Abstract
Declínio na memória explícita dependente do hipocampo (memória para fatos e eventos) é um dos primeiros sintomas clínicos da doença de Alzheimer (DA). Está bem estabelecido que a perda de sinapse e que se seguiu a neurodegeneração são os melhores preditores para perturbações da memória em AD. Últimos estudos têm enfatizado o papel neurotóxico de oligômeros beta-amilóide solúvel (Aβo) que começam a se acumular no cérebro humano aproximadamente 10 a 15 anos antes de os sintomas clínicos se tornam aparentes. Muitos relatórios indicam que Aβo solúvel correlacionar-se com déficits de memória em modelos AD e seres humanos. A neurodegeneração induzida por Aβo observada em culturas de fatias cerebrais e neuronais tem sido mais difícil de reproduzir, em muitos modelos animais. O modelo de infusões Aβo repetidas mostrado aqui ultrapassar este problema e permitir abordar dois domínios-chave para o desenvolvimento de nova doença modificando terapias: identificar marcadores biológicos para diagnosticar AD cedo, e determinar a mecha molecularnismos subjacentes défices de memória induzidos por Aβo no início da AD. Desde agregado Aβo solúvel relativamente rápido em fibrilas de Ap insolúvel que se correlacionam mal com o estado clínico dos pacientes, Aβo solúveis são preparados na hora e injetado uma vez por dia durante seis dias para produzir a morte celular acentuada no hipocampo. Usamos cânula especialmente desenhado para infusões simultâneas de Aβo e infusão contínua de anticorpo Aβo (6E10) no hipocampo utilizando bombas osmóticas. Esta inovadora no método in vivo podem agora ser utilizados em estudos pré-clínicos para validar a eficácia das terapias novas AD que pode evitar a deposição e de neurotoxicidade Aβo em pacientes pré-demência.
Introduction
Foi inicialmente proposto que a acumulação de espécies de Ap insolúveis no cérebro foi central para AD patogênese. 1,2 No entanto, placas amilóides também são detectados em algumas cognitivamente normais idosos. 3-7 Para superar a fraca correlação existente entre as deposições de placa e déficits cognitivos em AD, recentes relatórios demonstraram a presença de Aβo solúvel tóxico no início da doença, que se correlacionam muito melhor com o estado clínico dos pacientes. 8-14 Uma vez que o processo de Ap oligomerização é muito dinâmico, sugeriu-se que a neurotoxicidade é induzido por vários Aβo em vez de apenas um tipo específico de oligómero. 14-16 uma vez que muitos estudos têm mostrado que Aβo pode iniciar disfunções sinapse antes da sinapse e perda neuronal, 17-24 teorias actuais indicam que o tratamento relacionadas com Ap pode ser eficaz em AD cedo do que em fases posteriores como testado até agora em ensaios clínicos.
Uma característica característica da AD patogênese é a morte maciça e generalizada de células observadas nos últimos estágios da doença, e da sinapse significativo e perda neuronal observada em regiões cerebrais localizadas quando os déficits de memória se tornar detectável no nível clínico. A via perfurante que se projeta a partir do córtex entorrinal (CE) no giro denteado (DG) é perturbado acentuadamente no início precoce da AD 25,26. Durante o estado prodromal da AD quando comprometimento cognitivo leve (MCI) torna-se a morte celular significativa aparente é detectado na CE, bem como perda sináptica no DG 25,26.
Apesar de um grande corpo de evidências identificou a ação tóxica de Aβo solúvel em AD cedo, 8-14 neurodegeneração induzida Aβo observado na cultura neuronal ou a cultura fatia do cérebro organot�ica tem sido mais difícil de reproduzir em modelos animais 27. A maior parte da AD transgênico modelos com superexpressão Aβ tem placas amilóides, hiperfosforilação tau, deficiência sináptica e déficits de memória. 27 No entanto, estes modelos têm sido muito menos bem sucedido na morte celular modelagem observado no hipocampo de pacientes com DA. Para superar esses problemas técnicos, desenvolvemos um modelo baseado em infusões intracerebrais de Aβo solúvel. Nós relatado anteriormente que repetiu infusões hipocampo de Aβo solúvel induzir a perda neuronal gradual e hiperfosforilação tau, duas características patológicas associadas com o declínio da memória em AD. 28 Aqui, nós estamos mostrando um novo método para testar AD terapias usando cânula especialmente desenhado para infusões simultâneas de Aβo e infusão contínua de anticorpo Aβo (6E10) com bombas osmóticas.
