Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Bioengineering

ثلاثي الأبعاد تكنولوجيا المحاكاة البيولوجية: رواية Biorubber يخلق معرف الصغرى، وعلى نطاق والماكرو-البنى في الكولاجين الهلاميات المائية

doi: 10.3791/53578 Published: February 12, 2016

Abstract

السقالات الأنسجة تلعب دورا حاسما في عملية تجديد الأنسجة. السقالة المثالية يجب أن تتوفر عدة شروط مثل وجود التركيبة الصحيحة، معامل المستهدفة، والسمات المعمارية واضحة المعالم. المواد الحيوية التي تلخص العمارة الجوهرية في الجسم الحي الأنسجة حيوية لدراسة الأمراض وكذلك لتسهيل تجديد الأنسجة الرخوة المفقودة والتالفة. وقد تم تطوير تقنية جديدة biofabrication الذي يجمع بين دولة من فن التصوير، ثلاثية الأبعاد الطباعة (3D)، والنشاط الأنزيمي انتقائية لخلق جيل جديد من المواد الحيوية للبحث والتطبيق السريري. المواد المتقدمة، الأبقار مصل الزلال المطاط، هي رد فعل حقن القالب الذي يدعم ميزات هندسية محددة. هذه المواد الأضاحي تتيح نقل كافية من المعالم المعمارية لمادة سقالة الطبيعية. يتكون النموذج من سقالة الكولاجين 3D مع 4 و 3 قنوات مم أن reprESENT بنية متفرعة. وتؤكد هذه الورقة استخدام هذه التقنية biofabrication لتوليد بنيات الطبيعية. هذا البروتوكول يستخدم برنامج بمساعدة الكمبيوتر (CAD) لتصنيع القالب الصلب الذي سيكون رد فعل حقن المطاط BSA تليها عملية الهضم الأنزيمي من المطاط، وترك المعالم المعمارية في غضون المواد سقالة.

Introduction

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

في مجال هندسة الأنسجة القدرة على تصنيع السقالات الأنسجة الحيوية. سقالة الأنسجة المناسبة لديها بنية 3D، وتتكون من المواد حيويا، ويقلد في الهندسة المعمارية أنسجة الجسم الحي لتسهيل نمو الخلايا والأنسجة والتجديد. هذا سقالة يجب أن يسمح بنقل المواد الغذائية وإزالة النفايات 1-4. واحدة من العقبات الرئيسية في إنتاج هذه الاطر هو القدرة على تلخيص ملامح هندسية معينة إلى مادة حيويا. وقد تم الإبلاغ عن العديد من التقنيات biofabrication للسيطرة على الميزات الهندسية من هذه الاطر، والأمثلة والعزل الكهربائي 5-8، المذيبات الصب المجسمة 10، و3D-طباعة 11، من بين أمور أخرى. هذه التقنيات تقصر في توفير نقل من السهل نسبيا من المعالم المعمارية الداخلية والخارجية يمكن السيطرة عليها، ومكلفة، وتقتصر بموجب قرار والقابليه ( > على سبيل المثال، وقياس فوهة، وتقييد المواد)، أو تتطلب تقنيات ما بعد التصنيع الذي يتطلب فترة طويلة من الوقت لإنتاج السقالات قابلة للحياة 12.

في كثير من النظم تلفيق التجارية، وخلق الفراغات الداخلية، والقنوات، والميزات وتحقيقه باستخدام الرمل أو غيرها من المواد القابلة للإزالة أو الأضاحي مناسبة. ويتكون الجزء المعدني أو البلاستيك حول القالب الرمال، وبمجرد عزز ذلك، تتم إزالة الرمال. وبنفس الطريقة، الجيل القادم من المواد الحيوية يحتاج ما يعادل biosand. لذلك، تم تطوير المطاط BSA كبديل للbiosand. المطاط BSA هو مادة صيغت حديثا والتي تتكون من ألبومين المصل البقري crosslinked مع غلوتارالدهيد. والهدف النهائي هو إعادة المعالم المعمارية محددة في سقالة الكولاجين القابلة للتحلل. ووصف خصائص biorubber الذبيحه التي تحافظ على الإخلاص الأبعاد مع قالب من الأنسجة الأصلية.

تم اختبار الحمار = "jove_content"> عدة مجموعات من تركيزات BSA وغلوتارالدهيد باستخدام مجموعة متنوعة من المذيبات. تم إنشاء هذه المواد عن طريق تفاعل بين جيش صرب البوسنة وغلوتارالدهيد. BSA المطاط يمكن أن يكون رد فعل حقنها في هندستها معقدة من القوالب الأنسجة. Crosslinked BSA والتربسين عطوب وهضمها بسهولة بواسطة انزيم في الرقم الهيدروجيني ودرجة الحرارة ظروف معتدلة. على العكس من ذلك، نوع سليمة أنا الكولاجين هو مقاومة جدا للهضم التربسين. تم رسملة هذه الميزات لإزالة انتقائي المطاط BSA ترك الكولاجين وراء. يتألف هذا العمل من تحديد المعايير المثالية اللازمة للحصول على قالب قابل للتغيير التي يمكن أن توفر ميزات معمارية محددة لسقالة حيويا. وتشمل السمات المحددة التي تم تقييمها mixability، انزيم الهضم، الحاملة، والقدرة على أن يكون رد فعل حقن في قالب سلبي. مزيج من 30٪ BSA و 3٪ غلوتارالدهيد يفي بهذه المتطلبات. يوفر هذا البروتوكول necessالمبادئ التوجيهية آرى لإنشاء هذه السقالات ثلاثية الأبعاد. يتكون النموذج من سقالة الكولاجين التي تمثل بنية متفرعة مع تدفق واحد وقناة تدفق مع اثنين من أقطار 4- و 3 ملم، على التوالي. هذه التقنية لديها القدرة على تقليد الكلي والجزئي بيئات الأنسجة من الاهتمام. توفر هذه التكنولوجيا تقنية قابلة للتطبيق لتقديم المفيد هندسي محدد لمادة قابلة للتحلل في مسألة سهلة والوقت المناسب نسبيا مع الدقة العالية، والتي يمكن ضبطها لمحاكاة في الجسم الحي مرونة الأنسجة وغيرها من الأنسجة من الاهتمام الخصائص.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

1. تحديد نسبة المواد الصلبة في الدفعة الكولاجين

  1. استخراج الكولاجين بعد إجراء نشرت سابقا 13. ذوبان الجليد ما لا يقل عن 20 مل من الكولاجين. تحديد نسبة الأولية من المواد الصلبة الكولاجين في دفعة من أجل التلاعب تركيز الكولاجين في الهلاميات المائية تشكيلها.
    1. قطع ثلاث قطع من رقائق الألومنيوم (حوالي 6 × 6 سم) وشكل كل واحد كما مقلاة باستخدام الجزء السفلي من دورق 25 مل. تسجيل وزن كل المقلاة.
    2. إضافة كمية صغيرة من الكولاجين لكل عموم وتسجيل الوزن الكلي للعموم الألومنيوم والكولاجين. إضافة 0،5-0،8 غرام من الكولاجين في كل عموم الألومنيوم.
      ملاحظة: بعد هذه الخطوة، وهناك ثلاثة المقالي رقائق الألومنيوم ويجب أن يكون كل واحد على كمية صغيرة من الكولاجين. تأكد من تسجيل وزن كل (المجموع 3) فارغة عموم الألومنيوم والوزن من المقلاة بعد إضافة الكولاجين.
    3. حساب الوزن من الكولاجين في كل عموم باستخدام وollowing الصيغة:
      الوزن الكولاجين = عموم والوزن الكولاجين - الوزن عموم
    4. وضع المقالي من الالومنيوم الثلاثة التي عقد الكولاجين في الفرن على 100 درجة مئوية لمدة 24 ساعة.
    5. بعد 24 ساعة، تسجيل وزن كل عموم الألومنيوم والكولاجين المجففة.
    6. حساب وزن الكولاجين المجففة باستخدام المعادلة التالية:
      المجففة الوزن الكولاجين = عموم والمجففة الوزن الكولاجين - الوزن عموم
    7. حساب النسبة المئوية الصلبة لثلاث عينات لتحديد تركيز الكولاجين الصلبة باستخدام المعادلة التالية:
      المعادلة 2
    8. حساب متوسط ​​المحتوى الصلب الكولاجين الدفعة باستخدام نسبة من المواد الصلبة الكولاجين لكل من العينات الثلاث.
      ملاحظة: الكولاجين التي سيتم استخدامها هو ما تبقى من الكولاجين رطب. وسوف تستخدم أيا من الكولاجين المجففة.
    9. بعد تحديد نسبة الكولاجين الصلبة (طتركيز الكولاجين nitial) الدفعة، الاستمرار في استخدام الكولاجين المائية المتبقية. استخدام متر الرقم الهيدروجيني معايرة لضبط درجة الحموضة من الدفعة الكولاجين ل3.
      1. إضافة كميات صغيرة (2-5 ميكرولتر في وقت واحد) من 12 N حمض الهيدروكلوريك (حمض الهيدروكلوريك). الحفاظ على الجليد في جميع الأوقات. لا تقم بإضافة حمض الهيدروكلوريك مباشرة إلى الكولاجين - إضافة الحامض إلى جانب الأنبوب. بعد إضافة حامض، واستخدام ملعقة لدفع حمض لالكولاجين وسرعان ما يقلب الخليط.
    10. عندما يصل الرقم الهيدروجيني من 3، والسماح للالكولاجين الجلوس O / N عند 4 درجات مئوية.

