Abstract
Denne undersøgelse blev designet til at evaluere den beskyttende virkning af Bacillus subtilis stamme mod komplikationer relateret til varmestress. Toogtredive Sprague-Dawley-rotter blev anvendt i denne undersøgelse. Dyr blev oralt behandlet to gange om dagen i to dage med B. subtilis BSB3 stamme eller PBS. Den næste dag efter den sidste behandling blev hver gruppe delt og to forsøgsgrupper (én behandlet med PBS og én behandlet med B. subtilis) blev anbragt ved 45 ° C i 25 min. To kontrolgrupper opholdt sig 25 minutter ved stuetemperatur. Alle rotter blev aflivet og forskellige parametre blev analyseret i alle grupper. Bivirkningerne af varmestress registreres af faldet i villi højde og total slimhinde tykkelse i tarmepitelet; translokation af bakterier fra hulrummet; øget blæredannelse af erythrocytter og elevation af lipopolysaccharider (LPS) i blodet. Den beskyttende effekt af behandlingen vurderes ved prætion af disse bivirkninger. Protokollen blev oprettet til oral behandling af rotter med bakterier til forebyggelse af varme stress komplikationer, men denne protokol kan ændres og anvendes til andre former for indgivelse og til analyse af forskellige forbindelser.
Protocol
Alle eksperimentelle procedurer blev godkendt af IACUC fra Auburn University, Auburn, Alabama.
1. Udarbejdelse af Kultur Medier, fade og bakteriekultur
- Inokulere 10 ml næringsvæske i en kolbe med en enkelt koloni af Bacillus subtilis BSB3 kultur, dyrket natten over på en næringsagar plade.
- Gør 500 ml sporulationsmedium 19 (per liter: Bacto Nutrient Broth, 8 g; 10% (w / v) KCl, 10 ml; 1,2% (vægt / volumen) MgSO4 x 7H 2 O, 10 ml; agar, 15 g) og autoklaveres ved 121 ° C i 20 min. Lad afkøle til 50 ° C og tilsæt følgende sterile opløsninger: 1 M Ca (NO 3) 2, 1 ml; 0,01 M MnCI2, 1 ml; 1 mM FeSO4, 1 ml.
- Cool fremstillet medium til 40 ° C i 20 minutter ved stuetemperatur og hæld 25 ml i hver af 20 sterile petriskåle i det sterile skab. Lad mediet størkne natten over.
- Spred 0,5 ml natten over kultur af Bacillus subtilis BSB3 på overfladen af mediet i petriskålene. Inkuber kulturen ved 37 ° C i 5 dage indtil 90% sporulering. Reveal fase-lyse sporer ved høj opløsning mikroskopi.
- Harvest bakterier ved tilsætning af 1 ml sterilt phosphatbufret saltvand (PBS) til pladen og skrabning bakterier fra en overflade ved anvendelse af en steril celle sprederen. Opbevar suspensionen i køleskab indtil de skal bruges.
- Bekræft levedygtigheden af bakterier ved udpladning 0,1 ml af den passende fortynding (10 -5 til 10 -6) af en bakteriel suspension på sporulationsmedium plader efterfulgt af inkubation i 18 - 24 timer ved 37 ° C.
- Count bakterielle kolonier på pladerne ved hjælp af en kolonitæller og beregne titeren af bakterier i den testede suspension. Forbered bakteriesuspension med slutkoncentration 1 x 10 8 CFU / ml i PBS.
2. Dyr
- Brug 32 Sprague-Dawley-rotter (250 - 300g). Vedligehold dyr under specifikke patogenfrie betingelser med fri adgang til standard pellet chow og vand. Etablere en gennemsnitlig temperatur (21 ± 1 ° C), fugtighed (50 ± 5%) og en 12 h lys-mørke-cyklus.
3. Eksperimentel udformning
- Start behandling af dyr ved oral sondeernæring 11, efter 2 dages akklimatisering. Brug sprøjten med oral sonde nål. Behandl 16 rotter med B. subtilis BSB3 suspension (1 ml pr rotte) to gange dagligt i to dage (B. subtilis gruppe). Behandl 16 rotter med PBS (1 ml pr rotte) to gange dagligt i to dage (PBS gruppe) (figur 1).
