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Medicine

माउस में ऑस्टियोआर्थराइटिस दर्द की Monoiodoacetate मॉडल

Published: May 16, 2016 doi: 10.3791/53746
Automatic Translation
1, 1, 1
1Wolfson Centre for Age Related Diseases, King's College London

Summary

ऑस्टियोआर्थराइटिस (OA), या अपक्षयी संयुक्त रोग, एक गंभीर दर्द है कि केवल आंशिक रूप से उपलब्ध दर्दनाशक दवाओं से नियंत्रित रहता है के साथ जुड़े शर्त है। पशु मॉडलों OA-संबंधित दर्द तंत्र के बारे में हमारी समझ में सुधार करने के लिए विकसित किया जा रहा है। यहाँ हम माउस में OA दर्द की monoiodoacetate मॉडल के लिए कार्यप्रणाली का वर्णन है।

Abstract

ऑस्टियोआर्थराइटिस (OA) के साथ रोगियों का एक प्रमुख लक्षण दर्द उस दर्द को रास्ते भीतर परिधीय के साथ ही केंद्रीय परिवर्तन से शुरू हो रहा है। ऐसे NSAIDs या opiates के रूप में OA दर्द के लिए वर्तमान उपचार न तो पर्याप्त प्रभावी और न ही हानिकारक साइड इफेक्ट से रहित हैं। OA के पशु मॉडल OA-संबंधित दर्द तंत्र के बारे में हमारी समझ में सुधार और चिकित्सा के लिए उपन्यास औषधीय लक्ष्यों को परिभाषित करने के लिए विकसित किया जा रहा है। वर्तमान में कृंतकों में OA के मॉडल उपलब्ध एक संयुक्त घुटने में शल्य चिकित्सा और रासायनिक हस्तक्षेप शामिल हैं। monoiodoacetate (मिया) मॉडल दोनों चूहों और चूहों में OA में संयुक्त व्यवधान मॉडलिंग के लिए एक मानक बन गया है। मॉडल है, जो चूहे में प्रदर्शन करने के लिए आसान है, एक संयुक्त घुटने कि ipsilateral अंग में तेजी से दर्द-तरह की प्रतिक्रियाएं, किस स्तर के विभिन्न खुराक के इंजेक्शन से नियंत्रित किया जा सकता लाती में मिया के इंजेक्शन शामिल है। मिया की इंट्रा-जोड़ इंजेक्शन glycer बाधा उपास्थिकोशिका ग्लाइकोलाइसिस बाधितएल्डिहाइड-3-फॉस्फेट डिहाइड्रोजनेज और उपास्थिकोशिका मौत, neovascularization, subchondral हड्डी गल जाना और पतन में परिणाम है, साथ ही सूजन। जोड़ कार्टिलेज और हड्डी व्यवधान के morphological परिवर्तन रोगी विकृति के कुछ पहलुओं को प्रतिबिंबित करता है। संयुक्त क्षति के साथ-साथ, मिया इंजेक्शन लाती ipsilateral हिंद पंजा और वजन घाटा है कि औसत दर्जे का है और quantifiable हैं असर में यांत्रिक संवेदनशीलता भेजा। ये व्यवहार में बदलाव लक्षण रोगी जनसंख्या द्वारा सूचना दी, जिससे OA दर्द का एक उपयोगी और प्रासंगिक पूर्व नैदानिक ​​मॉडल के रूप में घुटने में मिया इंजेक्शन मान्य के कुछ समान है।

इस लेख का उद्देश्य के लिए आवश्यक कदम को उजागर करने के लिए सुसंगत और विश्वसनीय रिकॉर्डिंग देने के लिए एक मन के साथ मिया की इंट्रा-जोड़ इंजेक्शन और अतिसंवेदनशीलता जुड़े विकास के व्यवहार रिकॉर्डिंग की पद्धति का वर्णन है।

