Introduction
Akciğer kılcal (örneğin, marginating pulmoner (MP) lökositler) 1 diğer bağışıklık bölümlerinde (örneğin, kan dolaşımı, karaciğer, dalak, kemik iliği) gelen lökositlere kıyasla belirgin lökosit bileşim ve özel aktivitesi sergiledikleri gösterilmiştir ve 2- yapışan lökositlerin 4. Örneğin, dolaşım ve dalak NK hücreleri, hem de ayırt mesajcı RNA (mRNA) seviyeleri ve pro- ve anti-enflamatuar sitokinlerin artan salgılanmasında karşılaştırıldığında çeşitli tümör hücrelerine karşı MP-lökosit sergi yüksek doğal katil (NK) hücreler sitotoksisite. MP-lökosit dolaşan lökositlerin (% 50 vs sırasıyla% 30,) ile karşılaştırıldığında doğal / adaptif bağışıklığın daha yüksek bir oranına sahip olarak hücrelerin kompozisyonu da dolaşan lökositlerin ayırt edilir. Burada sunulan yöntemin amacı, MP-lökositlerin selektif hasat sağlamak, bu önemli ve eşsiz bağışıklık bölmesi (hücre popülasyonu) incelemek için, ve eluc için iseBu özel hücreler üzerinde çeşitli manipülasyonlar (örneğin, bağışıklık aktivasyon) etkisini idate.
Bu eşsiz nüfusun önemini anlamak için, bağışıklık sisteminin hücre-aracılı bağışıklık (CMI) in vivo fonksiyonları ile tümör hücrelerini, mikrometastazlar ve rezidüel hastalığın dolaşan kontrol edebilirsiniz dikkat etmek önemlidir. Bu yetenek primer tümörü kontrol etmek için bağışıklık sisteminin emsal etmemesine rağmen belirgindir ve kanser hastaları ve hayvan modellerinde 5 in vivo kanıt yeterli destekleniyor. Önemli bir şekilde, bu bulgular, 6,7 (sitotoksisite deneyleri ile ölçülen) çoğu zaman, in vitro ve en otolog tümör hücreleri, insan ve hayvanların kan örneklerinde lökosit dolaşımı sitotoksisite dirençli olduğunu rapor ex vivo çalışmalar, tutarsız. Bu çelişki gibi afore gibi farklı lökosit popülasyonlarının, in vivo varlığı bağlanabilirbahsedilen MP lökosit popülasyonu ve aktive NK hücreleri 3 özel olarak alt popülasyonu. Gerçekten de, dolaşımdaki lökositlerin ve dalak dirençli olduğu bulunmuştur sinjenik tümör hücreleri (MADB106), MP-NK hücrelerinin 3,8 ile lize edilmesi gösterilmiştir. Bu nedenle, fischer344 (F344) farelerin akciğerlerinde metastaz sözde "NK dayanıklı 'MADB106 hücreler değil, döner ya da genel olarak erişim kolaylığı verilen incelenen olan dalak NK hücreleri, MP-NK hücreleri tarafından kontrol edilir.
Saflaştırılmış ve aktif MP-lökosit akciğer doku taşlama veya biyolojik bozulma 9 dayalı akciğerler, lökositlerin standart hasat yöntemleri ile erişilemez. Bizim yaklaşımımız doku işleme yaklaşımları ile karşılaştırıldığında iki önemli avantaja sahiptir. İlk olarak, perfüzyon yaklaşımı seçici diğer akciğer parankim, geçiş reklamı kaynaklanan hücreler ve bronş-alveol karş onları ayıran, MP-lökositleri hasadındepartmanlarında. İkincisi, daha iyi perfüzyon tekniği öğütme ve biyolojik işleme aksine bütünlük ve MP-lökositlerin fizyolojik ortam, korur hasar hücreleri, kendi morfolojisi değiştirebilir ve üretim ve bağışıklık aktivitesini modüle ve özellikle NK bastıran çeşitli faktörlerin salınımını neden olduğunu yaklaşımlar sitotoksisite 10.
