Introduction
Nematoder med sine små, men komplekse nervesystem har vist kraftige verktøy for å forstå mange aspekter av nevrobiologi, inkludert atferd. Mye av denne forskningen har fokusert på modellorganisme Caenorhabditis elegans hvor et vell av ulike atferd har blitt dissekert og analysert. Disse inkluderer mechanosensory 3, kjemotaktisk 4, thermotactic 5,6 og magnetotactic 7 påvirke parring 8,9, læring 10 og fôring atferd 11. Men andre mer fjernt beslektede nematode arter vise atferd som ikke er observert i rhabditid C. elegans eller alternativt vise flere nivåer av kompleksitet, som reiser relevante spørsmål angående deres utvikling og regulering. Ett slikt eksempel på dette kan observeres i den fjernt beslektet diplogastrid nematode Pristionchus pacificus, som viser mye mer kompleks foring blihaviors og rytmer enn det som er observert i C. elegans en. Dette er til tross for de to artene dele homologe svelget nevroner 12. Samtidig med disse ekstra fôring atferd, P. pacificus viser også en utvidet kosttilskudd utvalg, som de er ivrige rovdyr, i stand til å supplere sitt bakteriell kosthold ved også å mate på larver av andre nematoder. Heldigvis P. pacificus har blitt utviklet som en modell for komparativ og integrerende evolusjonsbiologi og derfor mange molekylære og genetiske verktøy er nå tilgjengelig. Disse inkluderer en fullt sekvensert og annotert genom 13, molekylære og genetiske verktøy, inkludert transgener 14 og CRISPR / Cas9 15,16 samt en detaljert og godt merket fylogeni 17 med over 25 nært beslektede arter, inkludert sine nyoppdagede søsterarter. I tillegg økologien i tallrike Pristionchus arter inklusive P. pacificus er vill definert med mange arter vi nå er blitt beskrevet dele en necromenic tilknytning skarabé biller, en rekke de ofte dele med andre nematode arter 18. P. pacificus gir derfor et utmerket modellsystem som å dissekere utviklingen av nye atferd og deres økologiske betydning.
For å analysere rov forings atferd i nematode arter som P. pacificus vi utviklet flere nye atferdsanalyser for enkel observasjon og kvantifisering av rov handlinger. Som P. pacificus viser en dimorphic munn struktur, som sterkt påvirker aggressiv adferd, identifisering av riktig morphotype er viktig 1,2. Den smale kjeften stenostomatous morph inneholder en enkelt sløv rygg tann og engasjerer seg ikke i noen rov fôring. Alternativt omfatter det brede kjeften eurystomatous morph en mye større klo formet rygg tann og en ekstra motstridsub-ventral tann, som sammen operere effektivt åpne skjellaget av deres byttedyr. Forholdet mellom rov eurystomatous til den ikke-rov stenostomatous formen varierer mellom Pristionchus arter og også innen P. pacificus imidlertid andelen eurystomatous munn morph i P. pacificus vill type belastning (PS312) er vanligvis 70-90% 2. I tillegg kan de munn skjema forholdene varierer avhengig av ulike miljøpåvirkninger (begge kjent, inkludert sult og noen små molekyl signalering samt ukjente faktorer), og dermed korrekt identifisering og isolering av rov eurystomatous munnen form er avgjørende for vellykkede rov analyser.
Ved siden av beskrivelsen av rov munnen skjemaet har vi utviklet en "bite analysen" for direkte observasjon og kvantifisering av rov atferd inkludert biting, drap og fôring hendelser. Her byttedyr nematoder er isolert gjennom filtering av nylig sultet kulturer og utsatt for rov voksen P. pacificus, som er observert sammen over et kort tidsrom. I tillegg har vi også utviklet en høy gjennomstrømming "liket analysen" for å legge til rette for rask screening av aggressiv adferd gjennom indirekte observasjon av rov hendelser. Dette utnyttet nærvær av larver likene som et verktøy for å screene for predasjon. Begge analysene gir enkel og svært repeterbare metoder for å observere og måle aggressiv adferd i nematode arter som P. pacificus.