2. إعداد جيش صرب البوسنة المطاط

  1. إعداد الحل الأبقار مصل الزلال (BSA) بعد الإجراء المذكورة أدناه.
    1. يعد حل 2X الفوسفات مخزنة المالحة (PBS). إضافة إلى اثنين من أقراص برنامج تلفزيوني إلى 100 مل من الماء لجعل 0.02 حل M برنامج تلفزيوني.
    2. الجمع بين BSA مع 2X في برنامج تلفزيوني لإيجاد حل جيش صرب البوسنة 30٪ باستخدام الإجراء المذكورة أدناه.
      1. على سبيل المثال، لجعل BSA 30٪ مع 30 مل من 2X في برنامج تلفزيوني، استخدم 12.9 غرام من جيش صرب البوسنة. إضافة 1/3 من 2X في برنامج تلفزيوني (على سبيل المثال، 10 مل) إلى قارورة مع بقضيب. إضافة 1/2 من جيش صرب البوسنة (على سبيل المثال، 6.45 ز BSA) إلى القارورة وباستخدام ملعقة، والرطب المذاب الجاف.
      2. كرر هذه العملية لإضافة برنامج تلفزيوني ثم BSA حتى كل المذاب والمذيب في القارورة. استخدام ملعقة لالرطب جميع المذاب. وسوف تبدو وكأنها خليط من بعض السائل وكتل. اتركه لمدة حوالي 30 دقيقة.
      3. ثم، وتحويل النمام على دورة منخفضة والتأكد من عدم وجود كتل حول بقضيب. ينبغي أن تأخذ 90 دقيقة للحصول على كل شيء في حل أو أنها يمكن أن تترك اثارة O / N عند 4 درجات مئوية. بعد المذاب يذوب كل شيء، وضع الحل في حقنة 20 مل وتوج مع فلتر حقنة 0.20 ميكرون. اضغط على المكبس لطرد السوائل من خلال تصفية وجمع الحل تعقيمها في أنبوب جديد. تخزينها في 4 درجات مئوية.
    3. إعداد 3٪ soluti غلوتارالدهيدعلى طريق تمييع 25٪ محلول غلوتارالدهيد مع العقيمة التي تمت تصفيتها 2X في برنامج تلفزيوني. على سبيل المثال، لمدة 10 مل من 3٪ من محلول غلوتارالدهيد، استخدام 2 مل من 25٪ غلوتارالدهيد و 8 مل من 2X في برنامج تلفزيوني. تخزينها في 4 درجات مئوية.

3. قوالب العلاج

ملاحظة: النموذج هو موضح في هذه الورقة يستخدم العرف الفولاذ المقاوم للصدأ Y قالب قطعة. يحتوي القالب تدفق وتدفق قناتين من 4 و 3 ملم، على التوالي. أولا، قوالب نظيفة، رذاذ لهم مع شحم الخنزير غير المشبعة، وتعقيم لهم. إعداد قوالب باتباع الإجراء هو موضح أدناه.

  1. قوالب الصلب غير القابل للصدأ نظيفة باستخدام sonicator على تردد 35 كيلوهرتز. ضع القوالب في sonicator وغمر لهم الماء والجليد. الحفاظ على قوالب البرد في جميع الأوقات بينما sonicator قيد التشغيل. تشغيل sonicator ل2 فترات من 90 دقيقة.
    1. بعد كل فترة، واستخدام إبرة للتأكد من أنه لا يوجد مادة في بالتركيبة قفل الفولاذ المقاوم للصدأ أو بموصل الرس. استخدام الماء والصابون لتنظيف السطح بأكمله من الجانبين من القوالب. تحقق من وجود أي انسداد في القنوات.
  2. وضع قوالب، ومسامير، ولور موصل قفل في كيس الأوتوكلاف والأوتوكلاف ذلك.
  3. ملء زجاجة التي يعلقها على نصف الطريق بخاخ الهواء مع شحم الخنزير المتاحة تجاريا (الأحماض الدهنية المختلطة وكيل الافراج). استبدال الغطاء مع غطاء زجاجة العادية. وضعه في كيس الأوتوكلاف والأوتوكلاف ذلك.
    ملاحظة: يتم استخدام شحم الخنزير لتسهيل الإفراج عن المواد التي سوف يكون رد فعل حقن في وقت لاحق (BSA المطاط). لا تضع غطاء زجاجة بخاخ في autoclave- أنها يمكن أن تلحق الضرر الختم الداخلي.
  4. الاحماء شحم الخنزير لمدة 45 ثانية أو حتى في واضحة والسائل في الميكروويف. المسمار غطاء بخاخ الهواء إلى زجاجة شحم الخنزير. ربط الغطاء مع البخاخ. إرفاق بخاخ للمصدر الهواء في مقاعد البدلاء المختبر. فتح صمام الهواء، وفتح فوهة البخاخ حتى يبدأ ترطيب سطحمن منشفة ورقية.
  5. رش شحم الخنزير عمودي على سطح القالب حتى يتم تغطية السطح بالكامل. بعد أن تم رش كل قطعة، ووضعها في طبق بتري وختم عليها. ضع القوالب في 4 درجة مئوية لمدة 2 ساعة.
  6. انتقل إلى تعقيم قوالب من خلال تعريض السطح لضوء الأشعة فوق البنفسجية لمدة 30 دقيقة. وضعها مرة أخرى في 4 درجات مئوية حتى انهم على استعداد ليكون رد فعل حقن.

4. حقن رد فعل جيش صرب البوسنة المطاط

ملاحظة: جميع المواد والحل يجب أن تبقى باردة حتى جاهزة للاستخدام لمنع وضع سابق لأوانه من المطاط BSA في الخطوات التالية.

  1. إعداد موزع لتقديم المطاط BSA إلى قوالب باتباع الخطوات التالية.
    1. تعقيم كافة المكونات خلط (اثنين من الحلقات، وكأب حقنة، حقنة مزدوجة، مزيج طرف، و 4: 1 موزع) بتعريضها للأشعة فوق البنفسجية لمدة 30 دقيقة في غطاء محرك السيارة تفاعل البلمرة المتسلسل (PCR).
      ملاحظة: تم استخدام غطاء محرك السيارة PCR لرويشمل الإجراء له مثبتات. هذه المواد الكيميائية لا يمكن أن تستخدم في الخلية هود الثقافة / الأنسجة بسبب خطر التعرض والسمية على خلايا الجسم. فإن أي غطاء محرك السيارة الأخرى التي تحتوي على الأشعة فوق البنفسجية تكون مناسبة.
    2. وضع غطاء رأس على حامل حل.
    3. أداء الخلط والحقن في نسبة 4: 1 من BSA: غلوتارالدهيد. إضافة BSA 30٪ إلى غرفة مزدوجة حقنة من شأنها تقديم أكبر قدر من الحل (وسوف يستغرق حوالي 4 مل لشغل). تأكد من ترك مساحة كافية لوضع خاتم O من أجل منع التلوث تفيض ومن الغرفة المجاورة.
    4. إضافة 3٪ محلول غلوتارالدهيد إلى غرفة أخرى (سوف يستغرق حوالي 1 مل لشغل). تأكد من ترك مساحة كافية لوضع عصابة يا لمنع التلوث تفيض ومن الغرفة المجاورة.
    5. وضع حقنة مزدوجة على موزع. إمالة التجمع عموديا بحيث غطاء حقنة على رأس. استبدال الغطاء مع غيض الاختلاط.
    6. الشوري REW اثنين من الفولاذ المقاوم للصدأ قطع القالب الصلب معا.
    7. وضع التجمع داخل حقيبة الأوتوكلاف.
    8. لإزالة أي هواء في موزع، لأنه عقد في وضع مستقيم وبسرعة الضغط على المقبض مرة واحدة لإطلاق كمية صغيرة من جيش صرب البوسنة مختلطة مع غلوتارالدهيد. ثم سرعان ما نعلق موصل قفل لور من الفولاذ المقاوم للصدأ Y العفن على طرف الحقنة.
    9. عقد غير القابل للصدأ الصلب العفن Y مع اليد اليسرى وموزع خليط BSA-غلوتارالدهيد على اليمين. البديل تغطي كل من العادم الأيسر والأيمن من قنوات التدفق عن طريق الضغط على العادم على الجانبين من الحقيبة الأوتوكلاف للتأكد من ملء الفراغات الداخلية مع الحل. ثم، ضع القوالب أفقيا وحقن مرة أخرى.
    10. فصل قوالب من موزع ومكان في 25 مم طبق بيتري.
    11. وضع بارافيلم حول طبق بيتري لمنع الجفاف من المطاط.
    12. مكان القالب في الثلاجة 4 درجات مئوية O / N.

= "jove_title"> 5. ضبط تركيز الكولاجين

ملاحظة: يجب أن تظل الكولاجين على الجليد في جميع الأوقات خلال هذه العملية.

