Summary
Bu el yazması oluşturma ve ventral karın duvarı defekti (fıtık) tamiri ile ilgili yöntemler açıklanır. Bu model onarım stratejileri implante malzemeleri kullananlar gibi çalışma için kullanılabilir. Bu makale, domuz küçük bağırsak submukoza ile deneysel fıtık tamiri örnek olarak sunulur.
Abstract
Ventral karın fıtığı bazen herniorraphy (cerrahi onarım) gerektirir nispeten yaygın bir klinik durumdur. Ventral karın fıtığı tamiri genellikle karın duvarı üründe arasında mekanik bir köprü hizmet için bir malzemenin implantasyonu gerektirir. Biyomalzeme, domuz küçük bağırsak submukoza (SIS), gibi Ayrıca hücre büyüme içine implant için bir kafes olarak hizmet ve doğal olarak ana bilgisayar doku dahil edebilirsiniz. Bu tür tamir harçları gelişimi bir tekrarlanabilir biçimde onarmak için deneysel karın duvarı defektleri kolayca oluşturulur ve mükellef bulunmaktadır hayvan modelleri kullanımını yararlanır. Burada sunulan yöntem bir sıçan modelinde ventral karın fıtığı tamiri ve cerrahi oluşturma açıklar. Kardeşim bu modelde deneysel bir ventral karın fıtığı onarmak için kullanıldığında, bu hızla implantasyon 28 gün içinde ana bilgisayar doku kurulmuştur. Histolojik olarak, implante maddi ortaklığın ana bilgisayar doku içine sağlam bir fibrovascular yanıt tarafından karakterizedir. Büyük olasılıkla gelecekteki iyileştirmeler ve uygulamaları sıçan karın fıtığı modelinin daha yakından kopyalama ortak komorbiditeler bir adam için bir araç olarak diyabetik ve/veya obez hayvan içerebilir.
Introduction
Karın duvarı fıtığı Konjenital defekt, travma olabilir veya cerrahi yaralar karın duvarı içeren başarısız kapatılması sonucunda oluşabilecek bir sık karşılaşılan klinik bir konudur. Onarım yaygın bir implant indirimli bu kime karın duvarı kapalıdır sadece dikiş ile karşılaştırıldığında bir implant ile tedavi edilen hastaların kaydetti Rekürrens ile karın duvarının güçlendirmek kullanmayı gerektirir. 1
Cerrahi fıtık onarımı kez kusur yerleştirilmiş bir malzeme ile mekanik köprü oluşturma gerektirir. Bu bağlamda, sentetik ve doğal malzemeler fıtık onarımı için kullanılmaktadır. Birçok sentetik malzeme genellikle sigara absorbe ve diğer sentetik implantlar bir absorbe olmayan malzemelerin bir absorbe ile birleştirmek polipropilen, polietilen tereftalat polyester ve genişletilmiş politetrafloroetilen, yer Polimer polygalactine gibi. 1 buna ek olarak, doğal malzeme implantlar genellikle hayvan veya insan Kadavra kaynaklardan elde. Fıtık onarımı için kullanılan doğal malzemeler genellikle kollajen zengindir ve ingrowth ve ana bilgisayar doku bütünleştirilmesi için bir iskele olarak hareket.
Arzu geliştirmek ve yeni malzemeler ventral karın fıtık onarımı için en iyi duruma getirmek için aday malzemelerin değerlendirilmesi için uygun bir hayvan modeli gerektirir. Türler, koyun,2 domuz,3 tavşan,4 fareler,5,6,7,8 ve köpekler de dahil olmak üzere çeşitli çalışmalar yapılmıştır. 9 kolayca işlenmiş bir modeli doğuştan suşların genetik değişkenliği denetimi için izin çeşitli mevcuttur sundukları fareler gibi çalışmalar için kullanmanın avantajı var. Buna ek olarak, daha küçük genel vücut yüzey alanına yukarıda listelenen diğer türler ile karşılaştırıldığında sıçan izin doğada deneysel olabilir malzemeleri değerlendirilmesi ve bu nedenle, değil bol. Rat karşı diğer türler ile ilgili daha fazla, azaltılmış maliyetleri nispeten yüksek ekran aday malzemeler kullanmak ventral karın fıtığı tamiri için yeteneği sağlar. Malzemeler için konuları çoğunlukla cerrah, gücü, yeteneği ana bilgisayar doku, Biyouyumluluk ve enfeksiyona direnç içine dahil tarafından işleme kolaylığı içerir.