Protocol
1. Mouth skjema fenotyping
- Mouth Form Identifikasjon på Agarose Pads
Merk: For å visualisere de nematode munnen morphs, immobilisere ormer med en mild bedøvelse behandling på agarose pads og observere som følger.- Vokse og opprettholde nematode kulturer som P. pacificus på 6 cm standard nematode vekst medie (NGM) plater og beiter på en bakteriell plen av E. coli OP50 19.
- Gjør agarose pads ved først å tilsette 0,06 g agarose til 3 ml H 2 O i en 15 ml tube å lage 3 ml 2% agarose løsning. Dette kan lagres i inntil ett år ved 4 ° C.
- Bland og smelte agarose grundig i en mikrobølgeovn eller alternativt bruke en varmeblokk satt til> 88 ° C.
- Når fullstendig smeltet, tilsett 10 ul av en 10% natriumazid løsning på agarose og bland godt. FORSIKTIG: Tørr natriumazid er reaktive og alle former er giftig.
- Ved hjelp av en 1 mlmikropipette, plassere en dråpe av ikke mindre enn 300 ul av den flytende agarose azidet blandingen på midten av et standard mikroskop-objektglass.
- Før den kjøles agar, raskt sted en andre objektglass på toppen av fallet for å flate ut agarose som danner en pute ved avkjøling. Gjenta for så mange pads som er nødvendig.
- Like før bruk, skrelle hverandre glass objektglass ved å skyve dem av hverandre. Merk: Hvis agarose pads er forberedt for langt i forveien kan de være svært tørr og kan skade nematoder.
- For å overføre ormer til anestesi agarose pads, plassere en dråpe M9 buffer (2-3 mL) på midten av puten. Plukk 2-3 ung P. Pacificus voksne til slipp av M9 før du plasserer et dekkglass forsiktig over puten. P. pacificus nematoder blir immobilisert på agarose og klar til å visualisere.
- Overfør objektglass inneholdende en bedøvet ormen til en passende mikroskop ennd observere henhold 63X Nomarski optikk. Kategorisere morph identiteter basert på følgende funksjoner: tilstedeværelsen av en ekstra sub-ventral tann, forstørret rygg tann og bred munn åpning er et tegn på en eurystomatous munn morph dyr, mens tilstedeværelsen av en enkelt rygg tann og smalere munn åpning indikerer en stenostomatous dyr (figur 1).
Bemerk: For å opprettholde helsen til dyr, bør ormer opprettholdes på agar-pad for ikke mer enn 5 min. - Etter munnen morph identifikasjon, gjenopprette enten eurystomatous eller stenostomatous nematoder som kreves ved å fjerne dekkglass ved å skyve den av agarose puten. Nøye plukke de valgte dyr fra agarose puten (E. coli OP50 kan brukes på pick for å gjøre det mer klebrig) på friske NGM plater. Tillate utvinning fra narkosen til normal motile atferd har gjenopptatt på hvilke dyr er klare for videre rov analyser.
<li> Rapid Mouth fenotyping - Plasser nematoder på standard NGM plater med en bakteriell plen av E. coli OP50 på mikroskopet visningsområde.
- Oppdage forskjeller i munnen størrelse og bredde. Merk: På dette forstørrelse ingen tann lignende strukturer er observer derfor munn morph identifikasjon er utelukkende basert på brede munn versus smale munn.
Merk: Alternativt, med mer erfaring, munn skjema typen kan analyseres uten behov for noen bedøvelse behandling via et stereomikroskop med høy forstørrelse (150X).
2. Bite analyse
Merk: Bitende analyser tillater en detaljert rov atferdsanalyse.
- Vokse og opprettholde nematode kulturer på standard NGM plater (6 cm) og lever på en bakteriell plen av E. coli OP50 19.