  1. تعديل تركيز الكولاجين باستخدام نسبة من المواد الصلبة الكولاجين.
    1. جعل 10 مل من 1.75٪ الكولاجين عن طريق ضبط تركيز الكولاجين الأولي بالماء البارد.
    2. باستخدام مقياس درجة الحموضة معايرة، وضبط درجة الحموضة إلى 3 باستخدام 12 N حمض الهيدروكلوريك. لا تقم بإضافة حمض الهيدروكلوريك مباشرة إلى collagen- إضافة حمض إلى جانب الأنبوب. بعد إضافة حامض، واستخدام ملعقة لدفع الحمض في الكولاجين وسرعان ما يقلب الخليط.
    3. يزن 4 غراما من الكولاجين في أنبوب مخروطي منفصل.
    4. أجهزة الطرد المركزي الكولاجين لإزالة الهواء في 4 درجة مئوية و 9343 x ج لمدة 20-30 دقيقة.
    5. الأشعة فوق البنفسجية تعقيم الخلية هود الثقافة لمدة 30 دقيقة، وإضافة 14 ميكرولتر من laminin إلى الكولاجين 4 مل. وهذا يؤدي إلى تركيز laminin النهائي من 10 ميكروغرام / ميكرولتر. ملاحظة: Laminin يقدم الصورةسلامة tructural، التصاق، وتشجع مختلف الاستجابات الخلوية.
    6. تحويل PCR ضوء الأشعة فوق البنفسجية لمدة 20-30 دقيقة قبل استخدام غطاء للتعقيم.
    7. وضع غطاء قفل لور، لنعلق على حقنة 20 مل، في الإيثانول لساعة 2. ثم، اتركه حتى يجف ووضعه في ضوء الأشعة فوق البنفسجية.
    8. غاما أشرق الكولاجين 8.6 دقيقة للوصول إلى 1200 CGY.
      ملاحظة: التوقيت سيعتمد على اضمحلال مصدر السيزيوم. ضبط الوقت للوصول إلى نفس الجرعة.

6.Casting الكولاجين في جيش صرب البوسنة المطاط

  1. لبلمرة الكولاجين، استخدم 8: نسبة 1: 1 (الكولاجين: HEPES: MEM). ويستند هذا الإجراء التالي على 4 ز الأولي من الكولاجين المحمضة (من الخطوة 5.1.8).
    1. جعل حل 0.2 N HEPES في الماء، وضبط درجة الحموضة إلى 9 وذلك بإضافة كميات صغيرة (1-5 ميكرولتر) من 1-5 M هيدروكسيد الصوديوم (هيدروكسيد الصوديوم) حل. باستخدام مقياس درجة الحموضة معايرة، ومراقبة درجة الحموضة من الحل بعد كل إضافة. تخزينها في 4 درجة مئوية أو كهالجيش الشعبي على الجليد.
    2. بدوره على ضوء الأشعة فوق البنفسجية من غطاء محرك السيارة زراعة الأنسجة لمدة 20-30 دقيقة لتعقيم غطاء محرك السيارة.
    3. ملقط الأوتوكلاف، ملعقة، ومشرط للتعقيم.
    4. خلط 1.5 مل من 0.2 N HEPES (الرقم الهيدروجيني 9) و 1.5 مل من 10X MEM باستخدام غطاء محرك السيارة زراعة الأنسجة. تأكد من أن يبقيه على الجليد ودوامة لمدة 5 ثوان قبل استخدامها. تخزين عند 4 درجات مئوية أو الحفاظ على الجليد.
    5. لتعقيم هود PCR، بدوره على ضوء الأشعة فوق البنفسجية لمدة 30 دقيقة.
    6. وضع لوحة جيدا 12 وحقنة 20 مل في -20 درجة مئوية لمدة 10 دقيقة، أو حتى على استعداد للمتابعة. ملاحظة: حافظ على جميع المواد البرد حتى جاهزة للاستخدام. الزيادة في درجة حرارة تحرض المبكرة اللييفات الكولاجين.
    7. رش جميع الأنابيب والصفائح بشكل جيد التي ستكون في غطاء محرك السيارة مع الايثانول 70٪ والسماح لهم الجافة للتعقيم. وضع حقنة 20 مل على الجليد لتبريد لاستخدامها لاحقا.
    8. في غطاء محرك السيارة PCR، فتح قوالب الصلب غير القابل للصدأ لاطلاق سراح المطاط BSA وباستخدام مشرط، وقطع قنوات العادم من ص BSAالعفن ubber.
    9. تحت غطاء محرك السيارة PCR، وفتح أنابيب الكولاجين معقمة وإضافة 1 مل من محلول HEPES-MEM (تأكد من أن قبل استخراج الحل HEPES-MEM، أنه تمتزج جيدا وليس هناك أي ودائع الصلبة).
    10. باستخدام ملعقة معقمة، مزيج دقيق الحل الكولاجين والعازلة.
    11. إغلاق ودوامة بسرعة لضمان هيدروجيل-تمتزج جيدا.
    12. نقل إلى الباردة حقنة 20 مل.
    13. بيد واحدة، أمسك BSA المطاط داخل البئر، واستخدام البعض، الاستغناء عن نصف الحل الكولاجين هيدروجيل على قاع البئر.
    14. استخدام ملاقط معقمة، تأكد من أن تدفق المطاط وتدفق الغايات ولمس جوانب البئر.
    15. صب الحل الكولاجين على الجزء العلوي من المطاط حتى يتم تغطيتها بالكامل.
    16. تأكد من أن المطاط BSA معلق داخل الكولاجين وأنه لا توجد فقاعات، وخصوصا بالقرب من طرفي المطاط.
    17. وضع غطاء والتفاف حول بارافيلممحيط البئر.
    18. وضع في الحاضنة لمدة 1 ساعة على 37 درجة مئوية. الحفاظ على ضوء الأشعة فوق البنفسجية على PCR.
  2. بعد بلمرة الكولاجين والأشعة فوق البنفسجية تشعبي هيدروجيل عبر الإجراء التالي.
    ملاحظة: وسوف يتم يشابك الكولاجين باستخدام جهاز للأشعة فوق البنفسجية crosslinker فيه كمية من الطاقة يمكن السيطرة عليها.
    1. بدوره على crosslinker الأشعة فوق البنفسجية واستخدام الإعداد الطاقة لأشرق في غرفة فارغة مع 630،000 μJ / سم 2.
    2. إزالة المواد الهلامية من الحاضنة.
    3. رش اليدين مع الإيثانول، و، داخل غرفة، وإزالة الغطاء في أسرع وقت ممكن.
    4. إغلاق غرفة والأشعة فوق البنفسجية تشعبي الهلاميات المائية عن طريق اختيار الإعداد الطاقة واضاءة 630،000 μJ / سم 2.
    5. بعد دورة يشابك، إيقاف ضوء الأشعة فوق البنفسجية على غطاء محرك السيارة PCR
    6. رش اليدين مع الإيثانول وفتح الغرفة، ووضع بسرعة الغطاء الخلفي على لوحة جيدا. نقل لوحة جيداإلى غطاء محرك السيارة PCR.
    7. باستخدام ملعقة العقيمة، وتخفيف بلطف وإزالة هلام من البئر. الوجه المواد الهلامية تحت غطاء محرك السيارة لتشعبي الجزء السفلي من هيدروجيل. كرر الخطوة 6.2.3 و6.2.4.

7. انزيم الهضم من جيش صرب البوسنة المطاط

  1. من أجل الحصول على سقالة الكولاجين جوفاء، وإزالة BSA المطاط بطريقة لا تؤثر على أبعاد جزءا لا يتجزأ من هيدروجيل. ووصف الإجراء أدناه.
    1. بدوره على ضوء الأشعة فوق البنفسجية لمدة 20-30 دقيقة لتعقيم هود زراعة الأنسجة.
    2. جعل 0.25٪ حل التربسين درجة الحموضة 7.8. على سبيل المثال، لمدة 15 مل من الماء، إضافة 0.0376 غرام من التربسين في أنبوب مخروطي 50 مل. ضبط درجة الحموضة إلى 7.8 بإضافة كميات صغيرة (2-5 ميكرولتر) من 1 M كلوريد الصوديوم. وضع الحل في حقنة 20 مل وتوج مع فلتر حقنة 0.20 ميكرون. اضغط على المكبس لطرد السوائل من خلال تصفية وجمع محلول معقم في أنبوب جديد.
    3. بدوره على الحمام المائي وضبط درجة الحرارة إلى 30° C.
    4. بعد 30 دقيقة، وإيقاف ضوء الأشعة فوق البنفسجية. رذاذ الايثانول على جميع الأنابيب والمواد التي سيتم استخدامها في غطاء محرك السيارة.
    5. نقل هيدروجيل الكولاجين تحت غطاء محرك السيارة ووضعها في أنبوب مخروطي منفصل.
    6. إضافة حوالي 3-5 مل (فقط ما يكفي لتغطية المواد الهلامية) من 0.25٪ حل التربسين مع الرقم الهيدروجيني من 7.8 إلى كل أنبوب.
    7. ختم الأنابيب مع بارافيلم ودوامة برفق لحوالي 1 دقيقة.
    8. مكان في 30 ° C حمام الماء لمدة 15-24 ساعة. بينما في حمام مائي، دوامة بخفة المواد الهلامية في كثير من الأحيان حتى يتم هضمها المطاط BSA أو إزالتها من هيدروجيل.
      ملاحظة: من أجل تحديد ما إذا تم إزالة المطاط BSA، إما المطاط يعوم في حل التربسين أو هناك قطعة المعطلة. يجب أن تكون هناك مناطق مظلمة البصرية داخل هيدروجيل.
  2. لضمان أن جميع المطاط BSA والتربسين تم إزالتها من الهلاميات المائية، وشطف كما هو موضح أدناه.
    1. تشغيل هوو PCRد ضوء الأشعة فوق البنفسجية لمدة 20-30 دقيقة.
    2. يعد حل Mosconas. الجمع بين كلوريد البوتاسيوم (بوكل، 28.6 ملم)، (NaHCO 11.9 ملم) والجلوكوز (9.4 ملم) و (ناه 2 ص 0.08 ملم) في الماء. ضبط درجة الحموضة إلى 7.4 مع 1 M هيدروكسيد الصوديوم أو 12 حل M حمض الهيدروكلوريك. وضع الحل في حقنة 20 مل واستخدام فلتر حقنة 0.20 ميكرون لتعقيم الحل.
    3. رش كل شيء مع الايثانول قبل وضعها على غطاء محرك السيارة والسماح للإيثانول لتجف.
    4. فتح الأنبوب ونقل 5-10 مل من محلول معقم Mosconas إلى 50 مل أنبوب مخروطي الشكل الجديد.
    5. نقل هيدروجيل الكولاجين لأنبوب مخروطي الشكل الذي يحتوي على حل الانزيم. تأكد من أن هيدروجيل مغطاة بالكامل مع الحل. ترك الأنبوب في شاكر في الثلاجة عند 4 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة.
    6. نضح الحل Mosconas وكرر الخطوة 7.2.5 مرتين.
    7. تخزينها في 4 درجات مئوية.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