- Efter behandling, opdele hver gruppe (8 rotter per gruppe): Gruppe 1- kontrol (PBS / ingen stress), Gruppe 2 B. subtilis (B. subtilis / ingen stress), Gruppe 3 stress (PBS / varmestress) og Group 4 B. subtilis + stress (B. subtilis / varmestress).
- Mål den rektale temperatur af hver rotte under anvendelse af en elektronic digitalt termometer. Holde rotter i gruppe 1 og 2 ved stuetemperatur i 25 min. Placer dyr i gruppe 3 og 4 i et klimakammer ved 45 ° C og relativ luftfugtighed 55% i 25 min.
- Bagefter måler rektal temperatur på hver rotte i alle grupper ved hjælp af et elektronisk digital termometer. Anbring alle dyr ved stuetemperatur i 4 timer.
- Bedøver rotter med isofluran (2 - 4%) i et forsegleligt anæstesi krukke og observere, indtil rotterne dybt bedøvet (manglende respons på tå pinch). Aflive rotterne ved hurtig halshugning med en guillotine.
- Indsaml trunk blod fra hver rotte 20 (15 - 16 ml) med de apyrogent afpipetteres i apyrogent rør til opnåelse af serum og straks tage blodprøver (7 pi fra hver rotte) med en pipette til mikroskopisk undersøgelse.
- Sætte rør med blodet i køleskab i mindst 30 minutter for at tillade koagulation. Centrifugerør ved 20 ° C, 7000 xg i 10 min og hurtigtfjerne serum med en pipette. Delprøve serum opnået fra hver rotte i 50 pi volumener og opbevares ved -20 ° C indtil analyse.
4. Kirurgisk procedure
- Cut / trim alle skind fra maven og thorax af undersiden af slagtekroppen med elektriske saks. Placer kroppen i et sterilt kabinet og behandle det barberede overflade af slagtekroppen med 70% alkohol.
- Brug en steril skalpel for at skabe en midtlinjeincision af maven. Fjern lever, mesenteriske lymfekirtler, milt og tyndtarm fra hver rotte under anvendelse af sterile pincetter.
5. Analyse af Bakteriel Translokation
- Placer hver prøve af leveren, mesenteriallymfeknuder og milt i pre-vejede sterile rør og vejes. Beregn vægten af prøven som en forskel mellem vægten af et rør med en prøve, og vægten af en tom slange.
- Tilføj sterilt PBS til røret til opnåelse af en 1:10 fortynding (vægt / volumen) af prøven og homogenize hver prøve med en steril glas vævshomogenisator at opnå en homogen suspension 21.
- Gør serielle fortyndinger (10 -1 til 10 -4) af hver prøve i sterilt PBS. Plade 0,1 ml alle fortyndinger af hvert væv onto overfladen af MacConkey-og 5% blodagar og Brucella blodagar med hemin (0,005 g / l) og K1-vitamin (0,01 g / l) plader.
- Inkuber MacConkey s og 5% blodagarplader aerobt og Brucella blodagarplader under anaerobe forhold ved 37 ° C 22.
- Tæl kolonier af aerobe bakterier efter 24 timer, og kolonier af anaerobe bakterier efter 48 timers inkubation under anvendelse af en kolonitæller. Resultaterne udtrykkes som antallet af kolonidannende enheder (CFU) i et gram væv.
6. Histologisk analyse
- Fjern tyndtarmen prøver fra hver rotte ved den kirurgiske procedure (trin 4.1 - 4.2). Fix prøver i Bouins Fikservæske, integrere i paraffin,forberede 6 um snit og pletter sektioner med hematoxylin og eosin anvendelse af standardprocedurer 23.
- Brug en høj opløsning mikroskop til måling højde af intestinal villi og total mucosal tykkelse i hver prøve (forstørrelse 100X) 24. Analyser 4 prøver fra hver rotte og foretage mindst tyve målinger i hver prøve. Ekspres resultater i mikrometer.
