Abstract
Denne studien ble utformet for å evaluere den beskyttende effekt av Bacillus subtilis-stammen mot komplikasjoner relatert til varmestress. Tretti-to Sprague-Dawley rotter ble anvendt i denne studien. Dyrene ble behandlet oralt to ganger daglig i to dager med B. subtilis BSB3 belastning eller PBS. Dagen etter siste behandling ble hver gruppe delt og to eksperimentelle grupper (en behandlet med PBS og behandlet med en B. subtilis) ble plassert ved 45 ° C i 25 minutter. To kontrollgrupper oppholdt seg i 25 minutter ved romtemperatur. Alle rottene ble avlivet og ulike parametere ble analysert i alle grupper. Uønskede effekter av varmestress blir registrert ved reduksjon av villi høyde og slimhinne total tykkelse i tarmepitelet; translokasjon av bakterier fra hulrommet; økt blæredannelse av erytrocytter og heving av lipopolysakkarider (LPS) i blodet. Den beskyttende effekten av behandlingen vurderes etter prebygge disse bivirkningene. Protokollen ble satt opp for oral behandling av rotter med bakterier for forebygging av varmepåkjenningen komplikasjoner, men denne protokollen kan modifiseres og brukes til andre administrasjonsmåter og for analyse av ulike forbindelser.
Protocol
Alle eksperimentelle prosedyrer ble godkjent av IACUC av Auburn University, Auburn, Alabama.
1. Utarbeidelse av Culture Media, Retter og bakteriekultur
- Inokulere 10 ml næringsmedium i en kolbe med en enkelt koloni av Bacillus subtilis BSB3 kultur dyrket over natten på en næringsagar-plate.
- Gjør 500 ml sporulering medium 19 (per liter: Bacto næringsbuljong, 8 g, 10% (vekt / vol) KCl, 10 ml, 1,2% (w / v) MgSO4 x 7 H 2 O, 10 ml, agar, 15 g) og autoklav ved 121 ° C i 20 min. Avkjøl til 50 o C og legg til følgende sterile løsninger: 1 M Ca (NO 3) 2, 1 ml; 0,01 M MnCl2, 1 ml; 1 mM FeSO 4, 1 ml.
- Avkjøl forberedt medium til 40 ° C i 20 minutter ved romtemperatur og helles 25 ml i hver av 20 sterile petriskåler i det sterile skapet. La mediet stivne over natten.
- Spre 0,5 ml over natten kultur av Bacillus subtilis BSB3 på overflaten av det medium i Petri-skåler. Inkuber kultur ved 37 ° C i 5 dager til 90% sporulering. Avslør fase-lys sporer av høy oppløsning mikroskopi.
- Høste bakteriene ved å tilsette 1 ml steril fosfatbufret saltløsning (PBS) til platen og skraping bakterier fra en overflate ved hjelp av en steril celle spreder. Lagre suspensjonen i kjøleskap inntil nødvendig.
- Bekrefte levedyktigheten til bakteriene ved utsåing av 0,1 ml av den passende fortynning (10 -5 til 10 -6) av en bakteriell suspensjon i sporulering mediumskåler, etterfulgt av inkubasjon i 18 - 24 timer ved 37 o C
- Telle bakterielle kolonier på platene ved hjelp av en koloniteller og beregne titer av bakterier i den testede suspensjon. Tilberede bakteriesuspensjon med sluttkonsentrasjonen 1 x 10 8 CFU / mL, i PBS.
2. Dyr
- Bruk 32 Sprague-Dawley hannrotter (250-300 g). Oppretthold dyr under patogenfrie forhold med fri tilgang til standard pellet chow og vann. Etablere et midlere temperatur (21 ± 1 ° C), fuktighet (50 ± 5%) og en 12 timers lys-mørke-syklus.
3. Experimental Design
- Starte behandling av dyr ved oral sonde 11, etter 2 dager med akklimatisering. Bruk sprøyte med oral sonde nål. Unn 16 rotter med B. subtilis BSB3 suspensjon (1 ml per rotte) to ganger om dagen i to dager (B. subtilis gruppe). Unn 16 rotter med PBS (1 ml per rotte) to ganger om dagen i to dager (PBS gruppe) (figur 1).