Akciğerler kanser metastazı ve çeşitli bulaşıcı hastalıklar için önemli bir hedef organ vardır. Tüm dolaşan habis hücreleri ve enfekte olmuş hücrelerin deforme ve kapiller endotel hücreleri ve ikamet lökositlerin ile etkileşim için gereken akciğer kılcal damarlar yoluyla geçer. Bu koşullar altında, dolaşımdaki hücreleri kolayca yerleşik MP-lökositler tarafından hedeflenebilir. Bu nedenle bu bağışıklık bölmeye aktive lökositler var biyolojik avantajlı görünüyor ve farklı biyolojik, deneysel ve klinik ortamlarda bu eşsiz MP-nüfus incelemek için önemlidir. O sy dikkat layıkÇeşitli biyolojik cevap-değiştiricilerle stemic immün aktivasyonu (örneğin, poli-inozinik-polisitidilik asit (poli I: C) ya da tip-Cı CpG oligodeoksinükleotitler (CpG-Cı ODN)), dolaşımdaki lökositlerin 3 den MP-lökositler fazla aktif olduğu gösterilmiştir 8,11.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Hayvan denekleri Prosedürleri Tel-Aviv Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından onaylanmıştır.
1. Sıçan Protokolü
- hazırlıklar
- 2 kelebek 21 G iğne düzenleyin. İsteğe bağlı olarak, iğnenin keskin kenar dosyalama 2 künt kenarlı kelebek 21 G iğne hazırlamak.
- yerçekimi (kuru) ayarında en az 30 dakika süreyle 121 ° C'de otoklav ile sterilize makas 2 çift, körelmiş kenarlı forseps, hemostat, diş doku forseps: cerrahi aletler sterilize edin.
- fosfat tamponlu tuzlu su (1 x PBS), çözeltinin ml'si başına heparin 30 adet ekleyerek heparinize PBS (30 birim / ml) hazırlayın. Oda sıcaklığında kullanın. 35 ml hayvan başına ihtiyaç duyulan minimum hacimdir.
- Hava kabarcıklarını önlemek için peristaltik pompa hatları ve kelebek iğne içine heparinize PBS akışı.
- MP-lökosit Akciğerler ve Toplama perfüzyon
- % 8 izofluran aşırı dozda ile hayvan Euthanize. izleme solunum durması ile ötenazi onaylayın.
- Solunumun durması üzerine, derhal steril makas ve diş doku forseps kullanılarak periton ve göğüs boşlukları açın. kılıç şeklinde sürecine karın kadar birlikte orta hat karın kesisi gerçekleştirin.
- herhangi bir iç organ ya da büyük kan damarları delmeden, dikkatli her iki tarafta göğüs kafesini kesme, forseps kullanarak sternum kaldırın. sternum üzerinde bir hemostat kelepçe ve rostrally kardiyopulmoner kompleksi ortaya çıkarmak için göğüs kafesi katlayın.
- kalbin sağ ventrikül içine, bir kelebek iğne yerleştirin ve yaklaşık bir dakika içinde (~ 250 g hayvan 6 ml) bir şırınga içine kan maksimal hacim toplar.
- Karaciğer (Tartışma) geriye doğru perfüzyon önlemek için hemostatla vena kava Kelepçe.
- p çıkış borusu ile kan içeren şırınga değiştirirken sağ ventrikül içinde kelebek iğne tutuneristaltic pompa.
- interventriküler septum nüfuz kaçınarak sol ventrikül içine, bir 5 mi hasat şırıngaya bağlanan ikinci bir kelebek iğne yerleştirin.
- yaklaşık olarak 5 mL / dakikalık bir hızda bir peristaltik pompa açın ve yavaşça şırıngaya kan ile kirlenmiş olan perfüzat ilk mililitre toplar. perfüzat kırmızı renk soluk karanlıktan açılana kadar devam edin. (Kan bulaşmış perfuste atın).
- peristaltik pompa kesilmesi olmadan, hızlı bir şekilde 20 mi hasat şırınga ile 5 mi hasat şırınga yerine ve perfüzyon daha yüksek bir hızda (kadar 7 ml / dakika) kullanılarak, akciğer perfüzat 20 ml toplar. Vakum oluşumunu kaçınarak sürekli toplama enjektöre perfüzyon akışını izlemek.
- peristaltik pompa akışını kesmeye.
- lökositler Ekstraksiyon
- 400 x g'de 10 dakika boyunca santrifüj perfüzat.
