Summary
ويتجلى بروتوكول للحد من التغاير المكانية إشارات أيون في مطياف الكتلة MALDI من خلال تنظيم درجة حرارة الركيزة أثناء عمليات تجفيف العينة.
Protocol
ملاحظة: تم تطوير هذا البروتوكول للحد من عدم التجانس المكاني للمالتوتريوز والبراديكينين جزء (1-7) التي أعدت مع أسلوب المجفف قطرة. يتكون البروتوكول من ثلاث خطوات رئيسية، بما في ذلك إعداد وشروط مسبقة، عينة ترسب والتجفيف، وتحليل البيانات مطياف الكتلة. وترد الإجراءات وصفها في مزيد من التفاصيل أدناه:
1. إعداد وشروط مسبقة
- تنظيف لوحة عينة
- ارتداء قفازات النتريل وغسل اليدين لوحة عينة بلطف مع المنظفات والمقطر، منزوع الأيونات الماء (أحواض دبي الجافة العالمية).
- شطف لوحة عينة مع الميثانول (MeOH) وأحواض دبي الجافة العالمية.
- إدراج لوحة عينة في مل دورق 600 وملء مع أحواض دبي الجافة العالمية.
- يصوتن لوحة عينة في أحواض دبي الجافة العالمية لمدة 15 دقيقة في حمام بالموجات فوق الصوتية (200 واط، 40 كيلو هرتز).
- إزالة أحواض دبي الجافة العالمية من الدورق وملء الكأس مع MeOH.
- يصوتن لوحة عينة في MeOH لمدة 15 دقيقة في حمام بالموجات فوق الصوتية (200 واط، 40 كيلو هرتز).
- ينفخون قطرات المذيبات على لوحة مع غاز النيتروجين والحفاظ على لوحة عينة جافة قبل عينة الترسيب.
- تنظم غرفة التجفيف درجة الحرارة
ملاحظة: إن غرفة التجفيف هو 35 × 20 × 45 سم 3 (العرض × العمق × الارتفاع) غرفة الاكريليك ويبين الشكل 1 صورة من هذا النظام التجفيف. يتم إزالة الغرفة مع غاز النيتروجين درجة حرارة الغرفة من خلال مقياس الجريان الغاز بمعدل تدفق مستمر للحفاظ على انخفاض النسبية الرطوبة حالة رصدها من قبل الرطوبة معايرة مثبتة داخل غرفة التجفيف. ويستخدم كتلة قاعدة من النحاس في غرفة التجفيف مجهزة ثابت دائري درجة حرارة الماء مبرمجة لاستيعاب لوحات عينة الفولاذ المقاوم للصدأ. كتلة قاعدة النحاس قادرة على تنظيم درجة حرارة لوحة عينة 5-25 درجة مئوية. ويتم رصد درجات الحرارة من الهواء، كتلة قاعدة من النحاس، ولوحة عينة من K- نوع المزدوجات الحرارية.- فتح الباب ووضع بسرعة لوحة العينة على النحاسكتلة قاعدة ثم أغلق الباب.
- ضبط يدويا الجريان الغاز لضبط معدل تدفق النيتروجين إلى 10 قدم مكعب في الساعة (SCFH).
- مراقبة الرطوبة النسبية في غرفة التجفيف من قبل الرطوبة وتهذيب الجريان الغاز لضمان الرطوبة النسبية هي دائما أقل من 25٪.
- رصد درجات الحرارة من لوحة عينة من K- نوع المزدوجات الحرارية وضبط درجة الحرارة شكل دائري المياه يدويا حتى تصل لوحة عينة 5 درجة مئوية لمدة التجربة أو درجة حرارة الغرفة (25 درجة مئوية) من أجل السيطرة.