Örnek olarak, domuz küçük bağırsak submukoza (SIS) doku onarım endikasyonları, ventral karın, kasık ve diyafragmatik fıtığı tamiri dahil olmak üzere çok çeşitli için kullanılan doğal bir biomaterial var. 10 , 11 , 12 kardeşim hızla ana bilgisayar doku kurulmuştur ve enfeksiyon genellikle dayanıklı olduğu tespit edilmiştir ve çok malzeme kirlenmiş alanlarda belirli yarar vardır. 13 , 14 sıçan modelinde, işleme, iyi gerilme kuvveti uniaxial çekme hatası test ve doku ingrowth kollajen birikimi ve neovaskülarizasyon açısından teşviki tarafından belirlenen kolaylığı SIS göstermiştir. 6 , 7
Doğru cerrahi kusur köprüleme bir temel üretken modelleme aday tamir harçları değerlendirirken özelliğidir. Hayvan yeterince imzalat ve aseptik teknik kesinlikle takip olması gerekir. Ayrıca, standart boyutta bir karın duvarı defekti dikkatli oluşturulmalı ve yeterince malzeme defekt kenar boşluklarına güvenlik altına alır bir şekilde köprü. 8 bu iletişim kuralı, tamiri ve cerrahi oluşturma ventral karın fıtığı SIS kullanarak bir sıçan malzeme köprü oluşturma bir örnek olarak takip edilmesi gereken standart bir yöntemini sağlar.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Bu iletişim kuralı hayvanlarda kullanımı Üniversitesi Notre Dame kurumsal hayvan bakım ve kullanmak Komitesi tarafından kabul edildi, tüm yasal gereksinimleri ve yönergeleri takip ve tarafından akredite bir tesiste yapılmıştır Değerlendirme ve laboratuvar hayvan bakımı (AAALAC), uluslararası akreditasyon Birliği.
1. hayvan seçim
- edinme patojen-Alerjik Sprague Dawley fareler bir saygın satıcı veya damızlık koloni.
Not: Çoğu zaman, tesis veteriner veya Yöneticisi uygun kaynakları için araştırmacı yönlendirebilirsiniz. Fareler yaklaşık 250 g vücut ağırlığı bu yordam için uygun. - Bir gün önce cerrahi, klinik olarak sağlıklı olduklarından emin olmak için kullanılmak üzere hayvanlar inceleyin. Bu bağlamda, hayvan tartmak ve vücut durumunu değerlendirmek; solunum, herhangi bir açık yarası veya kitleler varlığı ve hayvan genel etkinlik düzeyini herhangi bir anormallik unutmayın. Bu tür gözlemler potansiyel dışlama ölçütü olarak düşünün ve cerrahi kayıttaki herhangi bir anormallik Not.
2. Anestezi ve aseptik cerrahi için hayvan hazırlık
- analjezi, 1.1-1.2 mg/kg sürekli yayın buprenorfin, subkutan sıçan önce ameliyat. Uygula oftalmik merhem için her iki gözde 2 h için yönetmek ve yönetmek 2 mL steril serum fizyolojik subkutan ısındı.
- Fareyi ketamin hidroklorür (90 mg/kg) ve xylazine (10 mg/kg) mayi bir doz ile anestezi. Oküler yağ küçük bir miktar her gözün kornea dessication önlemek için geçerlidir. Bir kez belgili tanımlık hayvan ’ s solunum sabit ve artık bir firma ayak çimdik için herhangi bir yanıt olduğunu, fareyi anestezi ameliyat için yeterli bir seviyeye ulaşmıştır. Anestezi kabul edilebilir bir düzeyde daha fazla derin, varlığı ile teyit edilmesi normal solunum ve normal renk göz (yetersiz kardiyovasküler perfüzyon öneren karşı solgunluk,).
- Ventral karın ile göğüs kemiği için apış arasından ve lateral kenar boşluklarına ventrum üzerinde bir ticari clippers tıraş. Nemli kağıt havlu bölgeye uygulayarak kısaltıldı tüylerden.
