Introduction
Evnen til å kombinere genetiske og biokjemiske metoder har gjort Drosophila et spesielt egnet organisme for biokjemi og molekylær biologi studier 1-3. Disse studiene krever ofte store mengder biologisk materiale, ikke bare fra voksne fluer, men også fra larver 4, puppe 5 og embryoer 6-8. For å få store mengder materiale, forskere har dyrket fluer ved hjelp av store beholdere som kalles fly "befolknings bur". Disse burene består av en sylinder laget av plast dekket av et nett på begge sider for å tillate innføring av mat inne i buret uten fluene rømmer. Disse burene kan være hjemmelaget 9-11 eller kjøpt fra et selskap (se tabell over spesifikke materialer / utstyr).
En stor fordel med å bruke dette systemet for å dyrke store antall fluer er at syklusen av bananflue 12 kan styres på en slik måte at alle fluene utvikle seg i en relatively synkronisert måte. Denne synkroniseringen er oppnådd ved såing nye embryo, fôring larver / fluer og ofre de voksne fluene på nøyaktige tider. Ved hjelp av en synkronisert fly befolkningen er spesielt nyttig for utviklingsstudier 13.
Starten på en ny populasjon bur fra noen fluer er en tidkrevende prosess som krever mange amplifikasjonssykluser 9-11. Selv ved bruk av større beholdere slik utlegger kulturflasker eller minicages, kan hele prosessen vare i måneder. For å unngå dette tidkrevende trinn, mange Drosophila laboratorier regelmessig vedlikeholde slike bur. Det er mest praktisk å starte et nytt bur fra et embryo samling fra en allerede etablert befolkning bur. Generelt, de fleste laboratorier opprettholde villtype befolknings bur, for eksempel Oregon R eller Canton S. Dette manuskriptet presenterer en detaljert protokoll for å opprettholde fly befolkningen bur.
Protocol
1. Starte Cycle: seeding Embryoet
MERK: Syklusen starter med 1,5 g av innsamlet materiale (en blanding bestående av befruktede egg og / eller noen første stadium larver) fra den forrige syklusen. Dette materialet vil bli plassert i en plastbeholder (se tabell av spesifikke materialer / utstyr) med en aktiv gjær blandingen inntil pupal fase. Beholderen lukkes etter innføring av den biologiske blanding av befruktede egg og larver med lokk for å unngå at larvene å unnslippe. Det er nødvendig å lage hull i lokket for å tillate luftsirkulasjon. For å unngå at larvene flukt gjennom hullene, blir skum plugger brukes. Til slutt, er det anbefalt å bruke hansker og frakk, ikke bare i denne delen, men også i hele protokollen, for å unngå å få skitne eller flekker klær med blekemiddel.
- Sett opp plastbeholder.
- Gjøre tre kvadratiske hull med et barberblad i plastbeholderlokket av enpproximately 2,2 cm. Legg tape (3/4 tommers merking tape) til de fire hjørner av hvert hull for å sikre en tett passform for de skumplugger (50 x 55 mm, DXL), og deretter plassere en skum plugg i hvert hull.
- Dekker innsiden av plastbeholder med plastfolie. I løpet av denne film, legge et lag av bomull for å dekke bunnen av plastbeholderen. Riv bomull med fingrene.
- Klargjør fly mat.
- Legg 333 ml avionisert vann i et 500 ml begerglass. Under omrøring av begerglasset med en magnetisk stav, tilsett 167 ul av propionsyre og 1,08 ml fosforsyre, fra stamløsninger (99,96% og 85%, respektivt).
- Sakte legger 77,5 g tørrgjær, unngå store klumper. Etter oppløsning av tørrgjær, tilsett 38,8 g sukrose.
MERK: Sukrose bør være den siste ingrediensen som skal legges til grunn like etter at denne komponenten, vil gjæringen starter.
- Umiddelbart etter oppløsning av sukrose, hellmat over bomull, og sørg for å dekke bomull jevnt. Lukke plastbeholder med lokk for å unngå unnsluppet fluer i laboratorium kontaminere mat.