ملاحظة: من أجل تحقيق الاستقرار في لوحة العينة عند درجة حرارة تصميم، وعادة ما ضبط درجة الحرارة شكل دائري المياه 0-5 درجة مئوية أقل من عينة تصميم. على سبيل المثال، للحفاظ على 5 درجات مئوية في لوحة عينة، وتحديد درجة الحرارة في شكل دائري المياه في حدود 0-2 درجة مئوية. للحفاظ على لوحة العينة في درجة حرارة 25 درجة مئوية، وتحديد درجة الحرارة في شكل دائري المياه في حدود 23 إلى 25 درجة مئوية. - ضمان وصلت درجات الحرارة المطلوبة والرطوبة النسبية (الجدول 1) قبل عينة الترسيب.
ملاحظة: يتم عرض جميع المعلمات وكذلك القيم محيطهم لعمليات التجفيف مع مختلف درجات الحرارة عينة لوحة في الجدول 1.
ملاحظة: في انخفاض درجة حرارة العينة لوحة، قد يحدث تكثف الماء على لوحة عينة إذا كان باب الغرفة مفتوحا لفترة طويلة. في حالة حدوث تكاثف المياه، ويغلق الباب ولا إيداع أي عينة على ذلك حتى يتم تجفيفها تكاثف المياه.
- إعداد مصفوفة وتحليلها حلول
- إعداد مصفوفة حلول
- إعداد 0.1 حل M ثاب مع 50٪ الأسيتونتريل (إيه سي): 50٪ أحواض دبي الجافة العالمية محلول مائي.
- إعداد التحاليل
- إعداد 10 -4 M حل مالتوتريوز مع أحواض دبي الجافة العالمية.
- إعداد 10 -5 M البراديكينين جزء (1-7) حل في 50٪ الأسيتونتريل(إيه سي): 50٪ أحواض دبي الجافة العالمية محلول مائي.
- إعداد مصفوفة حلول
2. ترسب العينة والتجفيف
- بريمكس 0.25 ميكرولتر من 0.1 M حل ثاب و 0.25 ميكرولتر من 10 -4 M مالتوتريوز أو 10 حلول في أنبوب microcentrifuge -5 M البراديكينين جزء (1-7).
- دوامة حل مختلط لمدة 3 ثانية.
- أجهزة الطرد المركزي في حل مختلط لمدة 2 ثانية (2000 x ج) لجمع الحل في الجزء السفلي من أنبوب الطرد المركزي.
- فتح باب غرفة التجفيف، بعناية إيداع 0.1 ميكرولتر من الحل على طبق من ذهب العينة مع ماصة وإغلاق الباب على الفور.
- انتظر الحبرية عينة لتجف.
. ملاحظة: تجفيف مرات عادة لاحظت مع مختلف درجات الحرارة عينة لوحة مدرجة في الجدول (1) لدرجة حرارة العينة لوحة من 5 درجات مئوية، ومتوسط وقت التجفيف هو 800 إلى 1000 ثانية؛ لدرجة حرارة العينة لوحة من 25 درجة مئوية، ومتوسط وقت التجفيف هو 100-150 قالمفوضية الأوروبية. - بعد التجفيف، وفتح باب غرفة التجفيف.
- ضبط درجة الحرارة شكل دائري المياه إلى درجة حرارة الغرفة (25 درجة مئوية).
ملاحظة: تخطي هذه الخطوة إذا بقيت لوحة عينة باستمرار في درجة حرارة الغرفة (25 درجة مئوية) أثناء عملية التجفيف. - بعد العينة تعود درجة الحرارة لوحة لدرجة حرارة الغرفة (25 درجة مئوية)، وإزالة لوحة عينة من غرفة التجفيف.
- دراسة مورفولوجية العينة تحت مجهر تشريحي 5X وأخذ لقطة صورة مشرق الميدان.
ملاحظة: إذا لم يكن يتوقع مثل الأشكال التضاريسية وضوح الشمس، فمن الضروري إعداد نموذج جديد مع نفس الإجراء. وتظهر الأشكال التضاريسية الكريستال نموذجية في لوحات العلوي من الشكل 2.