- Etter behandling, dele hver gruppe (8 rotter per gruppe): Gruppe 1- kontroll (PBS / no stress), gruppe 2 B. subtilis (B. subtilis / nei stress), Gruppe 3- stresset (PBS / varmestress) og gruppe 4- B. subtilis + stresset (B. subtilis / varmestress).
- Måle den rektale temperaturen til hver rotte ved bruk av en elektronic digitalt termometer. Hold rotter i gruppe 1 og 2 ved romtemperatur i 25 min. Plasser dyr i gruppe 3 og 4 i et klimakammer ved 45 o C og relativ fuktighet 55% i 25 min.
- Deretter måles den rektale temperaturen til hver rotte i alle grupper ved hjelp av en elektronisk digital termometer. Plassere alle dyr ved romtemperatur i 4 timer.
- Bedøve rotter med isofluran (2 - 4%) i et forseglbart anestesi krukke og observere inntil rottene er dypt bedøvet (mangel på respons på tå klype). Avlive rotter ved rask halshogging med en giljotin.
- Samle trunk blod fra hver rotte 20 (15 - 16 ml) med apyrogent pipettene i apyrogent rør for å oppnå serum og umiddelbart ta prøver av blod (7 ul fra hver rotte) med en pipette for mikroskopisk undersøkelse.
- Sette rør med blodet i et kjøleskap i minst 30 min for å tillate koagulering. Sentrifugerør ved 20 ° C, 7000 x g i 10 minutter og rasktfjerne serum med en pipette. Delmengde serum innhentet fra hver rotte i 50 mL volumer og oppbevares ved -20 ° C inntil analyse.
4. Kirurgisk prosedyre
- Kutt / trim alt pels fra abdomen og thorax av undersiden av skroget med elektriske sakser. Plasser skrotten i en steril skap og behandle den barberte flate av skrotten med 70% alkohol.
- Bruke en steril skalpell for å skape et midtlinje innsnitt i buken. Fjern lever, mesenteriale lymfeknuter, milt og tynntarm fra hver rotte ved hjelp av sterile pinsetter.
5. Analyse av bakteriell trans
- Plasser hver prøve av leveren, mesenteriale lymfeknuter og milt i pre-veide sterile rør og veier. Beregn vekten av prøven som en forskjell mellom vekten av et rør med en prøve og vekten av en tom tube.
- Legg steril PBS til røret for å oppnå en fortynning på 1:10 (w / v) av prøven og homogekjenner hver prøve med en steril glassfiberduk homogenisator for å oppnå en homogen suspensjon 21.
- Lage serielle fortynninger (10 -1 til 10 -4) av hver prøve i steril PBS. Plate 0,1 ml av alle fortynninger av hvert vev bort på overflaten av MacConkey 's og 5% blod-agar og Brucella blodagar med hemin (0,005 g / l) og Vitamin K1 (0,01 g / l) plater.
- Inkuber MacConkey s og 5% blod-agar-plater aerobt og Brucella blodagarplater under anaerobe betingelser ved 37 ° C 22.
- Telle koloniene av aerobe bakterier etter 24 timer, og kolonier av anaerobe bakterier etter 48 timers inkubering ved hjelp av en koloniteller. Uttrykke resultatene som antallet kolonidannende enheter (CFU) i et gram vev.
6. Histologisk analyse
- Fjern tynntarmen prøver fra hver rotte ved kirurgisk prosedyre (trinn 4.1 til 4.2). Fiks prøvene i Bouin er Fixative, bygge inn i parafin,forberede 6 mikrometer seksjoner og beis seksjoner med hematoxylin og eosin ved hjelp av standard prosedyrer 23.
- Bruk en høy oppløsning mikroskop system for å måle høyden på tarmtottene og total slimhinnetykkelse i hvert utvalg (forstørrelse 100X) 24. Analyser 4 prøver fra hver rotte og gjøre minst tyve målinger i hver prøve. Uttrykk resultater i mikrometer.
