इस प्रोटोकॉल एक अनुकूलित N-मिथाइल-D-glucamine (NMDG) मस्तिष्क टुकड़ा तैयारी के सुरक्षात्मक वसूली विधि के कार्यांवयन को दर्शाता है । एक एकल मीडिया निर्माण के लिए मज़बूती से किसी भी उम्र के जानवरों से और विविध प्रयोगात्मक अनुप्रयोगों के लिए स्वस्थ मस्तिष्क स्लाइसें प्राप्त करने के लिए प्रयोग किया जाता है ।
इस प्रोटोकॉल के लिए एक व्यावहारिक गाइड है N-मिथाइल-D-glucamine (NMDG) मस्तिष्क टुकड़ा तैयारी की सुरक्षात्मक वसूली विधि । कई हाल के अध्ययनों से न्यूरॉन संरक्षण और समग्र मस्तिष्क स्लाइस व्यवहार्यता को बढ़ाने के लिए इस विधि की उपयोगिता को मान्य किया है. जल्दी adopters द्वारा इस तकनीक के कार्यांवयन विविध प्रयोगात्मक अनुप्रयोगों का उपयोग कर मस्तिष्क समारोह में विस्तृत जांच की सुविधा है और पशु उंर, मस्तिष्क क्षेत्रों, और सेल प्रकार की एक विस्तृत श्रृंखला फैले । कदम सुरक्षात्मक वसूली मस्तिष्क टुकड़ा तकनीक एक अनुकूलित NMDG कृत्रिम मस्तिष्कमेरु द्रव (aCSF) मीडिया तैयार करने और बढ़ाया प्रक्रिया के लिए मज़बूती से पैच क्लैंप इलेक्ट्रोफिजियोलॉजी के लिए स्वस्थ मस्तिष्क स्लाइसें प्राप्त करने के लिए ले जाने के लिए उल्लिखित हैं । इस अद्यतन दृष्टिकोण के साथ, एक पर्याप्त सुधार गति और gigaohm सील गठन की विश्वसनीयता पर लक्षित पैच दबाना रिकॉर्डिंग प्रयोगों के दौरान मनाया जाता है, जबकि उत्कृष्ट न्यूरॉन संरक्षण को बनाए रखने, जिससे चुनौतीपूर्ण सुविधा प्रयोगात्मक अनुप्रयोगों । प्रतिनिधि परिणाम बहु से प्रदान की जाती हैं-ंयूरॉन पैच दबाना रिकॉर्डिंग प्रयोगों को परख synaptic कनेक्टिविटी neocortical मस्तिष्क में युवा वयस्क ट्रांसजेनिक चूहों और प्रौढ़ वयस्क मानव तंत्रिकाशल्यक नमूनों से तैयार स्लाइसें । इसके अलावा, मस्तिष्क टुकड़ा करने की क्रिया के अनुकूलित NMDG सुरक्षात्मक वसूली विधि दोनों किशोर और वयस्क जानवरों के साथ संगत है, इस प्रकार मूल पद्धति की एक सीमा को हल । संक्षेप में, एक मीडिया निर्माण और मस्तिष्क टुकड़ा करने की क्रिया प्रक्रिया विभिंन प्रजातियों और उंर भर में कार्यांवित किया जा सकता है उत्कृष्ट व्यवहार्यता और ऊतक संरक्षण प्राप्त करने के लिए ।
तीव्र मस्तिष्क टुकड़ा तैयारी तंत्रिका विज्ञान में एक आवश्यक प्रयोगात्मक मॉडल प्रणाली है । एक सदी के लगभग आधे के लिए, इस मंच संरचनात्मक मस्तिष्क क्षेत्रों और पशु प्रजातियों की एक विस्तृत विविधता भर में रहने वाले मस्तिष्क के गतिशील कार्यात्मक अध्ययन सक्षम है । क्या इरादा आवेदन जैव रसायन, कार्यात्मक इमेजिंग, आकृति विज्ञान, या इलेक्ट्रोफिजियोलॉजी है, यह अत्यंत महत्वपूर्ण है के लिए इष्टतम अखंडता और कटा हुआ ऊतक की व्यवहार्यता सुनिश्चित करने के लिए । यह इस कारण के लिए है कि अत्यधिक लचीला किशोर कुतर मस्तिष्क टुकड़ा तैयारी (यानी, चूहों के लिए जन्मोत्तर दिन 30 से छोटी) की तारीख को सबसे अधिक पसंद किया गया है । परिपक्व वयस्क और उंर बढ़ने