- sıvıyı aspire.
- 10 dakika boyunca 400 x g'de 10 ml PBS veya orta, santrifüj ekleyin ve sıvıyı aspire. İki kez bu adımı yineleyin. PBS veya ortam kullanılması numunesinin sonucu kullanımına bağlıdır.
- 10 dakika boyunca 400 x g'de 20 ml PBS veya orta, santrifüj ekleyin ve sıvıyı aspire.
- Örnek kullanım (FACS PCR, vb) göre istenen konsantrasyona hücreleri sulandırın.
2. Fare Protokolü
- hazırlıklar
- 2 kelebek 25 G iğne düzenleyin. İsteğe bağlı olarak, iğnenin keskin kenar dosyalama 2 künt kenarlı kelebek 25 G iğne hazırlamak.
- yerçekimi (kuru) ayarında en az 30 dakika süreyle 121 ° C'de otoklav ile sterilize makas 2 çift, körelmiş kenarlı forseps, hemostat, diş doku forseps: cerrahi aletler sterilize edin.
- 1x PBS çözeltisi ml'si başına heparin 30 adet ekleyerek heparinize PBS (30 birim / ml) hazırlayın. Oda sıcaklığında kullanın. 25 ml hayvan başına ihtiyaç duyulan minimum hacimdir.
- streHava kabarcıklarını önlemek için peristaltik pompa hatları ve kelebek iğne içine PBS heparinize ediyorum.
- MP-lökosit Akciğerler ve Toplama perfüzyon
- % 8 izofluran aşırı dozda ile hayvan Euthanize. izleme solunum durması ile ötenazi onaylayın.
- Solunumun durması üzerine, derhal steril makas ve diş doku forseps kullanılarak periton ve göğüs boşlukları açın. kılıç şeklinde sürecine karın kadar birlikte orta hat karın kesisi gerçekleştirin.
- herhangi bir iç organ ya da büyük kan damarları delmeden, dikkatli her iki tarafta göğüs kafesini kesme, forseps kullanarak sternum kaldırın. sternum üzerinde bir hemostat kelepçe ve rostrally kardiyopulmoner kompleksi ortaya çıkarmak için göğüs kafesi katlayın.
- Karaciğer (Tartışma) geriye doğru perfüzyon önlemek için hemostatla vena kava Kelepçe.
- Sağ ven içine peristaltik pompa çıkış borusuna bağlı bir kelebek iğne yerleştirinKalbin tricle ve kalp, septum ve avoidingpenetration sol ventrikül içine, bir 2 mi hasat şırıngaya bağlanan ikinci bir kelebek iğne.
- yaklaşık 2 ml / dk hızına pompa açın ve perfüzyon (kan bulaşmış perfuste atın) kırmızı soluk karanlıktan dönene kadar hasat şırıngaya kan kirlenmiş perfüzat ilk mililitre toplamak.
- peristaltik pompa kesilmesi olmadan, hızlı bir şekilde 10 mi hasat şırınga ile 2 mi hasat şırınga yerine ve perfüzyon daha yüksek bir hızda (en fazla 4 ml / dakika) kullanılarak, akciğer perfüzat 10 ml toplar. Vakum oluşumunu kaçınarak sürekli toplama enjektöre perfüzyon akışını izlemek.
- peristaltik pompa akışını kesmeye.
- lökositler Ekstraksiyon
- 400 x g'de 10 dakika boyunca santrifüj perfüzat.
- sıvıyı aspire.
- 400 10 ml PBS veya orta, santrifüj ekle10 dakika xg ve sıvıyı aspire. Bu adımı üç kez tekrarlayın. PBS veya ortam kullanılması numunesinin sonucu kullanımına bağlıdır.
- 10 dakika boyunca 400 x g'de 10 ml PBS veya orta, santrifüj ekleyin ve sıvıyı aspire.
