8), 539-545 (2011).
- Pijnenborg, R., Vercruysse, L., Brosens, I.
- Colucci, F., Kieckbusch, J. Maternal uterine natural killer cells nurture fetal growth: in medio stat virtus. Trends Mol Med. 21 (2), 60-67 (2015).
- Hanna, J., et al. Decidual NK cells regulate key developmental processes at the human fetal-maternal interface. Nat Med. 12 (9), 1065-1074 (2006).
- Xiong, S., et al. Maternal uterine NK cell-activating receptor KIR2DS1 enhances placentation. J Clin Invest. 123 (10), 4264-4272 (2013).
- Croy, B. A., Zhang, J., Tayade, C., Colucci, F., Yadi, H., Yamada, A. T. Analysis of uterine natural killer cells in mice. Methods Mol Biol. 612, 465-503 (2010).
- Kieckbusch, J., Gaynor, L. M., Moffett, A., Colucci, F. MHC-dependent inhibition of uterine NK cells impedes fetal growth and decidual vascular remodelling. Nat Commun. 5, (2014).
- Zhang, J., Chen, Z., Smith, G. N., Croy, B. A. Natural killer cell-triggered vascular transformation: maternal care before birth. Cell Mol Immunol. 8 (1), 1-11 (2010).
- Adamson, S. L., et al. Interactions between trophoblast cells and the maternal and fetal circulation in the mouse placenta. Dev Biol. 250 (2), 358-373 (2002).
- Colucci, F., Soudais, C., Rosmaraki, E., Vanes, L., Tybulewicz, V. L. J., Di Santo, J. P. Dissecting NK cell development using a novel alymphoid mouse model: Investigating the role of the c-abl proto-oncogene in murine NK cell differentiation. J Immunol. 162 (5), 2761-2765 (1999).
- Hu, D., Cross, J. C. Ablation of Tpbpa-positive trophoblast precursors leads to defects in maternal spiral artery remodeling in the mouse placenta. Dev Biol. 358 (1), 231-239 (2011).
- Zhang, J. H., Croy, B. A. Using Ultrasonography to Define Fetal-Maternal Relationships: Moving from Humans to Mice. Comparative Med. 59 (6), 527-533 (2009).