- % 70 etanol ile silin ve ardından traş alan bir iodophor antiseptik ile fırçalayın. Belgili tanımlık kesme için bir pencere potansiyel kirlenme ayrılmış olabilir cerrahi perdeler uygulamak.
- Steril Cerrahi önlük, bir yüz maskesi ve saç Bone don. İyice yıkayın ve eller sabun ve don steril cerrahi eldivenler ile fırçalayın.
3. Oluşturma ve Ventral karın fıtığı tamiri
- ameliyat öncesi cerrahi aletler otoklav tarafından sterilize.
- Bir neşter kullanarak, yaptığınız bir karın kas düzeyine ventral orta çizgi boyunca yaklaşık 3-4 cm dikey kesi. Karın duvarının yavaşça bir Forseps ile Asansör ve linea küçük bir açıklıktan oluşturmak alba. Temel iç organlar korumak için bir forseps delikten ve kas duvar oluşturmak için kazıma gibi koruyucu yol gösterici için karın boşluğu içine ekleyin bir yaklaşık 1 cm lateral her iki yanına kesme yaklaşık 2 cm x 2 cm tam kalınlıkta kusur, orta çizgi üzerinde her iki ucunda da linea, alba kesi.
- Lay önceden kesilmiş 2 cm x 2 cm Bölüm 4 katmanlı SIS (şekil 1), bu durumda mekanik köprüleme malzemenin kusur.
Not: Alternatif olarak, bir altlık yaklaşım malzeme bölümünü yerleştirdiği karın boşluğuna kusur iç boyutu gelen karşılamak için kullanılabilir. - Dikiş köprüleme, dört köşe 4-0 ipek ya da naylon bir basit kesintiye uğramış dikiş deseni kullanarak karın duvarı kas malzeme.
Not: Absorbe olmayan dikiş kolay tanımlanması hasat absorbe suture maddi karşı üzerine yerleştirilmiş malzemenin kullanılmasına. - Malzeme her kenarı eşit aralıklı üç ek dikiş ile güvenli. İç organlar karın duvarından geçişini sağlayan önemli boşluklar yok emin olmak için tüm çevresel kenarına incelemek; ve böyle boşluklar varsa, kenar boşluğunu güvenliğini daha da artırmak için ek dikiş yerleştirin.
- 4-0 absorbe dikiş basit kesintiye uğramış desen ile subkutan doku kapatın. Basit bir kesintiye uğramış desen uygulanan dikiş de kullanılabilir olsa cilt cerrahi zımba ile yakın.
- Bırakmayın hayvan katılımsız sternal recumbency; yeniden elde etmek için yeterli kendine geldi kadar ve tam olarak anesteziden kurtarıldı kadar diğer hayvanların şirkete cerrahi uğramıştır bir hayvan döndürmüyor. Bu süre boyunca, hayvan hipotermi önlemek için sıcak bir alanda devam. Tam kurtarma ve normal iyileşme sağlamak için bu yordamı uğramıştır
- inceleyin hayvan her gün. Deri zımba zımba sökücü ile 7-10 gün ameliyatı takiben kaldırmak.
4. Hasat implante malzeme
- tutarlı çalışma ihtiyaçları, ötenazi, yönetilen bir odasında karbon dioksit aşırı doz ile 28 gün ameliyatı takiben 10 ila 30 oranında, önceden belirlenmiş bir zamanda, genellikle 21 - hayvanlar doldurun.
- Kullanarak standart nekropsi araçlar, açık belgili tanımlık deri ve karın duvarı ve implantın alan bulaşmasına neden.
Not: Eğer absorbe olmayan dikiş implant güvenliğini sağlamak için kullanılan malzeme orijinal dikiş (Şekil 2) tarafından belirlenebilir. - Herhangi bir olumsuz tepkiler (örneğin, yara yırtılması, apse, seroma, Hematom) ve yapışma ölçüde ve azim temel iç organlar için de dahil olmak üzere brüt herhangi bir patolojik gözlem gözlemlemek.