Introduction

चिकित्सकीय, पुराने ऑस्टियोआर्थराइटिस (OA), या अपक्षयी संयुक्त रोग, एक दर्दनाक और गंभीर स्थिति जोड़ कार्टिलेज में और जोड़ों के आसपास के ऊतकों के हल्के सूजन, और कभी कभी osteophytes और हड्डी अल्सर के गठन के एक प्रगतिशील नुकसान की विशेषता है। OA के साथ मरीजों को लगातार दर्द 1 और प्रदर्शन के दबाव और हानिकारक उत्तेजनाओं के प्रति संवेदनशीलता में वृद्धि हुई है गठिया के संयुक्त 2-4 में रिपोर्ट करते हैं। वर्तमान में, वहाँ उपलब्ध चिकित्सकीय दृष्टिकोण और दर्दनाशक दवाओं सफलता 5 के कुछ डिग्री के साथ इस शर्त के साथ जुड़े दर्द को कम करने के लिए, निर्धारित कर रहे हैं के साथ OA के लिए कोई इलाज नहीं है। हालांकि, OA दर्द OA के एक नैदानिक ​​मुद्दा है और पशु मॉडल OA-संबंधित दर्द तंत्र के बारे में हमारी समझ में सुधार और चिकित्सा के लिए उपन्यास लक्ष्य का खुलासा करने के लिए विकसित किया जा रहा है बनी हुई है।

वहाँ अलग अलग विशेषताओं के साथ उपलब्ध 6 OA के कई पशु मॉडल हैं। ऐसे पूर्वकाल के रूप में शल्य चिकित्सा पद्धतियों,cruciate बंधन transection, उपयोग किया जा सकता है। हालांकि, वे कुशल शल्य चिकित्सा हस्तक्षेप शामिल है और मुख्य रूप से चूहे में प्रदर्शन कर रहे हैं, जबकि औसत दर्जे का meniscus (डी एम एम) की अस्थिरता माउस में प्रयोग किया जाता है। OA का सहज विकास में गिनी पिग और सहज संयुक्त अध: पतन 7.8 उम्र के 3 से 16 महीने से C57 काला चूहों में सूचित किया गया होता है। उठना, OA मॉडल हालत प्रेरित करने के लिए किसी प्रकार के हस्तक्षेप शामिल नहीं है, लेकिन वे निहित परिवर्तनशीलता है, और इस तरह के रूप में, अधिक से अधिक संख्या उठाना और लागत 9,10। रासायनिक प्रेरित मॉडल, दूसरे हाथ पर, शल्य चिकित्सा मॉडल की तुलना में बहुत कम आक्रामक प्रक्रियाओं की आवश्यकता होती है, और इस तरह के रूप में लागू करने के लिए आसान कर रहे हैं और विभिन्न चरणों में OA घावों के अध्ययन की अनुमति। इन मॉडलों को भड़काऊ एजेंटों, immunotoxins, कोलेजिनेस, papain, या monoiodoacetate के घुटने, जो अगर वे संयुक्त अंतरिक्ष से बच विषाक्त हो सकता है में एक इंजेक्शन शामिल हैं। OA के सभी रासायनिक मॉडलों की, मिया एक सबसे अक्सर इस्तेमाल किया, देहात हैrticularly, दर्द के इलाज के लिए pharmacologic एजेंटों की प्रभावकारिता का परीक्षण करने के रूप में इस मॉडल एक, प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य मजबूत, और तेजी से दर्द की तरह phenotype कि मिया खुराक 11-15 बदलकर वर्गीकृत किया जा सकता उत्पन्न करता है।

मूषक में मिया की इंट्रा-जोड़ इंजेक्शन OA-तरह के घावों और कार्यात्मक हानि कि विश्लेषण किया और मात्रा निर्धारित किया जा सकता है reproduces। मिया glyceraldehyde-3-फॉस्फेट के एक अवरोध, सेलुलर ग्लाइकोलाइसिस में खलल न डालें और अंततः कोशिका मृत्यु 16,17 में जिसके परिणामस्वरूप है। मिया की इंट्रा-जोड़ इंजेक्शन osteophytes 18,19 जैसे हड्डी की उपस्थिति के रूप में, उपास्थिकोशिका कोशिका मृत्यु का कारण बनता है कार्टिलेज अध: पतन और बाद subchondral हड्डी परिवर्तन के लिए अग्रणी।