وتظهر النتائج أن هذه التقنية biofabrication فعالة في توليد السقالات 3D التي يمكن أن تحاكي الترتيب المكاني ينظر في الجسم الحي في الأنسجة. الميزات المعمارية هي العوامل الحيوية لتطبيق هندسة الأنسجة، ولعب دورا حاسما في الخلية التفاعل في الجسم الحي وظائف الأنسجة.

كان الاتساق وmixability من المطاط BSA معيارا هاما في إنتاج المطاط BSA التي هي متجانسة وقادرة على الحفاظ على شكلها المقصود. يتم تحديد ذوبان البروتينات التي كتبها آثار الجزيئات، مثل التفاعل البروتين البروتين، والتفاعل مع المذيب، والذي يؤدي الى تغييرات في السلوك البروتين الكلي. وقد تم قياس الموصلية من الحل جيش صرب البوسنة، وهو دلالة على تركيز الملح من الحلول. ويورد الجدول 1 تواليفالإضافات من جيش صرب البوسنة، المذيبات، وغلوتارالدهيد اختبار. كما هو متوقع، والعينات التي لديها أعلى التوصيل (2X في برنامج تلفزيوني المذيبات) سهلت ذوبان جيش صرب البوسنة.

وكانت المعلمة أخرى تستخدم لتحديد حالة المناسبة لتطوير هذه المواد الأضاحي معدل التفاعل. انخفض وقت رد الفعل من BSA كما تركز غلوتارالدهيد زيادة، كما هو متوقع. تثبيتي يتفاعل مع مجموعات α الأمينية الأحماض الأمينية، وN المجموعة الأمينية الطرفية من الببتيدات، ومجموعة سلفهيدريل السيستين. غلوتارالدهيد يتفاعل في الغالب مع ديوان الرقابة المالية من خلال المجموعات الأمينية يسين لتشكيل روابط تساهمية بين الجزيئات (الشكل 1A) 14. بعد فترة الحضانة، وأظهرت عينات تغيير اللون من الأصفر الشاحب إلى الأصفر الداكن والبني، وزيادة في شدة مع زيادة تركيز غلوتارالدهيد (الشكل 1B). و20٪، 30٪، وهولم د 40٪ BSA مع 2٪ غلوتارالدهيد في المياه لا تشكل المطاط. الحل BSA 40٪، وذلك بسبب اللزوجة العالية وتثبيتي شديدة التفاعل، أسفرت متفاوتة القوة على طول المطاط. يمكن أن يكون سبب هذا السلوك حسب صعوبة غلوتارالدهيد في اختراق سلاسل البروتين متجانس. المذيب أثرت بشكل كبير على ذوبان البروتين وكذلك رد فعلها مع تثبيتي. وكانت الحلول PBS 2X قابل للمزج بسهولة. وكان الحل BSA بالماء الصعب المزيج. وBSA الذوبان تتأثر كثيرا الموصلية من المذيبات (الجدول 2)، مما تسبب تغيرات متعلق بتكوين في البروتين. وكانت العينات الواعدة 30٪ BSA مع 3٪ غلوتارالدهيد في برنامج تلفزيوني 1X و 2x برنامج تلفزيوني.

للتأكد من أن المطاط كان قادرا على القوات تحميل متواصلة، تم إجراء اختبار الضغط. تم قياس الخواص الميكانيكية للأربع عينات من المطاط BSA: 30٪ BSA 3٪ غلوتارالدهيد في2X في برنامج تلفزيوني، 30٪ BSA 3٪ غلوتارالدهيد في برنامج تلفزيوني 1X، 20٪ BSA 3٪ غلوتارالدهيد في برنامج تلفزيوني 2X و 20٪ BSA 2٪ غلوتارالدهيد في برنامج تلفزيوني 1X. أظهرت موجات الجيب تغيير المرحلة صغيرة جدا بين منحنيات الحمل والتشريد (الملحق الشكل 2) أن يتم نقلها إلى منحنيات الضغط العصبي والتوتر (الملحق الشكل 3). وبناء على الضغط العصبي والتوتر المنحنيات، أظهرت العينات الثلاثة الأولى التباطؤ في بين التحميل والتفريغ (الشكل 2A-2C). هذه العينات الثلاثة تصرف كمادة اللزجة التي تحتوي على خصائص المرونة ولزجة عندما طبقت القوات. أظهر 20٪ BSA 2٪ غلوتارالدهيد علامات تشوه دائم (الشكل 2D). أظهر 30٪ BSA 3٪ غلوتارالدهيد في برنامج تلفزيوني 1X و 2x برنامج تلفزيوني سلوك مماثل (الشكل 2E -one التحميل والتفريغ دورة). تم تحديد معامل المرونة من الجزء الخطي من هذه العينات الأربع (الشكل 2F). تركيز الفوسفاتالمذيبات زيادة كبيرة في معامل المرونة في المدى اختبار (ع = 0.03). 20٪ BSA 2٪ غلوتارالدهيد في برنامج تلفزيوني 1X تشوه بسهولة، مما يدل على معامل أقل مرونة.

لتقييم عملية الهضم الأنزيمي من المطاط، ومعدل التفاعل محسوبة على أساس اختفاء المطاط BSA عند وضعها في اتصال مع الانزيم عند نقطة زمنية محددة. كان يعالج عملية الهضم الأنزيمية بأنها مفاعل دفعة واحدة. مقارنة بين تركيز المطاط تبدأ قبل العلاج والمطاط غادر بعد أن مجفف بالتجميد وقدم للحصول على حركية عملية الهضم. ويبين الشكل 3 معدل التفاعل لكل عينة فيما يتعلق تركيز غلوتارالدهيد وديوان الرقابة المالية، المذيبات، و في وقت الإقامة. ولوحظ وجود اتجاه واضح بين تركيزات crosslinker ومعدل التفاعل من تفكك الكيان. تم إجراء التحليل الإحصائي في كل نقطة زمنية. للعشره-15 ساعة نقطة زمنية، وتركيز غلوتارالدهيد تأثيرا كبيرا على معدل التفاعل مما أسفر عن قيمة ا ف ب 0.02 (الملحق الجدول 4). بعد ذلك نقطة زمنية، كل من غلوتارالدهيد وتركيز BSA تأثيرا كبيرا على معدل (الملحق الجدول 5-7). وكان العامل الأكثر تأثيرا عموما تركيز غلوتارالدهيد، وأشار إلى قيمة احتمالية أكثر أهمية. الزيادة في تركيز غلوتارالدهيد انخفض معدل التفاعل من هضم الكيان المطاط.

تم تحديد كمية البروتين المذاب بواسطة التربسين باستخدام مقايسة BCA (الشكل 4). ولوحظ وجود اتجاه مشترك: انخفاض تركيز تثبيتي، واستيعاب المزيد من البروتين من المطاط BSA. تفاعلت التربسين مع عينة المطاط التي كتبها الشق جيش صرب البوسنة والتي تم إنشاؤها حديثا الرابطة التساهمية التي شكلتها غلوتارالدهيد، وبالتالي حل الهيكل العام علىمرة. ويبدو أنه مع برنامج تلفزيوني 1X هناك المزيد من البروتين بالفاعلات عند نقطة زمنية سابقة بالمقارنة مع 2X في برنامج تلفزيوني. مع مرور الوقت، هناك زيادة البروتينات في حل في 15 ساعة، والتي استمرت في الزيادة حتى 48 ساعة وبعد ذلك انخفضت. قد يكون هذا يرجع إلى التربسين الشق باستمرار البروتينات، وبالتالي خلق الببتيدات الصغيرة والأحماض الأمينية. ويمكن أيضا أن يعزى إلى القيود الفحص، والتي يمكن قراءتها فقط الببتيدات التي تتكون من ثلاثة أو أكثر من الأحماض الأمينية. وأظهر التحليل الإحصائي أن تركيز BSA وغلوتارالدهيد تأثيرا كبيرا على الافراج عن البروتين من المطاط BSA (ع <0.05). تسبب زيادة في تركيز BSA زيادة البروتين في طاف، في حين أن الزيادة في غلوتارالدهيد تسبب انخفاضا في البروتين المذاب.