- İmplant bölgesi doku implant içeren geniş bir bölümünü keserek çıkarın. Örnek işleme histolojik inceleme ve karakterizasyonu için hazırlanırken % 10 tarafsız tampon formalin gibi bir sabitleştirici yerleştirin.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
İmplantasyonu sonrası 28 gün tarafından SIS genellikle ana bilgisayar doku (Şekil 2) içine iyi birleşme gösterir. Çoğu durumda, orada 's kalan SIS belirgin, doku kez implante malzeme tanımlamak için keşfedilmeyi gerekir. Histolojik analizler iyi doku birleşme öncelikle fibrovascular doku ve kaydetti çok az kalıntı SIS (şekil 3) ile gösteren brüt patolojik gözlemlere doğruladı. Bu sonuçlar yardımcı programı sıçan ventral karın fıtığı modelinin gösterilmektedir. Fareyi kolayca elde edilen ve muhafaza ve genellikle hızlı bir şekilde ameliyat kurtarır. İçine yerleştirilmiş biomaterial doku birleşme Biyouyumluluk gösterir ve doku ingrowth için bir kafes olarak hizmet ve onarmak için Die yeteneğini gösterir. Bile önemli doku birleşme ile sitenin implantın kolayca karın duvarı malzeme güvenliğini sağlamak için kullanılan dikiş tarafından tespit edilebilir. Sonuç olarak, fıtık onarım malzemeleri tutarlı ve nispeten hızlı bir şekilde değerlendirilebilir.
Şekil 1:2 x 2 cm bölümünü deneysel Ventral karın fıtığı onarım için kullanılan SIS. Domuz küçük bağırsak submukoza türetilmiş bir acellular hücre dışı matriks SIS malzemedir. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 2: dahil ABLA 28 gün içinde bir sıçan Ventral karın fıtığı köprü implantasyonu sonrası. Ötenazi, ventral karın deri Die güvenliğini sağlamak için kullanılan ipek dikiş tarafından özetlenen implante malzeme ortaya çıkarmak için yansıdı. Not ingrowth Die olarak doku implantı ana bilgisayar doku dahil edilmiştir. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 3: Photomicrograph doku SIS bir deneysel Ventral karın fıtığı köprü implantasyonu sonraki 28 gün. Die büyük ölçüde ana bilgisayar doku dahil edilmiştir. Bölümde kalan ABLA çok küçük bir iplikçik okları göster (H & E, 40 X). Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Malzemelerin ventral karın fıtık onarımı için büyük ilgi, özellikle de bir ilk mekanik köprü sağlamak ve sonra ana bilgisayar doku dahil edebiliyoruz. Bu bağlamda, malzemelerin çeşitli araştırdık, SIS, domuz acellular dermal matris ve domuz kalp zarını gibi. 6 , 7 bu malzemelerin bu dokuların ekstraselüler matrisleri temsil ve böylece doku birleşme kolaylaştırmak içine hücre göç ve çoğalırlar, iskele hareket.
Fıtık onarım malzemeleri değerlendirilmesi, kolayca ele ve bozulmamış şifa yeteneği bir hayvan modeli gerektirir. Sıçan ventral fıtık modeli, onarım malzemeleri içinde vivodeğerlendirmek için çalışmalara işlemede kolaylığı olanak sağlar. Bu model implante fıtık onarım malzemeleri ana bilgisayar yanıt karşılaştırmalı histolojik değerlendirme için kullanılabilir olduğu kanıtlanmıştır. 6 bu özellikle onarım mekanizmasının bir parçası olarak ana bilgisayar doku içine birleşme geçmesi gibi ABLA, biyomalzemeler gereklidir.
Sıçan ventral karın fıtığı onarım modeli çok tekrarlanabilir bir şekilde kolayca gerçekleştirilebilir. Uygun aseptik teknik başarı için kirlenmiş cerrahi alanları şifa yanıt değiştirmek ve böylece karmaşık deneysel sonuçlar yorumlanması gibi önemlidir. 15 burada açıklanan Protokolü tek bir hayvan ameliyatta deneyimli bir yöntemle fıtık oluşturma gerektiren çalışmalar başarıyla üstlenmeyi ve onarmak için tasarlanmıştır.