चूहे में मिया की उपयोगिता 20 से पहले वर्णित किया गया है के रूप में, इस पत्र में हम चूहों में मिया प्रेरित OA की कार्यप्रणाली पर ध्यान केंद्रित करने के रूप में इस मॉडल तेजी से नाक आउट चूहों की उपलब्धता के साथ इस्तेमाल किया जा रहा है। हम injec के लिए एक प्रक्रिया का वर्णनघुटने में बहुत छोटी मात्रा और हिंद अंग में हानिकारक और गैर हानिकारक उत्तेजनाओं के प्रति संवेदनशीलता को मापने के लिए तरीकों की tion।

कार्यप्रणाली के टूटने परिवर्तनशीलता को कम करने में मदद करेगा, और जैसे, मॉडल को निखारने और अध्ययन के लिए आवश्यक जानवरों की संख्या कम है।

Protocol

पशु विषयों को शामिल प्रक्रियाओं किंग्स कॉलेज लंदन में नैतिक समिति द्वारा अनुमोदित किया गया है और ब्रिटेन के गृह मंत्रालय नियमों के अनुसार कर रहे हैं (पशु वैज्ञानिक प्रक्रिया अधिनियम 1986)।

1. घुटने में Monoiodoacetate की इंट्रा-जोड़ इंजेक्शन

  1. हाउस 8 -। एक 12 घंटा / प्रकाश अंधेरे चक्र के तहत 5 के समूह में 10 सप्ताह पुरानी चूहों (7:00 पर रोशनी) भोजन और पानी यथेच्छ के साथ चूहों 1 सप्ताह के लिए जलवायु के अनुकूल बनाना चलो प्रयोग शुरू करने से पहले।
  2. अनियमित करें और कोड के रूप में 5. इस्तेमाल पशु संख्या के समूह में पिंजरे चूहों उपचार के लिए प्रयोगकर्ता अंधा। randomization के लिए मानकों के रूप में शरीर के वजन का प्रयोग करें।
  3. इंजेक्शन के दिन, हौसले से वांछित सांद्रता में बाँझ खारा (0.9% NaCl) में monoiodoacetate का समाधान तैयार है। चूहों पर नियंत्रण का एक अलग समूह में इंजेक्शन के लिए बाँझ खारा का प्रयोग करें। मिया के उच्चतम सिफारिश की खुराक 10 μl में 1 मिलीग्राम है।
    सावधानी: Monoiodoacetate देखें हैY विषाक्त। इसलिए, यह सिफारिश की है कि दस्ताने और मास्क जब पाउडर से निपटने और समाधान की तैयारी पहने जाते हैं। समाधान बाँझ 0.22 माइक्रोन फिल्टर के साथ फ़िल्टर करना चाहिए।
  4. पहली बार उन्हें एक कक्ष हे 2 मिश्रण में 2% isoflurane पहुंचाने में रखकर एक संवेदनाहारी ट्राली का प्रयोग चूहों anesthetize (प्रवाह दर 1.5 एल / मिनट) और फिर नाक शंकु खंड है, जो भी 2% isoflurane-ओ 2 मिश्रण उद्धार करने के लिए चूहों का स्थानांतरण और इस तरह के रूप में, इंजेक्शन के दौरान संज्ञाहरण बनाए रखता है। आँखों पर पशु चिकित्सक मरहम की जगह, जबकि संज्ञाहरण के तहत उनके बाहर सुखाने से बचने के लिए। शल्य गाउन, दस्ताने, और नकाब पहनते हैं, जबकि इंजेक्शन प्रक्रिया का प्रदर्शन।