ملاحظة: في الحالات مع انخفاض درجات الحرارة لوحة عينة، مثل 5 درجات مئوية، فمن المهم أن الاحماء لوحة العينة إلى درجة حرارة الغرفة قبل إخراجها من غرفة التجفيف. عند إيداع العينات، لا تبقي لمحلول خلطن في غيض من ماصة أكثر من 10 ثانية. لا تستخدم الحل خلط مرة أخرى بعد إيداع العينات. لوحات العليا من الشكل 2 تظهر الصور مشرق الميدان من عينات أعدت مع مختلف درجات الحرارة عينة لوحة.
تحليل 3. الطيف الكتلي البيانات
- الطيف الكتلي الحصول على البيانات
ملاحظة: بعد التحضير، ويمكن تحليل العينة باستخدام مطياف التصوير كتلة. في الدراسة الحالية، وتجرى التجارب MS التصوير باستخدام مزامنة TOF ثنائي القطبية المدمج مختبر (DP-TOF) مطياف التصوير كتلة 15 التجاري MALDI-TOF الطيف كتلة مع القدرة على التصوير أيضا مناسبة لمثل هذه التجارب. ويتم تشغيل مطياف الكتلة في استخراج الخطي وسائط أيون إيجابية مع تأخير استخراج الأمثل. الطاقة الحركية للأيونات 20 كيلو فولت. حجم شعاع الليزر هو 35 ميكرون في القطر على سطح العينة، وطيف من كل بقعة هو افيالغضب من 5 طلقات الليزر.- إدراج لوحة عينة في مطياف الكتلة MALDI.
- أداء التصوير تحليل الطيف الكتلي للعينة أعد الخطوات 2،1-2،9.
- حدد ذروة كتلة مميزة من قائمة الكتلة هو مبين في إطار النتيجة وانقر على "2D" إلى رسم صورة أيون ثنائي الأبعاد.
ملاحظة: للحصول على مالتوتريوز مختلطة مع ثاب، وsodiated القمم مميزة مالتوتريوز، ثاب البروتونية، وsodiated ثاب. لجزء البراديكينين (1-7) مختلطة مع ثاب، وتشمل القمم مميزة البروتونية جزء البراديكينين (1-7)، البروتونية ثاب، وsodiated ثاب. - انقر على أزرار التعديل في نافذة منبثقة لتحديد الحدود العليا والدنيا لشدة الإشارة والنقر على "حفظ الصورة". ويحدد هذا الإعداد على النقيض من الصور أيون.
ملاحظة: في كل مجموعة من الأفراد من البيانات، يتم استبعاد المناطق متصدع وبقع فارغة تظهر سطوع منخفض. - مراقبة ومقارنة أيونصورة مع صورة مشرق الميدان الذي اتخذ في خطوة 2.9.
ملاحظة: التصوير قياس الطيف الكتلي وبناء الصور من أيونات معينة يمكن أن يتحقق مع الأوراق التجارية. ويرجع ذلك إلى مجموعة متنوعة من الحصول على البيانات وبرامج التحليل، يجب على المستخدمين متابعة تعليمات البرامج المقدمة من قبل بائع أداة للحصول على صور ذات جودة عالية.
- تحليل البيانات
ملاحظة: يتم تحليل التباين العينات كميا. في هذه المظاهرة، وينقسم كل عينة إلى مناطق مركزية متعددة من قبل البرامج المطورة داخليا لتحليل التوزيع المكاني للأيونات. كما يمكن إجراء التحليل باستخدام برنامج تحليل بيانات قائمة بذاتها.- انقر على بقع فارغة والمناطق تصدع في الصورة أيون هو مبين في إطار النتيجة لإزالة المناطق غير مهم.
ملاحظة: يعرف هذا الإجراء المنطقة الأساسية للصورة أيون. - انقر على "تجد حافة" الزر للعثور على طبقة قصوى للصورة أيون.
- انقر على "خصم" لحفظ المعلومات أيون فرة من طبقة قصوى في قاعدة بيانات وإزالة هذه الطبقة من الصورة أيون في وقت واحد. وهناك خانة الاختيار تمثل هذه الطبقة قصوى تظهر في قائمة "بيانات الناتج" من النافذة نتيجة.