Burada açıklanan yordamı onarım malzeme karın duvarı defekti dış kenarlarına bağlı bir harcama yaklaşım içerir. Onarım malzemesi defekt iç yönünü bağlı bir kakma yaklaşım kullanmak mümkündür. Fıtık onarımı üzerinden mesh laparoskopi ile genellikle bir kakma yaklaşım ile elde edilir. Kakma yöntem ile karın iç organlar, implantın büyük doğrudan temas böylece biraz adhesiogenesis implant ve iç organlar arasında olasılığını artırmak sağlar. Ameliyat sonrası adezyon oluşumunu önemli bir klinik konu olduğundan, adhesiogenesis yakından incelemek istediğiniz çalışmalar kakma yaklaşım kullanmak isteyebilirsiniz.
Fareler genellikle ameliyat çok çabuk iyileşir rağmen ameliyat sonrası komplikasyon için bazı olasılığı bulunmaktadır. Örneğin, bazı fareler deri dikiş, hatta zımba kaldıracaktır. Kesik yara açık olmak bulunursa, fareyi ya euthanized yeniden anestezi veya gereken ve cilt kapalı. Though nadir, cilt ve karın duvarı açık boşluklar var tespit edilirse hayvan euthanized. Bu gibi durumlarda, uzman veteriner böyle hayvanların derhal haberdar olmalıdır.
Burada açıklanan model daha önce belirtildiği gibi birçok avantajı vardır. Ancak, bir quadraped, bir sıçan gibi ventral karın fıtığı modellenmesi çeviri adam için sınırlar tanınacaktır. Çünkü birçok klinik Fıtıklar komorbiditeler diyabet, obezite ve bağ dokusu kusurları gibi ile ilişkili olduğu düşünülmektedir, daha, normal bir hayvan onarım stratejileri değerlendirilmesi translasyonel değerini karmaşık modeli. Yine de, fare modeli fıtık onarım malzemeleri nispeten hızlı ve kolay değerlendirilmesi verir.
Büyük olasılıkla gelecekteki iyileştirmeler ve uygulamaları sıçan karın fıtığı modelinin daha yakından kopyalama ortak komorbiditeler bir adam için bir araç olarak diyabetik ve/veya obez hayvan içerebilir. Aynı şekilde, doku onarım yardımcı olmak için İndüklenmiş pluripotent kök hücre yöntemleri değerlendirilmesi büyük olasılıkla bu modelde yarar göreceksiniz.
Bu modelin başarılı kullanımı için önemli adımlar üzerinde bakım hayvan ve cerrahi beceri ortalanmış. Aseptik teknik enfeksiyon olasılığını en aza indirmek için bir yol olarak kullanılması gerekir. Uygun anestezi ve analjezi temel, hem de ameliyat sonrası hayvan rahat ve cerrahi kesi kapalı kalmasını sağlamak için izleme. Önemlisi, ne zaman karın duvarı defekti kenarlarına biomaterial güvenliğini sağlama, cerrah bütün kenarları ile karın iç organlar geçirilmesi subkutan uzaya izin olabilir hiçbir açıklıklar güvenli kurmalısınız.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Bir yazar (CJ) Cook biyoteknoloji, Inc, Medikal dereceli SIS üreticisine istihdam edilmektedir.
Acknowledgments
Yazarlar Valerie Schroeder Bu eser teknik yönleri ile ona yardım için teşekkür etmek istiyorum. Geliştirilmesi bu model ile ilgili çalışma Cook biyoteknoloji, Inc. (West Lafayette, inç USA) destek verdi.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Isoflurane (Isoflo) | Henry Schine Animal Health | 17579 | gas anesthetic |
| Optixcare Eye Lubricant | Henry Schine Animal Health | OPX4240 | Ocular lubricant |
| Oster clippers | Henry Schine Animal Health | 6092 | hair clippers |
| Betadine surgical scrub | Henry Schine Animal Health | 1618 | antiseptic iodophor |
| Sterile scalpel | Henry Schine Animal Health | 329 | #10 scalpel |
| 9" x 12" disposable surgical drape | Braintree Scientific, Inc. | SP-RPS | Surgical drape |
| 4-0 nylon suture | Braintree Scientific, Inc. | SUT 812 | Suture material |
| 4-0 Absorbable Suture | Henry Schine Animal Health | 29242 | Synthetic absorbable suture |
| 9 mm Autoclips and applier | Braintree Scientific, Inc. | ACS KIT | Surgical staples for closure of skin incision |
| Torbugesic/analgesic | Henry Schein Animal Health | 12084 | Butorphanol tartarate for post-operative analgesia |
| Small intestinal submucosa (SIS) | Cook Biotech, Inc. | Implant material for bridging experimental abdominal wall defect | |
| Rats | Harlan, Inc. | Sprague Dawley | Animal for hernia modeling |
References
- Poussier, M., et al. A review of available prosthetic material for abdominal wall repair. J. Visc. Surg. 150 (1), 52-59 (2013).