  5. हिंद पंजे पर एक चुटकी उत्तेजना के जवाब के पशु की कमी की जाँच करके संज्ञाहरण की पुष्टि करें।
  6. एक बार जानवर संज्ञाहरण के तहत है, अपनी पीठ पर जगह है। ट्रिम और शराब के साथ संयुक्त घुटने के आसपास के क्षेत्र पोंछे। Povidone आयोडीन या chlorhexidine के रूप में अच्छी तरह से इस्तेमाल किया जा सकता चया कीटाणुशोधन। patellar कण्डरा (पटेला bellow सफेद लाइन) दिखाई हो जाएगा।
  7. आदेश में, इंजेक्शन साइट को स्थिर घुटने में अभी भी रखने के लिए, एक तुला स्थिति में, संयुक्त घुटने और टखने संयुक्त के पूर्वकाल सतह से ऊपर अंगूठे के नीचे तर्जनी रखकर करने के लिए। संयुक्त वरीयता की आवश्यकता नहीं है।
  8. इंजेक्शन की सटीक साइट को खोजने के लिए, क्षैतिज घुटने (इतनी के रूप टिप के साथ त्वचा बेध नहीं) के साथ एक 26 जी सुई एक सिरिंज से जुड़ी चलाने के लिए जब तक यह पटेला नीचे खाई को पाता है। क्षेत्र चिह्नित और फिर सुई उठा और इंजेक्शन के लिए खड़ी सिरिंज के लिए कोमल दबाव लागू करें। सुई, patellar कण्डरा के माध्यम से, चिह्नित क्षेत्र में डालें टिबिअ को सीधा। कोई प्रतिरोध महसूस किया जाना चाहिए।
    1. एक गाइड के रूप में अंगूठे का प्रयोग करें और प्रवेश की साइट के लिए सतही इंजेक्षन। इंजेक्शन के बाद, मालिश घुटने समाधान का भी वितरण सुनिश्चित करने के लिए। तेज में तुरंत सुई त्यागेंएस बिन।
    2. चूहों एक गर्म चटाई पर एक साफ घर पिंजरे में वापस प्लेस और उन्हें ठीक करने के लिए अनुमति देते हैं। जब तक वे उपयुक्त चेतना है, जो उनके द्वारा मापा जाता है स्टर्नल लेटना फिर से हासिल जानवरों पर निरंतर सतर्कता रखें। एक बार जानवरों बरामद कर रहे हैं, उनके पिंजरे में लौटने।
      नोट: यह सबसे अच्छा अभ्यास और प्रशिक्षण के उद्देश्यों है कि एक डाई का इस्तेमाल किया जाता है और तत्काल पोस्टमार्टम विच्छेदन इंजेक्शन का सही स्थानीयकरण पुष्टि करने के लिए प्रदर्शन के लिए सुझाव दिया है।