- Gjør analyseplatene ved å dyrke en stor mengde av utvalgte byttedyr larver av rundmark som C. elegans eller alternatively en passende økologisk relevant byttedyr. Merk: Voksen C. elegans er for store til å være egnet byttedyr, så det er viktig å bruke larvestadiet.
- Oppretthold C. elegans eller andre potensielle byttedyr på standard NGM plater og fôr på en bakteriell plen av E. coli OP50 til befolkningen er fersk sultet, noe som resulterer i en overflod av unge L1 larver.
Merk: Tid for sult er avhengig av en rekke miljømessige og eksperimentelle faktorer, herunder antall av nematoder som brukes til å starte kulturen, mengden av E. coli OP50 lagt, og omgivelsestemperaturen.
- Oppretthold C. elegans eller andre potensielle byttedyr på standard NGM plater og fôr på en bakteriell plen av E. coli OP50 til befolkningen er fersk sultet, noe som resulterer i en overflod av unge L1 larver.
- Vask fire eller flere ferske sultet byttedyr plater med M9 og passerer ormen løsning gjennom to 20 mikrometer filtre for å fjerne alle store dyr og eventuelle gjenværende egg før samlingen i en 15 ml tube. Bare små larver bør forbli i oppløsningen.
- For å danne et larve pellet sentrifuger filtrert byttedyr ved 377 xg i 1 min.
- Skjerm rov nematoder for ønsket munnen morph (protokoll 1).
- Ved hjelp av standard orm plukke teknikker og en lett stereo 19, overføre korrekt klassifisert rovdyr videre til analyseplaten. Pass på å overføre så lite OP50 bakterier som mulig til analyseplaten ved overføring rovdyr for å minimere bakteriell forurensning. Vent 15 minutter slik at ormen å gjenopprette fra stress for å bli overført og se etter villtype bevegelige atferd for å sikre ormer ikke har blitt skadet av overføringen.
Merk: Det er ikke nødvendig å sulte P. pacificus, som de er svært effektive rovdyr av andre larver av rundmark selv mens godt matet på bakterier. - Etter utvinning, observere rovdyr ved hjelp av en lett stereo i 10 min. Med dette utstyret, observere og karakterisere ulike fôrings arrangementer som biting, preget av rovdyr begrense bevegelsen av byttedyr, drepe, hvor av en åpning av byttedyr hårstråene blir oppdaget; og fôring, kategorisert etter en observerbar forbruk av byttedyr innvoller (figur 2A, B og Film 1).
- Gjenta analysen ved screening og observere minst 10 individuelle rov nematoder for å sikre nøyaktighet.
Merk: 3 mL av ren orm pellet på standard analyseplatene inneholde> 3000 byttedyr larver. Dette er tilstrekkelig til å generere hyppig kontakt mellom rovdyr og byttedyr.
3. Corpse analyse
Merk: Corpse analyser rette for en raskere kvantifisering av aggressiv adferd.
- Vokse og opprettholde nematode kulturer på standard NGM plater og lever på en bakteriell lawn av E. coli OP50 19. Generer triplikater av analyseplatene er nevnt tidligere (protokoll 2/1 til 2/5).
- Skjerm rov nematoder for ønsket munnen morph som beskrevet i protokollen 1. Ved hjelp av standard orm plukke teknikker og en lys stereooverføring 5 rov nematoder med den nødvendige munnen morph til hver analyse plate. La rovdyr sammen med byttedyr for 2 timer.
- Etter 2 timer skjerm analyseplaten for tilstedeværelse av tømt lik (figur 2B og C). Identifisere likene av fravær av bevegeligheten sammen med åpenbare morfologiske defekter inkludert lekker innmaten eller mangler ormen fragmenter.
4. Analyse av Faryngeal og tann bevegelse
- Vokse og opprettholde nematode kulturer på standard NGM plater og lever på en bakteriell plen av E. coli OP50 19. Generer analyseplater som nevnt tidligere (protokoll 02/01 til 02/05). Hvis standard 6 cmNGM plater passer ikke mellom objektiv og mikroskop scenen, bruke lokket på små 35 mm petriskåler som inneholder 2 ml NGM som et egnet alternativ.
