Protocol
פרוטוקול זה כדלקמן הנחיות ועדת האתיקה מחקר אנושית המקומית.
1. הכנה
- לתזמן את מדידת microcirculatory כך שזה לא עולה בקנה אחד עם נהלים אחרים כגון דגימת דם. בילודים טווח זה מבוצע הטוב ביותר לאחר ההאכלה. זה מונע תסיסה ויקל על המדידה.
- ודא שאחות או הורה לומדת לתמוך ולנחם את הילוד בזמן הבדיקה, תוך שימוש בעקרונות של יילוד פרטני התפתחותית טיפול והערכת תכנית 12.
הערה: למרות שניתן לבצע מדידות על ידי אדם אחד, זה מומלץ מאוד יש לי אדם שני לסייע. אחד מחזיק את המצלמה ועל הילוד ממוקד תוך אחרים פועל במחשב ותוכנה. מניסיוננו, זה תוצאות בתמונות באיכות גבוהות יותר ומשך קצר יותר של ההליך. - אם המצב הקליני של היתרי הילוד, למקםילוד במצב שכיבה. ההדמיה microcirculatory ניתן לבצע במצב שכיבה, אבל זה דורש יותר מיומנות וסבלנות.
- ודא את טמפרטורת הגוף של הפגים נמצאת בטווח המתאים (36.5 - 37.5 צלזיוס מעלות).
2. נוהל
- התקן את המכשיר לאורך החממה. ודא החממה היא בגובה הנכון.
- שים את הכובע חד פעמי על המצלמה.
- החל ג'ל, שמן או מלח על הקצה של החללית; זה יעזור להחליק את הקשר בין הבדיקה ועור.
- מניחים את המצלמה בצד הבטנית-תיכונה של הזרוע העליונה התינוקות. כדי למנוע התמקדות-חפצים, לוודא הבדיקה היא בניצב לעור. זה עשוי לדרוש מחדש של זרוע התינוקות.
הערה: הצד הבטנית-תיכונה של הזרוע העליונה הוא המיקום העיקרי למדידת זרימת דם עורית. יש מיקום זה שיער כשות קטן ולכן נוטה פחות לחפצים. הוא הגיע בקלותאם החולה ממוקם במצב שכיבה. - כדי למזער את האורך הכולל של הליך, להרוויח זמן על ידי מציאת העומק האופטימלי של מוקד (איור 3) בעת חיפוש המיקום עם החפצים הקטנים ביותר.
הערה: עומק המוקד תלוי בעיקר בגיל לידה ולא גיל הריון. עומק המוקד הממוצע בשבוע הראשון לחיים הוא 0-80 מיקרומטר. מכאן והלאה, בשל ההתבגרות של העור, עומק המוקד מגדיל במהירות עם ערכים של 80 ממוצע - 200 מיקרומטר בין 1 - 4 שבועות של גיל לאחר לידה (איור 2). בילודים שנולדו לטווח העומק הממוצע של מוקד הוא 80-160 מיקרומטר בלידה. - לייצב את הבדיקה, כדי למנוע חפצי תנועה. לשם כך, לנוח מרפק על חלון החממה ופרק כף היד ליד הילוד. לחלופין, למקם את החללית לצד הילוד על כרית.
- הימנע חפצי לחץ על ידי ומאפשר למצלמה יש רק קשר הקלוש עם העור. חפצי לחץ יכולים להיות recognized במהלך לכידת תמונה אם יש זרימה חזרה ו-ושוב בכלי או אם כלי גדול הם שאינו perfused בעוד שיש זרימה טובה בכלי דם קטנים. גם אם זרימת התבנית היא זהה לאורך כל המסך, היזהר מחפצי לחץ.
- קלטת קטעים וידאו לתקופת מינימום של 5 שניות.
- לאחר לכידה מוצלחת, להזיז את המצלמה למקום אחר בזרוע העליונה.
הערה: מומלץ ללכוד בסך הכל 5 - 10 קטעי וידאו ב3-5 מקומות שונים, כחלק מחפצים מוכרים רק בניתוח במצב לא מקוון, מה שאומר שהווידאו בשאלה הוא לא שמיש עבור ניתוח. - להסיר בעדינות את הג'ל, שמן או מלח מהעור עם גזה קטנה.
3. ניתוח מנותק
- לחתוך את הווידאו אם יש תנועה משמעותית שפוגעת בניתוח. עבור לסעיף 'כלים' ולהשתמש בלחצן 'העורך'. בחר את מרווח המסגרת זכאי לניתוח ולחץ ב 'יבול וידאו'utton. הערה: וידאו מקובל אם תנועה היא בתוך חצי של שדה הנוף 13.