2. यांत्रिक अतिसंवेदनशीलता का मापन (Allodynia)

नोट: स्टेटिक यांत्रिक वापसी थ्रेसहोल्ड हिंद पंजा के तल सतह के लिए वॉन फ्रे बाल लगाने से मूल्यांकन कर रहे हैं।

  1. व्यवहार के कमरे में चूहों ले आओ और अनर्गल जानवरों एक्रिलिक केबिन (8 सेमी एक्स 5 सेमी x 10 सेमी) एक तार की जाली ग्रिड के ऊपर में जलवायु के अनुकूल बनाना करते हैं।
    1. दो दिन वॉन फ्रे बाल आवेदन करने से पहले क्रम में के लिए हैंडलिंग और केबिन को 2 घंटा आदी होना द्वारा ट्रेन चूहोंवॉन फ्रे बाल के आवेदन के दौरान तनाव और ambulation सीमा। परीक्षा के दिनों में, 60 मिनट तक परीक्षण के लिए पूर्व केबिन के लिए पशुओं की आदत डालना। सभी व्यवहार प्रयोगों के दौरान गाउन, दस्ताने, और मास्क पहनें।
  2. फाइबर झुकता तक हिंद पंजा के तल सतह के लिए calibrated वॉन फ्रे बाल (बढ़ती व्यास रूप में है कि निर्माण कंपनी द्वारा calibrated और के रूप में ग्राम (छ व्यक्त परिभाषित बल के स्तर को लागू) का लचीला नायलॉन फाइबर) को लागू करें। परीक्षण के दौरान 0.008, 0.02, 0.04, 0.07, 0.16, 0.4, 0.6, और 1.0 ग्राम फाइबर का प्रयोग करें।
    1. 3 सेकंड के लिए जगह में प्रत्येक बाल पकड़ या जब तक पंजा वापस ले लिया है, बाद में एक सकारात्मक प्रतिक्रिया को परिभाषित। एक वापसी प्रतिक्रिया एक्स के रूप में मार्क और हे प्रतिक्रिया का अभाव: 0.07 ग्राम के एक प्रोत्साहन ताकत के साथ शुरू, "ऊपर-नीचे विधि" 21 के अनुसार बाल लागू होते हैं। बल के आरोही क्रम में लागू करें, 1 ग्राम (कट ऑफ बल) तक है, जब तक एक प्रतिक्रिया का पता चला है।
    2. दोहरा द्वारा पंजा फिर से परीक्षणकदम 2.2.1, रेशा है कि एक यह है कि एक वापसी का उत्पादन नीचे एक बल डाल रही है के साथ शुरू।
    3. फिर, शेष तंतु क्रमिक रूप से, लागू बल उतरते द्वारा जब तक कोई वापसी होती है। फिर से लागू आरोही क्रम में तंतु तक एक प्रतिक्रिया मनाया जाता है। जारी रखें जब तक छह प्रतिक्रियाओं का एक दृश्य, (जैसे, OXOXOX) प्राप्त की है आदेश सारणीबद्ध की चर्चा करते हुए 21 मूल्यों से 'कश्मीर' मूल्य प्राप्त करने के लिए।
    4. एक्सप्रेस ग्राम में 50% पंजा वापसी थ्रेसहोल्ड के रूप में पंजा वापसी मान हैं। सूत्र (10 [Xr + K δ]) / उपयोग 10,000 जहां Xr = = पिछले वॉन फ्रे अनुक्रम में प्रयोग किया जाता है (लॉग इकाइयों में) रेशा, कश्मीर = सारणीबद्ध मूल्य के मूल्य, और δ फाइबर के बीच बलों में अंतर हो। जहां कोई प्रतिक्रिया का पता चला है, 1 ग्राम 21,22 के अधिक से अधिक प्रतिक्रिया का उपयोग करें।
  3. प्रक्रिया से ऊपर (2.2.1-2.2.4) में वर्णित के बाद, मिया injectio से पहले दोनों हिंद पंजे के यांत्रिक थ्रेसहोल्ड का आकलनआधारभूत मूल्यों के रूप में एन। इंजेक्शन के बाद, यांत्रिक परपीड़ा के विकास का पता लगाने के मिया के बाद कई हफ्तों के लिए नियमित रूप से दिन के अंतराल पर ipsilateral और contralateral पंजे के थ्रेसहोल्ड का आकलन करें।
    नोट: उदाहरण के लिए, हम मापा थ्रेसहोल्ड रिपोर्ट 0, 3, 5, 7, 10, 14, 21, और 28 दिनों मिया इंजेक्शन के बाद। पशु allodynic माना जाता है जब वे 0.1 ग्राम या उससे कम के लिए एक प्रतिक्रिया प्रदर्शित कर रहे हैं। 1 ग्राम रेंज - सामान्य प्रतिक्रियाओं 0.6 भीतर गिर जाते हैं।