- Skjerm rov nematoder for ønsket munnen morph som beskrevet i protokollen 1. Bruk standard orm plukke teknikker og en lett stereomikroskop, overføre en enkelt korrekt klassifisert predator videre til analyseplaten. Vent 15 minutter slik at ormen å gjenopprette fra stress for å bli overført.
- Observer rovdyr på et mikroskop ved 40 - 63X Normaski, med et høyhastighetskamera (filmer 2 og 3). Record svelget pumping og tann bevegelse over 15 sek, 50 Hz i minst 20 dyr for å sikre nøyaktig kvantifisering. Replay registrert filmer på ønsket hastighet for å telle enkeltpumper og tann hendelser.
Merk: Pumping er observert i corpus, ligger på midten i svelget, mens tannen bevegelse er detekterbar i munningsåpningen og er bare observert fra dorsal tann.
Representative Results
Etter vellykket identifisering av den aktuelle munnen morph i P. pacificus, klare forskjeller mellom eurystomatous og stenostomatous dyr kan oppdages (figur 3) med bare eurystomatous dyr engasjerende i å drepe atferd. I stenostomatous dyr denne oppførselen synes å være undertrykt helt. Videre forskjeller i tannen aktivitet og svelget pumping av eurystomatous dyr på bakterier og byttedyr (figur 4 og filmer 2 og 3) er også tydelig. Mens rov foring, blir pumpehastigheten reduseres til under den som ble observert i løpet av bakteriell foring og tannen er bevegelse i et en til en forhold med svelget pumping. Dette er potensielt en indikasjon på viktige reguleringsmekanismer modulerende atferds respons på ulik diett.
s / ftp_upload / 54404 / 54404fig1.jpg "/>
Figur 1. P. pacificus har en Mouth dimorphism som påvirker Fôring Behavior. (A) eurystomatous munn formen er i stand til predasjon og har en bred munn åpning med en stor klo formet rygg tann (false-farget rødt) og (B) en stor motstander krok formet sub-ventral tann (false-farget blå). (C) Den stenostomatous munnen form er bare i stand til å mate på bakterier og har et smalere munn åpning med en flint formet rygg tann (false-farget rødt) og (D) ingen under ventral tann (*). Normaski bilder er 63X og skala bar representerer 10 mikrometer. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 3. Resultater av Bite og Corpse Analyser på C. elegans Prey. (A) Biting oppførsel er bare tydelig i eurystomatous munnen skjema med denne oppførselen ikke vises i stenostomatous dyr. Feil stolpe representerer standardavvik på 10 replikater. (B) Samtidig med ingen biting oppførsel tydelig fra stenostomatous dyr, liket analyser også avsløre skrotter bare på analyseplater av eurystomatous dyr. Feil stolpe representerer standardavvik av 5 replikater. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 4. Eurystomatous pumpehastighet og tann bevegelser under rov Feeding. Tooth bevegelsen er bare observert mens eurystomatous dyr er engasjert i rov fôring. Dette sammenfaller også med en reduksjon i svelget pumping. Feil stolpe representerer standardavvik på 10 replikater. href = "https://www.jove.com/files/ftp_upload/54404/54404fig4large.jpg" target = "_ blank"> Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
ad / 54404 / 54404movie3.jpg "/>
Movie 3. Zoomet inn høyhastighetskamera av tann bevegelse under predasjon. (Høyreklikk for å laste ned).
Discussion
Nematoder gi et kraftig system for å forstå nevrobiologi og atferd med C. elegans så langt å være det viktigste verktøyet. Men, mange nematode arter inkludert P. Pacificus vise atferd som er fraværende eller varierer i kompleksitet fra modellorganisme C. elegans og derfor øke fascinerende spørsmål om utviklingen og reguleringen av disse atferd. En slik ytterligere oppførsel finnes i mange andre nematoder arter, inkludert P. pacificus er evnen til å supplere sine bakteriell diett ved å delta i rov fôring 1, 20. Derfor har vi utviklet og beskrevet en detaljert protokoll for enkel og rask karakterisering av disse tidligere unanalyzed rov atferd i nematoder.