7. cytokin analyse
- Bruk kommersielle rotte ELISA kits for IL-1β; IL-6; TNF-α; INF-γ, og IL-10 for å måle nivåer av cytokiner i serum i henhold til produsentens protokoll.
- Generere standardkurver for hvert sett av prøver som analyseres ved hjelp av standarder for det aktuelle settet. Definere nivået av cytokiner i hver prøve ved sammenligning av eksperimentelle data med den passende standardkurve.
8. Lipopolysakkarid analyse
- Analysere nivået av LPS i serum ved hjelp av en rotte LPS-ELISA-sett ifølgeprodusentens protokoll. Beregne konsentrasjonen av LPS i prøver ved sammenligning av de oppnådde verdier med verdiene for standardkurven.
9. High Resolution lysmikroskopi of Blood
- Bruk mikroskop system beskrevet tidligere 25,26. Bruk en vibrasjonsisolerende plattform som en base for mikroskop system og videokamera og datamaskin 25 for å spille inn levende bilder. Kalibrere testbilder med en Richardson lysbilde som tidligere beskrevet 27.
- Plasser 7 mL av nytappet blod fra hver rotte på et objektglass, dekkglass, fotografi og spille inn ti bilderammer av 72 × 53,3 mikrometer 2 i hver prøve (forstørrelse 1,700X).
- Måle konsentrasjonen av vesikler ved hjelp av programvare som gir direkte utsikt optiske bilder med høy oppløsning i sanntid. Undersøke minimum 20 bilderammer for hver eksperimentell betingelse 28.
10. Statistics
- Uttrykke alle verdier som gjennomsnitt og standardavvik. Utføre statistisk analyse og graf plotting. Analyser resultatene med de to utvalgs t-test, satt signifikansnivået på 0,05 for å definere statistisk signifikans.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Den midlere kroppstemperaturen til dyr før og umiddelbart etter varmebelastning var 36,7 ± 0,07 ° C og 40,3 ± 0,17 ° C, henholdsvis (P <0,05). Eksponering av rotter for å varme (gruppe 3) resulterte i signifikant inhibering av villi høyde og slimhinne total tykkelse (figurene 2, 3). Oral administrasjon av BSB3 belastning før stresset beskyttet tarmen fra den skadelige effekten av varme.
Translokasjon av bakterier fra tarmen ble bestemt ved bakteriologisk analyse av mesenteriske lymfeknuter (MLN), lever og milt av hver rotte. Bakteriekulturer i en konsentrasjon på 1,7 x 10 3 ± 4,6 x 10 2 CFU / g vev (figur 4) ble isolert kun fra MLN og leveren av rotter som var behandlet med PBS og utsatt for varme (gruppe 3). Alle testet prøver fra kontrollrotter (grupper 1, 2) og fra varme stressede dyrmottatt et BSB3 stamme (gruppe 4) ble steril. Det er ingen bakterier ble isolert fra milt prøver.
Ingen endring av IL-1β; IL-6, TNF-α, INF-y cytokiner nivåer ble registrert i varmestresset rotter. I serum fra dyr behandlet med PBS før varmeeksponering betydelig økning av IL-10 og LPS-nivåer ble funnet (gruppe 3) - (figurene 5, 6). Forbehandling med B. subtilis BSB3 (gruppe 4) forhindret økningen av IL-10 og LPS i serum for varme stressede dyr.
En betydelig økning av fri vesikler konsentrasjon fra (1,4 ± 0,2) x 10 6 til (3,8 ± 0,3) x 10 6 vesikler ul -1 (p <0,001) ble funnet i blodet til rotter som fikk PBS før varmestress (figurene 7 , 8). I en gruppe dyr forbehandlet med BSB3 ingen endring i antall gratis vesikler ble funnet akteruter varmeeksponering (figur 7).