3. वजन असर घाटे का मापन

नोट: वजन में परिवर्तन असर एक वजन incapacitance परीक्षक का उपयोग कर मापा जाता है।

  1. प्रत्येक माउस ट्रेन तंत्र पर एक Plexiglass कक्ष में चलने के लिए और पकड़े बॉक्स में बैठने के लिए। पकड़े बॉक्स के सामने माउस जगह है, प्रवेश द्वार के ऊपर 45 डिग्री उठा, और माउस में चलने के लिए और बॉक्स को बंद करने के लिए अनुमति देते हैं। जानवरों के लिए स्वतंत्र रूप से स्थानांतरित करने के लिए जब तक वे एक बैठक मुद्रा अपनाने की अनुमति दें। इस प्रशिक्षण में कम से कम दो दिन लगते हैं और गारंटी देता है कि पशु अभी भी और नहीं है lचैम्बर के दोनों तरफ eaning। एक 100 ग्राम की जांच वजन के साथ उपयोग करने से पहले साधन जांचना (या उपकरण के निर्देश के अनुसार)।
    1. सुनिश्चित करें कि प्रत्येक हिंद पंजा उचित रिकॉर्डिंग पैड 11 पर रखा गया है सुनिश्चित करें। प्रत्येक माप की अवधि के निर्माता के निर्देशों के अनुसार, 1 सेकंड लेता है।
  2. वजन प्रत्येक रिकॉर्डिंग सत्र के लिए रिकॉर्डिंग पैड से प्रत्येक हिंद पंजा पर वहन की तीन माप लीजिए और ipsilateral और contralateral पंजे द्वारा वहन वजन में अंतर की गणना करने के लिए मतलब मूल्य का उपयोग करें। ग्राम में contralateral और ipsilateral पंजे के बीच अंतर के रूप में एक्सप्रेस मूल्यों।
  3. आधारभूत मूल्यों के रूप में मिया इंजेक्शन से पहले वजन असर परिवर्तन का आकलन करें। फिर, कई हफ्तों से अधिक नियमित अंतराल पर दोहराने आकलन गेट परिवर्तन के विकास का पता लगाने के। उदाहरण के लिए, हम पर मापा थ्रेसहोल्ड रिपोर्ट 0, 3, 5, 7, 10, 14, 21, और 28 दिनों मिया इंजेक्शन के बाद।
    नोट: एक सामान्य वजन ख50% की earing मूल्य ipsilateral और contralateral hindlimb भर में एक समान वजन वितरण का प्रतिनिधित्व करता है। पशु अतिसंवेदनशील प्रदर्शन एक वजन असर लगभग 45% की परिवर्तन माना जाता है। यांत्रिक थ्रेसहोल्ड और वजन असर घाटे की माप, एक ही चूहों में प्रदर्शन किया जा सकता है, क्योंकि न तो अंत बिंदु दूसरे को प्रभावित करता है। औषधीय मूल्यांकन के लिए, जानवरों के प्रत्येक समूह के लिए प्रयोग किया जाता परिसर के फ़ार्माकोकायनेटिक प्रोफाइल के साथ लाइन में खुराक के बाद निर्धारित समय पर परीक्षण किया जाना चाहिए।

Representative Results

, माउस संयुक्त घुटने लाती में 1 मिलीग्राम मिया ipsilateral हिंद पंजा में यांत्रिक अतिसंवेदनशीलता (परपीड़ा) और वजन 4 सप्ताह के लिए असर घाटे में भेजा हालांकि onsets खुराक पर निर्भर 23 हैं - हम हाल ही में सूचना दी है कि 0.5 के इंजेक्शन।

डेटा चित्रा 1 में सूचना दी घुटने में इंजेक्शन खुराक की एक सीमा के बाद ipsilateral हिंद पंजे में मिया प्रेरित यांत्रिक अतिसंवेदनशीलता के समय पाठ्यक्रम का एक उदाहरण का गठन। विशेष रूप से, मिया (0.5 मिलीग्राम / माउस) की सबसे कम खुराक 10 दिन पर खारा के इंजेक्शन की तुलना में सीमा के 50% कमी प्रेरित किया, और थ्रेसहोल्ड इंजेक्शन के बाद 28 दिन से खारा नियंत्रण के उन लोगों में से 70% की कमी हुई। मिया की 0.75 मिलीग्राम की खुराक मध्यवर्ती थ्रेसहोल्ड में एक क्रमिक कमी है कि 10 दिन पर खारा नियंत्रण थ्रेसहोल्ड 80% से कम थे और कम 28. दिन तक बने रहे 1 मिलीग्राम मिया के उच्चतम खुराक एक संकेत के साथ जुड़े थे में हुई5 दिन सीमा में ificant ड्रॉप और 10 दिन पर एक और कमी है, जो दिन के 28 अप करने के लिए निरंतर था।

डेटा चित्रा 2 में खबर दी है कि घुटने के जोड़ों में मिया इंजेक्शन के साथ जुड़े रहे हैं वजन असर परिवर्तन का उदाहरण देते हैं। प्रयोगों के इस सेट है, जबकि 0.5 मिलीग्राम खुराक मिया अध्ययन के 28 दिन की अवधि के दौरान असर वजन में महत्वपूर्ण परिवर्तन के लिए प्रेरित नहीं किया था में, 0.75 मिलीग्राम खुराक मिया वजन में एक महत्वपूर्ण कमी 10 दिन से ipsilateral पंजा द्वारा वहन में हुई बाद। विशेष रूप से, वजन असर विषमता मिया की 0.75 मिलीग्राम के साथ जुड़े अध्ययनों से 23 के बीच चर और असंगत परिणाम उत्पादन हो सकता है। इसके बजाय, 1 मिलीग्राम मिया की खुराक आम तौर पर प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य वजन असर विषमता और चित्रा 2 में डेटा प्रदर्शित वजन के महत्वपूर्ण कमी अवलोकन अवधि के अंत तक 3 दिन से ipsilateral हिंद पंजा पर वहन लाती है। उम्मीद है, साली के रूप मेंNE-इलाज जानवरों कोई वजन असर परिवर्तन दिखाया।

