Abstract
zor ve çok zaman alıcı olabilir çok kalın kafatasları var balıktan otolit içermesi (kulak kemikleri) ayıklanıyor. Doğru şekilde gerçekleştirilmemesi durumunda Otolith zarar verebilir bir el ya da elektrik testere ile kafatasının üst kısmında enine dikey kesi yapma yaygın uygulama. Mersin Balıkları (Acipenseridae) çok büyük ve kalın kafatası var özellikle bir aileyiz. otolit içermesi ortaya çıkarmak için balık ventral tarafında beyin boşluğu giren yeni laboratuar yöntemi literatürde bulunan diğer otolith ekstraksiyon yöntemleri daha kolay oldu. literatürde gözden yöntemler alanı için tasarlanmış ve hızlı bir şekilde balık büyük miktarlarda işlem daha verimli edilmiştir. Presleme süresi değildir ve her örnek başarılı ekstre önemlidir, ancak bu yeni teknik, bir laboratuvar ortamında için daha uygun olacak şekilde tasarlanmıştır. bulmak ve bu tekniği kullanarak otolit kaldırma başarısı çok yüksektir ve s ödün vermeyenherhangi bir şekilde tructure. Bu alternatif bir teknik otolit ayrılması için diğer benzer balık türleri için de geçerlidir.
Introduction
Dünyada mersin (Acipenseridae) popülasyonları nedeniyle habitat kaybı, nüfus parçalanma dahil darbelere karşı bir yüzyılı aşkın bir süredir azalan ve birçok popülasyonları eyalet ve federal yasalar 1,2 ile korunur, aşırı avcılık edilmiştir. ABD ve dünya çapında yönetim kurumları restorasyonu ve kurtarma 1 için bir hedef tür olarak mersin belirledik. En mersin balığı popülasyonlarının Nüfus özellikleri (büyüme, istihdam, diyet) daha temel biyoloji ve yaşam öyküsü özellikleri 1 anlamak için çalışılmıştır. En mersin balığı popülasyonlarının koruma statüsü nedeniyle, yaş değerlendirme bireylere hiçbir fedakarlık veya zarar garanti edilir küçük tehdit toplumlarda zordur.
Yaş tahmini ve büyüme analizi amacıyla kemiksi yapıların çıkarma Sturge yaşını belirlemek için yüzgeç ışın bölümlerinin ortak bir tekniktir 3 hayranlarıyla kullanımı olmuşturpratik bir ölümcül olmayan bir yöntem haline gelmiştir, ancak tekniğin doğrulama sınırlı kalmıştır ve yaş yaşlı bireylerde (> 15 yaş) deşifre etmek çok zor olabilir 4.. Gulf Sturgeon (Acipenser oxyrinchus desoti) 5 Atlantic Sturgeon (A O. Oxyrinchus) 6, beyaz Sturgeon (A. transmontanus) 7 ve Lake Sturgeon'da yaş doğrulama kullanımları için mersin birden fazla kemik yapılarının kullanımını değerlendirmek Araştırmacılar 8 ilk marjinal göğüs yüzgeci ışın en doğru yaşı sağlanan ancak büyük bireyler için zararlı olması için bu invaziv prosedürü sonucuna varmıştır (A. fluvescens). Şu anda, başarı 9. çok yüksek bir oranı ile Kuzey Amerika mersin türler arasında ayrım yapmak otolith şekil ölçümlerini kullanarak gelişimi bulunmuyor. Kafatasının dibinde dorsal enine kesi ile Otolith kaldırma işlemine ilişkin detaylar ortak otolith ekstraction yöntemi literatürde bulundu ve açıkça Secor ve arkadaşları tarafından ayrıntılı. (1991), 10. Ancak bu yöntem, küçük ve narin ve kırmak eğiliminde olacaktır otolitlerden ile çok kalın kafatasları var mersin balığı uygulamak zordur. Literatürde bir başka yorum mersin için otolith temizleme işleminin herhangi bir diğer ayrıntılı metodolojiyi gösterir. Bu makalenin amacı detaylara ventral tarafta beyin boşluğu girerek Mersin balığı gelen otolit içermesi ayıklanması için alternatif bir yöntem oldu.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Önemli Not: nedeniyle Amerika Birleşik Devletleri'nde mersin balığı tüm türlerin korunması durumu, kazanmak ve balık laboratuvar prosedürü öncesinde elde edildi işlemek için izin verir. Tüm örnekler doğal nedenlerden dolayı post mortem kuluçkahane kaynaklardan edinilen ve standart prosedür takip bertaraf edildi.
1. Numune Hazırlama
- Herhangi bir insizyon mersin balığı yan karkas ve en yakın 1 mm kuyruk ucuna kadar burnu toplam uzunluğunu ölçmek için bir ölçüm bandı kullanarak yatıyordu önce. (Şekil 1A)
- En yakın 1 g darası alınmış ölçekte Mersin balığı karkas tartılır. herhangi bir harici etiketleri veya işaretleri ve kayıt için karkas değerlendirin.