- Suspender 1,5 g av de høstes embryoer (ikke dechorionated) fra forrige syklus med 5 ml 70% etanol. Halvert to filterpapir og fordele den biologiske blandingen jevnt over 4 stykker ved hjelp av en spatel eller en overføring pipette med en bred spiss (cut om nødvendig). Lå filterpapir på toppen av gjennomvåt bomull og lukke lokket. Til slutt, inkuber plastbeholder ved romtemperatur (24 ° C) og fuktighet (35%) inntil puppe trinnet.
MERK: plastbeholder bør ikke plasseres i et fuktighetskammer, ellers vil dette stimulere veksten av bakterier.
2. Videreføring av Cycle: Fra embryoene fluer.
MERK: Denne del av syklusen fortsetter fra embryoene plassert i plastbeholderen på dag 1 til 9 dager senere når de voksne fluer vil fremståfra puppe. I løpet av disse 8 dager ingenting gjøres, men å overvåke at embryoene fremgang riktig til de neste fasene av Drosophila livssyklusen til eklosjonshormon. Dersom larvene begynner å dø og snu svart i løpet av denne tiden, sjekk at skumplugger ikke er for stramme og at tilstrekkelig ventilasjon. Denne perioden er et godt tidspunkt å rengjøre fly befolkningen buret fra den forrige syklusen.
- Observere embryoene bli en st stadium larver rundt 24 timer etter den voksne kvinnelige avsatt dem i fly mat (se punkt 3). Den resulterende Larvene vil mate fra fly mat tilberedt i trinn 1 under 4 dager, vokser og molting to ganger i 2. og 3. stadium larver.
- Rengjør fly befolkningen buret.
- Plasser buret ved 4 ºC i minst 30 minutter for å forsinke aktiviteten av fluer. Fjern det nett som dekker en side av buret, og med en rask bevegelse, hetten den åpne side med et stort biologisk fare plastiskbag. Helle innholdet i buret inn i posen.
- Med biohazard bag fortsatt dekker den ene siden av buret, plasser buret vertikalt over en vask med Biohazard bag siden ned. Fjern forsiktig plastpose for å forhindre fluer rømmer og kast den i en smittefarlig avfall.
- Åpne forsiktig det øvre nett nok til å skape et lite hull, skyll innsiden av buret med vann, noe som vil vaske fluene i vasken. Langsomt øke størrelsen av hullet og eliminere alle fluene inne i buret.
- Rengjør buret og både garn med vann og såpe. Mens garnene er fremdeles våt feste dem på begge sider av den tørre rent bur, og til slutt sette inne en lab reaksjonskammeret papir, som vil hindre at plastfolien fremstilt i trinn 1.1.2 fester seg til buret. Nå buret er klar for neste syklus.
- Fire dager etter det første oppsettet, observere larvene forpupper seg. Larvene vil forbli i denne fasen i 4 dager.
MERK: During denne fasen puppe vil dekke hele bomull overflaten inne i plastbeholder. - Under pupal fasen og før de første fluene dukke opp, åpne plastbeholder og legg plasten inneholder bomull med alle puppe over lab soaker papir inne i ren befolkningen buret. Lukk net med en dobbelt knute og rengjør plastbeholder og lokket for den neste syklus.
MERK: puppe festet til lokket må kastes og ødelagt av autoklav eller frysing før eklosjonshormon.
3. Voksne fluer.
MERK: Etter 4 dager med puppe stadium de første fluene vil dukke opp fra puppe. Innen 24-48 timer alle fluene skulle ha eclosed. I denne delen av syklusen, er det viktig å gi dem mat med sikte på å skape den riktige miljø for reproduksjon.
- Forbered melasse skuffene.
- Kombiner i en 1-liters kolbe 556,25 ml deionisert H2O, 90 ml av melasse, og 22 g agar. Autoklav med en rørepinne i 30 min, kjølig og tilsett 9,25 ml 10% Tegosept i 95% EtOH.
- Hell blandingen i en kjøtt brett med 21 x 14,5 cm. Kontroller at lyden er nok til å dekke 15 - 17 skuffer. Vent 10 - 20 min å stivne og dekke hver brett med en plastfilm for å unngå uttørking. Flere kolber av en L kan fremstilles samtidig. Oppbevar melasse magasinene ved 4 ºC innpakket i plast inntil nødvendig.
