Rabbits are widely used to study the pharmacokinetics of intraocular drugs. We describe a method for conducting pharmacokinetic studies of intraocular drugs using rabbit eyes.
जबकि उनके प्रणालीगत अवशोषण को कम औषधि प्रशासन की intraocular मार्ग, चिकित्सकीय दवाओं की उच्च सांद्रता के वितरण के लिए सक्षम बनाता है। कई दवाओं पूर्वकाल कक्ष या शीशे में प्रशासित रहे हैं, और intraocular इंजेक्शन विभिन्न intraocular रोगों के इलाज में प्रभावी किया गया है। खरगोश आँखों व्यापक रूप से, नेत्र अनुसंधान के लिए इस्तेमाल किया गया है के रूप में पशु अन्य स्तनधारियों की तुलना में संभाल करने के लिए आसान और किफायती है, और एक खरगोश आंख के आकार के एक मानव आँख के समान है। एक 30 जी सुई का प्रयोग, दवाओं खरगोश आंखों की intracameral और intravitreal रिक्त स्थान में इंजेक्ट किया जा सकता है। आंखों तब विश्लेषण जब तक जमे हुए हैं, और जलीय हास्य, कांच, और रेटिना / रंजित में विभाजित किया जा सकता है। कांच और रेटिना / रंजित नमूने homogenized और विश्लेषण से पहले solubilized जा सकता है। फिर, immunoassays प्रत्येक डिब्बे में intraocular दवाओं की सांद्रता को मापने के लिए किया जा सकता है। उचित फ़ार्माकोकायनेटिक मॉडल हो सकता हैइस तरह के आधा जीवन और नशीली दवाओं की अधिकतम एकाग्रता के रूप में कई मापदंडों की गणना करने के लिए प्रयोग किया जाता है। खरगोश आंखों intraocular दवाओं के फ़ार्माकोकायनेटिक के अध्ययन के लिए एक अच्छा मॉडल हो सकता है।
intraocular दवा वितरण के आगमन से पहले, intraocular रोगों के लिए चिकित्सा उपचार की मुख्य चिंता का विषय दक्षता दवा के साथ जो आँख में घुसना सकता था। खून से नेत्र बाधा आंख में diffusing से दवाओं सहित कई पदार्थों, रोकता है। इसलिए, कि उपचार के स्तर से ऊपर हैं दवाओं की सांद्रता आसानी से प्राप्त नहीं किया जा सकता है। Intracameral और intravitreal इंजेक्शन सहित intraocular औषधि प्रशासन विधि, सीधे कर सकते हैं, रक्त-नेत्र बाधा 1-3 बाईपास इतना है कि दवाओं के चिकित्सीय सांद्रता आंख 4,5 में प्राप्त किया जा सकता है।
तदनुसार, intravitreal दवा वितरण कई intraocular रोगों 5,6 के लिए इलाज का एक लोकप्रिय तरीका बन गया है। उदाहरण के लिए, intravitreal इंजेक्शन व्यापक रूप से उम्र से संबंधित धब्बेदार अध: पतन, मधुमेह रेटिनोपैथी, रेटिना नस अवरोध, और intraocular में संक्रमण 7-10 लिए किया जाता है। विशेष रूप से, के बाद सेविरोधी वीईजीएफ़ दवाओं का परिचय, intravitreal इंजेक्शन की आवृत्ति उल्लेखनीय रेटिना रोगों के उपचार के लिए बढ़ गया है। इसलिए, यह प्रभावकारिता और चिकित्सा उपचार की सुरक्षा के मूल्यांकन के लिए ऐसी दवाओं के intraocular फार्माकोकाइनेटिक्स समझने के लिए महत्वपूर्ण है।
हालांकि दवाओं के intraocular प्रशासन नेत्र रोगों के लिए चिकित्सा उपचार में एक बड़ी सफलता, नेत्रगोलक के भीतर दवा एकाग्रता की निगरानी में माना जाता है तकनीकी रूप से मांग की है। क्योंकि मानव आंखों के जलीय हास्य (लगभग 200 μl) और कांच का (के बारे में 4.5 मिलीलीटर, 1 टेबल) की ही छोटी मात्रा में होते हैं, यह दवा एकाग्रता को मापने के लिए आंख का तरल पदार्थ की पर्याप्त मात्रा में प्राप्त करने के लिए तकनीकी रूप से कठिन है। इसके अलावा, विधियों, ऐसे कांच का दोहन या पूर्वकाल कक्ष paracentesis रूप में है कि आंख तरल पदार्थ प्राप्त करने के लिए उपयोग किया जाता है, नेत्र ऊतकों को नुकसान पहुंचा है और इस तरह के मोतियाबिंद, endophthalmitis, या के रूप में गंभीर जटिलताओं में परिणाम हो सकता हैरेटिना टुकड़ी 11,12। तदनुसार, पशु मॉडल आमतौर पर इस्तेमाल किया intraocular दवाओं 13 के फ़ार्माकोकायनेटिक अध्ययन में इस्तेमाल किया जाता है। इन पशु मॉडल के अलावा, खरगोश या बंदरों सबसे अक्सर इस्तेमाल जानवर हैं।