Figur 1. Studiedesign. To grupper av rotter (16 rotter i hver gruppe) ble behandlet ved oral gavage med B. subtilis BSB3 (B. subtilis gruppe) eller med PBS (PBS gruppe) to ganger om dagen. På dag 3 hver gruppe ble oppdelt av 8 rotter i hver gruppe. Rotter fra gruppe 3 og 4 ble plassert ved 45 ° C i 25 min. Kontroll dyr (gruppe 1 og 2) ble holdt ved romtemperatur. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 2. Måling av tarmtotter Høyde (A) og slimhinner Tykkelse (B) hos rotter. Rotter forbehandlet med PBS ellerB. subtilis BSB3 ble utsatt for 45 o C (stress) eller til romtemperatur (kontroll). Hver gruppe besto av 8 rotter. Tyve målinger av hver parameter i hver prøve ble tatt. Verdier er presentert som middelverdi og standardavvik. Resultatene ble analysert med to utvalgs t-test på signifikansnivå 0,05 for å definere statistisk signifikans. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 3. Histologiske Bilder av tarmslimhinnen Stained med Hematoxylin og eosin. Rotter ble forbehandlet med PBS eller B. subtilis BSB3 og utsatt for 45 o C (stress) eller til romtemperatur (kontroll) A. PBS / ikke stress;. B. PBS / varmestress; C. B. subtilis / no stress; D. B. subtilis / varmestress. Villi høyde er angitt med piler. Bar 200 mikrometer. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 4. totale antall bakterier i vev av rotter. Rotter forbehandlet med PBS eller B. subtilis BSB3 ble utsatt for 45 o C (stress) eller til romtemperatur (kontroll). Hver gruppe besto av 8 rotter. Mesenteriske lymfeknuter, lever og milt ble fjernet aseptisk fra hver rotte, homogenisert og platet ut på agarmediet for å gjenvinne aerobe og anaerobe bakterier. Total telling av translokerte bakterier (aerobe og anaerobe) er presentert som kolonidannende enheter (CFU) per gram vev. Verdiene er presentert som gjennomsnitt og standardavvik. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 5. nivå av IL-10 i Serum av rotter. Rotter forbehandlet med PBS eller B. subtilis BSB3 ble utsatt for 45 o C (stress) eller til romtemperatur (kontroll). Hver gruppe besto av 8 rotter. Blodserum ble erholdt fra hver rotte og analysert med et kommersielt ELISA-sett rotte. Verdier er presentert som middelverdi og standardavvik. Resultatene ble analysert med to utvalgs t-test på signifikansnivå 0,05 for å definere statistisk signifikans. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 6. LPS Konsentrasjon i serum hos rotter. Rotter forbehandlet med PBS eller B. subtilis BSB3 ble utsatt for 45 o C (stress) eller til romtemperatur (kontroll). Hver gruppe besto av 8 rotter. Blodserum ble erholdt fra hver rotte og analysert med et kommersielt ELISA-sett rotte. Verdier er presentert som middelverdi og standardavvik. Resultatene ble analysert med to utvalgs t-test på signifikansnivå 0,05 for å definere statistisk signifikans. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 7. Antall Blemmer i Blood of Rats. Rotter forbehandletmed PBS eller B. subtilis BSB3 ble utsatt for 45 o C (stress) eller til romtemperatur (kontroll). En liten dråpe (7 pl) av nytappet blod ble plassert på et objektglass, dekkglass, fotografert og registrert ti helbilder i hver prøve (forstørrelse 1,700X). Konsentrasjon av vesikler ble målt ved hjelp av programvare som gir direkte utsikt optiske bilder med høy oppløsning i sanntid. Tjue bilderammer ble undersøkt for hver eksperimentell tilstand. Verdier er presentert som middelverdi og standardavvik. Resultatene ble analysert med to utvalgs t-test på signifikansnivå 0,05 for å definere statistisk signifikans. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 8. Økning av Vesicles Konsentrasjon i blod etter varmestress. Videobilde av blod av rottene forbehandlet med PBS før eksponering til romtemperatur (A), eller for å 45 o C (B). En liten dråpe (7 pl) av nytappet blod ble plassert på et objektglass, dekkglass, fotografert og registrert ti helbilder i hver prøve (forstørrelse 1,700X). Den vesikkel er angitt som V. Bar 6 mikrometer. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Eksponering for høye temperaturer fører til alvorlige helsemessige forhold 29. Forebygging og tidlig oppdagelse av komplikasjoner knyttet til varmestress er av vital betydning 30. Den presenterte protokollen kan brukes til å evaluere effekten av forskjellige framgangsmåter for forebygging av varmepåkjenningen bivirkninger.