- Hjort, H., Mathisen, T., Alves, A., Clermont, G., Boutrand, J. P. Three-year results from a preclinical implantation study of a long-term resorbable surgical mesh with time-dependent mechanical characteristics. Hernia. 16 (2), 191-197 (2012).
- Ko, R., Kazacos, E. A., Snyder, S., Ernst, D. M. J., Lantz, G. C. Tensile strength comparison of small intestinal submucosa body wall repair. J. Surg. Res. 135 (1), 9-17 (2006).
- Garcia-Moreno, F., et al. Comparing the host tissue response and peritoneal behavior of composite meshes used for ventral hernia repair. J. Surg. Res. 193 (1), 470-482 (2015).
- Soiderer, E. E., Lantz, G. C., Kazacos, E. A., Hodde, J. P., Wiegand, R. E. Morphologic study of three collagen materials for body wall repair. J. Surg. Res. 118 (2), 161-175 (2004).
- Liu, Z., Tang, R., Zhou, Z., Song, Z., Wang, H., Gu, Y. Comparison of two porcine-derived materials for repairing abdominal wall defect in rats. PLOS One. 6 (5), e20520 (2011).
- Zhang, J., Wang, G. Y., Xiao, Y. P., Fan, L. Y., Wang, Q. The biomechanical behavior and host response to porcine-derived small intestine submucosa, pericardium and dermal matrix acellular grafts in a rat abdominal defect model. Biomaterials. 32 (29), 7086-7095 (2011).
- Ma, J., Sahoo, S., Baker, A. R., Derwin, K. A. Investigating muscle regeneration with a dermis/small intestinal submucosa scaffold in a rat full-thickness abdominal wall defect model. J.Biomed.Mater.Res.Part B. 103 (2), 355-364 (2015).
- Greca, F. H., Souza-Filho, Z. A., Giovanni, A., Rubin, M. R., Kuenzer, R. F., Reese, F. B., Araujo, L. M. The influence of porosity on the integration histology of two polypropylene meshes for the treatment of abdominal wall defects in dogs. Hernia. 12 (1), 45-49 (2008).
- Hiles, M., Record-Ritchie, R. D., Altizer, A. M. Are biologic grafts effective for hernia repair? A systematic review of the literature. Surg. Innov. 16 (1), 26-37 (2009).
- Helton, W. S., Fisichella, P. M., Berger, R., Horgan, S., Espat, N. J., Abcarian, H. Short-term outcomes with small intestinal submucosa for ventral abdominal hernia. Arch. Surg. 140 (6), 560-562 (2005).
- Franklin, M. E., Trevino, J. M., Portillo, G., Vela, I., Glass, J. L., Gonzalez, J. J. The use of porcine small intestinal submucosa as a prosthetic material for laparascopic hernia repair in infected and potentially contaminated fields: long-term follow-up. Surg. Endosc. 22 (9), 1941-1946 (2008).
- Clarke, K. M., Lantz, G. C., Salisbury, S. K., Badylak, S. F., Hiles, M. C., Voytik, S. L. Intestine submucosa and polypropylene mesh for abdominal wall repair in dogs. J. Surg. Res. 60 (1), 107-114 (1996).
- Sarikava, A., Record, R., Wu, C. C., Tullius, B., Badylak, S. F., Ladisch, M. Antimicrobial activity associated with extracellular matrices. Tissue Eng. 8 (1), 63-71 (2002).
- Serra, R., Grande, R., Butrico, L., Rossi, A., Settimio, U. F., Caroleo, B., Amato, B., Gallelli, L., de Franciscis, S. Chronic wound infections: the role of Pseudomonas aeruginosa and Staphylococcus aureus. Expert Rev. Anti. Infect. Ther. 13 (5), 605-613 (2015).