7. Cytokine Assay
- Brug kommercielle rotte ELISA kits til IL-1β; IL-6; TNF-α; INF-γ og IL-10 til at måle niveauer af cytokiner i serum ifølge producentens protokol.
- Generere standardkurver for hvert sæt prøver analyseres under anvendelse standarder for den relevante kit. Definer niveauet af cytokiner i hver prøve ved sammenligning af eksperimentelle data med passende standardkurve.
8. Lipopolysaccharid Assay
- Analyser niveau af LPS i serum under anvendelse af en rotte LPS ELISA kit ifølgeproducentens protokol. Estimere koncentrationen af LPS i prøver ved sammenligning af de opnåede værdier med værdierne af standardkurven.
9. High Resolution Light Microscopy of Blood
- Mikroskopet systemet tidligere 25,26 beskrevet. Brug en vibrationsisolering platform som en base for mikroskopsystemet og videokamera og computer 25 for at optage de levende billeder. Kalibrer test billeder ved hjælp af en Richardson dias som tidligere beskrevet 27.
- Placer 7 pi frisktappet blod fra hver rotte på et objektglas, dækglas, fotografi og optage ti billedrammer af 72 × 53,3 um 2 i hver prøve (forstørrelse 1,700X).
- Måle koncentrationen af vesikler under anvendelse af software, som giver høj opløsning direkte-view optiske billeder i realtid. Undersøg mindst 20 billedrammer for hver eksperimentel tilstand 28.
10. STATIStics
- Hurtig alle værdier som middelværdi og standardafvigelse. Statistisk analyse og graf plotte. Analyser resultaterne med de to prøve t-test, skal du indstille signifikansniveau på 0,05 for at definere statistisk signifikans.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Den gennemsnitlige kropstemperatur af dyr før og umiddelbart efter varmestress var 36,7 ± 0,07 ° C, og 40,3 ± 0,17 ° C, henholdsvis (P <0,05). Eksponering af rotter for varme (gruppe 3) resulterede i signifikant inhibering af villi højde og total mucosal tykkelse (figur 2, 3). Oral administration af BSB3 belastning før stress beskyttet tarmen fra den skadelige virkning af varme.
Translokation af bakterier fra tarmen blev bestemt ved bakteriologisk analyse af mesenteriske lymfekirtler (MLN), lever og milt fra hver rotte. Bakterielle kulturer i en koncentration på 1,7 x 10 3 ± 4,6 x 10 2 CFU / g væv (figur 4) blev isoleret først fra MLN og leveren hos rotter forbehandlet med PBS og eksponeret for varme (gruppe 3). Alle testede prøver fra kontrol rotter (gruppe 1, 2) og fra varme-stressede dyrmodtog en BSB3 stamme (gruppe 4) var sterile. Ingen bakterier blev isoleret fra milt prøver.
Ingen ændring af IL-1β; IL-6, TNF-α, INF-y cytokiner niveauer blev registreret i varme-stressede rotter. I serum fra dyr behandlet med PBS før varmeeksponering signifikant forhøjelse af IL-10 og LPS-niveauer blev fundet (gruppe 3) - (5, 6). Forbehandling med B. subtilis BSB3 (gruppe 4) forhindrede fremkomsten af IL-10 og LPS i serum af varme-stressede dyr.
En væsentlig forøgelse af frie vesikler koncentration fra (1,4 ± 0,2) x 10 6 til (3,8 ± 0,3) x 10 6 vesikler pi -1 (p <0,001) blev fundet i blodet hos rotter, der modtog PBS før varmestress (figurerne 7 , 8). I en gruppe af dyr forbehandlet med BSB3 blev fundet nogen ændring i antallet af frie vesikler aftER varme eksponering (figur 7).