As bombas osmóticas fornecer uma forma única para testar in vivo a eficácia de qualquer anticorpo (ou outros compostos) contra a neurodegeneração induzida por Aβo directamente no local da infusão de Aβo. Assim, estas bombas represent uma ferramenta conveniente para estabelecer um sólido à prova de conceito sobre os mecanismos de acção de agentes terapêuticos potenciais na AD. Desde os relatórios recentes salientam o impacto crítico de Aβo solúveis nas fases iniciais da AD, muitos tratamentos dirigidos a Aβo está efectivamente a ser testado por laboratórios académicos e farmacêuticas. Este romance modelo animal permite imitar a perda sináptica e neuronal observado em AD cedo, e bombas osmóticos são utilizados para infundir continuamente agentes de tratamento especificamente no local de infusão a Aβo. As falhas repetitivas de terapias AD testados ao longo dos últimos anos em leve a moderada pacientes conforme solicitado pesquisadores para iniciar ensaios clínicos em doentes pré-demência antes Aβo começam a se acumular em abundância e gerar danos cerebrais irreversíveis. Neste contexto, o teste de novos compostos que impeçam a deposição e consequentemente a neurotoxicidade de Aβo pode ser de interesse em pacientes pré-clínicos.
Protocol
Declaração de ética: O protocolo de animais para este projecto obteve a aprovação do Comitê de Cuidados Animal do Hospital Sacré-Coeur de Montreal, em conformidade com as diretrizes do Canadian Council on Animal Care.
1. Cateter Preparação antes da cirurgia estereotáxica
- Cortar cateteres PE50 (6 cm de comprimento) que serão utilizados para ligar a cânula com bombas osmóticas (ver Figura 1A). Preencha cateteres PE50 com fluido cerebrospinal artificial (aCSF) e selar ambas as extremidades dos cateteres. Manter o cateter a 4 ° C até ser utilizado.
2. Cânula Implantação por estereotaxia
- Realizar a cirurgia em condições estéreis. Esterilizar todos os instrumentos e materiais cirúrgicos por autoclavagem. Limpar o aparelho estereotáxico e a área de trabalho completamente, e desinfectado com uma solução de etanol a 70%. Usar uma máscara cirúrgica, gorro cabelo e luvas estéreis.
- Anestesiar ratos por injecção intraperitoneal (ip) de uma solução de cetamina e xilazina (100 mg / kg e 10 mg / kg, respectivamente). Confirmar anestesia, verificando movimento após uma pitada toe suave.
- Injectar um não-esteróide anti-inflamatório (meloxicam; 1 mg / kg) por via subcutânea (SC) para o animal anestesiado, pelo menos, 30 minutos antes da cirurgia.
- Raspar a cabeça do animal usando cortadores e desinfectar a pele com uma solução de gluconato de clorexidina 2% e álcool isopropílico 2% três vezes. Aplicar pomada oftálmica veterinária nos olhos para evitar a secura e sob anestesia.
- Colocar o animal em um quadro estereotáxico com as barras de ouvido. Corrigir uma cânula no braço titular do quadro estereotáxico. Injectar (sc), um agente anestésico local (bupivacaína (1,5 mg / kg) e lidocaina (1,5 mg / kg) sobre a parte superior da cabeça. A anestesia é mantém durante todo o procedimento de colocação de um cone de nariz proporcionando 3% de isoflurano. A totalidade campo cirúrgico deve serenvolto off, mas não foi feito aqui para melhor demonstrar a técnica.