2. Otolith Ekstraksiyon
- Vücudun (Şekil 1B) kafasını ayırmak için vücutta kafatası tabanı ve birinci dorsal scute arasında büyük bir fileto bıçağı ile dikey bir kesi yapmak. kafa, tu çıkardıktan sonrabaş rn böylece ağız (Şekil 1C) yukarı bakacak.
- Kafatası (Şekil 1D) ventral tarafı boyunca kesmek için fileto bıçağı kullanarak yumuşak ağız dokuları ve solungaçları çıkarın. Tamamen kafa (Şekil 1E) bisect kafatası tabanına burnu ucundan elektrik kemik testere ile bir kesi yapmak. Beyin boşluğu (Şekil 2A) maruz elle iki yarısı ayırın.
- Çıkarın ve beyin boşluğuna (Şekil 2B) içinde yarım daire kanalları görüntülemek için forseps ile beyin meselesi (Kırmızı kutu sol) (Kırmızı kutusunu sağ) atın.
- Forseps (Şekil 2C) ile beyin boşluğundan semisirküler kanal kıkırdak çıkarın. Dikkatle forseps ucu ile semisirküler kanal kıkırdak delinme ve (Şekil 2D) Otolith çıkarın. Semisirküler kanal kıkırdağından forseps ile Otolith (kıkırdak içindeki sert kemik yapısı) çıkarın (Şekil 2E)
- Kafatasının diğer yarısından Otolith çıkarmak için 2.4 - Tekrar 2.3 adımları.
- Herhangi bir kıkırdak kaldırmak için 5 saniye boyunca% 92 Etanol otolit içermesi batırın. Açık bir 25 mL sintilasyon şişesine yer otolitler 24 saat boyunca kurumaya.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
dünya çapında Mersin balığı yetişkin boyutu büyük ölçüde değişir ama otolitlerden yeri tutarlıdır. Keskin bir fileto bıçağı kullanımı kolay Şekil 1D gösterilen ağız yumuşak doku kaldırmak bulunmuştur. Bir elektrikli kemik testere Şekil 1E beyin boşluğuna maruz lateral insizyon için tercih edilen bir araçtır. Ancak, kafatasının orta hat bisecting dikkat aksi otolitler Bu işlem sırasında ezilmiş olabilir ihtiyaç duyulmaktadır. Bu işlem, daha sonra doğru bir şekilde gerçekleştirilirse, beyin oyuğu Şekil 2A'da gösterildiği gibi, otolitlerden zarar vermeden eşit maruz kalacaktır. Beynin kolayca Şekil 2B'de ve Şekil 2C'de gösterildiği gibi kolayca beyin boşluğunun tabanında bulunan Otolith içeren yarı dairesel kanal kıkırdak bulgu olarak forsepsin kaldırılır. semisirküler kanal bulunan kıkırdak EASily Şekil 2D'de görüldüğü gibi forseps bir çift Otolith çıkarıldı.
Bu prosedür başarıyla mersin balığı Otolith kaldırılmasını gösterir ve balığın yaşam tarihinin daha kantitatif analiz bir ön adımdır. Sonuç başarı yapısını bozmadan Otolith çıkarılmasıyla gauged olabilir. Yaş tayini ve büyüme oranları kaldırıldı otolitlerden kullanımı ile değerlendirilebilir iki ölçümlerdir. türler farklılaşması için şekil analizi otolitlerden geliştirilmiş olabilir başka ölçülebilir bir ölçümdür.
Otolith Kaldırma için Sturgeon Karkas Şekil 1. Yerleştirme. Ölçülmesine ve Tartı (A) Mersin Karkas Yandan Görünüm, (B) Dikey Kesi Bo gelen Sturgeon Başkanı Ayrı etmek dy, (C) Başkanı Ağız ve ventral Side, (D) Kafatası ventral Side, (E) burnu Kafatası Base Ucundan Lateral İnsizyon Açığa kaldırıldı Yumuşak Doku Görünüm Başkanı çevirin büyük halini görmek için tıklayınız bu rakamın.
Baş sonra Exposed Beyin Kavitenin 2. Ara Sınav otolitler çıkarmak için Şekil. (A) Beyin Boşluk, (B) Beyin Madde, semisirküler kanallar Açığa kaldırıldı Ayrı (C) Yarımdaire Kanal Kıkırdak kaldırıldı, (D) Otolith Görüntülenen ve kaldırıldı Yarım daire Canal Kıkırdak, (E) Shortnose Sturgeon Otolith dan54316 / 54316fig2large.jpg "target =" _ blank "> bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
mersin karkaslardan otolit açılan bir alternatif yöntem genel detaylı edilmiştir. Özel önem diseksiyonu sırasında otolitlerden hiçbir zararı sağlamak için eşit kafatası bisect için kafatasının orta hat üzerinde yan kesi yerleştirme için gerekli olduğuna dikkat etmek önemlidir. Kesi tamamen kafatası bisect için yeterince derin değilse otolitlerden yeri açıkça görülebilir olduğu beyin boşluğuna maruz çok zor olacaktır. tecrübesi ile, genel teknik oldukça basit ve bozulmamış bulundu varlık otolitlerden yüksek oranda yol açar. Bu yeni yöntem araştırmalar standart otolith çıkarma yöntemleri kullanarak zor olabilir mersin balığı dışındaki türler için otolit içermesi ayıklamak için alternatif bir yol sunar.