- كرر الخطوات من 3.2.2 و 3.2.3 حتى يتم تعريف مركز الصورة أيون.
- انقر وتحديد كافة خانات الاختيار في قائمة "بيانات الناتج" وفوق "تصدير" لتصدير البيانات.
- فتح البيانات التي تم تصديرها باستخدام برنامج جداول البيانات لحساب متوسط وفرة ايون من كل طبقة للحصول على معلومات التوزيع المكاني للأيونات.
- انقر على بقع فارغة والمناطق تصدع في الصورة أيون هو مبين في إطار النتيجة لإزالة المناطق غير مهم.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
وتظهر الصور مشرق الميدان وكذلك الصور MS من مالتوتريوز والبراديكينين جزء (1-7) التي أعدت مع درجة حرارة العينة لوحة من 5 و 25 درجة مئوية في الشكل 1. وفي حالة مالتوتريوز sodiated، في إشارة أيون أساسا بملء في محيط منطقة العينة عند إعدادها مع درجة حرارة العينة لوحة من 25 درجة مئوية. عن طريق خفض درجة حرارة العينة لوحة إلى 5 درجة مئوية، وإشارة بملء بتجانس فوق منطقة العينة بأكملها. الجانب السلبي الوحيد الملحوظ عند إعداد العينات تحت 5 ° C هو أن هناك المزيد من الشقوق من العينات التي أعدت تحت 25 درجة مئوية. تظهر الصورة أيون من جزء البراديكينين البروتونية (1-7) اتجاها مماثلا لتلك من مالتوتريوز sodiated. وتشير نتائج التصوير MS أن إعداد العينات تحت درجة حرارة أقل عينة لوحة يمكن إعادة توزيع كثيرا من الجزيئات والحد من عدم التجانس.
gether.within الصفحات = "1"> استنادا إلى النتائج التجريبية، وتشير التحليلات الإحصائية أن عدم تجانس إشارات أيون التي تم الحصول عليها تحت درجة حرارة العينة لوحة من 5 ° C يقلل بنسبة 60-80٪ بالنسبة لتلك تقل أعمارهم عن 25 درجة مئوية. ويبين الشكل 3 نتائج التحليلات الإحصائية لمالتوتريوز والبراديكينين جزء (1-7) التي أعدت تحت درجات حرارة لوحة عينة من 5 و 25 درجة مئوية. لكل عينة، ويبلغ متوسط كثافة طبيعية. في حالة مالتوتريوز sodiated مع درجة حرارة العينة لوحة من 25 درجة مئوية، وشدة إشارة في مراكز هي أقل بكثير من تلك التي مع درجة حرارة العينة لوحة من 5 درجات مئوية. يظهر نتيجة شظية البراديكينين البروتونية (1-7) أيضا أقل الاختلاف عند انخفاض درجة الحرارة لوحة عينة 25-5 درجة مئوية.
