Summary
En ortotopisk brystkreft primær tumor modell og kirurgisk fjerning av primærtumoren for å forlenge liv mus for å generere spontan metastase, er beskrevet. Den tumorvekst og progresjon overvåkes og kvantifiseres ved luciferase fluorescens-avbildning.
Abstract
Metastase er den primære årsaken til dødelighet av brystkreftpasienter. Mekanismen bak kreftcelle metastaser, herunder brystkreft metastaser, er i stor grad ukjent og er et fokus på kreftforskning. Det er etablert Various brystkreft spontane metastaser musemodeller. Her rapporterer vi en forenklet prosedyre for å etablere orthotopic transplantert brystkreft primærtumor og resulterende spontanmetastaser som etterligner menneskelig brystkreft metastasering. Kombinert med bioluminescence levende svulst bilder gir tumorvekst og progresjon kinetikk som skal overvåkes og kvantifisert denne musemodell. I denne modellen ble en lav dose (1 x 10 4 celler) av 4T1-Luc brystkreft celler injisert inn i BALB / c-musebrystfettpute ved hjelp av en tuberkulinsprøyte. Mus ble injisert med luciferin og avbildes ved forskjellige tidspunkter ved hjelp av et selvlysende bildedannende system. Når de primære tumorene vokste til størrelsesbegrensningen som i IACUC-godkjent protokoll (ca.oximately 30 dager), ble musene bedøvet under konstant strøm av 2% isofluran og oksygen. Tumorområdet ble sterilisert med 70% etanol. Musen hud rundt tumoren ble skåret ut for å eksponere tumoren som ble fjernet med et par av steril saks. Fjerning av primærtumor forlenger overlevelsen av 4T-1 tumor-bærende mus i en måned. Musene ble deretter gjentatte ganger avbildes for metastatisk tumor spredning til fjerntliggende organer. Terapeutiske midler kan bli administrert for å undertrykke metastase ved dette punktet. Denne modellen er enkel og likevel følsom i kvantifisere brystkreftcellevekst i det primære område og progresjon kinetikken til fjerntliggende organer, og således er en utmerket modell for å studere brystkreft vekst og progresjon, og for testing av anti-metastase terapeutiske og immunterapeutiske midler in vivo .
Introduction
Ifølge American Cancer Society, er brystkreft den hyppigst diagnostisert form for kreft hos kvinner i USA. Tidlig oppdagelse i kombinasjon med nyutviklede målrettet terapi har redusert dødelighet av brystkreft i løpet av de siste to tiårene. Imidlertid er brystkreft fortsatt den nest største årsaken til kreft dødsfall hos kvinner i USA en. Flertallet av dødsfall av brystkreftpasienter er på grunn av tumorcellemetastase. Dessverre er de fleste brystkreft invasiv og ofte metastasizes til lymfeknute og senere til fjerne organer, inkludert bein, lunger, lever og hjerne. 1,2 Det er i dag ingen effektiv behandling for metastatisk brystkreft. Derfor er utvikling av kjemoterapeutiske og immunterapeutiske midler for å undertrykke metastatisk brystkreft er av stor betydning.