Bu yöntemin sınırlamalar alan kullanımı için değil ayarı laboratuara uygulanabilirliği vardır. karkas hazırlanması için gereken zaman toplanan örneklerin elverişli değildirzamanında bu alanda. Başka bir endişe tipik olarak nüfus düşüşleri eyalet ya da federal yasa altında korunmakta olup mersin balığı türleri üzerinde kullanılmasıdır.
Hayatta popülasyonları tutmak için gerekli olan bireyleri feda pahasına değerlendirmenin bu tür yapmak için izinleri almak için çok zordur. Ancak, ölü örnekleri doğal nedenlerden aracılığıyla kullanılabilir olduğunda bu tekniğin, aksi takdirde kullanılabilir olacağını daha fazla bilgi toplamak için kullanışlı bir yol sağlar.
Başarılı bir şekilde bu alternatif bir yöntem kullanılarak mersin gelen otolit kaldırmak için bu tekniğin önemini belirtmek önemlidir. başın dorsal bölgesinden otolit içermesi kaldırarak mevcut teknikleri hala kullanışlı ve yararlı ama mersin balığı için geçerli değildir. Beyin boşluğu ortaya çıkarmak için bu yeni tekniği kullanarak diğer alanlarda da sinir fonksiyonu ve beyin morfolojisi erişim ve uygulanabilirliğini sağlar. Bu yeni teknik yararlı olabilirÇok kalın kafatası duvarları ya da nerede otolith çıkarılması için kullanmak üzere balık sınırlı miktarda var olan balık diğer türler üzerinde kullanın.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Acknowledgments
Regis Mohawk Çevre Bölümü, Welaka National Fish Hatchery, ABD Balık ve Vahşi Yaşam Servisi Araştırmalar Birimi, Southern Illinois Üniversitesi, ABD Balık ve Vahşi Yaşam Servisi Kuzeydoğu Balıkçılık Merkezi, Sterling Caviar, California-Davis Üniversitesi, Garnizon Barajı Ulusal Fish Special thanks Bu proje için mersin balığı besleyen yardım ettikleri için kuluçka, ayılar Bluff National Fish Hatchery ve ABD Balık ve Vahşi Yaşam Servisi Panama Balıkçılık Kaynak Ofisi. Bu makalede, USGS Great Lakes Bilim Merkezinde Katkısı 2013 olduğunu.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Measuring Board | Metric meter stick is preferred | ||
| Weighing scale | |||
| Filleting Knife | |||
| Scalpel | |||
| Forceps | |||
| Sample vials | 25 ml scintillation vials work well |
References
- Auer, N. A. Conservation. Sturgeons and Paddlefish of North America. LeBreton, G. T. O., Beamish, F. W. H., McKinley, R. S. 27, Kluwer Academic Publishers. 252-276 (2004).
- Sturgeon Specialists Group, sturgeon conservation. IUCN (International Union for the Conservation of Nature). , Source: www.iucn.org (2008).
- Campana, S. E. Accuracy, precision and quality control in age determination, including a review of the use and abuse of age validation methods). Journal of Fish Biology. 59, 197-242 (2001).
- Bruch, R. M., Campana, S. E., Davis-Foust, S. L., Hansen, M. J., Janssen, J. Lake Sturgeon age validation using bomb radiocarbon and known-age fish. Transactions of the American Fisheries Society. 138, 361-372 (2009).
- Baremore, I. E., Rosati, J. D. A validated, minimally deleterious method for ageing sturgeon. Fishery Bulletin. 112, 274-282 (2014).
- Stevensen, J. T., Secor, D. H. Age determination and growth of Hudson River Atlantic sturgeon, Acipenser oxyrhynchus. Fishery Bulletin. 97, 153-166 (1999).
- Brennan, J. S., Cailliet, G. M. Comparative age-determination techniques for white sturgeon in California. Transactions of the American Fishery Society. 118, 296-310 (1989).
- Rossiter, A., Noakes, D. L. G., Beamish, F. W. H. Validation of age estimation for the lake sturgeon. Transactions of the American Fisheries Society. 124, 777-781 (1995).
- Chalupnicki, M. A., Dittman, D. E. North American Sturgeon Otolith Morphology. Copeia. , 260-266 (2016).
- Secor, D. H., Dean, J. M., Laban, E. H. Manual for otolith removal and preparation for microstructural examination. , Barach Press. Columbia, South Carolina. (1991).
