Marjinal-pulmoner lökositler, diğer lökosit popülasyonlarına kıyasla benzersiz özellikler ve farklı immünolojik fonksiyonlar sergiler. Burada, sıçanlarda ve farelerde akciğerlerin zorla perfüzyonu ile bu pulmoner lökosit alt popülasyonunun seçici olarak toplanmasını tarif ediyoruz. Marjinizan pulmoner lökositler, kan yoluyla bulaşan ve akciğerle ilgili hastalıklara duyarlılığın belirlenmesinde kritik görünmektedir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Marginating pulmoner lökosit seçici Hasat
* These authors contributed equally
Bu makalede
Özet
Özet
Marjinal-pulmoner (MP) lökositler, akciğer kılcal damarlarının iç endoteline yapışan lökositlerdir. MP-lökositlerin, diğer bağışıklık bölmelerinin lökositlerine kıyasla benzersiz bileşim ve özellikler sergilediği gösterilmiştir. Kanıtlar, doğal öldürücü hücrelerin daha yüksek sitotoksisitesini ve dolaşımdaki veya splenik immünositlere kıyasla MP-lökosit popülasyonunun belirgin bir pro- ve anti-inflamatuar profilini göstermektedir. Burada sunulan yöntem, farelerde veya sıçanlarda akciğerlerin zorla perfüzyonu ile MP-lökositlerin seçici olarak toplanmasını sağlar. Doku öğütme ve biyolojik bozunma gibi akciğer-lökositleri çıkarmak için kullanılan diğer yöntemlerin aksine, bu yöntem yalnızca parankimal, interstisyel ve bronko-alveolar hücrelerle kontamine olmamış akciğer kılcal damarlarından lökositler verir. Ek olarak, perfüzyon tekniği, doku işlemeye bağlı fizyolojik tepkilere neden olmadan MP-lökositlerin bütünlüğünü ve fizyolojik ortamını daha iyi korur. Bu benzersiz MP lökosit popülasyonu, dolaşımdaki tüm kötü huylu hücreler ve enfekte olmuş hücreler akciğer kılcal damarlarından geçerken, endotel hücreleri ve yerleşik lökositlerle fiziksel olarak etkileşime girerken alıkonulduğundan, anormal dolaşımdaki hücreleri tanımlamak ve bunlara tepki vermek için stratejik olarak konumlandırılmıştır. Bu nedenle, MP-lökositlerin seçici olarak toplanması ve çeşitli koşullar altında incelenmesi, özellikle dolaşımdaki anormal hücrelerin ve akciğerle ilgili hastalıkların kontrol edilmesi ile ilgili olarak biyolojik ve klinik önemlerini anlamamızı ilerletebilir.
Giriş
Akciğer kılcal (örneğin, marginating pulmoner (MP) lökositler) 1 diğer bağışıklık bölümlerinde (örneğin, kan dolaşımı, karaciğer, dalak, kemik iliği) gelen lökositlere kıyasla belirgin lökosit bileşim ve özel aktivitesi sergiledikleri gösterilmiştir ve 2- yapışan lökositlerin 4. Örneğin, dolaşım ve dalak NK hücreleri, hem de ayırt mesajcı RNA (mRNA) seviyeleri ve pro- ve anti-enflamatuar sitokinlerin artan salgılanmasında karşılaştırıldığında çeşitli tümör hücrelerine karşı MP-lökosit sergi yüksek doğal katil (NK) hücreler sitotoksisite. MP-lökosit dolaşan lökositlerin (% 50 vs sırasıyla% 30,) ile karşılaştırıldığınd....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Hayvan denekleri Prosedürleri Tel-Aviv Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından onaylanmıştır.
1. Sıçan Protokolü
- hazırlıklar
- 2 kelebek 21 G iğne düzenleyin. İsteğe bağlı olarak, iğnenin keskin kenar dosyalama 2 künt kenarlı kelebek 21 G iğne hazırlamak.
- yerçekimi (kuru) ayarında en az 30 dakika süreyle 121 ° C'de otoklav ile sterilize makas 2 çift, körelmiş kenarlı forseps, hemostat, diş doku forseps: cerrahi aletler sterilize edin.
- fosfat tamponlu tuzlu su (1 x PBS), çözeltinin ml'si başına heparin 30 adet ekleyerek heparinize PBS (30 birim / ml) hazırlayın. Oda sıcaklığında k....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
MP-bölmesi sergi, farklı bir lökosit alt kümesi kompozisyon lökosit dolaşan karşılaştırıldı. flow sitometri analizi kullanarak, lökosit subpopülasyonunun tespit ve hem dolaşan ve MP lökositlerin kompozisyonu karakterize etmek için ölçüldü. Granülosit ve lenfositler ileri ve yan scatter göre tespit edilmiştir. Lenfositler içinde NKRP-1 parlak hücrelerin NK hücreleri, monositler gibi T hücreleri gibi, CD3 +, H1 + ve CD4 + / CD8 +<.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Burada sunulan yöntem seçici hasat sağlayan ve MP-lökositlerin eşsiz nüfusun eğitim. Döner ya da dalak lökositleri karşılaştırıldığında, MP popülasyonu bir lökosit alt gruplarının farklı bileşim, yüksek aktivasyon düzeyleri, muhtelif sitokinlerin yüksek bırakma ve yanlısı ve anti-enflamatuar sitokinlerin 2,3 daha yüksek mRNA seviyeleri ile karakterize edilir. Özellikle, MP-NK hücreleri, çeşitli hedef hücrelere 3,4 karşı dolaşım NK hücreleri daha sitotoksiktir ve interferon-y yüksek seviyelerde eksp.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.
Teşekkürler
Yazarlar ve bu çalışma NIH / NCI hibe # (SBE kadar) R01CA172138 tarafından desteklendi.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Autoclud Peristaltik pompa | |||
| Kelebek iğne | OMG | 26G | |
| Kelebek iğne | OMG | 21G*3/4 " | |
| Şırınga | Pic çözeltisi | 1 ml | |
| Şırınga | Pic çözeltisi | 2.5 ml | |
| Şırınga | Pic çözeltisi | 5 ml | |
| Şırınga | Pic solüsyonu | 10 ml | |
| Şırınga | Pic solüsyonu | 25 ml | |
| Künt kenarlı forseps | |||
| Makas | |||
| kanama durdurucu | |||
| Doku forseps | |||
| Heparin sodyum domuz mukozası (koruyucu içermez) | Sigma Aldrich |
Kaynaklar
- Kuebler, W. M., Goetz, A. E. The marginated pool. Eur Surg Res. 34, 92-100 (2002).
- Benish, M., et al. The marginating-pulmonary immune compartment in mice exhibits increased NK cytotoxicity and unique cellular characteristics. Immunol Res. 58
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