Various brystkreft spontane metastaser musemodeller har been utviklet for å studere de molekylære mekanismer som ligger under brysttumorcelleutvikling og metastasering og til å bli brukt som modeller for utvikling av terapeutiske midler. 1,3-5 Men de fleste av disse musemodeller er genetiske tumormodeller som, mens utmerkede modeller for mekanistisk studier, er ikke egnet for testing terapeutiske midler fordi metastase tar måneder å utvikle seg i disse genetiske modellene, og dermed krever kost langsiktig forvaltning av kreftlegemidler. 6,7 Monitoring tumorprogresjon i levende mus er også teknisk utfordrende. I motsetning til dette, har et transplantert brystkreft metastase modell fordelene ved kortvarig tumorprogresjon og enkel sporing av tumorprogresjon hos levende mus. Den 4T1 ortotopisk brystkreft spontan metastase musemodell er en slik transplanterte tumormodell. 8. I denne modellen blir brysttumorceller transplantert inn i melkefettpute for å opprette primærtumorknuter. Den primære tumorkan deretter fjernes kirurgisk som i humane brystcancerpasienter. 4T1 kreftceller er svært plagsomme. 8,9, 3,10 Nesten alle tumorbærende mus utvikler metastaser i 30 dager etter tumor transplantasjon inn i melkefettpute. Men 4T1 svulster vokser aggressivt i primær områder og kreft størrelsene ofte overskride grensene som er tillatt i de fleste dyre protokoller. På dette stadiet, metastasene er ofte mikrometastaser. Derfor er det viktig å fjerne primærsvulster for å gi metastase fremgang for testing av terapeutiske midler. Her rapporterer vi etablering av en enkel og likevel følsom fremgangsmåte for primærtumor transplantasjon, kirurgisk fjerning av primærtumor og bioluminescens bildebasert kvantifisering av 4T1 tumorvekst og progresjon in vivo.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alle prosedyrer følger retningslinjer og godkjente protokoller av Georgia Regents universitet Animal Bruk og vedlikehold komiteen.
1. Etablering av ortotopiske Breast Cancer Tumor
- Én dag før eksperimentet ble kulturen omtrent 2 x 10 til 6 4T1-Luc tumorceller i en 10-cm kulturskål i 10 ml RPMI-medium inneholdende 10% FBS. Inkuber kulturskålen i en CO2 inkubator ved 37 ° C og 5% CO2.
- På dagen for tumorcelle-injeksjon, fjernes kulturmedium fra kulturskål med vakuum, tilsett 5 ml steril fosfatbufret saltløsning (PBS), pH 7,4 til kulturskålen, og rist retten til å vaske kulturoverflaten, fjerner PBS ved hjelp av vakuum.
- Tilsett 2 ml trypsin-EDTA (0,05% trypsin og 0,53 mM EDTA) til kulturskålen, inkuberes den i CO2 inkubator ved 37 ° C i ca. 5 min. Sjekk celler på en invertert mikroskop for å sørge for at alle cellene er løsrevet fra bunnen av kulturen fatet. </ Li>
- Slukke trypsin ved tilsetning av 8 ml serumholdig medium, overføre celler til en 15 ml konisk rør og sentrifuger cellene ved ca. 450 x g i 3 minutter ved romtemperatur.
- Supernatanten fjernes ved vakuum og resuspender cellene i 10 ml PBS. Sentrifuger cellene ved omtrent 450 x g i 3 min. Fjern supernatanten ved hjelp av vakuum, og resuspender cellene i 10 ml PBS.
- Pipetter 10 ul av cellesuspensjonen ut mot et hemocytometer under dekkglasset. Tell cellene for å bestemme cellekonsentrasjonen. Resuspender celler i PBS ved en tetthet på 2 x 10 5 celler / ml HBSS. Overføre cellene til en steril 1,5 ml mikrosentrifugerør og hold cellene på is inntil bruk.
- Bruk hunn BALB / c-mus av 6 - 8 uke for tumorcelle-injeksjon.
- Barbere håret nær rundt brystvorten # 3 ved hjelp av en elektronisk hår trimmer. Injeksjon av 4T1 celle i melkekjertlene 3 fettpute reproduserbart genererer lungemetastaser. Rengjør det barberte området ved hjelp av bomullspinne dyppet i 70% etanoll. Resuspender cellene ved å snu mikrosentrifugerør 2 - 3 ganger. Forsiktig aspirer 50 ul av cellesuspensjonen i en ½ CC 27 G 1/2 tuberkulin sprøyte.
- Injiser tumorceller til melkefett puten under # 3 melkekjertlene av en BALB / c mus. Plasser musen i et rent bur og gå tilbake i buret til dyret boliger anlegget. Vent ca 21 - 30 dager for tumorutvikling. Tumorvekst bør overvåkes regelmessig i henhold til institusjonens retningslinjer for kreftstudier.