खरगोश, जो परिवार Leporidae में आदेश Lagomorpha के छोटे स्तनधारी हैं, दुनिया के कई हिस्सों में पाए जाते हैं। क्योंकि खरगोश आक्रामक नहीं हैं, वे संभाल एक प्रयोग में इस्तेमाल करते हैं, और निरीक्षण करने के लिए आसान कर रहे हैं। कम लागत, जानवर, मनुष्य के लिए इसी तरह की आंख के आकार के लिए तैयार की उपलब्धता, और तुलना पक्ष खरगोश आंखों का उपयोग फ़ार्माकोकायनेटिक के अध्ययन के प्रदर्शन के लिए जानकारी का एक बड़ा डेटाबेस। इस पत्र में, खरगोश आंखों में intraocular दवाओं के फ़ार्माकोकायनेटिक अध्ययन के लिए एक प्रोटोकॉल में वर्णित है।
With the increasing use of intraocular drugs, such as anti-vascular endothelial growth factor (VEGF) agents, for the treatment of diverse ocular diseases, knowledge of the tissue distribution and clearance of the drug after the intraocular injection is important. Understanding the pharmacokinetics of intraocular drugs is important for understanding the efficacy and safety of drugs, determining the optimal dosage of the drugs, and minimizing systemic or intraocular complications. However, detailed pharmacokinetic studies …
The authors have nothing to disclose.
We would like to thank Ms. Ji Hyun Park and Ji Yeon Park for their technical assistance in the animal experiments. This work was supported by a grant from the Seoul National University Bundang Hospital Research Fund (grant number: Grant No. 14-2014-022) and from a grant (CCP-13-02-KIST) from the Convergence Commercialization Project of the National Research Council of Science and Technology, Seoul, Korea.
Zoletil | Virbac Laboratories, Carros Cedex, France | ||
Xylazine hydrochloride | Fort Dodge Laboratories, Fort Dodge, IA | ||
Proparacaine hydrochloride (Alcaine) | Alcon laboratories, Fort Worth, TX | ||
Phenylephrine hydrochloride and tropicamide | Santen Pharmaceutical, Co., Osaka, Japan | ||
Recombinant Human VEGF 165 | R&D systems | 293-VE-050 | |
Carbobate-Bicarbonate buffer | SIGMA | C3041-50CAP | |
NUNC MICROWELL 96F W/LID NUNCLON D SI | Thermo SCIENTIFIC | 167008 | 96 well plate |
Bovine Serum Albumin (BSA) 25grams(Net) | BOVOGEN | BSA025 | |
Phosphate Buffered Saline (PBS) pH7.4 (1X), 500mL | gibco | 10010-023 | |
Sheep anti-Human IgG Secondary Antibody, HRP conjugate | Thermo SCIENTIFIC | PA1-28652 | |
Goat Anti-Human IgG Fc(HRP) | abcam | ab97225 | |
Goat anti-Human IgG, Fab'2 Secondary Antibody, HRP conjugate | Thermo SCIENTIFIC | PA1-85183 | |
CelLytic MT Cell Lysis Reagent | SIGMA | C3228-50ML | lysis buffer |
100 Scalpel Blades | nopa instruments | BLADE #15 | |
100 Scalpel Blades | nopa instruments | BLADE #10 | |
FEATHER SURGICAL BLADE STAINLESS STEEL | FEATHER | 11 | |
1-StepTM TMB-Blotting substrate solution, 250mL | Thermo SCIENTIFIC | 34018 | |
Stable Peroxide Substrate Buffer (10X), 100mL | Thermo SCIENTIFIC | 34062 | |
Softmax Pro | Molecular Devices | v.5.4.1 | software for generating standard curve |
SAAM II | Saam Institute, Seattle, WA | software for pharmacokinetic modeling | |
Phoenix WinNonlin | Pharsight, Cary, NC | v. 6.3 | software for pharmacokinetic modeling |
Avastin (bevacizumab) | Genentech |