لقياس تفكك هذه المواد الأضاحي، كان وزنه المطاط (أساس رطب) قبل وضعه في حساب المشتركط م مع التربسين. تم تحديد ما يعادل وزن جاف من المطاط توضع في حل انزيم الهضم باستخدام القيم هو مبين في الملحق الرقم 1. كان رد فعل حل الانزيم مع المطاط جيش صرب البوسنة، وبالتالي، بالفاعلات البروتين. وقد مجفف بالتجميد المطاط المتبقية بعد العلاج O / N وزنه. ويبين الشكل 5 أن المذيب أثرت على التفكك من المطاط. في نفس التركيز من جيش صرب البوسنة وغلوتارالدهيد، احتفظت المطاط المذيبات 2X في برنامج تلفزيوني أكثر من موادها مقارنة مع برنامج تلفزيوني 1X.

ملفقة ثلاث قطع قالب الصلبة: حلقة القالب (الملحق الشكل 4A)، قطعة والاستقرار (الملحق الشكل 4B)، وY القالب (الشكل 6A، يسار). تم إنشاء الفولاذ المقاوم للصدأ Y قالب قطعة باستخدام آلة Microlution (الشكل 6A، يمين). وكان هذا القالب رد فعل حقن مع 30٪ BSA و 3٪ glutaraldeهايد في 2X في برنامج تلفزيوني (الشكل 6B، يسار). وسمح المطاط للرد O / N عند 4 درجات مئوية. ومسبوكة المطاط مع الكولاجين (الشكل 6B، وسط) ثم هضمها انزيم (الشكل 6B، يمين). وتشير البيانات الأولية إلى أن في الرقم الهيدروجيني 7.8 ودرجة حرارة 30 درجة مئوية لمدة 15 ساعة، والمطاط BSA يمكن هضمها مع تأثير ضئيل على سقالة الكولاجين. بعد 15 ساعة، وضعفت المطاط بواسطة انزيم وفضفاضة لدرجة أنه يترك القنوات دون التأثير على ميزات هندسية من الكولاجين. تم إنشاء الكولاجين سقالة 3D يحتوي على ميزات هندسية محددة. الشكل 6B (يمين) يدل على قناة قطر 4 مم داخل هيدروجيل الكولاجين بعد الهضم انزيم من المطاط BSA. وقد تم قياس القناة مع الفرجار لضمان أن البعد الأصلي والمحافظة عليها. في الواقع، كانت القناة الجديدة في هيدروجيل الكولاجين 4 مم. يمكن للقوالب من المطاط BSA عقد أبعاد صغيرة مثل 300 ميكرون، والذي تم اختباره لناجي القالب الاستقرار (الشكل 7). تم اختبار هذه الاطر لغلوتارالدهيد المتبقية ولم نعثر على أي بقايا بعد يغسل Mosconas.

الشكل 1
الشكل 1. BSA المطاط. (A) BSA المطاط رد فعل. غلوتارالدهيد crosslinks جيش صرب البوسنة خلال خلق روابط تساهمية. (ب) BSA المطاط. تم محمل تركيزات مختلفة من جيش صرب البوسنة، وتركيزات غلوتارالدهيد، ونوع المذيب على 24 لوحات جيدا وكان رد فعل O / N عند 4 درجات مئوية. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الشكل 2
الشكل 2. منحنيات الإجهاد والانفعال من المطاط BSA. منحنيات الإجهاد والانفعال من BSA رو bbers. (أ) 30٪ BSA 3٪ غلوتارالدهيد في 2X في برنامج تلفزيوني. (ب) 30٪ BSA 3٪ غلوتارالدهيد في برنامج تلفزيوني 1X. (ج) 20٪ BSA 3٪ غلوتارالدهيد في 2X في برنامج تلفزيوني. و (D) 20٪ BSA 2٪ غلوتارالدهيد في برنامج تلفزيوني 1X (3 دورات). منحنيات AC المعرض المطاط التي لديها بعض hysteris، ولكن العودة إلى شكلها الأصلي. يظهر عينة D المطاط مع معامل مرونة منخفضة جدا أن بتشوهات بسهولة بشكل دائم أثناء عمليات التحميل والتفريغ. عينة A و B أظهر سلوكا مماثلا جدا كما رأينا في التحميل والتفريغ دورة واحدة على الرسم البياني E (ممثل دورة واحدة من كل عينة). وقد تأثر مرونة من تركيز تثبيتي، والمذيبات المستخدمة (F). عرض العينات زيادة كبيرة في معامل بزيادة أملاح (** ف <0.05). تسبب تركيز تثبيتي أعلى زيادة كبيرة في مرونة المطاط BSA (* P <0.05).arget = "_ فارغة"> الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الشكل (3)
الشكل 3. سرعة التفاعل من تفكك المطاط BSA. كما يزيد من تثبيتي، يقلل من معدل التفاعل لجميع العينات في برنامج تلفزيوني 1X (A)، 2X في برنامج تلفزيوني (B)، والمياه (C). 40٪ BSA 2٪ غلوتارالدهيد في 2X في برنامج تلفزيوني يظهر واحد من أعلى معدلات التفاعل. ويرجع ذلك إلى صعوبة واجهتها في جعل بروتين BSA متجانسة. (الأزرق: 20٪ BSA، الأرجواني: 30٪ BSA، والأحمر: 40٪ BSA). الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الشكل (4)
الشكل 4. البروتين quantifi الموجبة بعد انزيم الهضم. كما يزيد من تثبيتي، والبروتين المذاب من المطاط النقصان لجميع العينات في برنامج تلفزيوني 1X (A)، 2X في برنامج تلفزيوني (B)، والمياه (C). (الأزرق: 20٪ BSA، الأرجواني: 30٪ BSA، والأحمر: 40٪ BSA). الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الرقم 5
الرقم 5. المطاط الهضم، ونحن عازمون على كمية من المطاط هضمها بمقارنة البداية وإنهاء المنتجات أساس الجافة. حصلنا على أقل قدر من الهضم على عينة غلوتارالدهيد 6٪ وأكثر بنسبة 30٪ BSA 2٪ غلوتارالدهيد في برنامج تلفزيوني 1X. الرجاء النقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.

ove_content "FO: المحافظة على together.within الصفحات =" 1 "> الشكل (6)
الشكل 6. متفرع النموذج (أ) تمثيل فرع الأوعية الدموية. يظهر على اليسار هو الصلبة التي تم إنشاؤها في MASTERCAM التي تم تحويلها إلى رمز G وملفقة باستخدام Microlution 363-S كما هو ظاهر على الحق. وغير القابل للصدأ الصلب العفن قطعة يمثل قناة تدفق 4 ملم مع قنوات تدفق يومين 3MM. (ب) 3D الكولاجين سقالة. يظهر على اليسار هو المطاط BSA التي تستخدم القالب هو مبين أعلاه. يظهر مركز المطاط جزءا لا يتجزأ من هيدروجيل الكولاجين. تظهر على اليمين هي قنوات اليسار ضمن سقالة الكولاجين بعد هضمها المطاط الانزيم. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

ftp_upload / 53578 / 53578fig7.jpg "/>
الرقم 7. BSA القناة. تمت إزالة القناة 300 ميكرون BSA من الاستقرار قطعة العفن. هناك طبقة رقيقة من وكيل الافراج عن القالب حول القناة. وتتميز منطقة إضافية بوضوح تحت المجهر ويمكن إزالتها بسهولة. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

BSA (٪) Glutaldehyde (٪)
20 2
20 3
20 6
30 2
30 3
30 6
40 2
40 3
6

كانت مختلطة الجدول 1. المعلمات المطاط BSA BSA وتثبيتي في 4: 1 نسبة استخدام ثلاثة أنواع مختلفة من المذيبات.

عينة الموصلية (MS / سم) الرقم الهيدروجيني
BSA (٪) مذيب
30 2X في برنامج تلفزيوني 11.43 7.06
30 برنامج تلفزيوني 1X 6.35 7.05
30 DI 2.39 6.76
20 2X في برنامج تلفزيوني 13.00 6.92
20 برنامج تلفزيوني 1X 8.67 7.09
20 DI 2.08

الجدول 2. التوصيل ودرجة الحموضة من عينات BSA. تم قياس التوصيلات والرقم الهيدروجيني للحلول BSA في وجود أنواع مختلفة من المذيبات. تظهر زيادة في التوصيل بين 2X و برنامج تلفزيوني 1X.