जानवरों से पर्याप्त स्वस्थ मस्तिष्क स्लाइस प्राप्त करने में कठिनाई सबसे अधिक के लिए एक दुर्जेय चुनौती साबित हो गया है और परिपक्व मस्तिष्क के कार्यात्मक वास्तुकला का अध्ययन करने के लिए गंभीर सीमाओं लगाया गया है । यह पैच दबाना रिकॉर्डिंग के लिए विशेष रूप से सच है, एक तकनीक है कि उत्कृष्ट रूपात्मक और कार्यात्मक संरक्षण की आवश्यकता है और निस्र्पक विस्तृत आंतरिक और synaptic गुणों की पहचान की एकल ंयूरॉंस के लिए अपरिहार्य है । पिछले कई दशकों के लिए, पैच क्लैंप electrophysiologists के विशाल बहुमत एक ‘ सुरक्षात्मक काटने ‘ विधि पर भरोसा किया है सुक्रोज का उपयोग कम एनए+ aCSF1 स्वस्थ किशोर से मस्तिष्क स्लाइस की तैयारी के लिए, और एक तक कम हद तक, युवा वयस्क जानवरों । इस विधि आधार है कि निष्क्रिय न+ आमद और बाद में पानी के प्रवेश और टुकड़ा काटने के दौरान कोशिका सूजन सेल पर आधारित है प्रमुख अपमान है कि ंयूरॉंस के गरीब अस्तित्व की ओर जाता है, विशेष रूप से उन ंयूरॉंस में स्थित के लिए सतही परतों कि सबसे ब्लेड आंदोलन से सीधे आघात बनाए रखने की संभावना है । हालांकि, सुरक्षात्मक काटने विधि अभी भी बहुत पत्तियों परिपक्व वयस्क जानवरों से मस्तिष्क टुकड़ा तैयारी के लिए वांछित हो विशेष रूप से लागू aCSF की परवाह किए बिना ।
इस समस्या का एक सरल लेकिन प्रभावी समाधान2,3,4,5,6 और ‘ सुरक्षात्मक वसूली ‘ मस्तिष्क स्लाइस विधि को बताया गया है । इस विधि के मूल संस्करण एक NMDG-प्रतिस्थापित aCSF का उपयोग करता है, के रूप में NMDG सबसे बहुमुखी और विभिंन अंय उंमीदवार सोडियम आयन स्थानापंन (सुक्रोज, ग्लिसरॉल, choline, और Tris सहित) के बीच प्रभावी रूप में पहचाना गया था । मीडिया निर्माण आगे HEPES के अलावा द्वारा बढ़ाया गया था मस्तिष्क टुकड़ा शोफ का विरोध और मजबूत पीएच बफर7प्रदान करते हैं, साथ ही साथ खुराक के अलावा ऑक्सीडेटिव तनाव (तालिका 1) के हानिकारक प्रभावों प्रतिक्रिया करने के लिए । यह empirically निर्धारित किया गया था कि कम एनए+, कम Ca2 +में एक प्रारंभिक वसूली मशीन कदम, और उच्च मिलीग्राम2 + NMDG aCSF तुरंत बाद वयस्क मस्तिष्क ऊतक टुकड़ा करने की क्रिया दोनों आवश्यक और सुधार के लिए पर्याप्त न्यूरॉन था मस्तिष्क क्षेत्रों, सेल प्रकार की एक विस्तृत श्रृंखला पर संरक्षण, और पशु उंर3,5,6।
विशेष रूप से, क्या अब सुरक्षात्मक वसूली विधि करार दिया है के पहले अवतारों साहित्य में पाया जा सकता है1,8,9,10,11,12, 13, हालांकि परिपक्व वयस्क और उम्र बढ़ने पशु मस्तिष्क स्लाइस और पैच दबाना रिकॉर्डिंग के लिए पूरी क्षमता मान्यता प्राप्त नहीं था या इन पहले काम करता है में प्रदर्शन किया । इसके अलावा, सूक्ष्म प्रक्रियात्मक विविधताओं को विशिष्ट प्रायोगिक अनुप्रयोगों के4,14,15,16के समर्थन में उभरने के लिए जारी है । इन कई अनुसंधान समूहों के काम के सामूहिक शरीर में सुधार ऊतक संरक्षण के लिए सुरक्षात्मक वसूली विधि की मजबूती में