- Fazer uma incisão de 3 cm na parte superior da cabeça com um bisturi. Instalar 4 grampos ao redor da incisão para deixar o crânio clara. Usando uma tesoura round-ponta, fazer um bolso (2 x 2 cm2) sob a pele entre as omoplatas do animal.
- Raspar o periósteo do crânio com uma lâmina. Aplique uma compressa de gaze sobre o crânio se o sangramento.
- Verifique se o crânio é plana e bem alinhados no quadro estereotáxico. Para se certificar de que o crânio é plana, verificar a altura coordena no bregma e ao lambda. Aqui as coordenadas do bregma que vai ser utilizado como ponto de referência.
- A partir da bregma, calcular as coordenadas dos dois cânula guia que serão implantados bilateralmente no hipocampo (anteroposterior: - 0,42 centímetros; mediolateral: ± 0,30 cm; dorsoventral: - 0,28 cm de acordo com o atlas de cérebro de rato em Paxinos e Watson) 29 . indicar oposição da cânula com um marcador.
- Perfurar um furo (0,5 mm) no crânio no ponto de implantação de cânula ambos. Faça dois outros buracos de aproximadamente 5 mm acima e abaixo desses pontos para inserir parafusos que irá solidificar a cânula ao aplicar cimento dental.
- Cortar uma extremidade do cateter previamente enchido com aCSF com um bisturi, e inseri-lo no braço angular da cânula. Fixar a primeira cânula com cimento dental. Evitar colocar cimento dental ao redor da posição no segundo cânula.
- Deixe o dental cimento seco para 2-3 min, em seguida, retire o braço de suporte a partir do primeiro cânula, e fixar a segunda cânula nele. Repita os passos 2.11 e 2.12. Coloque cânula manequim em ambos cânula guia. Certifique-se de que a cânula guia manequim e são do mesmo comprimento para evitar a infiltração do tecido e impedindo a cânula.
- Inserir a extremidade livre de ambos os cateteres no bolso feito anteriormente entre as omoplatas do animal. Retirar as braçadeiras e costurar a pele com umafio de sutura 4-0.
NOTA: A cânula guia superior precisa estar acessível para os próximos infusões Aβo. - Remover o animal a partir do quadro estereotáxico e colocá-lo de volta em sua gaiola. Durante a recuperação pós-cirúrgica, colocar a gaiola em um cobertor aquecimento de água até que o animal acorda. A gaiola deve ser parcialmente no bloco de modo que o rato pode afastar-se do calor, se necessário. Monitorar o animal constantemente até que recupere a consciência suficiente para manter decúbito esternal.
- Voltar ratos ao biotério para se recuperar da cirurgia durante 10 dias sob acompanhamento de perto.
NOTA: Não devolva um animal que foi submetido a uma cirurgia para a companhia de outros animais até que esteja totalmente recuperado. Meloxicam (1 mg / kg) é administrado uma vez por dia durante dois dias após a cirurgia para tratar a dor.
Instalação 3. osmótica bomba
- Um dia antes da instalação, encher bombas osmóticas com anticorpo 6E10 (1 mg / mL; 100 uL) e IgG1 de controloanticorpo (1 mg / mL; 100 uL) de acordo com as instruções do fabricante sob condições estéreis. Manter as bombas em água destilada estéril a 37 ° C durante a noite para activar bombas.
- Anestesiar ratos com isoflurano 3% para instalar bombas osmóticos (0,5 ul / h durante 7 dias). Raspar entre as omoplatas e desinfectar a pele com uma solução de gluconato de clorexidina e 2% de álcool isopropílico a 2%. Realizar uma incisão de 2 cm com um escalpelo entre as omoplatas para localizar os cateteres PE50 ligado à cânula guia.
- Cortar a extremidade dos cateteres PE50 contendo cimento dental com um bisturi. Ligue as bombas osmóticas para os cateteres PE50, e adicionar um pouco de cimento dental na junção da bomba e cateter para proteger a conexão.