6
BSA (٪) غلوتارالدهيد (٪) مذيب الملاحظات
20 2 برنامج تلفزيوني 1X لينة، المواد القابلة للتشوه سهلة
20 3 برنامج تلفزيوني 1X لينة ولكن أكثر قوي من 2٪ غلوتارالدهيد
20 6 برنامج تلفزيوني 1X قاسية، وقليلا هش
30 2 برنامج تلفزيوني 1X الاتساق جيدة
30 3 برنامج تلفزيوني 1X الاتساق جيدة
30 6 برنامج تلفزيوني 1X هش
40 2 برنامج تلفزيوني 1X متناقضة للغاية في خلق هلام / المطاط الاتساق
40 3 برنامج تلفزيوني 1X اتساق تختلف على عينة
40 6 1X PBS هش
20 2 2X في برنامج تلفزيوني لينة، المواد القابلة للتشوه سهلة ولكن أكثر قوي من العينة برنامج تلفزيوني 1X
20 3 2X في برنامج تلفزيوني لينة ولكن صلابة من 2٪
20 6 2X في برنامج تلفزيوني الاتساق جيدة
30 2 2X في برنامج تلفزيوني الاتساق جيدة، أكثر studry من مع برنامج تلفزيوني 1X
30 3 2X في برنامج تلفزيوني الاتساق جيدة، أكثر studry من مع برنامج تلفزيوني 1X
30 2X في برنامج تلفزيوني mixability جيدة ولكن britle
40 2 2X في برنامج تلفزيوني اتساق تختلف على عينة
40 3 2X في برنامج تلفزيوني اتساق تختلف على عينة
40 6 2X في برنامج تلفزيوني اتساق تختلف على طول العينة وكان هش
20 2 ماء لم تشكل مادة هلامية / مادة المطاط
20 3 ماء شكلت جل ولكن يبدو أكثر صلابة رانه برنامج تلفزيوني 1X و 2x برنامج تلفزيوني، يتعارض
20 6 ماء شكلت جل ولكن يبدو أكثر صلابة من برنامج تلفزيوني 1X و 2x برنامج تلفزيوني، يتعارض
30 2 ماء لم تشكل مادة هلامية / مادة المطاط
30 3 ماء شكلت جل ولكن يبدو أكثر صلابة من برنامج تلفزيوني 1X و 2x برنامج تلفزيوني، يتعارض
30 6 ماء شكلت جل ولكن يبدو أكثر صلابة من برنامج تلفزيوني 1X و 2x برنامج تلفزيوني، يتعارض
40 2 ماء لم تشكل مادة هلامية / المطاط العتادالله
40 3 ماء اتساق تختلف على طول العينة - صلابة على رأس
40 6 ماء اتساق تختلف على طول العينة - صلابة على رأس

الجدول 3. BSA المطاط، وبعد رد فعل المطاط BSA O / اتخذ N، 8 ملم حفرة خزعة لكمة من العينة. ويتضمن هذا الجدول بعض الملاحظات البصرية من الاتساق ومظهر من العينات.

الشكل التكميلي 1
وكان الملحق الشكل 1. نسبة الصلبة، ونسبة المواد الصلبة من كل المطاط تحديد (وزن جاف / الوزن الرطب). لم المذيب لا يؤثر على percentaجنرال الكتريك من المواد الصلبة (P> 0.05). يرجى النقر هنا لتحميل هذا الملف.

الشكل التكميلي 2
الملحق الشكل 2. موجة جيبية من 30٪ BSA 3٪ غلوتارالدهيد 2X في برنامج تلفزيوني. ويبين الحمل الضغط والتشريد من العينة وظائف من الوقت المنقضي. يرجى النقر هنا لتحميل هذا الملف.

الشكل التكميلي 3
وحسبت الملحق الشكل 3. موجة جيبية من 30٪ BSA 3٪ غلوتارالدهيد 2X في برنامج تلفزيوني، والضغط العصبي والتوتر من العينة وتآمر بوصفها وظيفة من الوقت المنقضي. هناك مرحلة التحول صغيرة، ومؤشراتالفعل cative السلوك اللزجة من المطاط. يرجى النقر هنا لتحميل هذا الملف.

الشكل التكميلي 4
الملحق الشكل 4. المواد الصلبة MASTERCAM. (A) حلقة و (ب) الاستقرار قطعة. بعد تصميم هذه باستخدام MASTERCAM، تم استيرادها رمز G والفولاذ المقاوم للصدأ أو النحاس قطعة باستخدام آلة Microlution أو قطعة جيش التحرير الشعبى الصينى باستخدام Makerbot 3D المكرر. الرجاء النقر هنا لتحميل هذا الملف.

حدود دقيقة ماكس
-17 3
نزوح (مم) -15 0.3
موجة المستوى 1 المستوي 2 التردد (هرتز) دورة
جيب -15 -3 1 5000
الحصول على البيانات
وقت الفحص 1.008
نقاط المسح الضوئي 360
عدد من المسح </ td> 5
مسح لاحق 1.008 ثانية بين المسح الضوئي

ملحق الجدول 1. المعلمات اختبار ضغط. عن طريق موجة جيبية، تم تحديد العلاقة بين الحمل والتشريد لأربعة أنواع من المطاط. يرجى النقر هنا لتحميل هذا الملف.

نتائج أنوفا
مدافع SS الآنسة F أهمية F
تراجع 3 9.85E + 02 3.28E + 02 4.70E + 02 1.06E-18
المتبقي 20 1.40E + 01 6.99E-01
مجموع 23 9.99E + 02
تحليل الانحدار
معاملات خطأ قياسي ر ستات ف قيمة
اعترض 1.74E + 00 8.23E-01 2.12E + 00 4.70E-02
BSA (٪) 7.82E-01 2.09E-02 3.74E + 01 5.49E 20
غلوتارالدهيد (٪) 3.17E-01 </ td> 1.03E-01 3.09E + 00 5.71E-03
مذيب 2.61E + 01 2.22E + 01 1.18E + 00 2.53E-01

الملحق الجدول 2. التحليل الإحصائي من نسبة المواد الصلبة في المطاط BSA، وديوان الرقابة المالية وغلوتارالدهيد تتأثر بشكل كبير من نسبة المواد الصلبة. لم المذيب لا يؤثر على نسبة من المواد الصلبة. يرجى النقر هنا لتحميل هذا الملف.

نتائج أنوفا
مدافع SS الآنسة F أهمية F
تراجع 3 3.06E + 05 1.02E + 05 1.18E + 01 4.00E-03
المتبقي 7 6.07E + 04 8.67E + 03
مجموع 10 3.67E + 05
تحليل الانحدار
معاملات خطأ قياسي ر ستات ف قيمة
اعترض 6.50E + 02 4.25E + 01 1.53E + 01 1.23E-06
BSA (٪) 4.67E + 00 3.80E + 01 1.23E-01 9.06E-01
مذيب 1.02E + 02 3.80E + 01 2.67E + 00 3.20E-02
غلوتارالدهيد (٪) 1.16E + 02 5.70E + 01 2.03E + 00 8.21E-02

الملحق الجدول 3. التحليل الإحصائي للمعامل المرونة المتعلقة تركيز برنامج تلفزيوني. يتأثر تركيز برنامج تلفزيوني كبير في معامل مرونة. زيادة الأملاح في المذيب تسبب زيادة في معامل مرونة. يرجى النقر هنا لتحميل هذا الملف.

أنوفا النتيجة
مدافع SS الآنسة F أهمية F
تراجع 3 6.15E 15 2.05E 15 3.68E + 00 1.67E-02
المتبقي 60 3.34E-14 5.57E-16
مجموع 63 3.96E-14
تحليل الانحدار
معاملات خطأ قياسي ر ستات ف قيمة
اعترض 3.74E-08 1.37E-08 2.74E + 00 td> 8.03E-03
BSA (٪) 3.89E 10 3.62E 10 1.07E + 00 2.88E-01
غلوتارالدهيد (٪) -5.92E-09 1.83E-09 -3.23E + 00 2.02E-03
مذيب -6.78E-08 3.76E-07 -1.80E-01 8.58E-01

الملحق الجدول 4. التحليل الإحصائي للمعدل التفاعل بعد 15 ساعة من عملية الهضم الانزيم، والتركيز غلوتارالدهيد تأثيرا كبيرا على معدل التفاعل من هضم المطاط من خلال خفض بتركيزات غلوتارالدهيد أعلى. يرجى النقر هنا لتحميل هذا الملف.

ه = "1"> P-قيمة
نتائج أنوفا
مدافع SS الآنسة F أهمية F
تراجع 3 7.36E 15 2.45E 15 3.62E + 01 1.21E-13
المتبقي 62 4.20E 15 6.78E-17
مجموع 65 1.16E-14
تحليل الانحدار
معاملات خطأ قياسي ر ستات
اعترض 2.98E-08 4.77E-09 6.25E + 00 4.22E-08
BSA (٪) 4.56E 10 1.26E 10 3.62E + 00 6.03E-04
غلوتارالدهيد (٪) -6.04E-09 6.15E 10 -9.82E + 00 3.00E-14
مذيب -6.57E-08 1.31E-07 -5.02E-01 6.17E-01

الملحق الجدول 5. التحليل الإحصائي للمعدل التفاعل بعد 24 ساعة من عملية الهضم الانزيم، والتركيز BSA وغلوتارالدهيد تأثيرا كبيرا على معدل التفاعل من هضم المطاط. بتركيزات غلوتارالدهيد أعلى، هناك انخفاضا في تيكان معدل التفاعل. في تركيزات BSA أعلى، هناك زيادة في معدل التفاعل. يرجى النقر هنا لتحميل هذا الملف.

نتائج أنوفا
مدافع SS الآنسة F أهمية F
تراجع 3 3.10E 15 1.03E 15 2.74E + 01 1.64E-11
المتبقي 64 2.42E 15 3.78E-17
مجموع 67 5.52E 15
تحليل الانحدار
معاملات خطأ قياسي ر ستات ف قيمة
اعترض 2.17E-08 3.50E-09 6.20E + 00 4.55E-08
BSA (٪) 2.13E 10 9.20E-11 2.31E + 00 2.39E-02
غلوتارالدهيد (٪) -3.94E-09 4.53E 10 -8.70E + 00 1.90E-12
مذيب 3.04E-08 9.57E-08 3.18E-01 7.51E-01

الملحق الجدول6. التحليل الإحصائي للمعدل التفاعل بعد 48 ساعة من عملية الهضم الانزيم، والتركيز BSA وغلوتارالدهيد تأثيرا كبيرا على معدل التفاعل من هضم المطاط. بتركيزات غلوتارالدهيد أعلى، وجود انخفاض في معدل التفاعل. يرجى النقر هنا لتحميل هذا الملف.