Figur 1. Undersøgelse Design. To grupper af rotter (16 rotter i hver gruppe) blev behandlet ved oral sondeernæring med B. subtilis BSB3 (B. subtilis gruppe) eller med PBS (PBS gruppe) to gange dagligt. På dag 3 hver gruppe blev opdelt ved 8 rotter i hver gruppe. Rotter fra gruppe 3 og 4 blev anbragt ved 45 ° C i 25 min. Kontrol dyr (gruppe 1 og 2) blev opbevaret ved stuetemperatur. Klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 2. Måling af Intestinal Villi Højde (A) og mucosal Tykkelse (B) i rotter. Rotter forbehandlede med PBS ellerB. subtilis BSB3 blev udsat for 45 ° C (stress) eller til stuetemperatur (Control). Hver gruppe bestod af 8 rotter. Tyve målinger af hver parameter i hver prøve blev taget. Værdier er præsenteret som gennemsnit og standardafvigelse. Resultaterne blev analyseret med to prøve t-test på signifikansniveau 0,05 til definere statistisk signifikans. Klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 3. Histologiske Billeder af tarmslimhinden farvet med hematoxylin og eosin. Rotter blev forbehandlet med PBS eller B. subtilis BSB3 og udsat for 45 ° C (stress) eller til stuetemperatur (Control) A. PBS / ingen stress;. B. PBS / varmestress; C. B. subtilis / ingen stress; D.B. subtilis / varmestress. Villi højde er angivet med pile. Bar 200 um. Klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 4. Samlet antal bakterier i væv af rotter. Rotter forbehandlet med PBS eller B. subtilis BSB3 blev udsat for 45 ° C (stress) eller til stuetemperatur (Control). Hver gruppe bestod af 8 rotter. Mesenteriske lymfeknuder, lever og milt blev aseptisk fjernet fra hver rotte, homogeniseret og udpladet på agar medie at genvinde aerobe og anaerobe bakterier. Samlet optælling af omplantede bakterier (aerobe og anaerobe) er vist som kolonidannende enheder (CFU) pr gram væv. Værdier præsenteres som middelværdien og standardafvigelsen. Klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 5. Niveau af IL-10 i Serum af rotter. Rotter pre-behandlet med PBS eller B. subtilis BSB3 blev udsat for 45 ° C (stress) eller til stuetemperatur (Control). Hver gruppe bestod af 8 rotter. Blodserum blev opnået fra hver rotte og analyseret med et kommercielt rotte ELISA-kit. Værdier er præsenteret som gennemsnit og standardafvigelse. Resultaterne blev analyseret med to prøve t-test på signifikansniveau 0,05 til definere statistisk signifikans. Klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 6. LPS Koncentration i Serum af rotter. Rotter pre-behandlet med PBS eller B. subtilis BSB3 blev udsat for 45 ° C (stress) eller til stuetemperatur (Control). Hver gruppe bestod af 8 rotter. Blodserum blev opnået fra hver rotte og analyseret med et kommercielt rotte ELISA-kit. Værdier er præsenteret som gennemsnit og standardafvigelse. Resultaterne blev analyseret med to prøve t-test på signifikansniveau 0,05 til definere statistisk signifikans. Klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 7. Antal blærer in Blood af rotter. Rotter pre-behandletmed PBS eller B. subtilis BSB3 blev udsat for 45 ° C (stress) eller til stuetemperatur (Control). En lille dråbe (7 pi) af frisk udtaget blod blev anbragt på et objektglas, dækglas, fotograferet og registreres ti billedrammer i hver prøve (forstørrelse 1,700X). Koncentration af vesikler blev målt ved hjælp af software, som tilvejebringer høj opløsning direkte-view optiske billeder i realtid. Tyve billedrammer blev undersøgt for hver eksperimentel betingelse. Værdier er præsenteret som gennemsnit og standardafvigelse. Resultaterne blev analyseret med to prøve t-test på signifikansniveau 0,05 til definere statistisk signifikans. Klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 8. Forhøjelse af Vesicles Koncentration i blod efter varmepåvirkning. videobillede af blod fra rotter forbehandlet med PBS før udsættelse for stuetemperatur (A) eller til 45 ° C (B). En lille dråbe (7 pi) af frisk udtaget blod blev anbragt på et objektglas, dækglas, fotograferet og registreres ti billedrammer i hver prøve (forstørrelse 1,700X). Den vesikel er angivet som V. Bar 6 um. Klik her for at se en større version af dette tal.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Udsættelse for høje temperaturer resulterer i alvorlige sundhedsmæssige betingelser 29. Forebyggelse og tidlig opsporing af komplikationer relateret til varmestress er af afgørende betydning 30. Den præsenterede protokol kan bruges til at evaluere effekten af forskellige tilgange til forebyggelse af varme stress bivirkninger.
