Selektive Ernte von Marginating-Lungen-Leukozyten

Zusammenfassung

Marginating-pulmonale Leukozyten weisen im Vergleich zu anderen Leukozytenpopulationen einzigartige Eigenschaften und unterschiedliche immunologische Funktionen auf. Hier beschreiben wir die selektive Entnahme dieser Subpopulation von Lungenleukozyten durch erzwungene Perfusion der Lunge bei Ratten und Mäusen. Marginating-pulmonale Leukozyten scheinen entscheidend für die Bestimmung der Anfälligkeit für durch Blut übertragbare und lungenbedingte Krankheiten zu sein.

Zusammenfassung

Marginating-pulmonale (MP) Leukozyten sind Leukozyten, die am inneren Endothel der Lungenkapillaren haften. Es wurde gezeigt, dass MP-Leukozyten im Vergleich zu Leukozyten anderer Immunkompartimente eine einzigartige Zusammensetzung und Eigenschaften aufweisen. Es gibt Hinweise auf eine höhere Zytotoxizität natürlicher Killerzellen und ein ausgeprägtes pro- und antiinflammatorisches Profil der MP-Leukozytenpopulation im Vergleich zu zirkulierenden oder Milzimmunozyten. Das hierin vorgestellte Verfahren ermöglicht die selektive Entnahme von MP-Leukozyten durch erzwungene Perfusion der Lunge bei Mäusen oder Ratten. Im Gegensatz zu anderen Methoden zur Extraktion von Lungenleukozyten, wie z. B. dem Zerkleinern von Gewebe und dem biologischen Abbau, werden bei dieser Methode ausschließlich Leukozyten aus den Lungenkapillaren gewonnen, die nicht mit parenchymalen, interstitiellen und broncho-alveolären Zellen kontaminiert sind. Darüber hinaus bewahrt die Perfusionstechnik die Integrität und das physiologische Milieu der MP-Leukozyten besser, ohne physiologische Reaktionen aufgrund der Gewebeverarbeitung hervorzurufen. Diese einzigartige MP-Leukozytenpopulation ist strategisch günstig gelegen, um abnormale zirkulierende Zellen zu identifizieren und darauf zu reagieren, da alle zirkulierenden bösartigen Zellen und infizierten Zellen beim Passieren der Lungenkapillaren zurückgehalten werden und physisch mit Endothelzellen und ansässigen Leukozyten interagieren. Daher kann die selektive Entnahme von MP-Leukozyten und ihre Untersuchung unter verschiedenen Bedingungen unser Verständnis ihrer biologischen und klinischen Bedeutung verbessern, insbesondere im Hinblick auf die Kontrolle zirkulierender aberranter Zellen und lungenbedingter Krankheiten.

Einleitung

Leukocyten zu den Kapillaren der Lunge anhaftenden (dh marginating-Lungen (MP) Leukozyten) ¹ gezeigt wurden verschiedene Leukozyten - Zusammensetzung und einzigartige Aktivität aufweisen , verglichen mit Leukozyten von anderen Immun Kompartimente (zB Zirkulations, Milz, Knochenmark) ^{2- 4.} Zum Beispiel, MP-Leukozyten zeigen eine höhere natürliche Killerzellen (NK) Zytotoxizität gegen verschiedene Tumorzellen, im Vergleich zu zirkulierenden und splenic NK-Zellen, sowie differenzierte Boten-RNA (mRNA) Ebenen und erhöhte Sekretion von pro- und anti-inflammatorischen Zytokinen. Die Zusammensetzung von Zellen ist auch aus der zirkuli....

Protokoll

Verfahren unter Verwendung tierischer Probanden wurden von der Institutional Animal Care und Use Committee (IACUC) an der Universität Tel Aviv genehmigt.

1. Rat Protokoll

1. Die Vorbereitungen
   1. Vereinbaren 2 Schmetterling 21 G Nadeln. Optional vorbereiten 2 stumpfkantige Schmetterling 21 G Nadeln durch die scharfe Kante der Nadel Einreichung.
   2. Sterilisieren chirurgische Instrumente: 2 Paar Scheren, abgestumpft kantigen Zange, hemostat, Zahngewebe durch Autoklaven bei 121 ° C sterilisiert Zange für mindestens 30 min auf die Schwerkraft (trocken) Einstellung.
   3. Bereiten heparinisiertem PBS (30 units / ml) durch Zugabe von 30 Ein....

Ergebnisse

Der MP-Fach weisen eine unterschiedliche Leukozyten-Subset Zusammensetzung im Vergleich zu Leukozyten zirkulieren. Verwendung von Durchflußzytometrie-Analyse wurden Leukozyten-Subpopulationen identifiziert und die Zusammensetzung von sowohl zirkulierenden Leukozyten und MP zu charakterisieren quantifiziert. Granulozyten und Lymphozyten wurden basierend auf Vorwärts- und Seitenstreuungen identifiziert. Innerhalb der Lymphozyten wurden NKRP-1 ^helle Zellen NK - Zellen, CD3 ^+.......

Diskussion

Das vorgestellte Verfahren ermöglicht hier die selektive Ernte und das Studium der einzigartigen Population von MP-Leukozyten. Im Vergleich zum Zirkulieren oder splenic Leukozyten wird die MP Population durch eine bestimmte Zusammensetzung der Leukozyten - Subpopulationen gekennzeichnet, höhere Aktivierungsstufen, höhere Freisetzung verschiedener Cytokine, und höhere mRNA - Spiegel von pro- und anti-inflammatorischen Zytokinen ^2,3. Insbesondere haben wir gezeigt , dass die MP-NK - Zellen cytotoxischer als Kre.......

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Autoclud Peristaltic Pump
Butterfly Nadel	OMG		26G
Butterfly Nadel	OMG		21G*3/4"
Spritze	Pic Lösung		1 ml
Spritze	Pic Lösung		2,5 ml
Spritze	Pic Lösung		5 ml
Spritze	Pic-Lösung		10 ml
Spritze	Pic-Lösung		25 ml
			abgestumpften Kanten
Schere
hämostatisch
Gewebezange
Heparin-Natrium-Schweineschleimhaut (ohne Konservierungsstoffe)	Sigma Aldrich

Pinzette mit