- Costurar a pele firmemente com um fio de sutura 4-0. Coloque a parte traseira animal em sua gaiola em uma almofada de aquecimento de água. Observar o despertar dos animais se rapidamente de uma anestesia isoflurano (cerca de 5 min).
NOTA: A cirurgia leva approdamente de 5 a 10 min.
4. Infusões Aβo em Awake e ratos movimentando-se livremente
- Preparar a solução de Aβo (0,2 ug / uL) tal como anteriormente relatado. Permitir 28,30 Aβo para se agregar de forma dinâmica e espontaneamente durante 1 hora à temperatura ambiente antes da infusão.
- Instale duas seringas de 10 ul de uma bomba de infusão. Encher as seringas com 5 uL de água estéril destilada. Corte dois cateteres PE50 a cerca de 60 cm de comprimento com um bisturi. Preencha ambos os cateteres com água destilada estéril usando 1 ml seringas e agulhas 21G.
- Manter as seringas de 1 ml numa extremidade do cateter e ligar a outra extremidade para as seringas de Hamilton. Retire as seringas de 1 ml e verificar que não há bolhas de ar dentro dos cateteres.
- Inserir uma cânula interna no final do cateter PE50. O uso de água destilada estéril, preencher a cânula interna ligada a cateteres PE50-se para 1 mL de seringas Hamilton. Faça uma bolha de ar por pulling para trás o pistão de até 2 l.
- Misturar a solução Aβo pipetando cima e para baixo usando a ponta do mínimo de adesão. Evitar a formação de bolhas durante a mistura. Preencha ambos cânula interna com 1,5 ml de solução Aβo puxando para trás o pistão até 3,5 mL.
- Adicione linhas com um marcador antes e após a bolha de ar feito em ambos os cateteres. Isto serve como um ponto de verificação de infusão contínua. Para perfusão, trazer a gaiola perto da bomba de infusão e remover sua capa.
- Coloque o rato em um snuggle e firmemente raspar o braço do snuggle em torno de seu pescoço para imobilizar a cabeça do rato. Remover cânula manequim da cânula dois guia. Inserir a cânula interna previamente preparada na cânula guia. Verificar que eles estão completamente inseridos e bem fixo à base da cânula guia.
- Solte rato do snuggle e colocá-lo de volta em sua gaiola para limitar o estresse contenção. Acompanhar de perto para garantir que os cateteres não torça togetela e a infusão é feito corretamente.
- Ligar a bomba de infusão. Injectar 1 ul de solução Aβo a uma velocidade de 0,1 ul / min (10 min). Durante a infusão, verificar que o êmbolo da seringa se desloca de 3,5 uL e 2,5 uL, e de que a bolha de ar em ambos os cateteres PE50 mover continuamente.
- Deixar a cânula interna no lugar durante mais 5 min após a infusão para permitir a difusão eficiente de solução Aβo. Traga o rato volta no aconchegar para remover cânula interna e uma cânula guia tapado para evitar o refluxo da solução injetadas. Use cânula dummy que parar um pouco antes do braço ângulo da cânula. Devolver o animal em sua gaiola.
- Repetir a perfusão Aβo uma vez por dia durante 6 dias consecutivos. Eutanásia do animal por decapitação.