Kritiske trin i denne protokol omfatter: varmebehandling procedure (45 ° C, 25 min); brugen af apyrogent materialer under indsamlingen og behandlingen af blod for at forhindre forurening med enterotoksiner; holde serum portioner ved -20 ° C for at undgå gentagen nedfrysning og optøning; og efter steril procedure under analysen af bakteriel translokation. Protokollen blev oprettet til oral behandling af rotter med bakterier til forebyggelse af varme stress bivirkninger. For andre former for indgivelse og andre forbindelser, kan denne protokol ændres. For eksempel tidspunktet for steatment før varmestress kan udvides. Oral administration kan ændres til rektal indgivelse. Bacillus subtilis bakterier blev anvendt til forebyggelse af varme stress komplikationer ved oral behandling af dyr før udsættelse for forhøjet temperatur. For at helbrede komplikationer af varmestress, kan denne protokol modificeres ved anvendelse af bakterier til behandling af dyr efter udsættelse for varme.
Det blev vist, at forøgelse af legemstemperaturen forårsagede en stigning af erythrocyt blæredannelse, og dette blev fuldstændigt forhindret ved præ-behandling med B. subtilis-bakterier. Således kan forhøjelsen af koncentrationen vesikler i blodet under udsættelse for varme indikere niveauet af varmestress og giver diagnostisk bevis for stabiliteten af erytrocytter og modstandskraft over for varme. Det er også et meget nyttigt og hurtig test til vurdering af effektiviteten af forebyggende behandling mod varme stress komplikationer. Induktionen of varmechokproteiner som en markør for varmestress er tidligere drøftet 30, men denne fremgangsmåde er tidskrævende og kan ikke anvendes til real-time diagnose af respons på varmestress.
Den præsenterede tilgang til forebyggelse af varme stress bivirkninger er enkel, omkostningseffektiv og kræver ikke ekstra udstyr eller særlige faciliteter. Fremtidig anvendelse af dette arbejde vil bidrage til at forstå mekanismerne for beskyttelse mod varme stress komplikationer og karakterisere de nye procedurer for denne beskyttelse. Denne metode har betydning for vejarbejdere, militært personel, atleter - grupper af mennesker, der er i fare for hedeslag under intens udendørs fysisk aktivitet 29. Den foreslåede metode gør det muligt at undersøge niveauet af varmestress og vurdere forskellige metoder til at beskytte sundheden for mennesker, der arbejder under ekstreme forhold.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne erklærer, at de ikke har nogen konkurrerende finansielle interesser.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Phosphate buffered saline (PBS) | Sigma-Aldrich, St. Louis, MO | P4417 | |
| Ethyl Alcohol | Pharmco products Inc. Brookfield, CT, USA | 64-17-5 | |
| Agar | VWR | 97064-334 | |
| MacConkey agar plates | VWR | 470180-742 | |
| 5% blood agar plates | VWR | 89405-024 | |
| Brucella blood agar plate with Hemin, and Vitamin K | VWR | 89405-032 | |
| Bouin’s Fixative | Electron Microscopy Sciences, Hatfield, PA, USA | 15990 | |
| IL-10 Rat ELISA kit | Invitrogen, Camarillo, CA, USA | KRC0101 | |
| IL-1beta Rat ELISA Kit | Invitrogen, Camarillo, CA, USA | KRC0011 | |
| IL-6 Rat ELISA Kit | Invitrogen, Camarillo, CA, USA | KRC0061 | |
| INF-gamma Rat ELISA Kit | Invitrogen, Camarillo, CA, USA | KRC4021 | |