الشكل 1: صورة النظام عينة التجفيف.وتتكون غرفة التجفيف الاكريليك. يتم إزالة الغرفة مع غاز النيتروجين درجة حرارة الغرفة للحفاظ على حالة انخفاض الرطوبة النسبية. ويستخدم كتلة قاعدة النحاس مجهزة ثابت دائري درجة حرارة الماء مبرمجة لتنظيم درجة حرارة لوحات عينة الفولاذ المقاوم للصدأ. موازين الحرارة مراقبة الهواء، كتلة قاعدة من النحاس، ولوحة عينة. الرجاء النقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 2: خفض عينة النتائج في درجة الحرارة لوحة في أفضل إشارة تجانس الصور الحقل مشرق (الصور العليا) وكذلك الصور MALDI (صور أقل) من مالتوتريوز (أ) و جزء البراديكينين (1-7) (ب) التي أعدت مع ثاب تحت درجات حرارة مختلفة عينة لوحة. وMALDI وقد تم الحصول على الصور عن طريق استخراج مالتوتريوز sodiated (م / ض: 527) وتفتيت البراديكينين البروتونية (1-7) (م / ض: 757) من مجموع الطيف، على التوالي. حجم بكسل للصور ايون هو 35 ميكرون. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل (3): إشارة الاختلاف يقلل من درجة الحرارة عينة لوحة ينخفض أثناء عملية التجفيف ويتم الحصول على الصور MALDI مع مالتوتريوز (أ) و جزء البراديكينين (1-7) (ب) التي أعدت مع ثاب تحت درجات حرارة مختلفة عينة لوحة. الأحمر والأزرق البيانات تشير إلى عينة أعدت بناء على درجة حرارة العينة لوحة من 25 و 5 درجات مئوية، على التوالي. ز "الهدف =" _ فارغة "> الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
| عينة لوحة درجة الحرارة (° C) | عينة | درجة الحرارة الجوية (درجة مئوية) | الرطوبة النسبية (RH٪) | تجفيف الوقت (ثانية) |
| 5 | مالتوتريوز مع ثاب | 20 ± 3 | <25 | 800 - 1000 |
| جزء البراديكينين (1-7) مع ثاب | ||||
| 25 | مالتوتريوز مع ثاب | 25 ± 3 | 100-150 | |
| جزء البراديكينين (1-7) مع ثاب |
ضمن الصفحات = "1"> الجدول 1: معلمات التجريبية والشروط التجفيف تحت درجات حرارة مختلفة عينة لوحة.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
استنادا إلى التنبؤات النظرية السابقة، يمكن أن تدفقات الهيدروديناميكية التي يسببها درجة الحرارة داخل قطرات التغلب الخارج التدفقات الشعرية الناجمة عن تبخر المذيبات. ومما يعزز كفاءة هذا التعميم الداخلي للجزيئات عندما التدرجات درجة الحرارة في زيادة قطرة. ووفقا للنتائج المتوقعة، عندما الحفاظ على درجة حرارة العينة لوحة تحت 5 درجات مئوية مع المحافظة على المناطق المحيطة بها في درجة حرارة الغرفة، ومتوسط سرعة التدفقات إعادة تدوير داخل قطرة حوالي 4 مرات أسرع من التدفقات الشعرية الخارج. إذا كانت درجة الحرارة عينة لوحة هي نفس المناطق المحيطة بها، ويبلغ متوسط سرعة التدفقات إعادة تدوير 1،800 مرات أبطأ من تدفق شعري الخارجي. وتشير نتائج هذا الحساب أن خفض درجة الحرارة لوحة عينة خلال إعداد عينة من المفيد. يتفق الملاحظات التجريبية مع هذا التوقع.
المزاج عينة لوحةature يجب أن تسيطر على وجه التحديد في جميع أنحاء عينة إعداد العملية. ويبين الجدول 1 مرة قطرة تجفيف نموذجي مع 0.1 ميكرولتر من العينة تحت درجات حرارة مختلفة عينة لوحة. قبل إيداع محلول العينة على لوحة، فمن المهم التأكد من أن سطح العينة لوحة جافة. إذا حدث تكثيف الماء عند إعداد العينات تحت درجات حرارة منخفضة، لا ينصح ترسب محلول العينة لأن الماء المكثف يوسع مناطق العينة ويخفف الحلول. وبالتالي، فمن المهم للحفاظ على الرطوبة النسبية للغرفة التجفيف أقل من 25٪. وبالإضافة إلى ذلك، عند إعداد العينات تحت درجات حرارة منخفضة، وينبغي أن تكون لوحة عينة الدافئ حتى في درجة حرارة الغرفة قبل إخراجها من غرفة التجفيف. على الرغم من أن القصر تكثيف الماء بعد الانتهاء من عينة تبلور لا يغير من أفراد العينة، وينبغي تجنب التكثيف كبير.