- Legg en melasse brett dekket med våt gjær inne i buret med den voksne fluer.
- Før du legger platen, plassere buret ved 4 ºC i kjølerommet i 30 min.
- Tilsett 200 ml deionisert H2O i et begerglass og langsomt strømme tørrgjær under omrøring med en skje. Stoppe tilsetning av tørrgjær når blandingen blir omtrent samme konsistens som peanøttsmør for å forhindre fluer å sette seg fast inn i maten.
MERK: Det er viktig å ikke la maten løsning å stivne ellers vil det være svært vanskelig å dekkemelasse skuffen og hente eggene under innhøstingsarbeidet (se pkt 4.3). - Fjern plastfolien fra en melasse skuffen og dekke den med et lag av fersk forberedt våt gjær ved hjelp av en skje eller slikkepott. Vær sikker på at hele overflaten er dekket.
- Mens buret er fortsatt i kjølerommet, åpne nettet og nøye tilsett sirup brett med våt gjær inn i buret. Steng nettet og plassere buret ved RT.
MERK: Det kan være nyttig å dekke tallerkenen med en tom kjøtt skuff under innsetting, men pass på å ikke blokkere tilgangen av fluene til melasse skuffen.
- Endre maten plate hver 24-48 timer for å unngå gjær å bli for tørr. Voksne fluer er svært følsomme for uttørking.
4. slutten av syklusen: Høsting av embryoer
MERK: Det beste fly fruktbarheten er 3 - 5 dager etter eklosjonshormon. Derfor vil høsting i løpet av denne tid får den beste embryo utbytte. Etter ønskede samlinger er completed, er syklusen over. Fluene bør bli ofret og buret rengjøres som beskrevet i trinn 2.2.
- Vanligvis 2 dager etter fly eklosjonshormon, innføre en ny melasse skuff med fersk våt mat inn i buret, som forklart i avsnitt 3.2.5. For å øke utbyttet av egg avsetning, ved hjelp av fingrene, gjøre overflaten av den våte gjær så uregelmessig som mulig. Hvis en gammel mat skuffen er til stede i buret, før du legger den nye platen, fjerner du det forsiktig og kast den i en biohazard bag. En annen spiss for å øke utbyttet er å fjerne bomull lag slik at alle eggene legges i maten. Oppretthold buret ved RT.
- Observer embryoene som små hvite prikker.
MERK: Eggene er klar til å bli samlet. For rutinemessig vedlikehold av fly bur, er to dagers samling den anbefalte tiden. Denne samlingen vil inneholde det meste embryoer og få en st stadium larver. Se representative resultater for typiske avkastning av høstet embryoer for ulike colleDette skjer tidspunkter. - Høste embryoer
- Plasser buret i kjølerommet i ca 30 min. I mellomtiden fremstille plastbeholder og det flue mat for den neste syklus, som forklart i avsnitt 1.
- I en 8 liters autoklav brett tilsett vann til en fjerdedel av den totale kapasitet og deretter tilsett 1 ml 10% Triton X-100. Mens buret er i kjølerommet forsiktig fjerne melasse plate og legg den i en biohazard bag.
- Fjern skuffen fra posen og senk den raskt (for å forhindre fluer fra rømmer) i vaskemiddel i autoklaven skuffen. Lukk biohazard pose og legg i en avfallsbeholder. Fluer vil ikke drukne i vannet som ikke inneholder vaskemiddel.
- Bruk en stor pensel og destillert vann pistol til å vaske embryoer og gjær ut av melasse. Kast plater og melasse i biohazard boks.
- Hell løsningen nøye gjennom en tre sil sett (groveste sikten 30 på toppen, 40 i midten og 100 på bunnen). Vask klumper on øverste nivå med destillert vann pistol til det ikke klumper forbli.
MERK: Den voksne fluer og 3. stadium larver vil bli beholdt i silen 30.- Skyll autoklaven skuffen med destillert vann og hell skyllevannet gjennom siktene. Fjern toppen sil og gjenta prosessen hvis gjær klumper forbli. Mesteparten av 1. og alle av 2. instar larver vil forbli i silen 40.