| TNF-alpha Rat ELISA Kit | Invitrogen, Camarillo, CA, USA | KRC3011 | |
| Rat LPS ELISA Kit | NeoBioLab, MA, USA | RL0275 | |
| Environmental Chamber 6020-1 | Caron, Marietta, OH, USA | 6020-1 | |
| Centrifuge | Beckman Coulter, Indianapolis, IN, USA | Optima L-90K | |
| Ultra Centrifuge | |||
| Light microscope optical system | CitoViva Technology Inc., Auburn, AL | ||
| Colony counter | Fisher Scientific , Pittsburgh, PA, USA | RE-3325 | |
| Freezer | Haier, Brooklyn, NY, USA | HCMO50LA | |
| Ultra microplate reader | Bio-Tek Instrument, Winooski, VT, USA | ELx 808 | |
| Auto Strip Washer | Bio-Tek Instrument, Winooski, VT, USA | ELx50 | |
| Pipettes | Gilson, Pipetman, France | P100, P200, P1000 | |
| C24 Incubator Shaker | New Brunswick Scientific, Enfield, CT, USA | Classic C24 | |
| Rocking Shaker | Reliable Scientific, Inc., Nesbit, MS, USA | 55 | |
| Petri dishes | Fisher Scientific, Pittsburgh, PA, USA | 875713 | 100 mm x 15 mm |
| SterilGard III Advance | The Baker Company, Sanford, ME, USA | SG403 | |
| Culture Growing Flasks | Corning Incorporated, Corning, NY, USA | 4995 | PYREX 250 ml Erlenmeyer flasks |
| Optical Spectrometer Genesys 20 | Thermo Scientific, Waltham, MA, USA. | 4001 | |
| Sony DXC-33 Video camera | Sony | ||
| Richardson test slide | Electron Microscopy Science, Hatfield, PA, USA | 80303 | |
| Millipore water purification system | Millipore | Direct-Q | |
| Image-Pro Plus software | Media Cybernetics, MD, USA | ||
| Triple Beam Balance | OHAUS Corporation, Parsippany, NJ, USA | ||
| Tissue Homogenizer, Dounce | VWR | 71000-518 |
References
- Crandall, C. G., Gonzalez-Alonso, J.
- Lambert, G. P. Role of gastrointestinal permeability in exertional heatstroke. Exerc. Sport Sci. Rev. 32, 185-190 (2004).
- Yu, J., et al. Effect of heat stress on the porcine small intestine: A morphological and gene expression study. Comp. Biochem. Physiol. A-Mol. Integr. Physiol. 156, 119-128 (2010).
- Moseley, P. L., Gisolfi, C. V. New Frontiers in Thermoregulation and Exercise. Sports Med. 16, 163-167 (1993).
- Lambert, G. P. Stress-induced gastrointestinal barrier dysfunction and its inflammatory effects. J. Anim. Sci. 87, 101-108 (2009).
- Berg, A., Muller, H. M., Rathmann, S., Deibert, P. The gastrointestinal system - An essential target organ of the athlete's health and physical performance. Exerc. Immunol. Rev. 5, 78-95 (1999).
- Khan, M. W., et al. Microbes, intestinal inflammation and probiotics. Expert Rev Gastroent. 6, 81-94 (2012).
- Quigley, E. M. M. Prebiotics and Probiotics: Their Role in the Management of Gastrointestinal Disorders in Adults. Nutr Clin Pract. 27, 195-200 (2012).
- Gore, C., et al. Treatment and secondary prevention effects of the probiotics Lactobacillus paracasei or Bifidobacterium lactis on early infant eczema: randomized controlled trial with follow-up until age 3 years. Clin Exp Allergy. 42, 112-122 (2012).
- Gomes, A. C., Bueno, A. A., de Souza, R. G. M., Mota, J. F. Gut microbiota, probiotics and diabetes. Nutr. J. 13, (2014).
- Eutamene, H., et al. Synergy between Lactobacillus paracasei and its bacterial products to counteract stress-induced gut permeability and sensitivity increase in rats. J. Nutr. 137, 1901-1907 (2007).