आकृति 1
चित्रा 1. यांत्रिक का विकास Allodynia पोस्ट मिया इंजेक्शन। Ipsilateral और contralateral हिंद पंजे का पंजा वापसी थ्रेसहोल्ड पहले और मिया (0.5, 0.75, और 1mg / माउस) और खारा (0.9% NaCl) के इंजेक्शन के बाद का मूल्यांकन किया गया, एन = 8 - 10 चूहों / समूह। * पी <0.05, ** पी <0.01, *** पी <0.001 बनाम खारा इलाज समूह; दो-तरफा दोहराया माप एनोवा छात्र न्यूमैन-Keuls के द्वारा पीछा पोस्ट अस्थायी परीक्षण। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्र 2
चित्रा 2. वजन असर घाटे का विकासपद मिया इंजेक्शन। दो हिंद अंग के बीच शरीर के वजन वितरण में परिवर्तन के रूप में गणना की गई [* 100 (वजन ipsilateral पंजा / वजन ipsilateral और contralateral पंजे पर वहन का योग पर वहन)] से पहले और मिया के इंजेक्शन (के बाद का मूल्यांकन किया गया 0.5, 0.75, और 1 मिलीग्राम / माउस) और खारा (0.9% NaCl), एन = 8 - 10 चूहों / समूह। * पी <0.05, ** पी <0.01, *** पी <0.001 बनाम खारा इलाज समूह। दो-तरफा दोहराया माप एनोवा छात्र न्यूमैन-Keuls के द्वारा पीछा पोस्ट अस्थायी परीक्षण। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Discussion

इस पद्धति के साथ, हम एक संयुक्त घुटने और संवेदनशीलता के आकलन हिंद अंग में गैर हानिकारक और हानिकारक उत्तेजनाओं के लिए मिया के एक अंतर-जोड़ इंजेक्शन द्वारा माउस में OA-तरह दर्द उत्प्रेरण के लिए एक पसंदीदा विधि का वर्णन है। मिया इंजेक्शन लगातार दर्द व्यवहार, अर्थात् बदल हिंद अंग वजन असर और निर्दिष्ट यांत्रिक अतिसंवेदनशीलता (परपीड़ा) के विकास के साथ जुड़ा हुआ है। इस तरह स्थिर माप स्वतंत्र रूप से चलती जानवरों में एक ट्रेडमिल पर या कैटवॉक विश्लेषण द्वारा चाल विश्लेषण से पूरित किया जा सकता है। मिया मॉडल पारंपरिक दर्द से राहत के उपचारों 24 के लिए उत्तरदायी हैं, यह दर्शाता है कि वे चिकित्सकीय दृष्टिकोण समझदार के लिए उपयोगी हो सकता है। जबकि मिया के इंजेक्शन तकनीकी रूप से कठिन नहीं है, संयुक्त कैप्सूल कैप्सूल के बाहर मिया का रिसाव, और बाद में विफलता में जिसके परिणामस्वरूप chondrocytes की विषाक्तता प्रेरित करने के लिए इंजेक्शन के दौरान छेदा जा सकता है। दरअसल, मिया के प्रणालीगत इंजेक्शन मूषक एक में घातक हो सकती हैएन डी ऊतकों और chondrocytes के अलावा अन्य कोशिकाओं पर मिया के संभावित प्रभावों परिणाम उलझाना सकता है, अवांछनीय होने के अलावा। जैसे, यह जोर दिया जाना चाहिए महान देखभाल, मिया के इंजेक्शन दिए जाने की के रूप में यह मॉडल का एक महत्वपूर्ण घटक है, और विश्वास है कि इंजेक्शन जोड़ अंतरिक्ष में होता है दिए जाने की जरूरत है कि जरूरत है। इस प्रोटोकॉल है कि प्राप्त करने में मदद करता है।