Representative Results
O efeito neurotóxico do Aβo foi investigada em ratos Long-Evans por implantação de cânula a DG do hipocampo. Solúvel Aβo foram injectados diariamente durante seis dias consecutivos. Utilizou-se uma cânula especialmente desenhado para perfusões simultâneas de Aβo e infusão contínua de anticorpo IgG1 de controlo 6E10 ou no hipocampo utilizando bombas osmóticas (Figura 1A). Para os ratos foram anestesiados imunohistoquímica, perfundidos transcardialmente com NaCl a 0,9%, e os cérebros imersos em solução de paraformaldeído a 4% para a solução de sacarose a 48% HR e 15 durante 24 h. -Secções coronais flutuando livres (40 pm) foram tratados com 0,3% de H 2 O 2 durante 30 min, bloqueadas em soro de cabra a 1% durante 1 h, e incubadas durante a noite a 4 ° C com um anticorpo anti-pan-Ap. As secções foram tratadas com ácido fórmico a 70% durante 3 min antes de aplicar o anticorpo. A detecção foi realizada utilizando o complexo ABC e um 0.05% de solução de 3,3-diaminobenzidina. As secções foram montadas em lâminas de vidro revestidas com gelatina, secas ao ar 2 horas, desidratados (30, 70, 95 e 100% de álcool), incubadas em tolueno 5 min, e lamínulas. Para a coloração de violeta de cresilo, as secções foram incubadas 10 min numa solução de violeta de cresilo a 0,5%, incubou-se 1 min numa solução de ácido acético a 0,5%, decolored (70, 95, e álcool 100%), imerso em tolueno 5 min, e coberto com lamela de vidro.
Os resultados aqui apresentados mostram a deposição de Aβo na DG na vizinhança do local de infusão, e morte celular associada a esta acumulação. Verificou-se que o nível Aβo foi substancialmente reduzida pelo tratamento com o anticorpo 6E10 (Figura 1B). Neurodegeneração marcada foi observada perto do local de injecção de Aβo, e foi atenuada por tratamento com o anticorpo 6E10 (Figura 1B). Estes resultados são consistentes com Aβo acumulação que foi observado no DGapós as perfusões Aβo repetidas em camundongos. 28 Apuramento da deposição de amilóide por imunoterapia com anticorpos 6E10 mostrado aqui está de acordo com outro relatório feito em um modelo transgénico AD rato 31.
Figura 1. Foto do animal com a cânula bilaterais durante Aβo Infusion Uma solução de Aβo. (0,2 mg / mL; 1 ml) foi injetado em ratos acordados e livremente em movimento (uma vez por dia durante 6 dias), utilizando cateteres PE50 ligados a cânula interna inserido cânula guia. O tratamento com o controle (CTL) IgG1 ou 6E10 anticorpo foi administrado directamente no local da Aβo infusão usando bombas osmóticas localizados por via subcutânea entre as omoplatas do animal. Por favor clique aqui para ver uma versão maior do thé figura.
Figura 2. A perda neuronal induzida por Aβo deposição é atenuada por 6E10 Anticorpo Tratamento A, Aβo (0,2 ug / uL; 1 mL). Injectou-se uma vez por dia durante 6 dias consecutivos, e tratados com CTL (IgG1) ou anticorpo 6E10 no local da perfusão usando bombas osmóticas. B, a acumulação representante da Aβo na DG em uma seção imediatamente ao lado de inserção da cânula, e coloração representante com violeta cresil que mostra a perda de células. Barras de escala: 50 mm (n = 4) Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Discussion
Há passos críticos dentro deste protocolo que exigiam uma atenção especial. Quando a implantação da cânula, evite colocar cimento dental quando está muito líquido para evitar o bloqueio do buraco da segunda cânula. É importante colocar cimento dental na extremidade livre do cateter P50 ligado à bomba para evitar a irritação e um possível resposta inflamatória. No dia da cirurgia estereotáxica, usar cânula manequim que são do mesmo comprimento que a cânula guia a fim de evitar o bloqueio de uma cânula. No entanto, depois de instalar bombas de usar mais curto cânula manequim que parar antes do braço angular da cânula para permitir a infusão adequada da solução a partir da bomba para o hipocampo. Acompanhar de perto infusões Aβo e verificar se a bolha de ar feito em cateteres está se movendo de forma contínua durante as infusões. Certifique-se sempre que a cânula injetar está completamente inserida na cânula guia durante infusões.