- בחר את הווידאו הקצוץ ולייצב אותו. עבור לסעיף 'כלים' ולהשתמש בלחצן 'ניתוח'. לחץ על הכפתור "לייצב".
הערה: כל הסרטים חייבים להיות התייצבו לפני ניתוח יכול להתבצע באופן אוטומטי. - בחר את הווידאו התייצב. עבור לסעיף "ניתוח" ולחץ על הכפתור 'זיהוי'. ודא "הנימים" האפשרויות ו'כלי שייט "מודגשות.
- לאחר זיהוי (איור 4), לחץ על "CNA 'או הכפתור' דה Backer 'לדו"ח microcirculatory מלא. דוח זה כולל את פרמטרים הנפוצים ביותר תוצאה כמו כוללת צפיפות כלי (TVD), צפיפות כלי perfused (PVD) וחלקם של כלי perfused (PPV).
הערה: כחלופה, ניתן לייצא קטעי וידאו מקוון כדי להיות מנותח באופן ידני. ניתן למצוא אפשרות זו ב'כלים 'הסעיף. Select באפשרות 'היצוא' ולחץ על כפתור 'יצוא AVA ".
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
איורים 1 ו -2 נציג תכנית עדיין תמונות של קטעי וידאו MI באיכות גבוהה. דוגמאות אלה ממחישות את ההבדל בעובי עור באותו התינוקות בין יום 1 (איור 1) ויום 28 (איור 2) בגיל שלאחר לידה. ביום 1, יש תאורה בהירה, מיקוד נאות על כלי מיקרו ונוכחות מינימאלית של חפצים. ביום 28 בזה יותר קשה למצוא את האיזון הנכון בין ההתמקדות בכלים וחפצי מיקרו בשל העור העבה. שים לב שיציבות, משך ולא יכולים להישפט חפצי לחץ על תמונות עדיין אלה. זה צריך להיות לב במהלך הרכישה של התמונות או לפני ניתוח לא מקוון.
איור 1. MI של פגים 24 שבועות גיל הריון, יום 1. Transcutaneous Mאני של תינוק שנולד בגיל הריון של 24 שבועות. הגיל לאחר הלידה של התינוק הוא יום 1. העומק משמש של מוקד הוא 40 מיקרומטר. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.
איור 2. MI של פגים 24 שבועות גיל הריון, יום 28. Transcutaneous MI של תינוק שנולד בגיל הריון של 24 שבועות. הגיל לאחר הלידה של התינוק הוא 28 ימים. העומק משמש של מוקד הוא 160 מיקרומטר. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.
איור 3. הבדלים הוא הפוקוס Depth. שתי תמונות אלה של המדויק אותו האזור מדגישות את החשיבות של עומק מוקד נאות. מוקד (משמאל) תוצאות לא מספקות בהפסד של נראות כלי בהשוואה למוקד נאות (מימין). אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.
איור 4. תוצאות של ניתוח האוטומטי מנותק. נתון זה מראה את התוצאות של ניתוח מחובר אוטומטי. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
בכתב יד זה אנו מתארים ומדגימים את הגישה להדמיה microcirculatory transcutaneous בפגים. לדמיין שיטה זו יסייע לחוקרים להתגבר על שני האתגרים הגדולים ביותר במחקר: שחזור והזמן וטבע עבודה אינטנסיבי של לימוד טכניקות חדשות. טכניקה זו יכולה לספק מידע שימושי מייקרו המחזורי ההיקפי בפגים באופן לא פולשני. מדידות סידוריים יכול לעזור לרופאים להעריך את ההשפעות של התערבויות טיפוליות. זרימת הדם הוא האזור שבו השלב האחרון בשרשרת הובלת החמצן מתרחש. מחקרים תצפיתיים הדגימו בין הידרדרות microcirculatory לאורך זמן ואת הנוכחות של זיהומים חיידקיים 14 ביחס. כהידרדרות של זרימת הדם ההיקפית היא אחד הסימנים הראשונים של אלח דם בפגים, שהוא בדרך כלל שער כי זרימת הדם ההיקפית יכול לעזור לחזות את ההתפתחותאֶלַח הַדָם.
האיכות של התמונות בעיקר תלויה בכישורים של המפעיל. למרות שמכשירי המצלמה האחרונים לספק מפרט טכני טוב יותר וחומרה, זה עדיין חשיבות משנית. מפעילים צריכים להיות מאומנים כראוי בהדמיה microcirculatory. הם צריכים להיות מוכרים עם ההמלצות של ועידת השולחן העגולה שנערכה באמסטרדם בשינה 2006 15 ועם קריטריוני האיכות שפותחו על ידי מאסי et al 13. ששת קריטריונים אלה (תאורה, משך, מיקוד, תוכן, יציבות, לחץ) הם הבסיס של איכות גבוהה ונתונים אמינים. מפעילים חסרי ניסיון עלולים להיכשל בזיהוי שכיח לחץ חפצי 16. שים לב, עם זאת, תקני איכות ואלה המלצות כבר גויסו למדידת MI sublingual במבוגרים ולא ניתן להסיק באופן ישיר למדידות MI עורית בפגים. קריטריוני איכות המשך והתוכןלכן קשים יותר לביצוע.