For det første har vi gitt metoder for å screene for variasjoner i fôring apparat i nematode munnen. Identifiseringen av riktig munnen typen er et viktig første sTep for vellykkede predasjon analyser som, i hvert fall innenfor Pristionchus slekten bare eurystomatous dyr er i stand til rov fôring. Det er best å identifisere munn forvandles med den "raske munn fenotyping" protokoll beskrevet i protokollen 1,2 da denne metoden er mye mindre invasiv og det er derfor mindre sannsynlig at rov oppførsel kan bli forstyrret. Imidlertid er det anbefalt å først bli kjent med de forskjellige munnen strukturer ved identifikasjon med bedøvede dyr på agar pads (protokoll 1.1).
Etter identifisering av den ønskede munnen morph, har vi beskrevet to analyser for å kvantifisere rov fôring. Dette er en rask, høy gjennomstrømning "liket assay" (protokoll 3) og en mer tidkrevende, men mer dyptgående adferdsanalyse gjennom "bite analysen" (protokoll 2). Begge disse protokollene er meget fleksible slik at flere modifikasjoner for å optimalisere analysene avhengig av experimental krav. For bite analyser ved hjelp av P. Pacificus rovdyr på C. elegans byttedyr, observasjoner av rov atferds interaksjoner for et tidsvindu på 10 minutter var nok til å kvantifisere en betydelig mengde biter sammen med andre fôring hendelser. For "liket analyser" igjen utnytte P. Pacificus rovdyr på C. elegans byttedyr, 5 rovdyr i 2 timer produsert lett kvantifiserbare og konsistente liket tall som åpner for rask atferdsanalyse. Imidlertid bør det bemerkes forskjellige arter av rovfisk nematode trekk ved ulike hastigheter, spise på ulike priser og generelt viser et stort mangfold i andre atferd 1. I tillegg kan ulike byttedyr også spises på ulike priser for lignende grunner. Det anbefales derfor å optimalisere analyser basert på de nematode arter testet både som rovdyr og byttedyr, og også for eventuelle forskjeller i miljøforhold. Under både "bite" og "korpse "analyser er det avgjørende at både byttedyr og rovdyr er sunt, som stresset eller skadet rovdyr vil ikke drepe effektivt. I tillegg ferske analyseplatene er viktig som eldre plater kan bli tørket ut som negativt påvirker helsen til nematoder som fører til feilaktige analyser. det er også å håpe at fremtidige gjentakelser av disse rov analyser vil kunne dra nytte av nylige fremskritt innen teknologi for å automatisere mye av analysen som er gjort for å undersøke mange atferd observert i C. elegans 21, 22. Foreløpig problemer er sannsynlig å oppstå i nematoder som P. pacificus som de dukker opp mye mer sensitiv for berøring, noe som gjør isolasjon og immobilisering i microfluidic kamre sannsynlig å oppheve rov fôring. Vinne dette kan vise seg utfordrende, men ville lette enkelte nematoder å bli vist for subtil rov atferd.
Endelig har vi også gitt metoder for undersøke nematode mateapparatet selv tilrettelegge sammenligninger mellom rov og bakterie fôring modusene ved å tallfeste tann og svelget pumpekinetikk ved hjelp av et høyhastighetskamera (protokoll 4). Kvantifisering av svelget pumpeprisene i C. elegans har vært benyttet for å overvåke mating i mange år 23, derimot, C. elegans mangler noen form for munnen denticle og mangler også rov atferd. Gjennom å kombinere kvantifisering av svelget pumping med at av tann aktivitet, kan noen innervasjon av tennene som er spesifikke for predasjon også observeres. På grunn av forstørrelsen som kreves for å observere den tann bevegelse dyrene ofte beveger seg ut av brennplanet, og dermed er det vanligvis bare mulig å observere den tann for korte tidsvinduer. I tillegg, i motsetning til C. elegans, svelget av P. pacificus ikke kontinuerlig pumpe, snarere det engasjerer seg i staver av pumping og mating. Derfor, for nøyaktig svelget pumping priser mens fôring skal fastsettes, er det viktig å ta opp 15 sekunder av kontinuerlig fôring.