- Örnek kullanım (FACS PCR, vb) göre istenen konsantrasyona hücreleri sulandırın.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
MP-bölmesi sergi, farklı bir lökosit alt kümesi kompozisyon lökosit dolaşan karşılaştırıldı. flow sitometri analizi kullanarak, lökosit subpopülasyonunun tespit ve hem dolaşan ve MP lökositlerin kompozisyonu karakterize etmek için ölçüldü. Granülosit ve lenfositler ileri ve yan scatter göre tespit edilmiştir. Lenfositler içinde NKRP-1 parlak hücrelerin NK hücreleri, monositler gibi T hücreleri gibi, CD3 +, H1 + ve CD4 + / CD8 + / CD25 olarak tanımlanmıştır + T hücresi alt-popülasyonları bulunduğunu tanımlama için kullanıldı. granülositler, monositler ve NK hücrelerinin de dahil olmak üzere doğuştan imünositler, dolaşım (p <0.05)% 27.9 (0.66 ±%) ile karşılaştırıldığında, MP-lökosit nüfusun% 52 (± 1.52%) oluşturdu. Aksine, CD4 +, CD4 + CD8 + T hücrelerinin ve düzenleyici (CD4 + CD25 +) dahil olmak üzere T hücresi alt-popülasyonları bulunduğunu,T hücreleri, hem de dendritik hücreler, dolaşımdaki göre MP bölmesindeki düşük yüzdeleri gösterdi (p <0.005, n = 8). Bu suşun MP bölmesine hücre verimi yaklaşık 3.000.000 lökosit (Şekil 1) oluşturmaktadır.
NK hücreleri içinde, iki alt popülasyonlar hücre boyutuna göre, belirgindir. NKRP-1 işareti, ileri dağılım, bir dağılım grafiğini kullanarak, NK hücreleri, küçük ve büyük NK hücreleri ayrıldı. NK hücrelerinin toplam sayısı (Şekil 2) benzer olsa da MP bölmesi, dolaşım (~% 10) ile karşılaştırıldığında, büyük NK hücreleri (~% 30) içindeki bir 3-kat daha yüksek bir yüzdesini sergiler. Ayrıca, standart bir 4 saat 51Cr salım deneyi kullanılarak, birkaç hedef tümör hücrelerine karşı, NK anti-tümör sitotoksisite 8 ölçülmüştür. Kısaca, deney, NK hücresi tarafından spesifik sitotoksisite sonucu tümör hücrelerinden salınan 51 Cr miktarı değerlendirirs. Tümör hücrelerini lize MP bölmeden NK hücrelerinin yeteneği NK hücreleri (Şekil 3), her iki MADB106 singeneik hücre çizgisi (Şekil 3A) karşı belirgin olarak dolaşımdaki daha büyüktür ve YAC-1 standart hücre hattı (Şekil 3B) . Buna ek olarak, in vivo olarak, poli yoluyla immün stimülasyon I: C Yönetim MADB106 hedef hücre hattı (Şekil 3A) kullanıldığında NK hücrelerini dolaşımdaki daha MP-NK hücrelerinin NK sitotoksisiteye üzerinde daha büyük bir etkiye üretir.
Şekil 1. Farklı lökosit alt kümesi kompozisyon F344 sıçanlarda dolaşıma kıyasla MP-bölmesi karakterize etmektedir. T hücrelerinin sıklığı bir karşı farklılık gösteren ise MP bölmesi olarak, doğal bağışıklık fraksiyonu (s, dolaşım (% 52 vs% 28) eşdeğer daha büyük karşılaştırılır0; 0.005; n = 8). Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.
Şekil 2. sirkülasyonu ile karşılaştırıldığında MP bölme büyük NK hücrelerinin yüzdesi artan MP-NK hücreleri sergiledi üç kat, sırasıyla NK hücreleri, dolaşımdaki kıyasla büyük bir NK hücrelerinin daha yüksek bir yüzdede (% 30 VS.% 10;. P < NK hücreleri sayısı benzer iken 0.05). Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.