उच्च विश्वास प्रदान । NMDG सुरक्षात्मक वसूली विधि अब व्यापक रूप से अपनाया गया है और कई प्रकाशित अनुसंधान वयस्क पशु मस्तिष्क टुकड़ा तैयारियों का उपयोग अध्ययन में कार्यांवित किया । इन तीव्र स्लाइस अध्ययन स्पैन neocortical3,17,18, हिप्पोकैम्पस15,19,20,21, striatal22 , 23 , 24, midbrain25,26,27,28,29, और hindbrain30,31,३२, ३३ , ३४ क्षेत्रों, और glutamatergic4,30, GABAergic18,20,31,३५ सहित न्यूरोट्रांसमीटर और neuromodulator प्रकार की एक किस्म ,३६, dopaminergic24,29,३७,३८, कोलीनर्जिक14,३७,३८, ३९, noradrenergic४०, और serotonergic27,28 neurotransmission । विधि भी अच्छी तरह से ट्रांसजेनिक पशुओं3,३९ या vivo वायरल इंजेक्शन17,27 में निंनलिखित से व्युत्पंन स्लाइस में optogenetic नियंत्रण के लिए अनुकूल है, 28,४०,४१,४२,४३, साथ ही कार्यात्मक Ca2 + इमेजिंग के ंयूरॉन गतिविधि2,४४ ,४५,४६. दोनों अल्पकालिक प्लास्टिक की4,४७,४८ और दीर्घकालिक प्लास्टिक के विविध रूपों के विश्लेषण16,३५,४८ गया है बताया. हाल के एक अध्ययन NMDG सुरक्षात्मक वसूली विधि लागू करने के लिए परिपक्व वयस्क माउस मस्तिष्क स्लाइस में दृश्य प्रांतस्था में synaptic कनेक्टिविटी की व्यापक और व्यवस्थित जांच की सुविधा octopatch रिकॉर्डिंग विंयास४९ का उपयोग कर-एक शक्तिशाली उपयोगिता और इस विधि की मजबूती का प्रदर्शन । सुरक्षात्मक वसूली विधि भी पहले अप्रत्याशित प्रयोगात्मक संदर्भों में सफलतापूर्वक लागू किया गया है, जैसे, वयस्क cortical मस्तिष्क स्लाइसों में vasculature और pericytes के बेहतर संरक्षण५०, से पैच दबाना रिकॉर्डिंग 1 में प्रत्यारोपण ंयूरॉन आबादी-1.5 वर्ष पुराने अल्जाइमर रोग माउस मॉडल20, और एक वयस्क मस्तिष्क टुकड़ा रिसेप्टर तस्करी परख५१।
निम्न प्रोटोकॉल तीव्र मस्तिष्क स्लाइस की व्यवहार्यता में सुधार करने के लिए मस्तिष्क टुकड़ा तैयारी के एक अनुकूलित NMDG सुरक्षात्मक वसूली विधि को लागू करने के लिए कदम दर कदम प्रक्रियाओं का वर्णन. बेहतर न्यूरॉन संरक्षण के लिए सिद्धांतों पर चर्चा कर रहे हैं, साथ ही दोनों युवा वयस्क ट्रांसजेनिक माउस मस्तिष्क स्लाइस और परिपक्व वयस्क में जटिल बहु-ंयूरॉन पैच दबाना रिकॉर्डिंग प्रयोगों के लिए इस पद्धति का स्पष्ट लाभ का प्रदर्शन मानव तंत्रिकाशल्यक ब्रेन स्लाइसेस. निंनलिखित प्रोटोकॉल चूहों के लिए 21 दिन पुराने से अधिक एक साल पुराने, के रूप में के रूप में अच्छी तरह से वयस्क रोगियों से व्युत्पंन मानव तंत्रिकाशल्यक नमूनों के लिए मांय किया गया है ।
ना + स् पाइक-में सुधार Gigaohm सील गठन और पैच दबाना रिकॉर्डिंग सफलता