प्रोटोकॉल यहाँ वर्णित सुनिश्चित करने के लिए जानवरों के परीक्षण अवधि के दौरान लगातार दर्द-तरह की प्रतिक्रियाएं उपलब्ध कराने के उद्देश्य। इसके अलावा, वे विकृति 15,23 प्रेरित करने के लिए प्रयोग किया जाता है मिया की खुराक बदलकर रोग की गंभीरता के समायोजन के लिए अनुमति देते हैं। दोनों रोग राज्य और दर्द की तरह व्यवहार के तेजी से प्रेरण दर्द को संशोधित करने के यौगिकों का समय पर मूल्यांकन के लिए अनुमति देते हैं। यह शल्य मौजूदा और अनायास OA का मॉडल है, जो समय की एक लंबी अवधि के लिए ले अतिसंवेदनशीलता को विकसित करने के लिए कर सकते हैं विकासशील से ज्यादा फायदेमंद है। इसके अलावा, विशेष रूप से सहज मॉडल के लिए, रोग pathol- (80% 7 ​​लगभग 20) जबकि मिया मॉडल responders के महत्वपूर्ण घटना के साथ जुड़ा हुआ है ogy सभी जानवरों में प्रकट नहीं करता। इसके अलावा, सहज मॉडल नहीं वजन असर में बदलाव की माप के लिए उपयुक्त है, के रूप में OA दोनों घुटनों में विकसित कर रहे हैं। जब व्यवहार माप पर विचार, जानवरों के मूल्यांकन के दौरान शांत और आराम रखा जाना चाहिए। इस हासिल की है, के रूप में माप रिकॉर्डिंग से पहले और दोहराव से निपटने, जो पशुओं प्रयोगकर्ता के साथ परिचित बनने के लिए अनुमति देता है द्वारा प्रोटोकॉल में विस्तृत जानकारी दी, प्रारंभिक प्रशिक्षण के द्वारा। एक प्रमुख तनाव कम करने के लिए बिंदु भर में, व्यवहार परीक्षण के लिए एक ही प्रयोगकर्ता के रूप में उपयोग करने के लगातार बदलते मुद्दों कि पहले उल्लेख किया प्रेरित करेगा। किसी भी मॉडल की तरह, OA की मिया मॉडल इस तरह के संयुक्त व्यवधान की तेज़ी है, जो रोगियों में OA विकृति की धीमी गति से विकास के समान नहीं है क्योंकि सीमाओं, भालू। एक तरह से इस मुद्दे पर काबू पाने के लिए एक सु के साथ इस मॉडल पूरक होगाOA के metallu rgical मॉडल। परिसर के विकास में मिया रासायनिक मॉडल के उपयोग के विकास और OA-तरह के दर्द के रखरखाव पर preventative और उपचारात्मक प्रोटोकॉल के उपयोग के लिए अनुमति देता है। अंत में, मिया मॉडल नाक आउट चूहों के phenotypical लक्षण की पढ़ाई के पूरक होता है, आगे OA बीमारी को समझने में मदद मिलती है।

Acknowledgments

JSV यूरोपीय आयोग (गण मन 603191-PAINCAGE) द्वारा मिमी के लिए एक सहयोगी अनुदान द्वारा समर्थित है।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Monoiodoacetate Sigma-Aldrich I-2512-25G ≥ 98% purity
0.9% Saline Mini-Plasco basic 365 4840
Isoflurane Merial DNI 4090/1
26 G Needle Fisher Scientific 12947606
50 μl Hamilton Syringe Sigma-Aldrich 20701
Von Frey Hairs Linton Instruments NC 122775-99
Incapacitance tester Linton Instruments Delivery on Request
Testing Cage Rack  Ugo Basile 37450
Compact Anesthetic system Vet-Tech AN001B
Medical O2 BOC 101-F
Aldasorbers Vet -Tech AN006A

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References

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माउस में ऑस्टियोआर्थराइटिस दर्द की Monoiodoacetate मॉडल
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Pitcher, T., Sousa-Valente, J.,… More

Pitcher, T., Sousa-Valente, J., Malcangio, M. The Monoiodoacetate Model of Osteoarthritis Pain in the Mouse. J. Vis. Exp. (111), e53746, doi:10.3791/53746 (2016).

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