استخدام الحلول الممزوجة مسبقا الطازج هو RECOMأوصت. مرة واحدة يتعرض لها حلول خلط في الهواء، قبل البلورة من الحلول عينة تحدث وحجم الكريستال النهائي والتشكل قد تتغير. لذلك، يجب أن يتم تنفيذ الإجراء pipetting لبكفاءة معقولة، وعادة في غضون 10 ثانية، لمنع قطرات عينة من مرحلة ما قبل تبلور في قمة ماصة. فمن المستحسن لمراقبة الأشكال التضاريسية العينة تحت المجهر لضمان إنتاج الأشكال التضاريسية الكريستال مناسبة قبل التحليل الطيفي الشامل. إذا كانت الأشكال التضاريسية وضوح الشمس ليست جيدة كما كان متوقعا، وتكرار عملية ترسب عند الضرورة.
وفقا لدينا دراسات النظرية والتجريبية، وإعداد العينات مع لوحة عينة درجة حرارة منخفضة المثبتة في ظل الظروف المحيطة يحسن إلى حد كبير استنساخ البيانات وجودة في MALDI-MS. تظهر التجارب اللاحقة أيضا تعزيز كبير من كثافة إشارة مع هذا الأسلوب إعداد العينات. البيانات التجريبية التي تم الحصول عليها بواسطة tطريقته تحسين كبير موثوقية MALDI أطياف الشامل لالتحليلات الكمية. بالمقارنة مع الطرق الأخرى التي تنطوي على تكوين حل أو تغيير الخاصية السطح، 8،16-18 حالة تغيير تجفيف أبسط وقابلة للتطبيق بشكل عام للحصول على عينات التقليدية. وبالتالي، يمكن لمعظم مستخدمي الطيف الكتلي الاستفادة منه في التطبيقات العادية.
تحسين MALDI تجانس إشارة مع انخفاض درجة حرارة العينة لوحة هي أيضا فعالة لبعض المصفوفات الشعبية الأخرى. على سبيل المثال، وتحسين α-سيكلودكسترين (α-CD) إشارة التجانس مع ثاب وα-cyano-4-hydroxycinnamic حمض (CHCA) مثل المصفوفة تحت درجات الحرارة المنخفضة الظروف عينة التجفيف قد ذكرت مؤخرا. 14 والعيب مع تغيير لوحة عينة درجة الحرارة بحيث تكون هذه الطريقة غير مناسب حاليا لتحليل الإنتاجية العالية نظرا لعينة طويل وقت التجفيف في ظروف درجات الحرارة المنخفضة.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Reagent | |||
| Detergent powder | Alconox | 242985 | |
| Methanol | Merck | 106009 | |
| Acetonitrile | Merck | 100003 | |
| 2,4,6-trihydroxyacetophenone (THAP) | Sigma-Aldrich | T64602 | |
| Bradykinin fragment (1-7) | Sigma-Aldrich | B1651 | |
| Maltotriose | Sigma-Aldrich | 47884 | |
| Pipette tips | Mettler Toledo | 17005091 | |
| Microcentrifuge tube | Axygen | MCT-150-C | |
| Equipment | |||
| Milli-Q water purification system | Millipore | ZMQS6VFT1 | |
| Powder-free nitrile gloves | Microflex | SU-690 | |
| 600 ml beaker | Duran | 2110648 | |
| Ultrasonic cleaner | Delta | DC300H | |
| Hygrometer | Wisewind | 5330 | |
| Nitrogen gas flowmeter | Dwyer | RMA-6-SSV | |
| K-type thermocouples | Digitron | 311-1670 | |
| Centrifuge | Select BioProducts | Force Mini | |
| Pipette | Rainin | pipet-lite XLS | |
| Stereomicroscope | Olympus | SZX16 | |
| Temperature controllable drying chamber | this lab | ||
| Synchronized dual-polarity time-of-flight imaging mass spectrometer (DP-TOF IMS) | this lab | ||
| MALDI-TOF stainless steel sample target | this lab |
References
- Karas, M., Hillenkamp, F. Laser Desorption Ionization of Proteins with Molecular Masses Exceeding 10000 Daltons. Anal. Chem. 60, 2299-2301 (1988).