2. Levende Mouse Bioluminesens Imaging av tumorvekst
- Bilde mus hver 3 dager etter svulst injeksjon Transfer mus til bilde anlegget. Injisere 100 ul luciferin (30 mg / ml i PBS) intraperitonealt (ip) til mus før avbildning. Etter omtrent 10 min, bedøve mus i en induksjons kammer med 2% isofluran / O 2 flyt. Bruk pinsett til å berøre etappe av musen. Ingen respons ved berøring bekrefter that musen er helt bevisstløs.
- Plasser mus i avbildnings kammer med sammenhengende 2% isofluran og O 2 ved en strømningshastighet på 2 l / min. Plasser mus slik at området av interesse (dvs. melke pute av den innledende tumorinjeksjon) vender mot kameraet av den bildedannende system. Sikre nese og munn til mus er fast innstilt inne i røret bedøvelse. Dyr skal bedøves per veterinær standarder ved institusjonen.
- Acquire bioluminesens bildebehandling med en rekke ulike eksponeringstiden. For eksempel kan du sette eksponering til 30, synsfelt (FOV) til 25, objekthøyde til 1,5 cm, og få selvlysende fotografiske bilder med lavt strømforbruk X-ray. Sett måleenheter til «utstråling».
- Bruk en automatisk lineær fargespekter med maksimalt ca 2,4 x 10 7 Radiance enheter. Etter å skaffe innledende bilder, justere innstillinger og få en optimalisert-bilde (Figurs 3 & 4).
- Returner mus å rengjøre bur og sikre mus gjenvinne bevissthet med ambulation før retur dyrene til huset anlegget.
- Analysere data med levende bildebehandlingsprogrammer knyttet til bildebehandling instrument. Ved hjelp av et bildebehandlingsprogram, tegne en lukket linje rundt regionen av interesse (ROI). Bruk bildebehandlingsprogrammer for å bestemme stråleglans intensiteten av ROI. Ta opp de relative intensitetene av hver ROI for hver mus.
MERK: Høyere utstråling intensiteter indikerer større grad av selvlysende celler, og dermed økt tumorvekst. - Visuelt undersøke mus hver 3 dager for bivirkninger.
MERK: Mus vil bli veid en gang i uken. Et vekttap på 15% av kroppsvekten vil bli betraktet som skadelig virkning, og de tumor-bærende mus vil bli avlives som beskrevet i trinn 5. mus med sårdannelse tumorer blir også avlives.
3. kirurgisk fjerning av primærtumor
NEITE: Autoclave saks, pinsett og såret klipp og sår klipp applier (figur 1).
- Utføre operasjonen i en steril hette for å opprettholde et sterilt betingelse for å redusere risikoen for infeksjon. En dag før operasjonen, barbere området rundt svulster av tumorbærende mus med en elektrisk hår trimmer.
- Omtrent 2 - 4 timer før kirurgi, mate muse tyggetabletter formulert carprofen for mus i en dose på 5 mg / kg kroppsvekt.
- Sett mus i et kammer inneholdende 2% isofluran i oksygen i ca. 30 sek. Kontinuerlig bedøve mus ved hjelp av en anestesiapparat under hele operasjonsperioden.
- Bruk en steril bomullspinne til å søke dyrlege salve til øynene til musen for å hindre tørrhet mens under anestesi. Bruk pinsett til å berøre etappe av musen. Ingen respons ved berøring bekrefter at musen er helt bevisstløs.
- Desinfiser huden området rundt svulsten området med tre vekselkluter av en såpe desinfeksjonsmiddel kratt. Tørk den kirurgiske området med en 70% alkoholserviett.
- Bruke en sterilisert skalpell (figur 1) for å skjære et lite snitt i nærheten av tumoren.
- Sette inn spissen av et par av steriliserte saks til innsnittet for å skjære huden rundt tumoren for å eksponere tumor nodul (figur 2A). Hold tumor med sterile pinsetter og bruke saks for å skille den fra tumor i huden (figur 2B). Lagre tumorprøve ved å fryse i en -80 ° C fryser eller ved å feste i 10% formalin løsning for fremtidig bruk.
- Lukk kirurgiske området med 9 mm sår klipp ved hjelp av auto-klipp applier (figur 1). Returner musen til et rent bur med autoklaveres sengetøy. Dyrene bør overvåkes per institusjonelle retningslinjer.