Se o problema é o encontro durante a infusão de Ap, Verifique se a cânula interna não está bloqueado. Se for o caso, lavagem com água destilada estéril através da cânula interna. Se a cânula guia está obstruído, vire a cânula interna na cânula guia. Caso contrário mover a cânula interna cima e para baixo. Contenção no snuggle pode ser estressante para os ratos, especialmente no primeiro dia. Para diminuir o stress do animal, recomendamos para manipular e habituar ratos ao snuggle antes da cirurgia estereotáxica.
Muitas vantagens podem ser atribuídas a este novo e flexível na abordagem in vivo. De fato, a natureza do Aβo injectado pode ser controlar com precisão antes da infusão, e vários tipos de preparações de Ap (por exemplo sintético vs soluções Ap derivado do cérebro) pode ser injectado para avaliar a sua neurotoxicidade in vivo. Este modelo também pode ser utilizado para investigar os mecanismos pelos quais várias espécies de Ap (por exemplo, monómeros, de baixa e alta massa molecular oligomers, protofibras) pode induzir efeitos neurotóxicos in vivo, e como tratamentos como a imunoterapia pode neutralizar seu impacto deletério no cérebro. Uma vez que as infusões são executar em, animais livremente em movimento acordado, não há efeitos de confusão entre os agentes anestésicos e a solução Aβo em vias de sinalização, conforme demonstrado em estudos anteriores. 32,33 Infusões em movendo-se livremente animais são também compatível com testes comportamentais qualquer tempo antes e após as infusões.
Infusões de Aβo e instalação da bomba pode ser feito em animais de idades diferentes para determinar os efeitos de tratamentos Aβo e durante o envelhecimento. Uma vez que a neurodegeneração ocorre na vizinhança do local de infusão, sinapse e perda neuronal pode ser induzida em diferentes regiões do cérebro e localizadas. A infusão garantia de Aβo e controle (veículo ou precipitação de Ap) permite controlar qualquer mudança dentro do mesmo animal. Por outro lado, Aβo ou controlo Soldoras podem ser injectados bilateralmente no hipocampo direito e esquerdo, por exemplo ao testar animais em tarefas comportamentais. A infusão de Aβo e tratamento pode ser feito simultaneamente ou, alternativamente, as bombas podem ser instalados após a infusão Aβo para avaliar se o tratamento é eficaz após a deposição de Ap. O mesmo protocolo descrito aqui pode também ser utilizado quando se faz infusões intracerebroventricular de Aβo. O efeito de Aβo em vias de sinalização intracelular pode ser avaliada antes e após a perda neuronal dentro de um período de tempo razoavelmente curto. A dose e o número de infusões de Ap também pode ser ajustada para se obter uma mais ou menos grave Ap patogenicidade.
Embora muito versátil, esta técnica tem algumas limitações. implantação da cânula produz uma ruptura mecânica do tecido e neuroinflama�o nos primeiros dias após a cirurgia. Assim, é essencial que esperar pelo menos uma semana após a cirurgia antes de iniciar Aβo INFUsion, e para adicionar controles adequados (injecção de veículo ou corrida inativo Ap) a ter em conta esses eventos. Além disso, apenas um pequeno volume de Aβo pode ser infundido para limitar a difusão da solução.