NMDG सुरक्षात्मक वसूली विधि के प्रारंभिक संस्करण विशेष रूप से वयस्क और उम्र बढ़ने जानवरों2,5के लिए बनाया गया था । कुछ प्रारंभिक adopters भी किशोर पशु मस्तिष्क टुकड़ा करने की क्रिया (यानी, चूहों < 30 दिन पुरानी) के लिए इस पद्धति को लागू करने की मांग की है । हालांकि, यह उल्लेख किया गया है कि बकाया के विपरीत में नेत्रहीन-NMDG सुरक्षात्मक वसूली विधि के साथ न्यूरॉन संरक्षण की पुष्टि की इस आयु सीमा में, gigaohm सील गठन अक्सर बाहर स्टाल कर सकते हैं, विफल पैच दबाना रिकॉर्डिंग प्रयास करने के लिए अग्रणी. एक परिकल्पना है कि NMDG cations अधिक आसानी से किशोर मस्तिष्क स्लाइसें वयस्क मस्तिष्क स्लाइस के सापेक्ष में फंस रहे है और सील गठन में बाधा कर सकते हैं; हालांकि, gigaohm जवानों आसानी से फार्म कर सकते हैं, जबकि किशोर मस्तिष्क स्लाइस पूरी तरह से NMDG aCSF में डूब रहे है (नहीं दिखाया डेटा), इस प्रकार का संकेत है कि NMDG aCSF प्रति एसई gigaohm सील गठन बाधा नहीं है ।
प्रारंभिक मस्तिष्क टुकड़ा वसूली कदम के पूरा होने पर कम करने के लिए उच्च ना+ समाधान से तेजी से संक्रमण ंयूरॉन झिल्ली को नुकसान का कारण बनता है और सील गठन की प्रक्रिया perturbs । यह सहज रूप से दिया है कि कम से संक्रमण-उच्च ना+, ठंड से गर्म तापमान, और Ca के नाटकीय उन्नयन2 + मिलीग्राम के लिए2 + अनुपात सामूहिक रूप से सहज synaptic गतिविधि का एक विशाल पुनरुत्थान का नेतृत्व. मस्तिष्क टुकड़ा करने की क्रिया प्रक्रिया में इस निरोधात्मक रिबाउंड चरण एक कोरोनरी अपमान के बाद reperfusion चोट दर्पण की संभावना है । इस प्रकार, आगे प्रारंभिक वसूली चरण में एक क्रमिक ना+ स्पाइक-प्रक्रिया में न्यूरॉन झिल्ली क्षति को कम करने के लिए जो NMDG सुरक्षात्मक वसूली मशीन चैंबर में ना+ एकाग्रता की तरक्की में शामिल किया गया है धीरे और सटीक समय के साथ reproducibly उठाया । मूल सुरक्षात्मक वसूली प्रक्रिया के रूप में, तापमान और Ca से ना+ ऊंचाई के लौकिक पृथक्करण2 +/Mg2 + अनुपात ऊंचाई फायदेमंद है । लेकिन इसके अलावा, ना+ स्पाइक-प्रक्रिया में छोटे वृद्धिशील वृद्धि की ओर जाता है extracellular Na+ जल्दी समय अंक और देर से अंक की ओर बड़े बढ़ जाती है पर एकाग्रता, जिससे मस्तिष्क ऊतक वहन बेहतर करने के लिए ना+ स्तरों को समायोजित करने का अवसर । यह प्रक्रिया क्रमिक समाधान एक छिड़काव पंप या गुरुत्वाकर्षण ड्रिप लाइनों जो ना+ स्तर में लगातार बढ़ जाती है और दोनों बहिर्वाह और बहिर्वाह के लिए ध्यान देने की आवश्यकता के लिए स्लाइस चैंबर के ओवरफ्लो से बचने के लिए नेतृत्व द्वारा नियंत्रित करने के लिए एक विकल्प है । विशेष रूप से, यह ना+ में स्पाइक-प्रक्रिया में परासरणीयता स्लाइस चैंबर में समाधान का धीरे से पहले कई मिनट की अवधि में उगता है स्लाइसें सामांय परासरणीयता समाधान के लिए वापस आ रहे हैं, लेकिन यह प्रतिकूल स्लाइस स्वास्थ्य को प्रभावित नहीं किया या पैच दबाना सफलता रिकॉर्डिंग । एक उच्च परासरणीयता काटने समाधान पहले midbrain स्लाइस तैयारियों के लिए इस्तेमाल किया गया है के लिए बेहतर पैच दबाना रिकॉर्डिंग के लिए डोपामाइन ंयूरॉंस की रक्षा के लिए५७,५८, इस प्रकार का प्रदर्शन है कि यह अस्थाई hyperosmolality कुछ संदर्भों में लाभकारी हो सकता है.