Dolaşıma kıyasla MP bölmesinde 3. Yüksek NK sitotoksisitesini rakam.(A) MADB106 hedef hücreleri - MP bölmeden hasat NK hücreleri bu hücre hattına karşı belirgin bir sitotoksisite sergiledi, dolaşımdaki NK hücreleri yok sitotoksisite gösterirken in vivo poli bağışıklık uyarım ben. C MP bölmesi NK sitotoksisitesini artırır, ancak dolaşımda. (B) YAC-1 hedef hücreleri, - MP bölmeden hasat NK hücreleri, bu standart hücre çizgisine karşı NK hücrelerini dolaşımdaki kıyasla daha yüksek bir sitotoksisite arzetmiştir. poli tarafından Bağışıklık sisteminin uyarılması I: C MP bölmesi ve dolaşım hem de NK sitotoksisitesini artırır. NK hücre sayıları sitotoksisite değerlendirmesi için kontrol edildi. Veri ortalama ± SEM olarak ifade edilir. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Burada sunulan yöntem seçici hasat sağlayan ve MP-lökositlerin eşsiz nüfusun eğitim. Döner ya da dalak lökositleri karşılaştırıldığında, MP popülasyonu bir lökosit alt gruplarının farklı bileşim, yüksek aktivasyon düzeyleri, muhtelif sitokinlerin yüksek bırakma ve yanlısı ve anti-enflamatuar sitokinlerin 2,3 daha yüksek mRNA seviyeleri ile karakterize edilir. Özellikle, MP-NK hücreleri, çeşitli hedef hücrelere 3,4 karşı dolaşım NK hücreleri daha sitotoksiktir ve interferon-y yüksek seviyelerde eksprese olduğunu göstermiştir. Genel olarak, bizim sonuçlar MP-NK lökositler kan yoluyla bulaşan metastaz ve akciğer metastazları kontrol daha büyük bir biyolojik önemini ima edebilir bu nedenle NK hücrelerini dolaşan ve daha büyük bir sitotoksisite olduğunu göstermektedir. Bu nedenle, dalak veya dolaşımdaki lökosit altın standart veya immünolojik durumunu yansıtan varsayılan nüfus ve insan çalışmalarında olarak kabul edilmemesi gerektiğini comkip eden bacak dikkatli yorumlanması gerektiğini lökositler dolaşımdaki güvenmemelisiniz. çeşitli hastalıklar, özellikle akciğerleri vermek Dahası, bağışıklık, bu organın içindeki incelenmesi gereken ve MP bölmesi geçiş reklamı, parankimal ve bronco-alveol alt bölmeleri ayırt edilmelidir, gibi gerçekten bizim perfüzyon yaklaşım kullanarak durumdur.
Bu prosedürün başarı sağlamak için, (i), hızla solunumun tam kesilmesini takiben karın ve göğüs boşlukları açmak maksimal kardiyak kan toplama sağlayan bir kan basıncı korumak için, ve (ii) istenmeyen bir ek kaçınmaya için çok önemlidir künt kenarlı kelebek iğne kullanımı yoluyla kalp ventrikül perforasyonu. Bir başka önemli engel akciğer perfüzat içindeki kanın potansiyel kirlenme olduğunu. Akciğer perfüzat ilk mililitre kalp kanla kontamine olarak gösterildiği gibi, bunlar atılmalıdır. ani arasındaki standardizasyonu sağlamak içinmals MP perfüzyon toplamaya başlamak için kriter kırmızı soluk koyu kırmızı renk geçişi dayanmaktadır. Buna ek olarak, bir de, karaciğer ardışık perfüzyon yoluyla karaciğer hücreleri marginating toplamak için istediği özellikle karaciğer geri perfüzyonu önlemek için olmayan bir dişli hemostatla vena kava sıkıştırmak için tavsiye edilir. sol karıncıktan perfüzyon toplarken, interventriküler septumu nüfuz değil önemlidir. Son PBS içinde heparin perfüzyon için kullanılan kılcal MP-lökosit popülasyonu kesme için çok önemlidir ve bu nedenle kullanılmalıdır.
Bu işlem sırasında, birkaç arıza meydana gelebilir, ancak çoğu düzeltilebilir. kalbine iğne penetrasyon sitesinden bir sızıntı varsa, kelebek iğne çevreleyen tırtıklı ipuçları ile bir küt burunlu forseps kullanılarak rüptüre kalp kası mühür önerilmektedir. Bir iğne, sto dışarı kayarsap peristaltik pompa, tekrar takın özgün penetrasyon sitesine içine iğne ve pompayı yeniden başlatın. toplama akışı kesilirse, toplama vakum basıncını durdurmak ventrikül içindeki iğne taşınmaya ve toplama yeniden başlatın. sol atrium şişirilir ve sürekli bir koleksiyona azalır değilse, pompanın debisini düşürmek. Genel olarak, yüksek bir peristaltik akış hızı kılcal damar oluşumunu zarar verebilir, ve akciğerler şişmiş olabilir.