- Fjerne den andre sil. Den gulaktige materialet i det tredje (nederste) sikt er blandingen av embryoer og liten 1 m instar larver. Bruke destillert vann pistol for å bevege alle eggene til den ene side av sikten. Samle dem med en slikkepott og veie dem.
- I løpet av disse syklusene innsamling utbytte av befruktede egg / larver i området mellom 7 og 13 g. Bruk kun 1,5 g av dette materialet for å starte en ny syklus (§ 1). Bruk resten av embryoene for videre behandling eller kan kastes.
5. VidereBehandling
MERK: embryoer ikke benyttes for videreføring av befolkningen kan brukes umiddelbart for eksperimenter eller alternativt kan fryses ved -80 ºC. For begge alternativene, kan embryoene må først bli dechorionated.
- For dechorionation, vaske embryoene i 2 minutter i 50% blekemiddel og skyll grundig med destillert vann.
- For å fryse embryoene, først tørr ved å trykke hardt med et papirhåndkle, og deretter veie og plassere dem, med hjelp av en slikkepott, inn i en 15 eller 50 ml konisk tube. Endelig senk konisk rør i flytende N2 i noen få sekunder.
Representative Results
Opprettholdelse av en flue bur befolkning er basert på fly livssyklus. Derfor, etter å ha plassert den første biologiske blanding av befruktede egg og larver i plastbeholderen (figur 1A) befruktede egg blir larver på ikke mer enn 2 dager, og larvene vil vokse i 4 dager, forholdsvis synkronisert gjennom de forskjellige instar larver trinn ( se figur 1B).
Etter at larvene har fullført 3. instar larvestadiet vil de danne pupper og dekker overflaten av bomull inne i plastbeholder med noen på den indre overflate av lokket (figur 1C). Dette pupation perioden vil gå for de neste 4 dagene før fluene fullføre metamorfose prosessen. I denne perioden er det sterkt anbefalt å overføre fluene inn i buret. De første voksne fluene begynner å ELukk på dag 9-10 etterinitiering av syklusen (figur 1D) og dag 11 alle av dem vil ha dukket opp fra puppe.
Det beste utbytte av embryoer samling oppnås 3 - 5 dager etter eklosjonshormon (dag 13 til 15) og til slutt avtar på dag 17 (7 dager etter eklosjonshormon). Derfor anbefales det å legge den siste brett av fersk mat på dag 13 og samle egg til dag 15 (Figur 1E og F). Dette vil tillate samling av det maksimale antall embryoer. Legge til en tredje ekstra dag før innsamling kan føre til at maten blir for tørr og dermed vil redusere utbyttet av innsamlede embryoer. Tabell 1 viser avkastningen av 6 sammenhengende sykkelsamlinger, med et utgangsmateriale av 1,5 g i hver syklus, og figur 2 er den anbefalte planen for en hel syklus samling.
Materialet høstet i to dag60, perioder er for det meste består av embryoer. Imidlertid et lite antall larver er også til stede. For bur vedlikehold disse larvene er ikke et problem, siden en viss grad av asynchronicity er forventet. Ikke desto mindre for noen biokjemiske forsøk, er renheten av disse embryoer meget viktig, men samtidig er det også nødvendig å samle store mengder egg for å utføre disse eksperimentene. Av denne grunn flere korte på hverandre følgende samlingene ble utført ved en time og tre timer, etter hurtig tilsetning ved RT en ny plate med mat, for å tilveiebringe et estimat av utbytte og renhet som kan oppnås med denne fremgangsmåten (tabell 2 og figur 3) . 1 t påfølgende samlinger startet med en veldig lav yield (14,5 mg), men da mengder av embryoer økte for hver gang samlet, men den siste tiden. Den lave avkastningen først kan være på grunn av fluene blir stresset under prosessen med å endre maten, men senere acclimating. På den annen side, ikke larVAE ble observert i de fem sekvensielle samlinger (figur 3A), som viser at kortere samlinger gir høyere renhet. Dersom bomull ikke fjernes fra buret, vil sannsynligheten for at larver fra tidligere tidspunkter forblir og gå inn i fersk plate økes. Selv når bomull er fjernet, til tider larver vil vandre på siden av buret, og inn i nærings i løpet av en samling.
