Summary
פרוטוקול להפחתת heterogeneities המרחבי של אותות יון ספקטרומטריית MALDI ההמונית על ידי ויסות טמפרטורת מצע במהלך תהליכי ייבוש מדגם מודגם.
Protocol
הערה: פרוטוקול זה מפותח להפחתת ההטרוגניות המרחבית של שבר maltotriose ו ברדיקינין (1-7) מוכן עם שיטת רביב היבש. הפרוטוקול מורכב משלושה שלבים עיקריים, כולל הכנה נפשית מראש, בתצהיר מדגם וייבוש, וניתוח נתונים ספקטרומטריית מסה. הנהלים מתוארים ותיאר בפירוט רב יותר בהמשך:
הכנת אכשור קד 1.
- ניקוי פלייט לדוגמא
- יש להשתמש בכפפות ניטריל ויד-לשטוף את הצלחת מדגם בעדינות עם חומר ניקוי ומים deionized מזוקקים (DDW).
- יש לשטוף את הצלחת המדגם עם מתנול (MeOH) ו DDW.
- הכנס את צלחת מדגם בכוס 600 מ"ל ולמלא עם DDW.
- Sonicate צלחת מדגם DDW במשך 15 דקות באמבטיה קולית (200 ואט, 40 קילוהרץ).
- הסר DDW מן הקנקן כשמילא את הכוס MeOH.
- Sonicate הצלחת מדגם MeOH במשך 15 דקות באמבטיה קולי (200 וואט, 40 קילוהרץ).
- לפוצץ את טיפות ממס על צלחת עם גז חנקן לשמור על צלחת מדגם יבש לפני בתצהיר מדגם.
- ויסות טמפרטורת הייבוש
הערה:. תא ייבוש הוא 35 x 20 x 45 ס"מ 3 (ר x ע x ג) תא אקריליק איור 1 מציג את התמונה של מערכת ייבוש זה. החדר הוא מטוהר עם גז חנקן בטמפרטורת חדר באמצעות מד זרימת גז בקצב זרימה מתמיד כדי לשמור על מצב לחות יחסי נמוך פיקוח על ידי היגרומטר מכויל המותקן בתוך חדר הייבוש. זינוק בסיס נחושת בתא הייבוש מצויד circulator מים בטמפרטורה קבוע מתוכנת משמש כדי להתאים צלחות מדגם נירוסטה. בלוק הבסיס נחושת הוא מסוגל לווסת את טמפרטורת צלחת המדגם בין 5 ל -25 מעלות צלזיוס. הטמפרטורות של אוויר, לחסום בסיס נחושת, ואת צלחת המדגם מנוטרות על ידי צמדים מסוג K.- פתח את הדלת במהירות לשים את צלחת המדגם על הנחושתבלוק בסיס וסוגר את הדלת.
- באופן ידני את מד זרימת הגז לקבוע את קצב זרימת החנקן עד 10 רגל מעוקב סטנדרטיים לשעה (SCFH).
- לפקח על הלחות היחסית בתא הייבוש על ידי מד הלחות ו לכוונן את מד זרימת הגז על מנת להבטיח את הלחות היחסית היא תמיד מתחת ל -25%.
- לנטר את הטמפרטורה של צלחת מדגם ידי צמדים מסוג K ולהתאים את הטמפרטורה circulator מים ידני עד שהצלחת מדגם מגיע 5 מעלות צלזיוס במשך הניסוי או בטמפרטורת החדר (25 מעלות צלזיוס) במשך שליטה.
הערה: כדי לייצב את צלחת המדגם בטמפרטורה מתוכננת, טמפרטורת circulator המים מוגדרת, בדרך כלל 0 עד 5 מעלות צלזיוס נמוך יותר לדוגמה שנועד. לדוגמא, כדי לשמור על 5 מעלות צלזיוס על צלחת המדגם, הגדרת הטמפרטורה של circulator המים היא בטווח של 0 עד 2 מעלות צלזיוס; כדי לשמור על צלחת המדגם ב 25 מעלות צלזיוס, הגדרת הטמפרטורה של circulator המים היא בטווח של C 23 עד 25 °. - ודא הטמפרטורות הנדרשות ואת הלחות היחסית הם הגיעו (טבלה 1) לפני בתצהיר מדגם.