एक अनुकूलित प्रक्रिया को लागू करने के द्वारा NMDG सुरक्षात्मक वसूली विधि और क्रमिक ना+ स्पाइक-चरण में इस मस्तिष्क टुकड़ा पद्धति की उपयोगिता को परिपक्व वयस्क पशु उंर के माध्यम से जुवेनाइल कवर करने के लिए विस्तारित किया गया है । यह अद्यतन प्रोटोकॉल अब एक एकल इष्टतम NMDG aCSF निर्माण और प्रक्रिया का उपयोग कर पशु उम्र की एक विस्तृत श्रृंखला के लिए उपयुक्त है । यदि आवश्यक हो, ना+ स्पाइक-प्रक्रिया में एक उत्तरोत्तर अब देरी और/या धीमी समय पाठ्यक्रम के साथ लागू किया जा सकता है पुराने जानवरों से मस्तिष्क स्लाइस की व्यवहार्यता को बढ़ाने के लिए, और हम अनुशंसित स्पाइक के एक बुनियादी गाइड प्रदान की है-कार्यक्रम में अनुसार पशु आयु के लिए ( तालिका 2देखें) । जबकि हम एक बुनियादी आवेदनों की एक विस्तृत सरणी के लिए उपयुक्त ढांचा प्रदान की है, अतिरिक्त उंनत कदम आगे बढ़ाने व्यवहार्यता और वयस्क और उंर बढ़ने जानवरों से मस्तिष्क के स्लाइस की लंबी उंर के लिए पता लगाया जा सकता है । उदाहरण के लिए, glutathione बहाली रणनीतियों विशेष रूप से इस संबंध में प्रभावी रहे है और2,6कहीं वर्णित के रूप में लागू किया जा सकता है ।
चुनौतीपूर्ण प्रयोगों के लिए प्रवाह में सुधार
पैच दबाना रिकॉर्डिंग द्वारा synaptic कनेक्टिविटी का विश्लेषण एक मांग आवेदन है कि दोनों ंयूरॉन संरचना और समारोह के उत्कृष्ट संरक्षण की आवश्यकता है ताकि सफलता की एक उच्च विश्वसनीयता प्राप्त करने के लिए । न्यूरॉन्स की संख्या के रूप में एक साथ दर्ज किया जा करने के लिए रेखीय ऊपर चला जाता है, तकनीकी कठिनाई स्तर ऊपर अर्थ का उपसर्ग-रेखीय चला जाता है. वहां कई विफलता मोड रहे हैं, और विफलताओं का सबसे लगातार कारणों में से एक एक या एक से अधिक लक्षित कोशिकाओं पर पर्याप्त gigaohm जवानों फार्म करने में असमर्थता है । यह नाटकीय रूप से धीमी गति से प्रगति कर सकते हैं, विशेष रूप से जब तीन या अधिक न्यूरॉन्स एक साथ दर्ज किया जाना चाहिए. अनुकूलित NMDG सुरक्षात्मक वसूली विधि के साथ तेजी से gigaohm सील गठन के समय की खोज के अनुरूप है, दोनों वयस्क ट्रांसजेनिक के साथ सफलता की दर और बहु-ंयूरॉन पैच दबाना रिकॉर्डिंग प्रयोगों के प्रवाह में एक चिह्नित सुधार किया गया माउस मस्तिष्क स्लाइसें और वयस्क मानव तंत्रिकाशल्यक मस्तिष्क स्लाइसें । बेहतर दक्षता लगभग निश्चित रूप से दोनों और अधिक तेजी से और विश्वसनीय gigaohm सील गठन और इस प्रोटोकॉल के साथ स्लाइस के बेहतर ंयूरॉन संरक्षण के लिए कारण है । हालांकि इस प्रोटोकॉल पैच दबाना रिकॉर्डिंग अनुप्रयोगों के लिए स्पष्ट रूप से लाभ पर केंद्रित है, इसी तरह लाभ अन्य चुनौतीपूर्ण प्रयोगात्मक अनुप्रयोगों के लिए अनुमानित कर रहे हैं, जहां मस्तिष्क स्लाइस व्यवहार्यता सर्वोपरि है ।
The authors have nothing to disclose.