- Beavis, R. C., Chait, B. T. Velocity Distributions of Intact High Mass Polypeptide Molecule Ions Produced by Matrix Assisted Laser Desorption. Chem. Phys. Lett. 181, 479-484 (1991).
- Beavis, R. C., Chaudhary, T., Chait, B. T. Alpha-Cyano-4-Hydroxycinnamic Acid as a Matrix for Matrix-Assisted Laser Desorption Mass-Spectrometry. Org. Mass Spectrom. 27, 156-158 (1992).
- Ehring, H., Karas, M., Hillenkamp, F. Role of Photoionization and Photochemistry in Ionization Processes of Organic-Molecules and Relevance for Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization Mass-Spectrometry. Org. Mass Spectrom. 27, 472-480 (1992).
- Strupat, K., Karas, M., Hillenkamp, F. 2,5-Dihydroxybenzoic Acid - a New Matrix for Laser Desorption Ionization Mass-Spectrometry. Int. J. Mass Spectrom. Ion Process. 111, 89-102 (1991).
- Hu, H., Larson, R. G. Evaporation of a Sessile Droplet on a Substrate. J. Phys. Chem. B. 106, 1334-1344 (2002).
- Deegan, R. D., et al. Capillary Flow as the Cause of Ring Stains from Dried Liquid Drops. Nature. 389, 827-829 (1997).
- Hu, J. -B., Chen, Y. -C., Urban, P. L. Coffee-Ring Effects in Laser Desorption/Ionization Mass Spectrometry. Anal. Chim. Acta. 766, 77-82 (2013).
- Schwartz, S. A., Reyzer, M. L., Caprioli, R. M. Direct Tissue Analysis Using Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization Mass Spectrometry: Practical Aspects of Sample Preparation. J. Mass Spectrom. 38, 699-708 (2003).
- Hu, H., Larson, R. G. Marangoni Effect Reverses Coffee-Ring Depositions. J. Phys. Chem. B. 110, 7090-7094 (2006).
- Bhardwaj, R., Fang, X., Attinger, D. Pattern Formation During the Evaporation of a Colloidal Nanoliter Drop: A Numerical and Experimental Study. New J. Phys. 11, 075020 (2009).
- Savino, R., Paterna, D., Favaloro, N. Buoyancy and Marangoni Effects in an Evaporating Drop. J Thermophys Heat Tr. 16, 562-574 (2002).
- Probstein, R. F. Surface Tension. in Physicochemical Hydrodynamics : An Introduction. , John Wiley & Sons. Ch. 10 305-361 (1994).
- Lai, Y. -H., et al. Reducing Spatial Heterogeneity of MALDI Samples with Marangoni Flows During Sample Preparation. J. Am. Soc. Mass Spectrom. 27, 1314-1321 (2016).
- Hsiao, C. -H., et al. Comprehensive Molecular Imaging of Photolabile Surface Samples with Synchronized Dual-Polarity Time-of-Flight Mass Spectrometry. Rapid Commun. Mass Spectrom. 25, 834-842 (2011).
- Vorm, O., Roepstorff, P., Mann, M. Improved Resolution and Very High-Sensitivity in MALDI TOF of Matrix Surfaces Made by Fast Evaporation. Anal. Chem. 66, 3281-3287 (1994).
- Gabriel, S. J., Schwarzinger, C., Schwarzinger, B., Panne, U., Weidner, S. M. Matrix Segregation as the Major Cause for Sample Inhomogeneity in MALDI Dried Droplet Spots. J. Am. Soc. Mass Spectrom. 25, 1356-1363 (2014).
- Mampallil, D., Eral, H. B., van den Ende, D., Mugele, F. Control of Evaporating Complex Fluids through Electrowetting. Soft Matter. 8, 10614-10617 (2012).