As bombas osmóticos representam um método de entrega conveniente e exclusivo para validação pré-clínica de agentes destinados a prevenir a neurodegeneração induzida por Aâ. Uma vez que a imunoterapia com o anticorpo 6E10 foi mostrado anteriormente para diminuir a acumulação de Ap no cérebro, 31 utilizou-se o anticorpo 6E10 como uma prova de conceito para validar a nossa nova abordagem in vivo. A utilizado de bombas osmóticas neste modelo pode agora ser utilizado para desenvolver novas terapias modificadores da doença que pudesse evitar a deposição e de neurotoxicidade Aβo em pacientes com AD pré-clínicos.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Artificial Cerebrospinal Fluid (aCSF) | Harvard Apparatus | 59-7316 | |
| PE 50 Catheter thin wall | Plastics one | C232CT | |
| Ketamine Hydrochloride (100 mg/ml) | Bioniche | 1989529 | |
| Xylazine Hydrochloride (100 mg/ml) | Bimeda | 8XYL004C | |
| Meloxicam (5 mg/ml) | Norbrook | 215670I01 | |
| Solution of chlorhexidine gluconate 2% and isopropyl alcohol 2% | Carefusion | 260100C | |
| Lidocaine Hydrochloride | Alveda Pharma | 0122AG01 | |
| Bupivacaine Hydrochloride | Hospira | 1559 | |
| ophthalmic ointment | Baussh and Lomb inc. | 2125706 | |
| stereotaxic frame | Stoelting | 51600 | |
| stereotaxic cannula holder arm | Harvard Apparatus | 72-4837 | |
| Drill | Dremel | 8050-N/18 | |
| Guide Cannula | Plastics one | 326OPG/spc | |
| Injection Cannula | Plastics one | C315I/spc | |
| Dummy Cannula | Plastics one | C315DC/spc | |
| Suture thread coated vicryl rapide 4-0 | Ethicon | VR2297 | |
| Dental Acrylic Cement | Harvard Apparatus | 72-6906 | |
| Screws | JI Morris Company | P0090CE125 | |
| 6E10 antibody (mouse IgG1 isotype) | BioLegend | 803003 | |
| Mouse IgG1 isotype control antibody | Abcam | AB18447 | |
| Alzet osmotic pumps model 1007D | Durect corporation | 290 | |
| Isoflurane | Baxter | CA2L9100 | |
| Amyloid-beta 1-42 | rPeptide | A-1163-1 | |
| Hamilton syringe (10 µl) | Fisher Scientique | 14815279 | |
| Infusion Syringe Pump CMA 402 | Harvard Apparatus | CMA8003110 | |
| Syringe 1 ml | BD | 309659 | |
| Needle 21 G | Terumo | NN-2125R | |
| Snuggle | Lomir Biomedical | RTS04 |
References
- Hardy, J. A., Higgins, G. A. Alzheimer's disease: the amyloid cascade hypothesis. Science. 256, 184-185 (1992).
- Selkoe, D. J. Toward a comprehensive theory for Alzheimer's disease. Hypothesis: Alzheimer's disease is caused by the cerebral accumulation and cytotoxicity of amyloid beta-protein. Ann. N.Y. Acad. Sci. 924, 17-25 (2000).
- Terry, R. D., et al. Physical basis of cognitive alterations in Alzheimer's disease: synapse loss is the major correlate of cognitive impairment. Ann. Neurol. 30, 572-580 (1991).
- Giannakopoulos, P., et al. Tangle and neuron numbers, but not amyloid load, predict cognitive status in Alzheimer's disease. Neurology. 60, 1495-1500 (2003).
- Price, J. L., Morris, J. C. Tangles and plaques in nondemented aging and "preclinical" Alzheimer's disease. Ann. Neurol. 45, 358-368 (1999).
- Reiman, E. M., et al. Fibrillar amyloid-beta burden in cognitively normal people at 3 levels of genetic risk for Alzheimer's disease. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 106, 6820-6825 (2009).
- Aizenstein, H. J., et al. Frequent amyloid deposition without significant cognitive impairment among the elderly. Arch. Neurol. 65, 1509-1517 (2008).
- Mc Donald, J. M., et al. The presence of sodium dodecyl sulphate-stable Abeta dimers is strongly associated with Alzheimer-type dementia. Brain. 133, 1328-1341 (2010).
- Tomic, J. L., Pensalfini, A., Head, E., Glabe, C. G. Soluble fibrillar oligomer levels are elevated in Alzheimer's disease brain and correlate with cognitive dysfunction. Neurobiol. Dis. 35, 352-358 (2009).
- Naslund, J., et al. Correlation between elevated levels of amyloid beta-peptide in the brain and cognitive decline. JAMA. 283, 1571-1577 (2000).
- Hardy, J.