For de tre timers sammenhengende samlinger, avkastningen varierte 840-1250 mg, som er rundt 10 ganger mer enn avkastningen som oppnås i 1 time samlinger. Renheten av disse embryoer var nær 100% (figur 3B). ble observert sporadisk larver. Noen utviklingsstudier krever en meget streng synkronisering for embryoene samlet inn. For å øke synkroniserings renhet, anbefales det å forkaste den første samleplaten fordi hvis forholdene ikke er ideelle, kan kvinner beholde mer modne egg og innskuddm når forholdene bedres, slik som med innføringen av en ny plate. Også er det viktig å vite at eldre voksne fluer (> 6 dager) produserer mindre synkronisert embryoer. For å verifisere graden av synkronisering med høy nøyaktighet, er en DAPI farging av de innsamlede embryoer anbefales.
Figur 1. Drosophila melanogaster Life Cycle i et fly befolkningen Cage. (A) Innvielse av syklusen seeding 1,5 g av embryo i plastboksen container. Som en referanse, i den nedre panel, lengden på filterpapiret er 8,5 cm. (B) Larver vokser forholdsvis synkronisert 5 dager etter initiering av syklusen. (C) På dag 8, de fleste av fluene er i puppe stadium. De nedre paneler i B (B ') og C- (C ') er forstørrelser av de angitte områder i de øvre paneler. (D) Voksne fluer dukket opp fra puppe 10 dager etter syklus start. (E) Voksen flyr inne i befolkningen buret før du starter prosessen med å samle inn embryoene, på dag 15. gulaktig materiale på fly mat er befruktede egg. (F) Embryoet (og noen larver) samles i bunnen av den 100 groveste sil, etter en hel bur syklus. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 2. Antall Cycle Collection Schedule. Figur 2 viser den anbefalte planen for en komplett syklus samling. t = "_ blank"> Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 3. Purity av en time og tre timers sammenhengende samlinger. Representant bilde av embryoer samlet på 1 time (A) og 3 t (B) etter at et nytt brett med mat. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
| Cycle nummer | Yield (g) |
| 1 | 10.3 |
| 2 | 9.5 |
| 3 | 10.3 |
| 4 | 12.7 |
| 5 | 10 |
| 6 | 7.1 |
| Collection # | Lengde på samling (t) | Yield (mg) |
| 1 | 1 | 14.5 |
| 2 | 1 | 21.6 |
| 3 | 1 | 56.1 |
| 4 | 1 | 160.1 |
| 5 | 1 | 106,1 |
| 1 | 3 | 960 |
| 2 | 3 | 840 |
| 3 | 3 | 1250 |
Tabell 2. Utbytte av en time og tre timers sammenhengende samlinger. Tabell 2 viser avkastningen av 5 påfølgende samlinger en time etter å ha lagt ny mat og 3 påfølgende samlinger tre timer etter å plassere en ny melasse plate.
Discussion
Å starte med 1,5 g av materiale man kan oppnå et utbytte av innsamlet embryoer mellom 7 og 13 g per syklus. For å få en slik mengde materiale er det avgjørende å opprettholde de riktige dyrkingsforhold for alle stadier av fly syklus.
De viktigste parameterne er temperatur og fuktighet, som bør være henholdsvis 24 ° C og 35%. Hvis disse to parametrene ikke kan holdes konstant i det normale miljøet i laboratoriet, vil en mulighet være å plassere fly buret inn i en inkubator eller et miljøkammer. Andre protokoller anbefalt 70% fuktighet og også en konstant 24 timers lys-mørke-syklus for å øke utbyttet av de produserte egg 9,10. Imidlertid å holde luftfuktigheten rundt 35% unngår bakteriell forurensning, og siden hensikten med denne protokollen er bare å opprettholde en populasjon bur, blir fluene holdt i det normale lys miljøet i laboratoriet.
Et annet viktig poeng er å holde disturbances til den voksne flyr så lavt som mulig. Det kan være lurt å holde buret på et sted atskilt fra fly plass for å unngå smitte fra andre fluer.