הערה: כל הפרמטרים כמו גם ערכי ההגדרה שלהם לתהליכי הייבוש עם טמפרטורות צלחת מדגם שונות מוצגים בלוח 1.
הערה: בטמפרטורת צלחת נמוכה מדגם, עיבוי מים על צלחת המדגם עלול להתרחש אם את דלת החדר פתוחה במשך זמן רב. אם מי עיבוי מתרחש, לסגור את הדלת ואל להפקיד כל מדגם עליו עד עיבוי המים התייבש.
- הכנת פתרונות מטריקס אנליטי
- הכנת פתרונות מטריקס
- כן 0.1 פתרון M Thap עם 50% אצטוניטריל (ACN): 50% בתמיסה מימית DDW.
- הכנת analytes
- כן 10 -4 פתרון M maltotriose עם DDW.
- כן 10 -5 שבר ברדיקינין M (1-7) פתרון אצטוניטריל 50%(ACN): 50% בתמיסה מימית DDW.
- הכנת פתרונות מטריקס
2. הפקדה לדוגמא ייבוש
- Premix 0.25 μl של פתרון 0.1 M Thap ו 0.25 μl של 10 -4 M maltotriose או 10 -5 M שבר ברדיקינין (1-7) פתרונות בתוך שפופרת microcentrifuge.
- פתרון וורטקס המעורב במשך 3 שניות.
- צנטריפוגה פתרון מעורב למשך 2 שניות (2,000 XG) לאסוף את הפתרון בתחתית הצינור צנטריפוגות.
- פתח את הדלת של חדר הייבוש, בזהירות להפקיד 0.1 μl של הפתרון על צלחת המדגם עם פיפטה ולסגור את הדלת מייד.
- חכה אגל המדגם להתייבש.
. הערה: פעמי הייבוש נצפו בדרך כלל עם טמפרטורות צלחת מדגם שונות מפורטות בטבלת 1 עבור טמפרטורת צלחת מדגם של 5 מעלות צלזיוס, זמן הייבוש הממוצע הוא 800 עד 1,000 שניות; עבור טמפרטורת צלחת מדגם של 25 ° C, זמן הייבוש הממוצע הוא 100 עד 150 sEC. - לאחר ייבוש, פתח את הדלת של חדר הייבוש.
- הגדר את הטמפרטורה circulator מים בטמפרטורת החדר (25 מעלות צלזיוס).
הערה: דלג על שלב זה אם הצלחת מדגם נשמרת כל הזמן בטמפרטורת החדר (25 מעלות צלזיוס) במהלך תהליך הייבוש. - לאחר תשואות טמפרטורת צלחת המדגם לטמפרטורת חדר (25 מעלות צלזיוס), להסיר את צלחת המדגם מאולם הייבוש.
- בדוק את מורפולוגיה הדגימה תחת סטראו 5X ולקחת תמונה בהיר שדה תמונת מצב.
הערה: אם מורפולוגיה קריסטל לא צפויות כמו, יש צורך להכין מדגם חדש עם אותו ההליך. מורפולוגיה גביש אופייניות מוצגות הלוחות העליונים של איור 2.
הערה: במקרים עם טמפרטורות צלחת מדגם נמוכות, כגון 5 מעלות צלזיוס, חשוב לחמם את צלחת המדגם לטמפרטורת חדר לפני שלקחת אותו מתוך חדר הייבוש. בעת הפקדת דגימות, אין להחזיק את solutio premixedn ב קצה פיפטה מעל 10 שניות. אין להשתמש פתרון premixed שוב לאחר הפקדת הדגימות. הפנלים העליונים של איור 2 מציגים תמונות בהיר שדה של דגימות מוכנות עם טמפרטורות צלחת מדגם שונות.
3. ניתוח נתונים ספקטרומטריית מסה
- קליטת נתונים ספקטרומטריית מסה
הערה: לאחר הכנה, המדגם ניתן לנתח באמצעות הדמיה ספקטרומטריית מסה. במחקר הנוכחי, ניסויי MS ההדמיה נערכים באמצעות TOF כפול קוטביות מסונכרנת בנוי מעבדה (DP-TOF) ספקטרומטר מסת הדמיה. 15 ספקטרומטרים המוני מסחרי MALDI-TOF עם יכולת הדמיה מתאים גם ניסויים כאלה. ספקטרומטר מסה מופעל החילוץ לינארית מצבי יון חיובי עם עיכובים החילוץ מותאם. האנרגיה הקינטית של יונים היא 20 קילו. גודל קרן הליזר הוא 35 מיקרומטר קוטר על פני השטח המדגמים, והספקטרום של כל נקודה הוא aveזעם של 5 יריות לייזר.- הכנס את צלחת מדגם לתוך ספקטרומטר מסה MALDI.