نتائج أنوفا
مدافع SS الآنسة F أهمية F
تراجع 3 2.19E 15 7.29E-16 3.05E + 01 3.56E-12
المتبقي 61 1.46E 15 2.39E-17
مجموع 64 3.64E 15
تحليل الانحدار
معاملات خطأ قياسي ر ستات ف قيمة
اعترض 1.05E-08 2.84E-09 3.69E + 00 4.80E-04
BSA (٪) 3.61E 10 7.48E-11 4.83E + 00 9.48E-06
غلوتارالدهيد (٪) -3.07E-09 3.69E 10 -8.33E + 00 1.21E-11
هكذاlvent 3.97E-08 7.80E-08 5.09E-01 6.12E-01

الملحق الجدول 7. التحليل الإحصائي للمعدل التفاعل بعد 72 ساعة من عملية الهضم الانزيم، والتركيز BSA وغلوتارالدهيد تأثيرا كبيرا على معدل التفاعل من هضم المطاط. بتركيزات غلوتارالدهيد أعلى، وجود انخفاض في معدل التفاعل. في تركيزات BSA أعلى، هناك زيادة في معدل التفاعل. يرجى النقر هنا لتحميل هذا الملف.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Biofabrication هو حقل متعدد التخصصات للغاية التي تندمج علم الأحياء والهندسة مبادئ لتوليد المواد المعقدة التي تحاكي الأنسجة الأم. من أجل تحقيق ذلك، هناك حاجة إلى تطوير التقنيات التي تستخدم المعلومات التي تم جمعها من في الجسم الحي الأنسجة وترجمتها إلى سقالة في المختبر. وبهذه الطريقة، منبرا يمكن هندستها التي تشبه خصائص المعمارية والفنية، والميكانيكية للأنسجة في الجسم الحي. المواد السقالات المثلى يجب أن تمتلك خصائص معينة، مثل أن تكون حيويا، تحاكي الخواص الميكانيكية للأنسجة الفائدة، وتكون قادرة على تدهور تسيطر عليها، وقادرة على دعم بقاء الخلية، وقادرة على السماح الأنسجة إعادة عرض 2،3.

وقد تم تطوير العديد من تقنيات التصنيع لتوليد قابلة للحياة، بنيات ثلاثية الأبعاد. وتندرج هذه التقنيات في فئتين رئيسيتين: والتقليديتقدم د. وتشمل التقنيات التقليدية واستخدام المواد التقليدية الاصطناعية والطبيعية لجعل هياكل التي يسهل اختراقها. بعض الأمثلة المذيبات الصب، وتجميد التجفيف، وتذوب الصب. ومن عيوب هذه التقنيات ضعف مراقبة المسامية داخل هيكل (حجم المسام والترابط المسام)، وصعوبة اتخاذ القنوات الداخلية في السقالات. وتشمل التقنيات المتقدمة المجسمة و الصب و الطباعة 3D، والعزل الكهربائي، من بين أمور أخرى 1. هذه التقنيات لها عيوب مثل عدم وجود قنوات المعمارية المصغرة بعيدة المدى، اختيار المواد لتوفير القوة الميكانيكية المثلى في حين يجري قادرة على الاستغناء من خلال فتحات صغيرة القطر، وتحسين تعتمد على المواد، تتطلب واسعة النطاق في مرحلة ما بعد المعالجة التي قد تكون سامة، و تقييد في تصميم أبنية الداخلية في بناء في المختبر. والعيب الرئيسي في الطباعة 3D هو توافر المواد الحيوية التي هي ناقلات خلية كافية، في حين وجود أيضا في الخواص الميكانيكية اللازمة للحفاظ على تنظيم المعمارية المحددة 12. التكنولوجيا المعروضة هنا تضم ​​كلا تقنيات التصنيع التقليدية والمتطورة. ويستمد هذا أفضل ما في العالمين من تقارب التصنيع بمساعدة الحاسوب لخلق، أو الاستيراد، والهندسة المعمارية المطلوبة مع وضع المطاط انزيم قابل للتغيير. تم إنشاء قوالب الصلب غير القابل للصدأ باستخدام آلة الطحن، ولكن تصنيعها لا يقتصر على هذه التقنية. باستخدام طابعة 3D (على سبيل المثال، Makerbot)، ملفقة نفس قوالب من عديد حمض اللبنيك (PLA). تم المضروب القوالب السلبية باستخدام توجيهات المعمارية التي صممها برنامج CAD، الذي يوفر قوالب صلبة خلق نقل سهلة وموثوقة من الميزات لجميع المواد. هذه التكنولوجيا هي كبيرة لأنه لا يسمح للسيطرة على تكوين الأنسجة الخارجية، ولكن أيضا للبنية الداخلية معقدة للغاية. العمل المقدم هنايركز في المقام الأول على توصيف المطاط جيش صرب البوسنة، والتي يمكن أن تكون مختلطة متجانس، يتم هضمها بسهولة في كمية معقولة من الزمن، كانت مقاومة للتغييرات في هيكلها، وغير قادرة على تقليد ملامح دقيقة، في حين عقد استقراره خلال عملية الصب . تم اختبار الحد من هذه التقنية وقرار المواد الأضاحي يمكن الحفاظ على أبعاد صغيرة مثل 300 ميكرون في القطر. ومع ذلك، الشكل 7 تبين أن القناة محاطة بطبقة رقيقة من وكيل الافراج عن القالب. باستخدام المجهر، وهذه المنطقة هي إضافية مميزة بشكل واضح ويمكن إزالتها أن يكون البعد المطلوب. هذه التقنية تسمح biofabrication تكرار مجموعة واسعة من الهياكل الداخلية التي تتراوح بين المستويين الكلي لحجم الصغير.

الزلال في الدم هو البروتين الأكثر وفرة في الدورة الدموية. منذ البروتينات هي polyelectrolytes، تم تحديد الذوبان بواسطة التفاعلات كهرباء 15-17. وقد تبين أنه في تركيز الملح منخفضة، هناك التمليح في التأثير على البروتين تسهيل ذوبانه 18. غلوتارالدهيد هو عامل يشابك أن يسبب تغيرات في خصائص الزلال. ويعزى هذا التغيير اللون هو مبين في الشكل 1 إلى تشكيل الروابط ألديمين 19-21. غلوتارالدهيد يتفاعل في الغالب مع ديوان الرقابة المالية من خلال المجموعات الأمينية يسين لتشكيل روابط تساهمية بين الجزيئات 14. وتشير البيانات إلى أن زيادة الأملاح تحسين مرونة المطاط (من برنامج تلفزيوني 1X إلى 2x PBS). تركيز غلوتارالدهيد أعلى تنتج المواد الهلامية أشد التي وضعت في وقت سابق مقارنة مع تلك التركيز المنخفض. ومع ذلك، فهي أكثر صعوبة الاستغناء، مزيج متجانس، وأنها تشكل المواد الهلامية هشة. لتوفير كمية مناسبة من BSA المطاط في قوالب، يجب أن تبقى كل جزء من التجمع البارد بسبب ارتفاع درجات الحرارة تسريع غلوتارالدهيد ورد فعل جيش صرب البوسنة.المطاط المثالي (30٪ BSA 3٪ غلوتارالدهيد في 2X برنامج تلفزيوني أو برنامج تلفزيوني 1X) يتصرف كمادة اللزجة التي يمكن أن تحمل التحميل دون تشويه بشكل دائم. هذا يصبح من المهم جدا عند التعامل مع وصب مادة حول هيكل المطاط BSA.

التربسين هو الأنزيم البروتيني سيرين أن hydrolyzes البروتينات. التربسين هو انزيم المستخدمة على نطاق واسع أن يحتوي على نسبة عالية التحديد الانقسام. فإنه يشق سلاسل الببتيد أساسا في الجانب الكربوكسيل من ليسين الأحماض الأمينية وأرجينين 22. BSA قابل للذوبان بسهولة في تركيزات منخفضة في الماء، والتربسين هضمها بسهولة المطاط BSA ترك الكولاجين سليمة وبمنأى نسبيا. فإن المواد ليس لديها أي اتصال مع الخلايا. تم اختبار بناء على وجود غلوتارالدهيد الحر وعدم وجود آثار لهذا مثبت. وهذا يدل على فعالية المطاط BSA كمادة فداء لbiofabrication. في هذا البروتوكول، واستخدمت الكولاجين والمواد سقالة، ولكن أي بعد التمديدمادة لها التي هي مقاومة للهضم التربسين يمكن أن تستخدم.