यह काम एलन इंस्टीट्यूट फॉर ब्रेन साइंस ने वित्त पोषित किया था । लेखक एलन संस्थान संस्थापकों, पॉल जी एलन और जोड़ी एलन शुक्रिया अदा करना चाहते हैं, उनकी दृष्टि, प्रोत्साहन के लिए, और समर्थन करते हैं । हम भी पशु देखभाल, पशुपालन, और genotyping के प्रदर्शन के लिए एलन संस्थान तकनीकी सहायता स्टाफ धंयवाद ।
Compresstome VF-200 | Precisionary Instruments | VF-200 | Vibrating tissue slicer (recommended) |
N-methyl-D-glucamine | Sigma Aldrich | M2004 | aCSF constituent |
Sodium Chloride | Sigma Aldrich | S3014 | aCSF constituent |
Potassium Chloride | Sigma Aldrich | P5405 | aCSF constituent |
Sodium Phosphate monobasic dihydrate | Sigma Aldrich | 71505 | aCSF constituent |
Sodium Bicarbonate | Sigma Aldrich | S5761 | aCSF constituent |
HEPES | Sigma Aldrich | H4034 | aCSF constituent |
Glucose | Sigma Aldrich | G7021 | aCSF constituent |
Sodium Ascorbate | Sigma Aldrich | A4034 | aCSF constituent |
Thiourea | Sigma Aldrich | T8656 | aCSF constituent |
Sodium pyruvate | Sigma Aldrich | P5280 | aCSF constituent |
Calcium chloride dihydrate | Sigma Aldrich | C7902 | aCSF constituent |
Magnesium Sulfate heptahydrate | Sigma Aldrich | M1880 | aCSF constituent |
2,2,2-Tribromoethanol | Sigma Aldrich | T48402 | Anesthetic component 1 |
2-methyl-2-butanol | Sigma Aldrich | 240486 | Anesthetic component 2 |
Curved blunt forceps | Fine Science Tools | 11065-07 | Brain dissection tools |
Fine dissecting scissors (supercut) | Fine Science Tools | 14058-09 | Brain dissection tools |
Large heavy duty scissors 7'' | Fine Science Tools | 14000-18 | Brain dissection tools |
Metal spatula | Sigma Aldrich | Z511455-1PAK | Brain dissection tools |
Razor blades | VWR | 89031-954 | Brain dissection tools |
Brain Slice Keeper-4 | Automate Scientific | S-BSK4 | brain slice holding chamber |
nylon netting | Warner Instruments | 64-0198 | For building small slice recovery chambers |
Pyrex glass beakers (250 mL) | VWR | 89090-434 | For building small slice recovery chambers |
35 mm plastic dish, round | VWR | 100488-376 | For building small slice recovery chambers |
Gas diffuser stones (10 µm) | Sigma Aldrich | 59277 | For constant carbogenation (fine bubbles) |
Agarose Type I-B | Sigma Aldrich | A0576 | For embedding brain specimens |
Micro loader tips | Eppendorf | 22491229 | For filling patch clamp electrodes |
Sylgard | VWR | 102092-312 | For making a custom dissecting platform |
Hydrochloric acid | Sigma Aldrich | H1758-100ML | For pH adjustment of media |
Sodium Hydroxide | Sigma Aldrich | 221465-25G | For pH adjustment of media |
Potassium Hydroxide | Sigma Aldrich | 221473 | For pH adjustment of media |
Plastic transfer pipets 3 mL graduated | VWR | 89497-676 | For slice transfer |
Zirconium ceramic injector blades | Cadence Specialty Blades | EF-INZ10 | http://cadenceinc.com/ |
KG-33 borosilicate glass capillary w/filament | King Glass Company | custom quote | ID: 0.87mm, OD 1.50mm |
Biocytin | Sigma Aldrich | B4261 | Intern pipette solution |
Phosphocreatine disodium | Sigma Aldrich | P7936 | Intern pipette solution |
Potassium Gluconate | Sigma Aldrich | G4500-100G | Intern pipette solution |
EGTA | Sigma Aldrich | E3889 | Intern pipette solution |
Mg-ATP | Sigma Aldrich | A9187 | Intern pipette solution |
Na2-GTP | Sigma Aldrich | 51120 | Intern pipette solution |
sucrose | Sigma Aldrich | S0389 | Intern pipette solution |
Heated water bath (2.5L) | VWR | 13491-060 | Miscellaneous |
Filter paper rounds | VWR | 28456-022 | Miscellaneous |
Cyanoacrylate glue | Amazon | B000BQRBO6 | Miscellaneous |
Glass petri dish | VWR | 89000-326 | Miscellaneous |
10X Phosphate buffered saline | Sigma Aldrich | P5493 | Miscellaneous |
30 mL syringes | VWR | BD302832 | Miscellaneous |
1 mL syringes | VWR | BD-309628 | Miscellaneous |
25 5/8 gauge needles | VWR | 89219-292 | Miscellaneous |
Thermomixer (w/1.5 mL tube block) | VWR | 89232-908 | To keep agarose molten |