MERK: Musen vanligvis gjenvinner tilstrekkelig bevissthet og begynner å bevege seg i buret ca 10-30 min etter operasjonen. - Administrere carprofen tilmus igjen 24 timer etter operasjonen. Carprofen er for post-kirurgi analgesi og forskrivning av post-kirurgi analgesi bør verifiseres ved direkte samråd med institusjonens veterinær ansatte. Fjern sår klipp etter at såret leges (vanligvis i løpet av 5 - 7 dager etter operasjonen). Fjern sår klipp ved hjelp av auto-klipp fjerner.
4. Levende Mouse Bioluminesens Imaging av tumormetastaser
- Bilde mus hver 3 dager etter operasjonen som beskrevet i trinn 2.
5. Validering av lungemetastaser Bruke India Ink Inflasjon av tumorbærende Lunger
MERK: For å validere luciferasepreparater live-tumor bildebehandling resultater, utføre India blekk inflasjon av tumorbærende mus lungene å kvantifisere tumorknuter. 4T1 celler også metastaserer til andre organer og vev (figur 5) og derfor bør histologisk undersøkelse av disse organene å validere metastase utføres hvis nødvendig. Denne protokollen bruk lung metastaser som et eksempel.
- Hold mus i boligen bur for aktiv dødshjelp. Når huset med andre dyr, flytte disse mus ikke blir avlivet til et annet bur.
- Fjern buret filter toppen og erstatte med CO 2 filter toppen. Slå på den komprimerte CO2 gass sylinder (100%) som er koblet til den CO to filter toppen. Still strømningshastighet på 2 l / min og holder CO 2 på i minst 10 min. Hvis musene fortsatt puster ved slutten av 10 min, la CO 2 videre til minst 1 min etter at musene slutte å puste. Slå av CO 2 sylinder kontroll og strømningsmåleren. Vent i 3 minutter og ta ut filteret toppen.
- Plasser ofret-musen på ryggen på en polystyren bord. Fest bena for å sikre uhindret tilgang til luftrøret. Spray mus med 70% etanol.
- Ved hjelp av en saks, kuttet langs midtlinjen av midt underliv av musen gjennom brystkasse og opp mot salivariere kjertler. Observer luftrøret. Bruk pinsett for å fjerne vev som omgir luftrøret for å eksponere trakea.
- Træ pipette under luftrøret. Hold spissen med en hånd, løfter forsiktig luftrøret opp og bort fra kroppen.
- Roter plattformen holde muse 180 °. Bruk en ½ CC 27 G 1/2 tuberkulin sprøyte for å injisere India Ink (10% tusj og 0,1% ammoniumhydroksid) i lungene via luftrøret. Helt blåse lungene med blekk til en sterk motstand.
- Bruk en saks til å kutte luftrøret. Bruk pinsett til å holde musen og sette inn et annet sett med tang under lungene og trekk lungelapper ut av musen. Skyll lungene kort i et begerglass inneholdende vann.
- I et avtrekksskap, overfører lungene til et scintillasjonsglass inneholdende 3 ml Fekete oppløsning (50% etanol, 6% formaldehyd, og 3% iseddik). Lukk glasset for å hindre at oppløsningen fra fordamper.
NOTAT: Vevene kan lagres i Fekete løsning på ubestemt tid. - Etter noen minutter, observere tumornoduler som hvite prikker på de svarte lungene (figur 5). Den hvite svulst nodule er synlig ved øynene. Overfør lungene til en rett i et avtrekksskap og telle antall hvite flekker. Hver hvit flekk representerer en enkelt metastatisk tumor nodule.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Etablering av ortotopiske Breast Cancer Mouse Model
4T1 er en aggressiv brystkreft-cellelinje. Injeksjon av så lite som 1 x 10 4 celler i melkefettputen kan føre til etablering av en enkelt svulst knute på injeksjonsstedet (figur 2A). Derfor etterligner tumor menneskelige primære brystkreft. Nesten 100% mus utvikler den ortotopisk tumor. Tumorstørrelsen kan kvantifiseres ved hjelp av et digitalt skyvelære eller av levende tumoravbildning (figur 3). Svulster er påvise ca 3 dager etter tumorinjeksjon med en bioluminesens imaging system, og luminescens intensiteten øker som tumor størrelse øker (figur 3). Derfor denne modellen er en ideell orthotopic brystkreft modell for å teste effekten av kjemoterapeutiske og immunterapeutiske midler mot alle stadier av brystkreft.