Kritiske trinn i denne protokollen er: varmebehandlingsprosedyren (45 o C, 25 min); bruken av apyrogent materialer under innsamling og bearbeiding av blod for å hindre forurensning med enterotoksiner; holder serum alikvoter ved -20 ° C for å unngå gjentatt frysing og tining; og følge steril prosedyre under analysen av bakteriell translokasjon. Protokollen ble satt opp for oral behandling av rotter med bakterier for forebygging av varmepåkjenningen bivirkninger. For andre administrasjonsveier og andre forbindelser, kan denne protokollen endres. For eksempel, den tiden av treatment før varmestress kan forlenges. Oral administrering kan endres til rektal administrering. Bacillus subtilis bakterier ble benyttet for å forebygge varmepåkjenningen komplikasjoner ved oral behandling av dyr før eksponering for forhøyet temperatur. For å kurere komplikasjoner av varmestress, kan denne protokollen endres ved anvendelse av bakterier for behandling av dyr etter eksponering for varme.
Det ble vist at en heving av kroppstemperatur som skyldes en økning av erytrocytt blæredannelse, og dette ble fullstendig forhindret ved forbehandling med B. subtilis bakterier. Således kan økning av vesikler konsentrasjonen i blodet i løpet av eksponering for varme indikere nivået av varmestress og gir diagnostisk bevis for stabiliteten av erytrocytter og deres motstandsdyktighet mot varme. Det er også en meget nyttig og hurtig test for evaluering av effekten av forebyggende behandling mot varme spennings komplikasjoner. Induksjons of varmesjokkproteiner som en markør for varmestress ble tidligere diskutert 30, men denne metode er tidkrevende og kan ikke brukes for sanntids diagnose av respons på varmestress.
Den presenterte metode for forhindring av varmepåkjenningen uønskede bivirkninger er enkel, kostnadseffektivt og krever ikke ekstra utstyr eller spesielle anlegg. Fremtidig bruk av dette arbeidet vil bidra til å forstå mekanismene for beskyttelse mot varmestress komplikasjoner og karakterisere de nye rutiner for denne beskyttelsen. Denne metoden er av betydning for veiarbeidere, militært personell, idrettsutøvere - grupper av mennesker som er i faresonen for heteslag under intens utendørs fysisk aktivitet 29. Den foreslåtte tilnærmingen gjør det mulig å undersøke nivået av varmestress og for å vurdere ulike metoder for å beskytte helsen til personer som jobber under ekstreme forhold.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne hevder at de ikke har noen konkurrerende økonomiske interesser.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Phosphate buffered saline (PBS) | Sigma-Aldrich, St. Louis, MO | P4417 | |
| Ethyl Alcohol | Pharmco products Inc. Brookfield, CT, USA | 64-17-5 | |
| Agar | VWR | 97064-334 | |
| MacConkey agar plates | VWR | 470180-742 | |
| 5% blood agar plates | VWR | 89405-024 | |
| Brucella blood agar plate with Hemin, and Vitamin K | VWR | 89405-032 | |
| Bouin’s Fixative | Electron Microscopy Sciences, Hatfield, PA, USA | 15990 | |
| IL-10 Rat ELISA kit | Invitrogen, Camarillo, CA, USA | KRC0101 | |
| IL-1beta Rat ELISA Kit | Invitrogen, Camarillo, CA, USA | KRC0011 | |
| IL-6 Rat ELISA Kit | Invitrogen, Camarillo, CA, USA | KRC0061 | |
| INF-gamma Rat ELISA Kit | Invitrogen, Camarillo, CA, USA | KRC4021 | |