Burada tarif edilen yöntem, nispeten basit bir prosedür MP lökosit nüfusun seçici bir hasat sağlar. Bu nüfus, diğer immün bölmelere lökositlerin göre benzersiz özellikleri sergiler ve özellikle akciğer ile ilgili süreçleri ve hastalıkları okuyan ne zaman mümkün, bu nüfus organizmanın biyolojik ve klinik öneme sahip olabilir, bu yöntemin kullanılmasını öneriyoruz göz önüne alındığında. Akciğer capill ikamet MP hücreleri, olmadığı henüz bilinmiyorkoç hücreleri hasat üzerine, akciğerlerde olgunlaşmış, ya da akciğerlere ayrıldıktan sonra kendi özelliklerini muhafaza edip. diğer bölmelere lökositlerin MP nüfusun profili yansıtması ve bu insanlarda erişilebilir değil gibi, biz daha fazla benzersiz MP özellikleri ile ilişkili spesifik dolaşan Biyobelirteçleri aydınlatmak için bu yöntemi kullanan önermek olmayabilir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.
Acknowledgments
Yazarlar ve bu çalışma NIH / NCI hibe # (SBE kadar) R01CA172138 tarafından desteklendi.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Autoclud Peristaltic pump | |||
| Butterfly needle | OMG | 26G | |
| Butterfly needle | OMG | 21G*3/4" | |
| Syringe | Pic solution | 1 ml | |
| Syringe | Pic solution | 2.5 ml | |
| Syringe | Pic solution | 5 ml | |
| Syringe | Pic solution | 10 ml | |
| Syringe | Pic solution | 25 ml | |
| Blunted-edged forceps | |||
| Scissors | |||
| hemostat | |||
| Tissue forceps | |||
| Heparin sodium porcine mucosa (perservative free) | Sigma Aldrich |
References
- Kuebler, W. M., Goetz, A. E.
- Benish, M., et al. The marginating-pulmonary immune compartment in mice exhibits increased NK cytotoxicity and unique cellular characteristics. Immunol Res. 58, 28-39 (2014).
- Melamed, R., et al. The marginating-pulmonary immune compartment in rats: characteristics of continuous inflammation and activated NK cells. J Immunother. 33, 16-29 (2010).
- Shakhar, G., et al. Amelioration of operation-induced suppression of marginating pulmonary NK activity using poly IC: a potential approach to reduce postoperative metastasis. Ann Surg Oncol. 14, 841-852 (2007).
- Smyth, M. J., Godfrey, D. I., Trapani, J. A. A fresh look at tumor immunosurveillance and immunotherapy. Nat Immunol. 2, 293-299 (2001).
- Talmadge, J. E., Meyers, K. M., Prieur, D. J., Starkey, J. R. Role of NK cells in tumour growth and metastasis in beige mice. Nature. 284, 622-624 (1980).
- Grimm, E. A., Mazumder, A., Zhang, H. Z., Rosenberg, S. A. Lymphokine-activated killer cell phenomenon. Lysis of natural killer-resistant fresh solid tumor cells by interleukin 2-activated autologous human peripheral blood lymphocytes. J Exp Med. 155, 1823-1841 (1982).
- Melamed, R., et al. Marginating pulmonary-NK activity and resistance to experimental tumor metastasis: suppression by surgery and the prophylactic use of a beta-adrenergic antagonist and a prostaglandin synthesis inhibitor. Brain Behav Immun. 19, 114-126 (2005).
- O'Dea, K. P., et al. Lung-marginated monocytes modulate pulmonary microvascular injury during early endotoxemia. Am J Respir Crit Care Med. 172, 1119-1127 (2005).
- Sorski, L., Melamed, R., Ben-Eliyahu, A unique role for marginating-pulmonary and marginating-hepatic NK cells in cancer anti-metastatic surveillance and in immunotherapy. Annual Meeting of the Psychoneuroimmunology Research Society, Philadelphia, USA.(2014, , (2014).
- Levi, B., et al. Continuous stress disrupts immunostimulatory effects of IL-12). Brain Behav Immun. 25, 727-735 (2011).