Spontan metastaser
I humane brystcancerpasienter, er de primære tumorene fjernet kirurgisk etter diagnose. Imidlertid, et stort antall av pasienter som allerede har LN eller fjernmetastaser ved tidspunktet for diagnose. I fremgangsmåten, har de fleste av de musene LN og fjernmetastaser etter 30 dager etter tumor transplantasjon. Den beskrevne kirurgiske prosedyren fjerner fullstendig primærtumor (figur 2B). Det er ingen rester av primære svulster blir detektert ved den primære tumor områdene 10 - 30 dager etter operasjonen (figur 2B). Kirurgisk fjerning av den primære tumoren forlenger levetiden til tumorbærende mus, men hindrer ikke tumor-metastasering til forskjellige deler av musene. Disse metastaser kan oppdages av live avbildningsmetode (figur 4). Denne modellen er således en spontan metastase brystkreft modell som etterligner humane brystcancerpasienter. Denne modellen er nyttig for: 1) å studere spontan breast cancer metastase (for eksempel, 4T1-celler kan bli transfektert med et gen av interesse for å teste de funksjoner av disse genene i brystkreft spontan metastase); og 2) å teste effekten av kjemoterapeutiske og immunterapeutiske midler mot spontan bryst metastase i en immun-kompetent vert. Nettstedene til og grader av metastasering kan oppdages av levende imaging (Figur 4) og bekreft med en annen metode (figur 5). Luminescence bildebehandling kan kvantifisere tumorbyrde av hele lungen. Blekk inflasjon av tumorbærende lungene muliggjør nøyaktig telling av selve tumorknuter i hver lunge (figur 5), hvorved, som representerer en gratis kvantifisering fremgangsmåte for tumormetastasering.
Figur 1. kirurgi. 1.stainless skalpell, 2. tang. 3. Rustfritt saks. 4. Autocleppe sår klipp applier. 5. Autoclip sår klipp fjerner. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 2. ortotopisk 4T1 tumormodell. A. 4T1 tumorceller (1 x 10 4 celler i 100 ul PBS) celler ble injisert inn i melkefettputen. Tretti dager etter tumorinjeksjon, ble musen ofret og undersøkt for tumorvekst. Vist er de tumor-bærende mus med en enkelt svulst knute ved injeksjonsstedet (gul pil). B. Svulsten som vist i A ble kirurgisk fjernet. Vist er de 4T1 tumorbærende mus 10 dager etter kirurgisk fjerning av primærtumor. Klikk her for å se et størreversjon av denne figuren.
Figur 3. Levende Tumor Imaging av Luciferase-baserte Lever Tumor Imaging. 4T1 tumorceller (1 x 10 4 celler i 100 ul PBS) celler ble injisert inn i melkefettputen. Musen ble fotografert på dager 7, 14 og 28. Vist er luminescens intensiteten av primærtumor. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 4. Visualisering av tumorprogresjon av Luciferase-baserte Lever Tumor Imaging. 4T1 tumorceller (1 x 10 4 celler i 100 ul PBS) celler ble injisert inn i melkefettputen. Den primære svulsten ble fjernet kirurgisk som shhånd i figur 3. Musen ble deretter fotografert 17 dager etter kirurgisk fjerning av den primære tumoren. Vist er bilde av metastaser. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 5. Visualisering av Lung tumornoduler av India Ink Inflasjon. Lunge av tumorbærende mus ble blåst opp med tusj og fikset i Fekete løsning. De hvite prikkene er lungemetastaser. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Mange typer av transgene musemodeller for brystkreft metastasering er blitt utviklet. 1. Disse transgene mus har høy forekomst svulst fra 60 til 100%. Imidlertid metastase hyppigheten av disse transgene mus som er mye lavere enn den tumortilfeller (14 - 100%). Tumorceller metastaserer til LN og lungene i de fleste av disse transgene musemodeller av brystkreft metastasering. Den metastase ventetid varierer fra modell til modell og varierer fra 2 til 8 måneder. 6,11-16 Disse transgene musemodeller av brystkreft metastaser er gode systemer for å studere genetiske og molekylære mekanismer bak brystkreft metastasering. Men den lave metastase hyppigheten og lang ventetid metastase begrenser nytten av disse modellene i testen for anti-kreft midler.