| TNF-alpha Rat ELISA Kit | Invitrogen, Camarillo, CA, USA | KRC3011 | |
| Rat LPS ELISA Kit | NeoBioLab, MA, USA | RL0275 | |
| Environmental Chamber 6020-1 | Caron, Marietta, OH, USA | 6020-1 | |
| Centrifuge | Beckman Coulter, Indianapolis, IN, USA | Optima L-90K | |
| Ultra Centrifuge | |||
| Light microscope optical system | CitoViva Technology Inc., Auburn, AL | ||
| Colony counter | Fisher Scientific , Pittsburgh, PA, USA | RE-3325 | |
| Freezer | Haier, Brooklyn, NY, USA | HCMO50LA | |
| Ultra microplate reader | Bio-Tek Instrument, Winooski, VT, USA | ELx 808 | |
| Auto Strip Washer | Bio-Tek Instrument, Winooski, VT, USA | ELx50 | |
| Pipettes | Gilson, Pipetman, France | P100, P200, P1000 | |
| C24 Incubator Shaker | New Brunswick Scientific, Enfield, CT, USA | Classic C24 | |
| Rocking Shaker | Reliable Scientific, Inc., Nesbit, MS, USA | 55 | |
| Petri dishes | Fisher Scientific, Pittsburgh, PA, USA | 875713 | 100 mm x 15 mm |
| SterilGard III Advance | The Baker Company, Sanford, ME, USA | SG403 | |
| Culture Growing Flasks | Corning Incorporated, Corning, NY, USA | 4995 | PYREX 250 ml Erlenmeyer flasks |
| Optical Spectrometer Genesys 20 | Thermo Scientific, Waltham, MA, USA. | 4001 | |
| Sony DXC-33 Video camera | Sony | ||
| Richardson test slide | Electron Microscopy Science, Hatfield, PA, USA | 80303 | |
| Millipore water purification system | Millipore | Direct-Q | |
| Image-Pro Plus software | Media Cybernetics, MD, USA | ||
| Triple Beam Balance | OHAUS Corporation, Parsippany, NJ, USA | ||
| Tissue Homogenizer, Dounce | VWR | 71000-518 |
References
- Crandall, C. G., Gonzalez-Alonso, J.
- Lambert, G. P. Role of gastrointestinal permeability in exertional heatstroke. Exerc. Sport Sci. Rev. 32, 185-190 (2004).
- Yu, J., et al. Effect of heat stress on the porcine small intestine: A morphological and gene expression study. Comp. Biochem. Physiol. A-Mol. Integr. Physiol. 156, 119-128 (2010).
- Moseley, P. L., Gisolfi, C. V. New Frontiers in Thermoregulation and Exercise. Sports Med. 16, 163-167 (1993).
- Lambert, G. P. Stress-induced gastrointestinal barrier dysfunction and its inflammatory effects. J. Anim. Sci. 87, 101-108 (2009).
- Berg, A., Muller, H. M., Rathmann, S., Deibert, P. The gastrointestinal system - An essential target organ of the athlete's health and physical performance. Exerc. Immunol. Rev. 5, 78-95 (1999).
- Khan, M. W., et al. Microbes, intestinal inflammation and probiotics. Expert Rev Gastroent. 6, 81-94 (2012).
- Quigley, E. M. M. Prebiotics and Probiotics: Their Role in the Management of Gastrointestinal Disorders in Adults. Nutr Clin Pract. 27, 195-200 (2012).
- Gore, C., et al. Treatment and secondary prevention effects of the probiotics Lactobacillus paracasei or Bifidobacterium lactis on early infant eczema: randomized controlled trial with follow-up until age 3 years. Clin Exp Allergy. 42, 112-122 (2012).
- Gomes, A. C., Bueno, A. A., de Souza, R. G. M., Mota, J. F. Gut microbiota, probiotics and diabetes. Nutr. J. 13, (2014).
- Eutamene, H., et al. Synergy between Lactobacillus paracasei and its bacterial products to counteract stress-induced gut permeability and sensitivity increase in rats. J. Nutr. 137, 1901-1907 (2007).