وسوف تركز العمل في المستقبل بشأن إعادة تشكيل مكونات الأوعية الدموية داخل الهلاميات المائية من قبل بذر السقالة مع الخلايا البطانية والخلايا الليفية. أحد التحديات هو خلق توزيع موحد للخلايا في جميع أنحاء داخل القنوات التي تحاكي توزيع 3D الأصلي. لمعالجة هذه المسألة، ويجري تطوير استراتيجية تسمح الختم أو يسد القنوات وحقن تعليق خلية. المادة المختبرة هي F127 pluronic، وهو جل thermoreversible والسائلة في 4 درجات مئوية، وصلب فوق 30 درجة مئوية 23،24. وكان تركيز عال من pluronic الناجحة في إنشاء الختم الزمني اللازم. بعد تعليق خلية ضمن قنوات السقالة، يتم تدوير الكيان لفترة محددة من الوقت حتى تلتزم الخلايا لجميع الاطراف من هيكل 3D. والقناة الداخلية لديها وسائل الاعلام كاف للحفاظ علىبقاء الخلية. يحافظ Pluronic شكل هلام وغير القابلة للذوبان بسهولة في بيئة مائية. مرة واحدة تلتصق الخلايا، سيتم غمرها هيدروجيل مع وسائل الإعلام، ويمكن تربيتها في ظروف ثابتة أو تدفق، وهذا يتوقف على الغرض من الدراسة. وهذه المنهجية مزيد من التقييم وسوف تصبح متابعة لهذا المنشور. ويجري حاليا استخدام تقنية biofabrication الموصوفة هنا لتطوير نسخة طبق الأصل سقالة في الشريان الكلوي البشري. ويمكن أن يتم نفس النهج مع أنواع أخرى من الأنسجة، مثل أمراض القلب، إلى توسيع إمكانية تطبيق هذه التقنية لمجموعة واسعة من التطبيقات السريرية.

تقنية biofabrication وضعت هنا هو خطوة إلى الأمام في توليد في المختبر السقالات التي يمكن أن ألخص ملامح هندسية الجوهرية بسرعة وبشكل موثوق. والمواد الطبيعية، مثل الكولاجين واختير، لأنه يقدم العظة المادية للخلايا على المواد الاصطناعية الكيميائية الأمثل و. هذه ناالمواد تورال يمكن أن تستخدم في البحوث العلاجية، كما هو الحال في المختبر نماذج التنمية، تشوه، والأنسجة المرض، فضلا عن استبدال الأنسجة التالفة.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

الكتاب ليس لديهم ما يكشف.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Collagen type I Collagen extracted from calf hide
Hydrocloric Acid (HCl) Sigma-Aldrich 7647-01-0
Phosphate Buffer Solution (PBS Tablets) MP Biomedical U5378 1 tablet per 100 ml makes 1x PBS
Albumium from bovine serum (BSA) Sigma-Aldrich A9647
Glutaraldehyde Sigma -Aldrich G5882 Toxic
Lard Fields 3090
Stainless Steel Molds Milled using Microlution Machine
Air Brush Kit Central Pneumatic 47791
Mixing Tip for double syringe Medmix ML2.5-16-LLM Mixer, DN2,5X16, 4:1 brown, med
Small O ring for double syringe Medmix PPB-X05-04-02SM Piston B, 5 ml, 4:1, PE natural
Double Syringe cap  Medmix VLX002-SM Cap, 4:1/10:1, PE brown, med
Big O ring for double syringe Medmix PPA-X05-04-02SM Piston A, 5 ml, 4:1
Double Syringe Medmix SDL X05-04-50M Double syringe, 5 ml, 4:1
Double Syringe Dispenser Medmix DL05-0400M Dispenser, 5 ml, 4:1, med , plain
Laminim 3.6 mg/ml - extracted USC lab
20 ml Syringe Luer Lock Tip BD 302830
Luer Lock Caps Fisher JGTCBLLX
HEPES Sigma -Aldrich H4034
Gibco Minimum Essential Media 10x (MEM) Life Technologies 1143-030
Trypsin Life Technologies 27250-018
UV Crosslinker  Spectroline UV XLE1000
Sodium Cloride (NaCl) Fisher S271-10 To prepare Mosconas
Potassium chloride (KCl) Sigma -Aldrich P5405-250 To prepare Mosconas
Sodium Bicarbonate (NaHCO3) Fisher BP328-500 To prepare Mosconas
Glucose Sigma -Aldrich G-8270 To prepare Mosconas
Sodium Phosphate didasic (NaH2PO4) Sigma-Aldrich S-7907 To prepare Mosconas
Sterile Filter for syringes Corning 431224

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Kundu, J., Pati, F., Hun Jeong, Y., Cho, D. W., Cho, D. W. Biofabrication. Forgacs, G. abor, Sun, W. ei William Andrew Publishing. 23-46 (2013).
  2. Vats, A., Tolley, N. S., Polak, J. M., Gough, J. E. Scaffolds and biomaterials for tissue engineering: a review of clinical applications. Clin. Otolaryngol. 28, 165-172 (2003).
  3. Chan, B. P., Leong, K. W. Scaffolding in tissue engineering: general approaches and tissue-specific considerations. Eur Spine J. 17, s467-s479 (2008).
  4. Salerno, A., Di Maio, E., Iannace, S., Netti, P. A. Tailoring the pore structure of PCL scaffolds for tissue engineering prepared via gas foaming of multi-phase blends. J. Porous Mater. 19, 181-188 (2011).
  5. Hasan, A., et al. Electrospun scaffolds for tissue engineering of vascular grafts. Acta Biomater. 10, 11-25 (2014).
  6. Huang, Z. -M., Zhang, Y. Z., Kotaki, M., Ramakrishna, S. A review on polymer nanofibers by electrospinning and their applications in nanocomposites. Compos. Sci. Technol. 63, 2223-2253 (2003).
  7. Sell, S. A., McClure, M. J., Garg, K., Wolfe, P. S., Bowlin, G. L. Electrospinning of collagen/biopolymers for regenerative medicine and cardiovascular tissue engineering. Adv. Drug. Deliv. Rev. 61, 1007-1019 (2009).
  8. Zheng, W., Zhang, W., Jiang, X. Biomimetic Collagen Nanofibrous Materials for Bone Tissue Engineering. Adv. Eng. Mater. 12, B451-B466 (2010).
  9. Cao, H., Kuboyama, N. A biodegradable porous composite scaffold of PGA/beta-TCP for bone tissue engineering. Bone. 46, 386-395 (2010).
  10. Ankam, S., et al. Substrate topography and size determine the fate of human embryonic stem cells to neuronal or glial lineage. Acta Biomater. 9, 4535-4545 (2013).
  11. Bose, S., Vahabzadeh, S., Bandyopadhyay, A. Bone tissue engineering using 3D printing. Mater. Today. 16, 496-504 (2013).
  12. Billiet, T., Vandenhaute, M., Schelfhout, J., Van Vlierberghe, S., Dubruel, P. A review of trends and limitations in hydrogel-rapid prototyping for tissue engineering. Biomaterials. 33, 6020-6041 (2012).
  13. Yost, M. J., et al. A novel tubular scaffold for cardiovascular tissue engineering. Tissue Eng. 10, 273-284 (2004).
  14. Habeeb, A. J., Hiramoto, R. Reaction of proteins with glutaraldehyde. Arch Biochem Biophys. 126, 16-26 (1968).
  15. Tanford, C., Buzzell, J. G. The Viscosity of Aqueous Solutions of Bovine Serum Albumin between pH 4.3 and 10.5. J. Phys. Chem. 60, 225-231 (1956).
  16. Yadav, S., Shire, S. J., Kalonia, D. S. Viscosity analysis of high concentration bovine serum albumin aqueous solutions. Pharm Res. 28, 1973-1983 (2011).
  17. Tobitani, A., Ross-Murphy, S. B. The intrinsic viscosity of polyelectrolytes revisited. Polym. Int. 44, 338-347 (1997).
  18. Arakawa, T., Timasheff, S. N. Theory of protein solubility. Methods Enzymol. 114, 49-77 (1985).
  19. Migneault, I., Dartiguenave, C., Bertrand, M. J., Waldron, K. C. Glutaraldehyde: behavior in aqueous solution, reaction with proteins, and application to enzyme crosslinking. Biotechniques. 37, 790-796 (2004).
  20. Burmeister, J. J., et al. Glutaraldehyde cross-linked glutamate oxidase coated microelectrode arrays: selectivity and resting levels of glutamate in the CNS. ACS Chem Neurosci. 4, 721-728 (2013).
  21. Chatterji, P. R. Gelatin with hydrophilic/hydrophobic grafts and glutaraldehyde crosslinks. J. Appl. Polym. Sci. 37, 2203-2212 (1989).
  22. Freije, J. R., et al. Chemically modified, immobilized trypsin reactor with improved digestion efficiency. J Proteome Res. 4, 1805-1813 (2005).
  23. Cunha-Filho, M. S., Alvarez-Lorenzo, C., Martinez-Pacheco, R., Landin, M. Temperature-sensitive gels for intratumoral delivery of beta-lapachone: effect of cyclodextrins and ethanol. ScientificWorldJournal. 2012, 126723 (2012).
  24. Basak, R., Bandyopadhyay, R. Encapsulation of hydrophobic drugs in Pluronic F127 micelles: effects of drug hydrophobicity, solution temperature, and pH. Langmuir. 29, 4350-4356 (2013).
ثلاثي الأبعاد تكنولوجيا المحاكاة البيولوجية: رواية Biorubber يخلق معرف الصغرى، وعلى نطاق والماكرو-البنى في الكولاجين الهلاميات المائية
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Rodriguez-Rivera, V., Weidner, J. W., Yost, M. J. Three-dimensional Biomimetic Technology: Novel Biorubber Creates Defined Micro- and Macro-scale Architectures in Collagen Hydrogels. J. Vis. Exp. (108), e53578, doi:10.3791/53578 (2016).More

Rodriguez-Rivera, V., Weidner, J. W., Yost, M. J. Three-dimensional Biomimetic Technology: Novel Biorubber Creates Defined Micro- and Macro-scale Architectures in Collagen Hydrogels. J. Vis. Exp. (108), e53578, doi:10.3791/53578 (2016).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter