Summary
Osteoartrit (OA) eller degenerativ ledsjukdom, är ett försvagande tillstånd associerade med smärta som fortfarande bara delvis kontrolleras av tillgängliga analgetika. Djurmodeller utvecklas för att förbättra vår förståelse av OA relaterade smärtmekanismer. Här beskriver vi den metod för monoiodoacetate modellen OA smärta i mus.
Abstract
En stor symptom på patienter med artros (OA) är smärta som utlöses av perifera såväl som centrala förändringar inom smärtbanorna. De nuvarande behandlingar för OA smärta såsom NSAID eller opiater är varken tillräckligt effektiv eller saknar skadliga biverkningar. Djurmodeller av OA utvecklas för att förbättra vår förståelse av OA relaterade smärtmekanismer och definiera nya farmakologiska mål för terapi. För närvarande tillgängliga modeller av OA i gnagare inkluderar kirurgiska och kemiska ingrepp i en knäled. Den monoiodoacetate (MIA) modell har blivit en standard för modellering gemensam störningar i OA i både råttor och möss. Modellen, som är lättare att utföra i råtta involverar injektion av MIA i en knäled som inducerar snabba smärtliknande svar i ipsilaterala lem, vars nivå kan styras genom injektion av olika doser. Intraartikulär injektion av MIA stör kondrocyter glykolysen genom att hämma glyceraldehyd-3-fosfatas-dehydrogenas och resulterar i kondrocyt död, neovaskularisering, subkondralt ben nekros och kollaps, såväl som inflammation. De morfologiska förändringar i ledbrosket och ben störningar är reflekterande av vissa aspekter av patientens patologi. Tillsammans med ledskada, enligt MIA injektion inducerar mekaniska känslighet i ipsilaterala baktassen och viktbärande underskott som är mätbara och kvantifierbara. Dessa beteendeförändringar liknar några av symptomen som rapporterats av patientpopulationen och därmed validera MIA injektion i knät som en användbar och relevant preklinisk modell av OA smärta.
Syftet med denna artikel är att beskriva metoderna för intraartikulära injektioner av MIA och beteende inspelningar av tillhörande utveckling av överkänslighet med ett sinne för att lyfta fram de åtgärder som krävs för att ge konsekventa och tillförlitliga inspelningar.
Introduction
Kliniskt, osteoartrit (OA) eller degenerativ ledsjukdom, är en smärtsam och försvagande tillstånd som kännetecknas av en progressiv förlust av ledbrosk, mild inflammation av vävnader i och kring lederna, och ibland bildning av osteofyter och ben cystor. Patienter med artros rapporterar ihållande smärta en och visa ökad känslighet för tryck och skadliga stimuli i artritisk led 2-4. För närvarande finns det inget botemedel mot OA med tillgängliga behandlingsmetoder och smärtstillande medel är föreskrivna för att lindra smärta i samband med detta villkor, med en viss grad av framgång fem. Men fortfarande OA smärta är ett kliniskt problem och djurmodeller av OA utvecklas för att förbättra vår förståelse av OA relaterade smärtmekanismer och avslöja nya mål för terapi.
Det finns flera djurmodeller för OA tillgängliga med olika egenskaper 6. Kirurgiska metoder, såsom främrekorsband transection, kan utnyttjas. Emellertid, de innebär skicklig kirurgiskt ingrepp och är i första hand utförs på råtta, medan destabilisering av mediala menisken (DMM) används i musen. Spontan utveckling av OA uppträder i marsvin och spontan gemensam degeneration har rapporterats i C57 svart möss från 3 till 16 månaders ålder 7,8. Spontana OA modeller inte innebär någon intervention för att framkalla sjukdomen, men de har normala variationer, och som sådan, medför större antal och kostar 9,10. Kemiskt inducerade modeller, å andra sidan, kräver mycket mindre invasiva procedurer än kirurgiska modeller, och som sådan är lättare att genomföra och medger studier av OA lesioner i olika skeden. Dessa modeller inkluderar enkla injektioner i knäet av inflammatoriska medel, immunotoxiner, kollagenas, papain, eller monoiodoacetate, som kan vara giftiga om de fly det gemensamma utrymmet. Av alla kemiska modeller av OA, är MIA den som oftast används, particularly att testa effektiviteten av farmakologiska medel för behandling av smärta, eftersom denna modell ger en reproducerbar, robust och snabb smärtliknande fenotyp som kan graderas genom att förändra MIA dosering 11-15.
Intraartikulär injektion av MIA i gnagare återger OA-liknande skador och funktionsnedsättningar som kan analyseras och kvantifieras. MIA är en hämmare av glyceraldehyd-3-fosfatas, störa cellulär glykolys och slutligen resulterar i celldöd 16,17. Intraartikulär injektion av MIA orsakar chondrocyte celldöd, vilket leder till broskdegeneration och efterföljande subkondralt ben förändringar såsom utseendet av ben osteofyter 18,19.
Eftersom nyttan av MIA i råtta har beskrivits tidigare 20, i denna uppsats fokuserar vi på metodiken för MIA-inducerad OA hos möss som denna modell används alltmer med tillgången på knock-out-möss. Vi beskriver ett förfarande för injecning av mycket små volymer i knäet och metoder för att mäta känsligheten för skadliga och icke-skadliga stimuli i bakbenen.
Fördelningen av metoden kommer att bidra till att minska variationen, och som sådan, förfina modellen och minska antalet djur som behövs för studier.
Protocol
Förfaranden med djurförsök har godkänts av den etiska kommittén vid Kings College London och är i enlighet med brittiska inrikesdepartementet förordningar (Djur vetenskapliga förfaranden Act 1986).
1. intraartikulär injektion av Monoiodoacetate i knäet
- House 8 -. 10 veckor gamla möss i grupper om fem under en 12 timmar ljus / mörker-cykel (ljus på vid 07:00) med mat och vatten ad libitum Låt mössen acklimatiseras i en vecka före start av experimentet.
- Slumpmässigt och bur möss i grupper om 5. Använd antalet djur som koder för att blinda försöks behandlingar. Använd kroppsvikter som parametrar för randomisering.
- På dagen för injektionen, nyligen framställa lösningen av monoiodoacetate i steril saltlösning (0,9% NaCl) vid de önskade koncentrationerna. Använda steril saltlösning för injektion i en separat grupp av kontrollmöss. Den högsta rekommenderar dos av MIA är 1 mg i 10 pl.
Varning: Monoiodoacetate är very toxiska. Därför rekommenderas det att handskar och mask bärs vid hantering av pulver och beredning av lösningen. Lösningen ska sterilfiltreras med ett 0,22 pm filter. - Söva möss genom att använda ett bedövningsmedel vagn genom att först placera dem i en kammare som levererar 2% isofluran i O 2 blandning (flödeshastighet 1,5 l / min) och sedan överföra möss till noskonen avsnitt, som också levererar isofluran-O 2 blandning 2% , och som sådan, bibehåller anestesi under injektion. Placera veterinär salva på ögonen för att undvika att de torkar ut under anestesi. Bär operationsrock, handskar och mask när de utför injektionsproceduren.
- Bekräfta anestesi genom att kontrollera djurets bristande respons på en nypa stimulans på baktassarna.
- När djuret är under narkos, placera den på rygg. Trimma och torka det område som omger knäleden med alkohol. Povidon jod eller klorhexidin kan också användas feller desinfektion. Patellar tendon (vit linje nedan knäskålen) blir synliga.
- För att stabilisera injektionsstället, hålla knäet stilla, i en böjd position, genom att placera pekfingret nedanför knäleden och tummen ovanför den främre ytan av fotleden. Gemensam preferens är inte nödvändig.
- För att hitta den exakta platsen för injektion, kör en 26 G-nål fäst vid en spruta horisontellt längs knäet (för att inte tränga igenom huden med spetsen) tills den hittar gapet under knäskålen. Tryck lätt för att markera området och sedan lyfta nålen och sprutan vertikalt för injektionen. För in nålen i det markerade området, genom knäskålssenan, vinkelrätt mot skenbenet. Inget motstånd skall kännas.
- Använd tummen som en guide och injicera ytlig till platsen för inresa. Efter injektion, massera knäet för att säkerställa jämn fördelning av lösningen. Kassera nålen omedelbart i skarps bin.
- Placera möss tillbaka till ett rent hem bur på en uppvärmd matta och ge dem möjlighet att återhämta sig. Håll ständig vaksamhet på djuren tills de återfår lämplig medvetandet, som mäts av dem återfår sternala VILA. När djuren återhämtade sig, återvänder till sin bur.
Obs: Det föreslås för bästa praxis och utbildningssyfte som ett färgämne används och omedelbart efter slakt dissektion utförs för att bekräfta korrekt lokalisering av injektion.
2. Mätning av mekaniska Överkänslighet (allodyni)
Obs: Statiska mekaniska återtagströsklarna bedöms genom att tillämpa von Frey hår till plantar yta baktassen.
- Föra möss till beteende rum och låt ohämmade djur acklimatiseras i akryl kabiner (8 cm x 5 cm x 10 cm) atop ett trådnät rutnät.
- Tåg möss genom hantering och 2 tim tillvänjning till skåpen för två dagar före von Frey hår ansökan föratt begränsa stress och förflyttningar under applicering av von Frey hårstrån. På testdagar, vänja djur till skåpen för upp till 60 minuter före testning. Bär klänningar, handskar och masker under alla beteendeexperiment.
- Tillämpa kalibrerade von Frey-hår (flexibla nylonfibrer med ökande diameter som utövar definierad kraftnivåer som kalibrerats av det tillverkande företaget och uttrycktes som gram (g)) och den plantara ytan av baktassen tills fiber krökar. Använd 0,008, 0,02, 0,04, 0,07, 0,16, 0,4, 0,6, och 1,0 g fibrer under testning.
- Håll varje hårstrå på plats för 3 sek eller tills tassen dras tillbaka, den senare definierar ett positivt svar. Börjar med en stimulans styrka av 0,07 g, tillämpa hår enligt "upp-ner-metoden" 21: varumärke som X ett tillbakadragande respons och O en avsaknad av svar. Applicera i stigande ordning av kraft, upp till 1 g (cut-off kraft), tills ett svar detekteras.
- Åter testa tassen genom att upprepasteg 2.2.1, som börjar med glöd som utövar en kraft under en som producerade ett uttag.
- Sedan gäller de återstående trådarna sekventiellt, genom fallande kraft, tills ingen återkallelse sker. Åter tillämpa filamenten i stigande ordning tills ett svar observeras. Fortsätt tills en sekvens av sex responser erhålls (t.ex. OXOXOX), i syfte att erhålla den "k" värde genom att hänvisa till tabellvärdena 21.
- Uttrycka tasstillbakadragande värden som 50% tasstillbakadragande tröskelvärden gram. Använd formeln (10 [Xr + K δ]) / 10.000, där Xr = värde av förra von Frey filament som används i sekvensen (i log-enheter), k = tabellvärde, och δ = genomsnittlig skillnad i krafter mellan fibrer. Om inget svar detekteras använder maximal respons av en g 21,22.
- Genom att följa förfarandet beskrivet ovan (2.2.1-2.2.4), bedöma mekaniska tröskelvärden för båda baktassarna innan MIA injection som utgångsvärden. Efter injektion, utvärdera tröskelvärdena i de ipsilaterala och kontralaterala tassar vid regelbundna dagars intervall under flera veckor efter MIA att fastställa utvecklingen av mekanisk allodyni.
Obs: Till exempel rapporterar vi trösklar mätt 0, 3, 5, 7, 10, 14, 21, och 28 dagar efter MIA injektion. Djuren betraktas allodynisk när de visar ett svar till 0,1 g eller mindre. Normala svar faller inom 0,6-1 g intervall.
3. Mätning av viktbärande Deficit
Obs! Ändringar i viktbärande mäts med en vikt incapacitance testare.
- Träna varje musen för att gå in i en plexiglaskammare på apparaten och sitta i innehavet rutan. Placera musen framför anläggningen rutan lyfter ingången upp 45 ° och låt musen för att gå in och stänga rutan. Tillåta djuren att röra sig fritt till dess att de antar en sittställning. Denna utbildning tar minst två dagar och garanterar att djuret är stilla och inte leaning på vardera sidan av kammaren. Kalibrera instrumentet före användning med en 100 g check vikt (eller enligt utrustning instruktion).
- Se till att varje baktass placeras på lämplig inspelningsdynan 11. Varaktigheten av varje mätning tar en sekund, enligt tillverkarens instruktioner.
- Samla tre mätningar av vikt bäras på varje baktass från inspelningen pad för varje inspelningen och använda medelvärdet för att beräkna skillnaden i vikt bäras av ipsilaterala och kontralaterala tassar. Express värden som skillnaden mellan kontralaterala och ipsilaterala tassar i gram.
- Bedöm viktbärande ändringar innan MIA injektion som baslinjevärden. Sedan, för att upprepa bedömningar med jämna mellanrum under flera veckor fastställa utvecklingen av gate förändringar. Till exempel rapporterar vi trösklar som uppmätts på 0, 3, 5, 7, 10, 14, 21, och 28 dagar efter MIA injektion.
Obs: En normal vikt Bearing värde på 50% representerar en lika viktfördelning mellan ipsilateral och kontra bakbenen. Djur anses överkänslig display en viktbärande byte av cirka 45%. Mätningar av mekaniska trösklar och viktbärande underskott kan utföras i samma möss, eftersom varken slutpunkt påverkar den andra. För farmakologisk utvärdering, bör varje grupp av djur ska testas på bestämda tider efter dosering i linje med den farmakokinetiska profilen för den förening som används.
Representative Results
Vi har nyligen rapporterat att insprutningen av 0,5-1 mg MIA i mus knäleds inducerar avses mekanisk överkänslighet (allodyni) i ipsilaterala baktassen och viktbärande underskott upp till fyra veckor, men inträden är dosberoende 23.
De data som rapporteras i figur 1 utgör ett exempel på tidsförloppet för MIA-inducerad mekanisk överkänslighet i de ipsilaterala baktassarna efter ett intervall av doser som injiceras i knäet. Specifikt, den lägsta dosen av MIA (0,5 mg / mus) inducerade en 50% -ig minskning av trösklar jämfört med injektion av saltlösning på dag 10, och tröskelvärdena minskade till 70% av de för saltlösningskontroller vid dag 28 efter injektion. Den mellanliggande dos av 0,75 mg MIA resulterade i en gradvis minskning av trösklar som var 80% lägre än saltlösning styrtrösklar på dag 10 och förblev låg upp till dag 28. Den högsta dosen av 1 mg MIA var associerat med en skyltificant nedgång i tröskeln på dag 5 och en ytterligare minskning på dag 10, som upprätthölls fram till dag 28.
De data som redovisas i figur 2 ger exempel på viktbärande förändringar som är förknippade med MIA injektion i knäleder. I denna uppsättning av experiment, medan 0,5 mg MIA dos inte inducerade signifikanta förändringar i viktbärande under 28 dagars varaktighet av studien, resulterade 0,75 mg MIA dos i en signifikant minskning av vikten bäras av den ipsilaterala tassen från dag 10 framåt. Noterbart är viktbärande asymmetri i samband med 0,75 mg MIA kan ge olika och inkonsekventa resultat mellan studier 23. Istället dosen 1 mg MIA inducerar i allmänhet reproducerbar viktbärande asymmetri och data i Figur 2 visar betydande minskning av vikt bärs på den ipsilaterala baktassen från dag 3 till slutet av observationsperioden. Som väntat, saline-behandlade djur visade ingen viktbärande förändringar.
Figur 1. Utveckling av mekanisk allodyni Post MIA Injection. Paw abstinens trösklar för den ipsilaterala och kontralaterala baktassarna bedömdes före och efter injektion av MIA (0,5, 0,75, och 1 mg / mus) och saltlösning (0,9% NaCl), n = 8 - 10 möss / grupp. * P <0,05, ** P <0,01, *** P <0,001 versus salinbehandlade gruppen; Tvåvägs upprepade mätningar ANOVA följt av Student Newman-Keuls post hoc-test. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 2. Utveckling av viktbärande Deficits Post MIA Injection. Förändringar i kroppsvikt fördelningen mellan de båda bakbenen beräknades som [(vikt bärs på ipsilaterala tassen / summan av vikten bäras på ipsilaterala och kontralaterala tassar) * 100] bedömdes före och efter injektion av MIA ( 0,5, 0,75, och 1 mg / mus) och koksaltlösning (0,9% NaCl), n = 8 - 10 möss / grupp. * P <0,05, ** P <0,01, *** P <0,001 versus saltlösningsbehandlade gruppen. Tvåvägs upprepade mätningar ANOVA följt av Student Newman-Keuls post hoc-test. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Discussion
Med denna metod, beskriver vi en föredragen metod för att inducera OA-liknande smärta i musen genom en intra-artikulär injektion av MIA i en knäled och bedömning av känslighet för icke-hälsofarliga och skadliga stimuli i bakbenen. MIA injektion i samband med ihållande smärta beteende, nämligen förändrade bakbenen viktbärande och utveckling av avses mekanisk överkänslighet (allodyni). Sådana statiska mätningar kan kompletteras med gånganalys på ett löpband eller genom catwalken analys i fritt rörliga djur. MIA modeller är mottaglig för konventionella smärtlindrande terapier 24, vilket indikerar att de kan vara användbara för kräsna terapeutiska metoder. Medan injektion av MIA inte är tekniskt svårt, kan ledkapseln genomstickas under injektionen, vilket resulterar i läckage av MIA utanför kapseln, och efterföljande misslyckande att inducera toxicitet kondrocyter. I själva verket kan systemisk injektion av MIA vara dödlig hos gnagare ennd eventuella effekter av MIA på vävnader och andra än kondrocyter celler kan förvirra resultat, förutom att vara oönskad. Som sådan måste det understrykas att stor omsorg måste ges till injektion av MIA, eftersom det är en kritisk komponent i modellen och förtroende måste ges att injektionen sker i artikulära utrymmet. Detta protokoll bidrar till att uppnå detta.
De protokoll som beskrivs här syftar till att säkerställa att djuren ger konsekventa smärtliknande svar hela testperioden. Även de tillåter justering av sjukdomens svårighetsgrad genom att ändra dosen av MIA används för att framkalla patologin 15,23. Den snabba induktion av både sjukdomstillstånd och smärta-liknande beteende tillåter snabb utvärdering av smärt modifierande föreningar. Detta är fördelaktigt över befintliga kirurgisk och spontant utveckla modeller av OA, som kan ta en längre tid för att utveckla överkänslighet. Också, i synnerhet för de spontana modeller, sjukdomen Patholnik inte manifesteras i alla djur (ungefär 20 - 80% 7), medan MIA modellen är förknippad med betydande förekomst av responders. Dessutom spontana modeller är inte lämpliga för mätning av förändringar i viktbärande, som OA utvecklas i båda knäna. När man överväger beteendemätningar, djuren måste hållas lugn och avslappnad under bedömningarna. Detta uppnås, enligt beskrivningen i protokollet, i början av träning innan inspelningen mätningar och genom upprepad hantering, vilket gör det möjligt för djur att bekanta sig med försöksledaren. En viktig punkt för att minska stress är att använda samma försöks för beteendetestet hela, så konstant förändras kommer att framkalla de problem som tidigare nämnts. Liksom alla modell, MIA modell av OA bär begränsningar, såsom den snabba gemensamma störningar, som inte liknar den långsamma utvecklingen av OA patologi hos patienter. Ett sätt att lösa detta problem skulle vara att komplettera denna modell med en SUrgical modell av OA. Användningen av MIA kemiska modellen i förening utveckling möjliggör användning av förebyggande och terapeutiska protokoll över utveckling och underhåll av OA-liknande smärta. Slutligen skulle MIA modell komplettera studier av fenotypiska drag av knock-out-möss, hjälper till att ytterligare förstå OA sjukdomen.
Acknowledgments
JSV stöds av en gemensam bidrag till MM som Europeiska kommissionen (GAN 603.191-PAINCAGE).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Monoiodoacetate | Sigma-Aldrich | I-2512-25G | ≥ 98% purity |
| 0.9% Saline | Mini-Plasco basic | 365 4840 | |
| Isoflurane | Merial | DNI 4090/1 | |
| 26 G Needle | Fisher Scientific | 12947606 | |
| 50 μl Hamilton Syringe | Sigma-Aldrich | 20701 | |
| Von Frey Hairs | Linton Instruments | NC 122775-99 | |
| Incapacitance tester | Linton Instruments | Delivery on Request | |
| Testing Cage Rack | Ugo Basile | 37450 | |
| Compact Anesthetic system | Vet-Tech | AN001B | |
| Medical O2 | BOC | 101-F | |
| Aldasorbers | Vet -Tech | AN006A |
References
- Farrell, M., Gibson, S., McMeeken, J., Helme, R. Pain and hyperalgesia in osteoarthritis of the hands. J. Rheumatol. 27 (2), 441-447 (2000).
- Kuni, B., Wang, H., Rickert, M., Ewerbeck, V., Schiltenwolf, M. Pain threshold correlates with functional scores in osteoarthritis patients. Acta. Orthop. 86 (2), 215-219 (2015).
- Wylde, V., Hewlett, S., Learmonth, I. D., Dieppe, P. Persistent pain after joint replacement: prevalence, sensory qualities, and postoperative determinants. Pain. 152 (3), 566-572 (2011).
- Wylde, V., Palmer, S., Learmonth, I. D., Dieppe, P. Test-retest reliability of Quantitative Sensory Testing in knee osteoarthritis and healthy participants. Osteoarthr. Cartil. 19 (6), 655-658 (2011).