Disse metodene som presenteres her gir derfor den første rammeverk for å undersøke rov atferd i nematode systemer. Videre kan de også være tilpasningsdyktig for bruk i å undersøke andre interaksjoner innen nematode økosystemet inkludert påvirkning av tillegg økologisk relevante organismer på predasjon inkludert mikroorganismer, sopp og midd . Dermed gir de et middel til å dissekere hvordan disse rov atferd er regulert, hvordan de kan ha utviklet seg, og også deres økologiske betydning.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Nylon net filters (20 µm) | Merck Millipore Ltd | NY2004700 | Used to filter worms just leaving larvae for use as prey. |
| PP Funnel for filter (54 mm) | Duran | 292215003 | Used to filter worms just leaving larvae for use as prey. |
| Small petri dish (35/10 mm) | Greiner Bio-One | 627102 | For imaging on High speed camera |
| Zeiss SteREO Discovery V12 | For mouth form identificaton | ||
| Axio-Imager A1 | For mouth form identificaton | ||
| Glass Slides | Roth | H869 | |
| Cover Slips | Roth | 657 | |
| Motion Scope M3 Highspeed camera | IDT | High speed camera | |
| Video zoom 44 ENG 1/2" 0.5X to 2.4X | Zeis | 452984-0000-000 | High speed camera zoom |
| Nematode Growth Medium (NGM) ingredients: | |||
| Agar | Roth | 5210.2 | CAS-Nr. 9002-18-0 |
| Sodium chloride (NaCl) | Roth | 3957 | CAS-Nr. 7647-14-5 |
| Bacto Tryptone | BD | 211699 | Lot 4316614 |
| Calcium chloride dihydrate (CaCl2) | Sigma-Aldrich | C3306 | CAS-Nr. 10035-04-8 |
| Cholesterol from lanolin | Sigma-Aldrich | F 26732 00050 | CAS-Nr. 57-88-5 |
| Magnesium sulfate heptahydrate (MgSO4) | Merck | 1,058,861,000 | CAS-Nr. 10034-99-8 |
| Potassium dihydrogen phosphate (KH2PO4) | ACROS organics | 271080025 | CAS-Nr. 7778-77-0 |
| 6 cm petri dish | Greiner Bio-One | 628102 | |
| 3.5 cm petri dish | Greiner Bio-One | 627102 | |
| M9 ingredients: | |||
| Potassium dihydrogen phosphate (KH2PO4) | ACROS organics | 271080025 | CAS-Nr. 7778-77-0 |
| Sodium hydrogen phosphate heptahydrate (NaHPO4) | Sigma-Aldrich | S9390-500G-D | CAS-Nr. 7782-85-6 |
| Sodium chloride (NaCl) | Roth | 3957 | CAS-Nr. 7647-14-5 |
References
- Wilecki, M., Lightfoot, J. W., Susoy, V., Sommer, R. J. Predatory feeding behaviour in Pristionchus nematodes is dependent on phenotypic plasticity and induced by serotonin. J Exp Biol. 218 (Pt 9), 1306-1313 (2015).
- Ragsdale, E. J., Muller, M. R., Rodelsperger, C., Sommer, R. J. A Developmental Switch Coupled to the Evolution of Plasticity Acts through a Sulfatase. Cell. 155 (4), 922-933 (2013).
- Goodman, M. B. Mechanosensation. WormBook. , 1-14 (2006).
- Rankin, C. H. Nematode behavior: the taste of success, the smell of danger! Curr Biol. 16 (3), R89-R91 (2006).