Dyrkingen av store bestander av genmodifiserte og mutante fluer anbefales ikke, siden det er svært vanskelig å opprettholde sin renhet, og de kan vise uttalt unormal parring atferd i store befolknings bur 14.
Et mulig problem mens dyrkning av Drosophila i store mengder er nærværet av andre organismer som midd og / eller mugg, som vil konkurrere for mat og derfor reduserer utbyttet av produserte egg. For å unngå dette, er det svært viktig å holde alt utstyret rent, vaske buret, garn og fly bokser med vann og såpe, og forkaster disponibel materiale (skum plugger) etter hver syklus. For å redusere mold vokser, er propionsyre og fosforsyre lagt inn i den våte gjær når forberede flua mat i trinn1,2 og Tegosept ved utarbeidelsen av melasse skuffen i trinn 3.1. Det kan være nyttig å plassere materialer som plasteske eller sikter på -20 ˚C når tiden er kort og materialer kan ikke rengjøres med en gang.
En hel samling syklus oppstår i 14 - 15 dager, som begynner når embryoene blir sådd inn i flueboksen og slutter med den siste samlingen dagen. I løpet av denne perioden, er det anbefalt å organisere en tidsplan for å huske alle de nødvendige skritt for vedlikehold av en befolkning fly bur (fig. 2), detaljert i protokollen delen. Fra den dagen eggene er seeded, inntil de voksne fluene dukker opp, er det bare nødvendig å inspisere plastboks, og når pupation skjer, å plassere dem inne i buret. Etter at fluene må bli matet hver 2 - 3 dager til embryoer blir sådd ut for en ny syklus. I hele protokollen, er den lengste dag under innsamling og poding av embryoene for å starte en ny syklus. ENs kommenterte i protokollen, er den beste egg utbyttet 3 - 5 dager etter voksen eklosjonshormon, og til slutt synker 2 dager senere. Dette gir oss en viss fleksibilitet for å kunne velge den dagen hvor innhøstingen av eggene vil bli utført.
Hvis en eller annen grunn utbyttet av innsamlede embryoer er mindre enn den ønskede startbeløpet (1,5 g), en alltid kan legge til en ny melasse brett og samle flere egg neste dag. For konstant samlinger, er det anbefalt å opprettholde 2 merder i parallell, og hvis større mengder av embryoer er nødvendig, også er det mulig å anvende større merder. Ved å gjøre korte tids samlinger, en måte å øke utbyttet er å dra nytte av egg-legging burst i morgen.
Det er mange fordeler med å samle inn store mengder ulike utviklingsstadier. For eksempel har samlet embryoer fra befolknings bur blitt brukt med stor suksess i immunoutfellingsstudier analyser 6-8, masse collection av larver vev fra dissosierte larver har vist seg å være en svært god kilde for 3C eksperimenter 4 og RNA forberedelser 15, og hoder fra voksne fluer har blitt utnyttet for CHIP eksperimenter 16. I tillegg er voksne, ofte nødvendig for å gjøre flue ekstrakter for vevskultur 17.
En av de mest lovende anvendelser av buret er å tilveiebringe materiale for high-throughput analyser som tillater analyse og screening av gener, transkripter, proteiner og metabolitter i respons til eksponering for patogener, biologiske molekyler, kjemiske stoffer og ioniserende stråling. I disse store analyser stort antall individer er nødvendig, og flua befolkningen bur beskrevet her kan være svært nyttig for å få store mengder materiale i de ulike faser av Drosophila livssyklusen for deres analyse og screening 18.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Bacto-Agar | Beckton Dickinson | 214010 | |
| Curity practical cotton roll | Kendall | 2287 | |
| Dry yeast | Affymetrix | 23540 | |
| Filter paper | GE Healthcare Life Science | 1001-085 | |
| Foam tube plugs | Jaece | L800-D2 | 50 mm Diameter x 55 mm Length |
| Fly population cage | Flystuff | 59-116 | 9″ Diameter x 14.4″ Length. Includes the nets for the cage. |
| Meat tray | Genpak | 1002S (#2S) | 8.25 x 5.75 x 0.5 inches |
| Molasses | Grandma´s | ||
| Plastic container | Rubbermaid | 4022-00 | |
| Plastic film | Glad | ||
| Phosphoric acid | Fisher Scientific | S 93326 | Toxic. Handle in Chemistry Hood |
| Propionic acid | Fisher Scientific | A258-500 | Toxic. Handle in Chemistry Hood |
| Stainless steel sieve #100 | VWR | 57324-400 | |
| Stainless steel sieve #40 | VWR | 57324-272 | |
| Stainless steel sieve #30 | VWR | 57324-240 | |
| Sucrose | MP | 152584 | |
| Tegasept | LabScientific | FLY5501 | |
| Triton-X100 | Fisher Scientific | BP151-500 |
References
- Lim, S. J., Boyle, P. J., Chinen, M., Dale, R. K., Lei, E. P. Genome-wide localization of exosome components to active promoters and chromatin insulators in Drosophila. Nucleic Acids Res. 41, 2963-2980 (2013).