כמו כן, מומלץ מאוד לבצע את המדידות עם שני מפעילים ולשאול אחות או הורה להשתתף. המצלמה חייבת להיות מוחזקת יציבה, יש להימנע מחפצי לחץ, התוכנה חייבת להיות מופעלת ולרווחתם של התינוק יש לקחת בחשבון. במיוחד אם התינוק נע הרבה, זה יותר מדי למפעיל אחד. לכן עדיף להיות אדם אחד לטפל במצלמה ולהתמקד בתחום המדידה ואדם אחר להפעיל את התוכנה ולבדוק סימנים החיוניים של התינוק. באופן טבעי, מלבד ההיבטים הטכניים של אמ"ן, ניסיון בטיפול בפגים (אנושים) הוא חיוני למפעילים.
למרות האופי לא פולשנית שלה, MI עדיין נושא בנטל וסיכונים פוטנציאליים. להגביל את משך הזמן של מדידות למינימום כדי למנוע שהחממה ובכך טמפרטורת גוף יורדת יותר מדי. תמיד להחיל כובע הגנה חד פעמי על המצלמהלפני מדידות. הפונקציה של הכובע הזה היא כפול: הוא מגן על העור מפני ההתחממות פוטנציאלית של הבדיקה הקצה והיא משמשת כמחסום מלאכותי כדי למנוע העברת חיידקים. בנוסף, ציוד MI יש לחטא באופן קבוע.
כמו כן, חל רק כמות קטנה של ג'ל או שמן על העור בעדינות ולהסיר אותו לאחר המדידה. אם נעשה שימוש לרעה, השילוב של שמן ופוטותרפיה הטיפולית יכול להיות השפעות הרסניות על העור. למרות שרוב התינוקות לא מגיבים למדידות, לא ניתן לשלול חוסר יציבות לב-ריאה. זו הסיבה מדוע אנו ממליצים שהתינוק נתמך על ידי הורה או אחות.
לאחר רכישת נתונים, ניתוח מקוון של קטעי הווידאו צריכה להתבצע באופן אחיד. תוכנה מסחרית נגיש לנתח באופן אוטומטי קטעי וידאו MI פי ההנחיות 15. ניתוח ידני מורכב משלושה שלבים. ראשית, שיפור לעומת יכול להיות AP העמיס על מנת להשיג את הניגוד האופטימלי. שנית, צריכים להיות התייצבו קטעי וידאו. צעד זה יביא את החשיבות של יציבות במהלך המדידות. לסחיפה הקל שבקלים יכולים לעשות וידאו שמיש עבור ניתוח. שלישית, כלי חייבים להיגרר והזרימה חייבת להיות מסווגת. שים לב שהשלב אחרון זה נושאת סיכון גבוה של הצופה בין עניי השתנות 17. ניתוח מחובר ידני ולכן צריכה להתבצע על ידי חוקרים מאומנים בלבד. ישנן שתי שיטות לדיווח על מדדי התוצאה. השיטה המקובלת של ניתוח רשת נימים (CNA) משקפת את האורך הכולל של כלי מחולקים באזור נמדד המשטח (מ"מ / 2 מ"מ). לחלופין, ניתן להשתמש בפחות הזמן רב ציון De Backer (DBS). בציון זה, שלוש אופקי במרחק שווה ושלושה קווים אנכיים במרחק שווה נמשכים על המסך. צפיפות כלי ניתן לחשב את מספר כלי חוצים את הקווים מחולקים באורך הכולל של הקווים (n / מ"מ).