- Hardy, J., Selkoe, D. J. The amyloid hypothesis of Alzheimer's disease: progress and problems on the road to therapeutics. Science. 297, 353-356 (2002).
- Haass, C., Selkoe, D. J. Soluble protein oligomers in neurodegeneration: lessons from the Alzheimer's amyloid beta-peptide. Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 8, 101-112 (2007).
- McLean, C. A., et al. Soluble pool of Abeta amyloid as a determinant of severity of neurodegeneration in Alzheimer's disease. Ann. Neurol. 46, 860-866 (1999).
- Hepler, R. W., et al. Solution state characterization of amyloid beta-derived diffusible ligands. Biochemistry. 45, 15157-15167 (2006).
- Martins, I. C., et al. Lipids revert inert Abeta amyloid fibrils to neurotoxic protofibrils that affect learning in mice. EMBO J. 27, 224-233 (2008).
- Lesne, S., et al. A specific amyloid-beta protein assembly in the brain impairs memory. Nature. 440, 352-357 (2006).
- Hung, L. W., et al. Amyloid-beta peptide (Abeta) neurotoxicity is modulated by the rate of peptide aggregation: Abeta dimers and trimers correlate with neurotoxicity. J. Neurosci. 28, 11950-11958 (2008).
- Ono, K., Condron, M. M., Teplow, D. B.
- Lambert, M. P., et al. Diffusible, nonfibrillar ligands derived from Abeta1-42 are potent central nervous system neurotoxins. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 95, 6448-6453 (1998).
- Shankar, G. M., et al. Amyloid-beta protein dimers isolated directly from Alzheimer's brains impair synaptic plasticity and memory. Nat. Med. 14, 837-842 (2008).
- Shankar, G. M., et al. Natural oligomers of the Alzheimer amyloid-beta protein induce reversible synapse loss by modulating an NMDA-type glutamate receptor-dependent signaling pathway. J. Neurosci. 27, 2866-2875 (2007).
- Cleary, J. P., et al. Natural oligomers of the amyloid-beta protein specifically disrupt cognitive function. Nat. Neurosci. 8, 79-84 (2005).
- Townsend, M., Shankar, G. M., Mehta, T., Walsh, D. M., Selkoe, D. J. Effects of secreted oligomers of amyloid beta-protein on hippocampal synaptic plasticity: a potent role for trimers. J. Physiol. 572, 477-492 (2006).
- Gomez-Isla, T., et al. Profound loss of layer II entorhinal cortex neurons occurs in very mild Alzheimer's disease. J. Neurosci. 16, 4491-4500 (1996).
- DeKosky, S. T., Scheff, S. W., Styren, S. D. Structural correlates of cognition in dementia: quantification and assessment of synapse change. Neurodegeneration. 5, 417-421 (1996).
- Brouillette, J. The Effects of Soluble Abeta Oligomers on Neurodegeneration in Alzheimer's Disease. Curr. Pharm. Des. 20, 2506-2519 (2014).
- Brouillette, J., et al. Neurotoxicity and memory deficits induced by soluble low-molecular-weight amyloid-beta1-42 oligomers are revealed in vivo by using a novel animal model. J. Neurosci. 32, 7852-7861 (2012).
- Paxinos, G., Watson, C. The rat brain in stereotaxic coordinates. , Academic Press. New York. Fourth edition (1998).
- Broersen, K., et al. A standardized and biocompatible preparation of aggregate-free amyloid beta peptide for biophysical and biological studies of Alzheimer's disease. PEDS. 24, 743-750 (2011).
- Thakker, D. R., et al. Intracerebroventricular amyloid-beta antibodies reduce cerebral amyloid angiopathy and associated micro-hemorrhages in aged Tg2576 mice. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 106, 4501-4506 (2009).
- Papon, M. A., Whittington, R. A., El-Khoury, N. B., Planel, E.
- Le Freche, H., et al. Tau phosphorylation and sevoflurane anesthesia: an association to postoperative cognitive impairment. Anesthesiology. 116, 779-787 (2012).