- Hunter, D. J. Pharmacologic therapy for osteoarthritis--the era of disease modification. Nat. Rev. Rheumatol. 7 (1), 13-22 (2011).
- Lampropoulou-Adamidou, K., et al. Useful animal models for the research of osteoarthritis. Eur. J. Orthop. Surg. Traumatol. 24 (3), 263-271 (2014).
- Yamamoto, K., Shishido, T., Masaoka, T., Imakiire, A. Morphological studies on the ageing and osteoarthritis of the articular cartilage in C57 black mice. J. Orthop. Surg. (Hong Kong). 13 (1), 8-18 (2005).
- Huebner, J. L., Hanes, M. A., Beekman, B., TeKoppele, J. M., Kraus, V. B. A comparative analysis of bone and cartilage metabolism in two strains of guinea-pig with varying degrees of naturally occurring osteoarthritis. Osteoarthr. Cartil. 10 (10), 758-767 (2002).
- Thysen, S., Luyten, F. P., Lories, R. J. Targets, models and challenges in osteoarthritis research. Dis Model Mech. 8 (1), 17-30 (2015).
- Longo, U. G., et al. Osteoarthritis: new insights in animal models. Open. Orthop. J. 6, 558-563 (2012).
- Bove, S. E., et al. Weight bearing as a measure of disease progression and efficacy of anti-inflammatory compounds in a model of monosodium iodoacetate-induced osteoarthritis. Osteoarthr. Cartil. 11 (11), 821-830 (2003).
- Pomonis, J. D., et al. Development and pharmacological characterization of a rat model of osteoarthritis pain. Pain. 114 (3), 339-346 (2005).
- Schuelert, N., McDougall, J. J. Grading of monosodium iodoacetate-induced osteoarthritis reveals a concentration-dependent sensitization of nociceptors in the knee joint of the rat. Neurosci. Lett. 465 (2), 184-188 (2009).
- Vonsy, J. L., Ghandehari, J., Dickenson, A. H. Differential analgesic effects of morphine and gabapentin on behavioural measures of pain and disability in a model of osteoarthritis pain in rats. Eur. J. Pain. 13 (8), 786-793 (2009).
- Im, H. J., et al. Alteration of sensory neurons and spinal response to an experimental osteoarthritis pain model. Arthritis Rheum. 62 (10), 2995-3005 (2010).
- Sabri, M. I., Ochs, S. Inhibition of glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase in mammalian nerve by iodoacetic acid. J. Neurochem. 18 (8), 1509-1514 (1971).
- van der Kraan, P. M., Vitters, E. L., van de Putte, L. B., van den Berg, W. B. Development of osteoarthritic lesions in mice by 'metabolic' and 'mechanical' alterations in the knee joints. Am. J. Pathol. 135 (6), 1001-1014 (1989).
- Guingamp, C., et al. Mono-iodoacetate-induced experimental osteoarthritis: a dose-response study of loss of mobility, morphology, and biochemistry. Arthritis Rheum. 40 (9), 1670-1679 (1997).
- Janusz, M. J., et al. Moderation of iodoacetate-induced experimental osteoarthritis in rats by matrix metalloproteinase inhibitors. Osteoarthr. Cartil. 9 (8), 751-760 (2001).
- Marker, C. L., Pomonis, J. D. The monosodium iodoacetate model of osteoarthritis pain in the rat. Methods Mol. Biol. 851, 239-248 (2012).
- Chaplan, S. R., Bach, F. W., Pogrel, J. W., Chung, J. M., Yaksh, T. L. Quantitative assessment of tactile allodynia in the rat paw. J. Neurosci. Methods. 53 (1), 55-63 (1994).
- Dixon, W. J. Efficient analysis of experimental observations. Ann. Rev. Pharmacol. Toxicol. 20, 441-462 (1980).
- Ogbonna, A. C., Clark, A. K., Gentry, C., Hobbs, C., Malcangio, M. Pain-like behaviour and spinal changes in the monosodium iodoacetate model of osteoarthritis in C57Bl/6 mice. Eur. J. Pain. 17 (4), 514-526 (2013).
- Fernihough, J., Gentry, C., Malcangio, M., Fox, A., Rediske, J., Pellas, T., Kidd, B., Bevan, S., Winter, J. Pain related behaviour in two models of osteoarthritis in the rat. Pain. 112 (1-2), 83-93 (2004).