- לבצע הדמית ניתוח ספקטרומטריית מסה על המדגם המוכן בצעדים 2.1-2.9.
- בחר לשיא מסת מאפיין מהרשימה המוני מוצגת בחלון התוצאה ולחץ "2D" לתכנן תמונת יון דו ממדים.
הערה: לקבלת maltotriose מעורבב עם Thap, פסגות מאפיין הם sodiated maltotriose, Thap protonated, ו sodiated Thap. עבור שבר ברדיקינין (1-7) מעורבב עם Thap, פסגות מאפיין כוללות protonated שבר ברדיקינין (1-7), protonated Thap, ו sodiated Thap. - לחץ על לחצני התאמה בחלון הקופץ כדי לקבוע את הגבולות העליונים ותחתונים של עוצמת האות ולוחץ על "שמור תמונה". הגדרה זו קובעת את הניגוד של תמונות יון.
הערה: בכל סט יחיד של נתונים, האזורים הסדוקים כתמי null מראים בהירות נמוכה בוטלו. - שים ולהשוות את היוןתמונה עם התמונה בהיר השדה שנלקחה בשלב 2.9.
הערה: הדמיה ספקטרומטריית מסה ובניית תמונות של יונים מסוימים יכולה להיות מושגת באמצעות מכשירים מסחריים. בשל המגוון של רכישת נתונים וניתוח תוכנה, המשתמשים צריכים לפעול בהתאם להנחיות תוכנה המסופקות על ידי ספק המכשיר כדי לקבל תמונות באיכות גבוהות.
- ניתוח נתונים
הערה: ההטרוגניות של דגימות מנותחת כמותית. בהפגנה זו, כל מדגם מחולק לאזורי קונצנטריים מרובים על ידי תוכנות שפותחו באופן עצמי לנתח את הפריסה המרחבית של היונים. ניתוח המידע יכול גם להתבצע באמצעות תוכנת ניתוח נתונים עצמאית.- לחץ על הכתמים בטל האזורים הסדוקים בתמונת היון מוצגת בחלון התוצאה להסיר אזורים בלתי חשובים.
הערה: נוהל זה מגדיר את השטח החיוני של תמונת יון. - לחץ על "למצוא קצה" על מנת למצוא את שכבת קצוני של תמונת היון.
- לחץ "לנכות" כדי לשמור את מידע שפע יון של שכבת קצוני במסד נתונים ולהסיר שכבה זו מתמונת היון בו זמנית. תיבת סימון מייצג שכבה קצוני זה תופיע ברשימת "נתוני תפוקה" של חלון התוצאה.
- חזור על שלבים 3.2.2 ו 3.2.3 עד מרכז התמונה יון מוגדר.
- לחץ ובחר את כל תיבות הסימון ברשימה "נתוני תפוקה" ולחץ על "יצוא" כדי לייצא את הנתונים.
- פתח את הנתונים המיוצאים באמצעות תוכנת גיליון אלקטרוני כדי לחשב את שפע יון הממוצע של כל השכבה כדי להשיג את המידע הפריסה המרחבית של יונים.
- לחץ על הכתמים בטל האזורים הסדוקים בתמונת היון מוצגת בחלון התוצאה להסיר אזורים בלתי חשובים.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
התמונות בהיר השדה כמו גם תמונות MS של שבר maltotriose ו ברדיקינין (1-7) מוכן עם טמפרטורת צלחת מדגם של 5 ו -25 ° C מוצגות באיור 1. במקרה של maltotriose sodiated, אות היון בעיקר מאכלס בשולי שטח המדגם כאשר הוא מוכן עם טמפרטורת צלחת מדגם של 25 מעלות צלזיוס. ובאמצעות קטנה הצליחה טמפרטורה המדגמת עד 5 מעלות צלזיוס, האות מאכלס בצורה הומוגנית על פני שטח המדגם. החסרון הבולט היחיד בעת הכנת דגימות תחת 5 מעלות צלזיוס הם שיש יותר סדקים מאשר הדגימות אשר הוכנו על פי 25 מעלות צלזיוס. תמונת היון של שבר ברדיקינין protonated (1-7) מראה מגמה דומה למדי לאלו של maltotriose sodiated. תוצאות הדמית MS מראות כי הכנת דגימות תחת טמפרטורת צלחת מדגם נמוכה יכולה באופן משמעותי מחדש את המולקולות ולהפחית ההטרוגניות.