- Ong, C. T., Van Bortle, K., Ramos, E., Corces, V. G. Poly(ADP-ribosyl)ation regulates insulator function and intrachromosomal interactions in Drosophila. Cell. 26, 148-159 (2013).
- Gonzalez, I., Mateos-Langerak, J., Thomas, A., Cheutin, T., Cavalli, G. Identification of regulators of the three-dimensional polycomb organization by a microscopy-based genome-wide RNAi screen. Mol Cell. 8, 485-499 (2014).
- Magbanua, J. P., Runneburger, E., Russell, S., White, R. A variably occupied CTCF binding site in the ultrabithorax gene in the Drosophila bithorax complex. Mol Cell Biol. 35, 318-330 (2014).
- Maksimenko, O. Two new insulator proteins, Pita and ZIPIC, target CP190 to chromatin. Genome Res. 25, 89-99 (2015).
- Lei, E. P., Corces, V. G. RNA interference machinery influences the nuclear organization of a chromatin insulator. Nat Genet. 38, 936-941 (2006).
- Matzat, L. H., Dale, R. K., Moshkovich, N., Lei, E. P.
- King, M. R., Matzat, L. H., Dale, R. K., Lim, S. J., Lei, E. P. The RNA-binding protein Rumpelstiltskin antagonizes gypsy chromatin insulator function in a tissue-specific manner. J Cell Sci. 1, 2956-2966 (2014).
- Sisson, J. C. Culturing large populations of drosophila for protein biochemistry. Cold Spring Harb Protoc. , (2007).
- Shaffer, C. D., Wuller, J. M., Elgin, S. C. Raising large quantities of Drosophila for biochemical experiments. Methods Cell Biol. 44, 99-108 (1994).
- Roberts, D. B., Standen, G. N. The elements of Drosophila biology and genetics. Drosophila: A practical approach. Roberts, D. B. , Oxford University Press. Oxford. 1-53 (1998).
- Ashburner, M., Roote, J. Culture of Drosophila: The laboratory setup. Cold Spring Harb Protoc. , (2007).
- Dahlberg, O., Shilkova, O., Tang, M., Holmqvist, P. H., Fb Mannervik, M. P-TEb, The super elongation complex and mediator regulate a subset of non-paused genes during early Drosophila embryo development. PLOS Genet. 13, e1004971 (2015).
- Zhang, S. D., Odenwald, W. F. Misexpression of the white (w) gene triggers male-male courtship in Drosophila. Proc Natl Acad Sci USA. 6, 5525-5529 (1995).
- Chak, L. L., Mohammed, J., Lai, E. C., Tucker-Kellogg, G., Okamura, K. A deeply conserved, noncanonical miRNA hosted by ribosomal DNA. RNA. 21, 375-384 (2015).
- Moshkovich, N., Lei, E. P. HP1 recruitment in the absence of argonaute proteins in Drosophila. PLOS Genet. 12, e1000880 (2010).
- Drosophila RNAi Screening Center [Internet]. , Available from: http://www.flyrnai.org/DRSC-PRC.html (2015).
- Pandey, U. B., Nichols, C. D. Human disease models in Drosophila melanogaster and the role of the fly in therapeutic drug discovery. Pharmacol Rev. 63, 411-436 (2011).