Den ortotopisk implantasjon av 4T1-celler i melkefettpute, med dannelse av primære tumorer og metastaser påfølgende vekst, resembles flere stadier fra ondartet brystkreft, inkludert primærtumordannelse, lymfeknutemetastase og fjernt organ metastaser. Dessuten unngår syngeniske transplantasjon immunologisk vert-versus-transplantat-reaksjon tillater studiet av bidraget fra svulsten mikromiljøet, inkludert immunsystemet, for å ondartet tumorprogresjon. Denne modellen er også nyttig for å studere vert anti-tumor immunrespons. Derfor injeksjon av 4T1 celler i melkefettpute representerer en rask og kvantitativ metode for å studere brystkreft metastasering.
Den orthotopic 4T1 transplantasjon tumormodellen har en 100% svulst insidens på mindre enn 30 dager og 100% metastaser insidens på mindre enn 60 dager (Figur 2-4). Videre, i motsetning til de fleste av de transgene musemodeller for brystkreft metastase, 4T1 tumorceller også metastaserer til benet (figur 4), for derved, ligner human brystkreft metastasering.
stabil expressipå av luciferase-kodende cDNA i 4T1-tumorceller muliggjør overvåking av tumorvekst og progresjon i levende mus over tid (figur 3). Svulsten byrde og metastasekinetikk kan kvantifiseres basert på luminescens intensitet. Videre kan de metastase steder også identifiseres ved hjelp av luciferase-imaging (figur 4) og validert med en komplementær måte (figur 5). Derfor er denne brystkreft spontan metastase modell er en utmerket modell for å bestemme effektiviteten av anti-metastase midler in vivo.
Mesteparten av kirurgi innebærer nedleggelse av kutt med sting. Her observerte vi at rustfritt sår klipp fungerer godt (figur 1). Såret Klippet kan lett steriliseres og lett å påføre med autoclip applier (figur 1). Såret klipp kan enkelt fjernes med klippet remover (Figur 1) etter at såret er grodd. Vi har observert ingen infeksjoner med dette kirurgisk teknikk i over 20 operasjoner.
En begrensning av denne modellen er rask svulst vekst. Flertallet av metastaser-bærende mus dør i 1 - 2 måneder etter operasjonen på grunn av omfattende metastase byrde. En annen begrensning er at 4T1 er en musecellelinje og dens respons på eksperimentelle medikamenter kan avvike responsen fra humane celler. Dette bør vurderes i studiedesign for eksperimentell narkotika testing.