- Beverly, M., Anbil, S., Sengupta, P. Degeneracy and neuromodulation among thermosensory neurons contribute to robust thermosensory behaviors in Caenorhabditis elegans. J Neurosci. 31 (32), 11718-11727 (2011).
- Kimata, T., Sasakura, H., Ohnishi, N., Nishio, N., Mori, I. Thermotaxis of C. elegans as a model for temperature perception, neural information processing and neural plasticity. Worm. 1 (1), 31-41 (2012).
- Vidal-Gadea, A., et al. Magnetosensitive neurons mediate geomagnetic orientation in Caenorhabditis elegans. Elife. 4, (2015).
- Chute, C. D., Srinivasan, J. Chemical mating cues in C. elegans. Semin Cell Dev Biol. 33, 18-24 (2014).
- Sherlekar, A. L., Lints, R. Nematode Tango Milonguero - the C. elegans male's search for the hermaphrodite vulva. Semin Cell Dev Biol. 33, 34-41 (2014).
- Sasakura, H., Mori, I. Behavioral plasticity, learning, and memory in C. elegans. Curr Opin Neurobiol. 23 (1), 92-99 (2013).
- Avery, L., You, Y. J. C. elegans feeding. WormBook. , 1-23 (2012).
- Bumbarger, D. J., Riebesell, M., Rodelsperger, C., Sommer, R. J. System-wide Rewiring Underlies Behavioral Differences in Predatory and Bacterial-Feeding Nematodes. Cell. 152 (1-2), 109-119 (2013).
- Dieterich, C., et al. The Pristionchus pacificus genome provides a unique perspective on nematode lifestyle and parasitism. Nature Genetics. 40 (10), 1193-1198 (2008).
- Schlager, B., Wang, X. Y., Braach, G., Sommer, R. J. Molecular Cloning of a Dominant Roller Mutant and Establishment of DNA-Mediated Transformation in the Nematode Pristionchus pacificus. Genesis. 47 (5), 300-304 (2009).
- Witte, H., et al. Gene inactivation using the CRISPR/Cas9 system in the nematode Pristionchus pacificus. Dev Genes Evol. 225 (1), 55-62 (2015).
- Lo, T. W., et al. Precise and Heritable Genome Editing in Evolutionarily Diverse Nematodes Using TALENs and CRISPR/Cas9 to Engineer Insertions and Deletions. Genetics. 195 (2), 331-348 (2013).
- Sommer, R. J., McGaughran, A. The nematode Pristionchus pacificus as a model system for integrative studies in evolutionary biology. Molecular Ecology. 22 (9), 2380-2393 (2013).
- Herrmann, M., et al. The nematode Pristionchus pacificus (Nematoda : Diplogastridae) is associated with the oriental beetle Exomala orientalis (Coleoptera:Scarabaeidae) in Japan. Zoological Science. 24 (9), 883-889 (2007).
- Chaudhuri, J., Parihar, M., Pires-daSilva, A. An Introduction to Worm Lab: from Culturing Worms to Mutagenesis. J Vis Exp. (47), e2293 (2011).
- Serobyan, V., Ragsdale, E. J., Sommer, R. J. Adaptive value of a predatory mouth-form in a dimorphic nematode. Proc. R. Soc. B Biol. Sci. 281, 20141334 (2014).
- Albrecht, D. R., Bargmann, C. I. High-content behavioral analysis of Caenorhabditis elegans in precise spatiotemporal chemical environments. Nat Methods. 8 (7), 599-605 (2011).
- Yeminin, E., Jucikas, T., Grundy, L. J., Brown, A. E., Schafer, W. R. A database of Caenorhabditis elegans behavioral phenotypes. Nat Methods. 9 (10), 877-879 (2013).
- Raizen, D. M., Lee, R. Y. N., Avery, L. Interacting Genes Required for Pharyngeal Excitation by Motor Neuron MC in Caenorhabditis elegans. Genetics. 141 (4), 1365-1382 (1995).