gether.within-page = "1"> בהתבסס על תוצאות הניסוי, ניתוחים סטטיסטיים מראים כי ההטרוגניות של אותות יון שהושגה לפי טמפרטורת צלחת מדגם של 5 ° C מפחיתה ידי 60-80% ביחס לאותו מתחת לגיל 25 מעלות צלזיוס. איור 3 מציג את התוצאות של ניתוחים סטטיסטיים עבור שבר maltotriose ו ברדיקינין (1-7) מוכנים בטמפרטורות צלחת מדגם של 5 ו -25 מעלות צלזיוס. עבור כל דגימה, עוצמת הממוצע היא מנורמלת. במקרה של maltotriose sodiated עם טמפרטורת צלחת מדגם של 25 מעלות צלזיוס, עוצמות האות במרכזים הם נמוכות בהרבה מאלו עם טמפרטורת צלחת מדגם של C ° 5. התוצאה של שבר ברדיקינין protonated (1-7) גם מראה פחות וריאציה כאשר יורדת הטמפרטורה צלחת מדגם מתוך 25 ° 5 צ.
איור 1: תמונה של מערכת ייבוש מדגם.תא הייבוש עשוי אקרילי. החדר הוא מטוהר עם גז חנקן בטמפרטורת החדר כדי לשמור על מצב לחות יחסית נמוכה. זינוק בסיס נחושת מצויד circulator מים בטמפרטורה קבוע מתוכנת משמש כדי לווסת את הטמפרטורה של צלחות מדגם נירוסטה. המדחום לפקח אוויר, גוש בסיס נחושת, ואת צלחת המדגם. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.
איור 2:. הורדת מדגם תוצאות טמפרטורת צלחת ההומוגניות אות חזקה יותר דימויי השדה הבהירים (תמונות עליונות), כמו גם את תמונות MALDI (תמונות קטנות) של maltotriose (א) ו- שבר ברדיקינין (1-7) (ב) מוכן עם Thap בטמפרטורות צלחת מדגם שונות. MALDI התמונות התקבלו על ידי חילוץ maltotriose sodiated (m / z: 527) ו שבר ברדיקינין protonated (1-7) (m / z: 757) מהספקטרום הכולל, בהתאמה. גודל פיקסל של תמונות היון הוא 35 מיקרומטר. לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.
איור 3: וריאצית איתותים מפחיתה טמפרטורת מדגם צלחת פוחתת במהלך תהליך ייבוש תמונות MALDI מתקבלות עם maltotriose (א) ו- שבר ברדיקינין (1-7) (ב) מוכן עם Thap בטמפרטורות צלחת מדגם שונות.. האדום ונתונים כחולים מצביעים על המדגם המוכן בטמפרטורת צלחת מדגם של C ° 25 ו -5 בהתאמה. "Target =" g _ blank "> לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.
| טמפרטורת פלייט מדגם (° C) | לִטעוֹם | טמפרטורת האוויר (מעלות צלזיוס) | לחות יחסית (% לחות יחסית) | זמן ייבוש (sec) |
| 5 | maltotriose עם Thap | 20 ± 3 | <25 | 800 - 1,000 |
| שבר ברדיקינין (1-7) עם Thap | ||||
| 25 | maltotriose עם Thap | 25 ± 3 | 100 - 150 | |
| שבר ברדיקינין (1-7) עם Thap |
בתוך-page = "1"> טבלה 1: פרמטרים ניסיוניים ותנאי ייבוש בטמפרטורות צלחת מדגם שונות.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
בהתבסס על תחזיות תיאורטיות קודמות, תזרים הידרודינמית מושרה טמפרטורה בתוך טיפות יכול להתגבר החוצה תזרים נימי מושרה על ידי אידוי ממס. היעילות של סחרור פנימי כזה של מולקולות מוגברות כאשר הטמפרטורה הדרגתית בתוך עליית רביב. על פי התוצאות ניבא, כאשר שמירה על טמפרטורת צלחת מדגם מתחת לגיל 5 מעלות צלזיוס תוך שמירה וסביבתה בטמפרטורת הסביבה, המהירות הממוצעת של תזרימי סחרור בתוך רביב הוא בערך 4 פעמים מהר יותר מזו של תזרימי נימי כלפי חוץ. אם טמפרטורת צלחת מדגם זהה הסביבה, המהירות הממוצעת של תזרים סחרור היא 1,800 פעמים לאט יותר את זרימת נימים כלפי חוץ. תוצאות חישוב זה עולה כי הירידה בטמפרטורה צלחת מדגם במהלך הכנת המדגם הוא יתרון. התצפיות הניסיוניות מסכימות עם התחזית הזאת.