Oppsummert har vi optimalisert en enkel og likevel følsom prosedyre for orthotopic brystkreft spontane metastase modell. Denne modellen etterligner menneskelig brystkreft metastasering. De tumorprogresjon kinetikk kan måles og kvantifiseres over tid. Denne modellen er en ideell man ikke bare for å studere brystkreft vekst og metastasering, men også for å teste effektiviteten av kjemoterapeutiske og immunterapeutiske midler 17 i undertrykkelse av spontan brystkreft metastasering.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Ami-X Imaging System | Spectral Instruments Imaging Inc. Tucson, AZ | ||
| IsoTec SurgiVet | Anesthesia Service & Equipment , Inc., Atlanta, GA | ||
| AutoClip Physicians Kit | Becton Dickinson Primary Care Diagnostics. Sparks, MD | 427638 | |
| 9 mm AutoClip Applier | Becton Dickinson Primary Care Diagnostics. Sparks, MD | 427630 | |
| 9 mm AutoClip Remover | Becton Dickinson Primary Care Diagnostics. Sparks, MD | 427637 | |
| 9 mm AutoClip Wound Clip | Becton Dickinson Primary Care Diagnostics. Sparks, MD | 427631 | |
| Sharp-Pointed Dissecting Scissors | Fisher | 8940 | |
| Dissecting Fine-Pointed Forceps | Fisher | 8875 | |
| 1/2 CC 27 G 1/2 tuberculin syringe | Becton Dickinson and Co. NJ | 305620 | |
| RPMI 1640 medium | Mediatech Inc | 10-040-CV | |
| PBS | Mediatech Inc | 21-040-CV | |
| 70% Ethanol | Ultrapure-usa.com | ||
| Trypsin-EDTA | Mediatech Inc | 25-040-CI |
References
- Fantozzi, A., Christofori, G. Mouse models of breast cancer metastasis. Breast Cancer Res. 8, 212 (2006).
- Weigelt, B., Peterse, J. L., van 't Veer, L. J. Breast cancer metastasis: markers and models. Nat Rev Cancer. 5, 591-602 (2005).
- Kocaturk, B., Versteeg, H. H. Orthotopic injection of breast cancer cells into the mammary fat pad of mice to study tumor growth. J Vis Exp. , (2015).
- Stewart, T. J., Abrams, S. I. How tumours escape mass destruction. Oncogene. 27, 5894-5903 (2008).
- Lopez, J. I., et al. CD44 attenuates metastatic invasion during breast cancer progression. Cancer Res. 65, 6755-6763 (2005).
- Khanna, C., Hunter, K. Modeling metastasis in vivo. Carcinogenesis. 26, 513-523 (2005).
- Cuevas, B. D., Winter-Vann, A. M., Johnson, N. L., Johnson, G. L. MEKK1 controls matrix degradation and tumor cell dissemination during metastasis of polyoma middle-T driven mammary cancer. Oncogene. 25, 4998-5010 (2006).
- Danna, E. A., et al. Surgical removal of primary tumor reverses tumor-induced immunosuppression despite the presence of metastatic disease. Cancer Res. 64, 2205-2211 (2004).
- Tao, K., Fang, M., Alroy, J., Sahagian, G. G. Imagable 4T1 model for the study of late stage breast cancer. BMC Cancer. 8, 228 (2008).
- Hu, X., et al. Deregulation of apoptotic factors Bcl-xL and Bax confers apoptotic resistance to myeloid-derived suppressor cells and contributes to their persistence in cancer. J Biol Chem. 288, 19103-19115 (2013).
- Kwan, H., et al. Transgenes expressing the Wnt-1 and int-2 proto-oncogenes cooperate during mammary carcinogenesis in doubly transgenic mice. Mol Cell Biol. 12, 147-154 (1992).
- Guy, C. T., Cardiff, R. D., Muller, W. J. Induction of mammary tumors by expression of polyomavirus middle T oncogene: a transgenic mouse model for metastatic disease. Mol Cell Biol. 12, 954-961 (1992).
- Almholt, K., et al. Reduced metastasis of transgenic mammary cancer in urokinase-deficient mice. Int J Cancer. 113, 525-532 (2005).
- Gallego, M. I., Bierie, B., Hennighausen, L. Targeted expression of HGF/SF in mouse mammary epithelium leads to metastatic adenosquamous carcinomas through the activation of multiple signal transduction pathways. Oncogene. 22, 8498-8508 (2003).
- Lin, S. C., et al. Somatic mutation of p53 leads to estrogen receptor alpha-positive and -negative mouse mammary tumors with high frequency of metastasis. Cancer Res. 64, 3525-3532 (2004).
- Ridgeway, A. G., McMenamin, J., Leder, P. P53 levels determine outcome during beta-catenin tumor initiation and metastasis in the mammary gland and male germ cells. Oncogene. 25, 3518-3527 (2006).
- Zimmerman, M., Hu, X., Liu, K. Experimental metastasis and CTL adoptive transfer immunotherapy mouse model. J Vis Exp. , (2010).