- Ait-Belgnaoui, A., et al. Lactobacillus farciminis treatment attenuates stress-induced overexpression of Fos protein in spinal and supraspinal sites after colorectal distension in rats. Neurogastroenterol. Motil. 21, 585-593 (2009).
- Fujiya, M., et al. The Bacillus subtilis quorum-sensing molecule CSF contributes to intestinal Homeostasis via OCTN2, a host cell membrane transporter. Cell Host Microbe. 1, 299-308 (2007).
- Cutting, S. M.
- Pinchuk, I. V., et al. In vitro anti-Helicobacter pylori activity of the probiotic strain Bacillus subtilis 3 is due to secretion of antibiotics. Antimicrob Agents Ch. 45, 3156-3161 (2001).
- Sorokulova, I. B., Kirik, D. L., Pinchuk, I. V.
- Gracheva, N. M., et al. The efficacy of the new bacterial preparation biosporin in treating acute intestinal infections. Zh Mikrobiol Epidemiol Immunobiol. , 75-77 (1996).
- Horosheva, T. V., Vodyanoy, V., Sorokulova, I. Efficacy of Bacillus probiotics in prevention of antibiotic-associated diarrhoea: a randomized, double-blind, placebo-controlled clinical trial. JMM Case Report. 1, (2014).
- Sorokulova, I. B., Krumnow, A. A., Pathirana, S., Mandell, A. J., Vodyanoy, V. Novel Methods for Storage Stability and Release of Bacillus Spores. Biotechnol. Prog. 24, 1147-1153 (2008).
- Vogel, H. G., Vogel, W. H. Drug Discovery and Evaluation: Pharmacological Assays. eds H.G. Vogel & W.H. Vogel. Vogel, H. G., Vogel, W. H. , 658-659 (1997).
- Bailey, M. T., Engler, H., Sheridan, J. F. Stress induces the translocation of cutaneous and gastrointestinal microflora to secondary lymphoid organs of C57BL/6 mice. J. Neuroimmunol. 171, 29-37 (2006).
- Rakoff-Nahoum, S., Paglino, J., Eslami-Varzaneh, F., Edberg, S., Medzhitov, R. Recognition of commensal microflora by toll-like receptors is required for intestinal homeostasis. Cell. 118, 229-241 (2004).
- Leon, L. R., Blaha, M. D., DuBose, D. A. Time course of cytokine, corticosterone, and tissue injury responses in mice during heat strain recovery. J. Appl. Physiol. 100, 1400-1409 (2006).
- Ribeiro, S. R., et al. Weight loss and morphometric study of intestinal mucosa in rats after massive intestinal resection. Influence of a glutamine-enriched diet. Rev. Hosp. Clìn. Fac. Med. S. Paulo. 59, 349-356 (2004).
- Vainrub, A., Pustovyy, O., Vodyanoy, V. Resolution of 90 nm (lambda/5) in an optical transmission microscope with an annular condenser. Opt Lett. 31, 2855-2857 (2006).
- Moore, T., Globa, L., Pustovyy, O., Vodyanoy, V., Sorokulova, I. Oral administration of Bacillus subtilis strain BSB3 can prevent heat stress-related adverse effects in rats. J Appl Microbiol. 117, 1463-1471 (2014).
- Richardson, T. M. Test slides: Diatoms to divisions-What are you looking at. Proc Roy Microsc Soc. 22, 3-9 (1988).
- Moore, T., Sorokulova, I., Pustovyy, O., Globa, L., Vodyanoy, V. Microscopic evaluation of vesicles shed by rat erythrocytes at elevated temperatures. J Therm Biol. 38, 487-492 (2013).
- Leon, L. R., Helwig, B. G. Heat stroke: Role of the systemic inflammatory response. J. Appl. Physiol. 109, 1980-1988 (2010).
- Kumar, Y., Chawla, A., Tatu, U. Heat Shock Protein 70 as a Biomarker of Heat Stress in a Simulated Hot Cockpit. Aviat Space Env Med. 74 (7), 711-716 (2007).