מזג צלחת המדגםature צריכה להיות מבוקרת בדיוק ברחבי הכנת מדגם תהליך. טבלת 1 מראה את זמן ייבוש אגל הטיפוסי עם 0.1 μl של מדגם בטמפרטורות צלחת מדגם שונות. לפני הפקדת פתרון מדגם על הצלחת, חשוב להבטיח כי פני צלחת מדגם יבשות. אם עיבוי מים מתרחש בעת הכנת דגימות תחת טמפרטורות נמוכות, בתצהיר של הפתרון המדגם אינו מומלץ בגלל מים מרוכזים מגדיל אזורים מדגמים ו מדללים פתרונות. לכן, חשוב לשמור על הלחות היחסית של הייבוש מתחת ל -25%. בנוסף, בעת הכנת דגימות תחת טמפרטורות נמוכות, צלחת המדגם צריכה להיות חמה עד לטמפרטורת חדר לפני לוקח אותו אל מחוץ לתא הייבוש. למרות עיבוי מים קלים לאחר השלמת התגבשות מדגם אינו משנה את אוכלוסיית המדגם, עיבוי משמעותי יש להימנע.
שימוש פתרונות מעורבבים מראש טריים הוא מלמְתוּקָן. לאחר הפתרונות premixed נחשפים לאוויר, מראש crystallizations של הפתרונות מדגם להתרחש ואת גודל ומורפולוגיה קריסטל הסופי עשוי להשתנות. לכן, הנוהל pipetting צריך להתבצע ביעילות סבירה, בדרך כלל תוך 10 שניות, כדי למנוע את אגל המדגם מ-התגבשות מראש בתוך קצה פיפטה. מומלץ להתבונן מורפולוגיה דגימה תחת מיקרוסקופ כדי להבטיח מורפולוגיה קריסטל מתאימות מיוצרות לפני ניתוח ספקטרומטריית מסה. אם מורפולוגיה הקריסטל אינן טובות כמו כצפוי, חזרה על התהליך בתצהיר לפי צורך.
על פי המחקרים תיאורטיים וניסיוניים שלנו, הכנת דגימות עם צלחת מדגם בטמפרטורה נמוכה המותקנת בתנאי סביבה משפרת את שחזור נתונים מאוד ואיכות MALDI-MS. ניסויים מאוחרים יותר גם להראות שיפור משמעותי של עוצמת אות עם שיטת הכנת מדגם זה. נתוני הניסוי מתקבלים על ידי tשיטתו משמעותית לשפר את המהימנות של ספקטרה המונית MALDI עבור ניתוחים כמותיים. לשם השוואה עם שיטות אחרות הקשורות רכב תמיסות או שינויים ברכוש שטח, תנאי ייבוש משתנה 8,16-18 פשוט וישים באופן כללי יותר עבור דגימות קונבנציונליות. לפיכך, רוב המשתמשים ספקטרומטריית מסה יכולים ליהנות ממנו ביישומים רגילים.