- Ait-Belgnaoui, A., et al. Lactobacillus farciminis treatment attenuates stress-induced overexpression of Fos protein in spinal and supraspinal sites after colorectal distension in rats. Neurogastroenterol. Motil. 21, 585-593 (2009).
- Fujiya, M., et al. The Bacillus subtilis quorum-sensing molecule CSF contributes to intestinal Homeostasis via OCTN2, a host cell membrane transporter. Cell Host Microbe. 1, 299-308 (2007).
- Cutting, S. M.
- Pinchuk, I. V., et al. In vitro anti-Helicobacter pylori activity of the probiotic strain Bacillus subtilis 3 is due to secretion of antibiotics. Antimicrob Agents Ch. 45, 3156-3161 (2001).
- Sorokulova, I. B., Kirik, D. L., Pinchuk, I. V.
- Gracheva, N. M., et al. The efficacy of the new bacterial preparation biosporin in treating acute intestinal infections. Zh Mikrobiol Epidemiol Immunobiol. , 75-77 (1996).
- Horosheva, T. V., Vodyanoy, V., Sorokulova, I. Efficacy of Bacillus probiotics in prevention of antibiotic-associated diarrhoea: a randomized, double-blind, placebo-controlled clinical trial. JMM Case Report. 1, (2014).
- Sorokulova, I. B., Krumnow, A. A., Pathirana, S., Mandell, A. J., Vodyanoy, V. Novel Methods for Storage Stability and Release of Bacillus Spores. Biotechnol. Prog. 24, 1147-1153 (2008).
- Vogel, H. G., Vogel, W. H. Drug Discovery and Evaluation: Pharmacological Assays. eds H.G. Vogel & W.H. Vogel. Vogel, H. G., Vogel, W. H. , 658-659 (1997).
- Bailey, M. T., Engler, H., Sheridan, J. F. Stress induces the translocation of cutaneous and gastrointestinal microflora to secondary lymphoid organs of C57BL/6 mice. J. Neuroimmunol. 171, 29-37 (2006).
- Rakoff-Nahoum, S., Paglino, J., Eslami-Varzaneh, F., Edberg, S., Medzhitov, R. Recognition of commensal microflora by toll-like receptors is required for intestinal homeostasis. Cell. 118, 229-241 (2004).
- Leon, L. R., Blaha, M. D., DuBose, D. A. Time course of cytokine, corticosterone, and tissue injury responses in mice during heat strain recovery. J. Appl. Physiol. 100, 1400-1409 (2006).
- Ribeiro, S. R., et al. Weight loss and morphometric study of intestinal mucosa in rats after massive intestinal resection. Influence of a glutamine-enriched diet. Rev. Hosp. Clìn. Fac. Med. S. Paulo. 59, 349-356 (2004).
- Vainrub, A., Pustovyy, O., Vodyanoy, V. Resolution of 90 nm (lambda/5) in an optical transmission microscope with an annular condenser. Opt Lett. 31, 2855-2857 (2006).
- Moore, T., Globa, L., Pustovyy, O., Vodyanoy, V., Sorokulova, I. Oral administration of Bacillus subtilis strain BSB3 can prevent heat stress-related adverse effects in rats. J Appl Microbiol. 117, 1463-1471 (2014).
- Richardson, T. M. Test slides: Diatoms to divisions-What are you looking at. Proc Roy Microsc Soc. 22, 3-9 (1988).
- Moore, T., Sorokulova, I., Pustovyy, O., Globa, L., Vodyanoy, V. Microscopic evaluation of vesicles shed by rat erythrocytes at elevated temperatures. J Therm Biol. 38, 487-492 (2013).
- Leon, L. R., Helwig, B. G. Heat stroke: Role of the systemic inflammatory response. J. Appl. Physiol. 109, 1980-1988 (2010).
- Kumar, Y., Chawla, A., Tatu, U. Heat Shock Protein 70 as a Biomarker of Heat Stress in a Simulated Hot Cockpit. Aviat Space Env Med. 74 (7), 711-716 (2007).