_content "> יש חסרונות לשדה המחקר של זרימת דם. הטרוגניות של זרימת הדם הופך מסובך להקים ערכי ייחוס. לכן, רוב המחקר מחקרים תצפיתיים או השוואות בין קבוצות. ההערכה מורכבת למדי של קטעי וידאו microcirculatory והתערבות אנושית הסובייקטיבית מגדיל את האפשרות של שחזור עלוב (ואן דן ברג 2015 17). לכן חשוב שהשיטה של קטעי וידאו קבלת היא סטנדרטית.בעתיד הקרוב, התקדמות טכנית תשפר את המחקר באמ"ן עורית. דוגמא היא אוטומטית ניתוח מחשב של תמונות וידאו, אשר תחליף את ההערכה האנושית יחסית הסובייקטיבית של microvessels ובכך לשלול השתנות משקיף השאר. דוגמא טובה לתקן תחום זה של מחקר היא השימוש בחיישני הדמיה אלחוטיים, אשר סדרתי למדוד את זרימת הדם בדיוק באותו המקום. זה יגרום MI עוריתפחות תלוי במפעיל.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
יש המחברים אין לחשוף.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Cytocam | Braedius | http://www.braedius.com/magnoliaPublic/braedius/products.html | Other well known handheld microscopes to visualize the microcirculation are MicroScan (Microvision Medical) using SDF technique or the CytoScan (CytoMetrics) using OPS technique |
| Disposable Lens Cover | Glycocheck | http://www.glycocheck.com/lenscovers.php | |
| CCTools | Braedius | http://www.braedius.com/magnoliaPublic/braedius/products.html | Another well known offline analysis programme is AVA (Microvision medical). |
References
- Groner, W., et al. Orthogonal polarization spectral imaging: a new method for study of the microcirculation. Nat Med. 5 (10), 1209-1212 (1999).
- Goedhart, P. T., Khalilzada, M., Bezemer, R., Merza, J., Ince, C. Sidestream Dark Field (SDF) imaging: a novel stroboscopic LED ring-based imaging modality for clinical assessment of the microcirculation. Opt Express. 15 (23), 15101-15114 (2007).
- Sherman, H., Klausner, S., Cook, W. A. Incident dark-field illumination: a new method for microcirculatory study. Angiology. 22 (5), 295-303 (1971).
- Trzeciak, S., et al. Early microcirculatory perfusion derangements in patients with severe sepsis and septic shock: relationship to hemodynamics, oxygen transport, and survival. Ann Emerg Med. 49 (1), 88-98 (2007).
- Sakr, Y., Dubois, M. J., De Backer, D., Creteur, J., Vincent, J. L. Persistent microcirculatory alterations are associated with organ failure and death in patients with septic shock. Crit Care Med. 32 (9), 1825-1831 (2004).
- De Backer, D., et al. Microcirculatory alterations in patients with severe sepsis: impact of time of assessment and relationship with outcome. Crit Care Med. 41 (3), 791-799 (2013).
- Buijs, E. A., et al. Early microcirculatory impairment during therapeutic hypothermia is associated with poor outcome in post-cardiac arrest children: A prospective observational cohort study. Resuscitation. , (2013).
- Genzel-Boroviczeny, O., Christ, F., Glas, V. Blood transfusion increases functional capillary density in the skin of anemic preterm infants. Pediatr Res. 56 (5), 751-755 (2004).
- Ergenekon, E., et al. Peripheral microcirculation is affected during therapeutic hypothermia in newborns. Arch Dis Child Fetal Neonatal Ed. 98 (2), F155-F157 (2013).
- Schwepcke, A., Weber, F. D., Mormanova, Z., Cepissak, B., Genzel-Boroviczeny, O. Microcirculatory mechanisms in postnatal hypotension affecting premature infants. Pediatr Res. , (2013).
- van Elteren, H. A., Ince, C., Tibboel, D., Reiss, I. K., de Jonge, R. C. Cutaneous microcirculation in preterm neonates: comparison between sidestream dark field (SDF) and incident dark field (IDF) imaging. J Clin Monit Comput. , (2015).
- Als, H., et al. Individualized Behavioral and Environmental Care for the Very-Low-Birth-Weight Preterm Infant at High-Risk for Bronchopulmonary Dysplasia - Neonatal Intensive-Care Unit and Developmental Outcome. Pediatrics. 78 (6), 1123-1132 (1986).
- Massey, M. J., et al. The microcirculation image quality score: development and preliminary evaluation of a proposed approach to grading quality of image acquisition for bedside videomicroscopy. J Crit Care. 28 (6), 913-917 (2013).
- Weidlich, K., et al. Changes in microcirculation as early markers for infection in preterm infants--an observational prospective study. Pediatr Res. 66 (4), 461-465 (2009).
- De Backer, D., et al. How to evaluate the microcirculation: report of a round table conference. Crit Care. 11 (5), R101 (2007).
- Sallisalmi, M., Oksala, N., Pettila, V., Tenhunen, J. Evaluation of sublingual microcirculatory blood flow in the critically ill. Acta Anaesthesiol Scand. 56 (3), 298-306 (2012).
- van den Berg, V. J., et al. Reproducibility of microvascular vessel density analysis in Sidestream dark-field-derived images of healthy term newborns. Microcirculation. 22 (1), 37-43 (2015).