שיפור ההומוגניות אות MALDI עם טמפרטורה יורד צלחת מדגם יעיל גם כמה מטריצות פופולריות אחרות. לדוגמה,-cyclodextrin α משופרת (α-CD) הומוגניות אות עם Thap ו α-cyano-4-hydroxycinnamic חומצה (CHCA) כמו מטריקס בתנאים ייבוש מדגם בטמפרטורה נמוכה דווחה לאחרונה. 14 החיסרון עם צלחת מדגם שינוי הטמפרטורה היא שהשיטה אינה מתאימה כיום לניתוח תפוקה גבוהה עקב זמן ייבוש מדגם הארוך בתנאים בטמפרטורה נמוכה.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Reagent | |||
| Detergent powder | Alconox | 242985 | |
| Methanol | Merck | 106009 | |
| Acetonitrile | Merck | 100003 | |
| 2,4,6-trihydroxyacetophenone (THAP) | Sigma-Aldrich | T64602 | |
| Bradykinin fragment (1-7) | Sigma-Aldrich | B1651 | |
| Maltotriose | Sigma-Aldrich | 47884 | |
| Pipette tips | Mettler Toledo | 17005091 | |
| Microcentrifuge tube | Axygen | MCT-150-C | |
| Equipment | |||
| Milli-Q water purification system | Millipore | ZMQS6VFT1 | |
| Powder-free nitrile gloves | Microflex | SU-690 | |
| 600 ml beaker | Duran | 2110648 | |
| Ultrasonic cleaner | Delta | DC300H | |
| Hygrometer | Wisewind | 5330 | |
| Nitrogen gas flowmeter | Dwyer | RMA-6-SSV | |
| K-type thermocouples | Digitron | 311-1670 | |
| Centrifuge | Select BioProducts | Force Mini | |
| Pipette | Rainin | pipet-lite XLS | |
| Stereomicroscope | Olympus | SZX16 | |
| Temperature controllable drying chamber | this lab | ||
| Synchronized dual-polarity time-of-flight imaging mass spectrometer (DP-TOF IMS) | this lab | ||
| MALDI-TOF stainless steel sample target | this lab |
References
- Karas, M., Hillenkamp, F. Laser Desorption Ionization of Proteins with Molecular Masses Exceeding 10000 Daltons. Anal. Chem. 60, 2299-2301 (1988).
- Beavis, R. C., Chait, B. T. Velocity Distributions of Intact High Mass Polypeptide Molecule Ions Produced by Matrix Assisted Laser Desorption. Chem. Phys. Lett. 181, 479-484 (1991).
- Beavis, R. C., Chaudhary, T., Chait, B. T. Alpha-Cyano-4-Hydroxycinnamic Acid as a Matrix for Matrix-Assisted Laser Desorption Mass-Spectrometry. Org. Mass Spectrom. 27, 156-158 (1992).
- Ehring, H., Karas, M., Hillenkamp, F. Role of Photoionization and Photochemistry in Ionization Processes of Organic-Molecules and Relevance for Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization Mass-Spectrometry. Org. Mass Spectrom. 27, 472-480 (1992).
- Strupat, K., Karas, M., Hillenkamp, F. 2,5-Dihydroxybenzoic Acid - a New Matrix for Laser Desorption Ionization Mass-Spectrometry. Int. J. Mass Spectrom. Ion Process. 111, 89-102 (1991).
- Hu, H., Larson, R. G. Evaporation of a Sessile Droplet on a Substrate. J. Phys. Chem. B. 106, 1334-1344 (2002).
- Deegan, R. D., et al. Capillary Flow as the Cause of Ring Stains from Dried Liquid Drops. Nature. 389, 827-829 (1997).
- Hu, J. -B., Chen, Y. -C., Urban, P. L. Coffee-Ring Effects in Laser Desorption/Ionization Mass Spectrometry. Anal. Chim. Acta. 766, 77-82 (2013).
- Schwartz, S. A., Reyzer, M. L., Caprioli, R. M. Direct Tissue Analysis Using Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization Mass Spectrometry: Practical Aspects of Sample Preparation. J. Mass Spectrom. 38, 699-708 (2003).
- Hu, H., Larson, R. G. Marangoni Effect Reverses Coffee-Ring Depositions. J. Phys. Chem. B. 110, 7090-7094 (2006).
- Bhardwaj, R., Fang, X., Attinger, D. Pattern Formation During the Evaporation of a Colloidal Nanoliter Drop: A Numerical and Experimental Study. New J. Phys. 11, 075020 (2009).
- Savino, R., Paterna, D., Favaloro, N. Buoyancy and Marangoni Effects in an Evaporating Drop. J Thermophys Heat Tr. 16, 562-574 (2002).
- Probstein, R. F. Surface Tension. in Physicochemical Hydrodynamics : An Introduction. , John Wiley & Sons. Ch. 10 305-361 (1994).
- Lai, Y. -H., et al. Reducing Spatial Heterogeneity of MALDI Samples with Marangoni Flows During Sample Preparation. J. Am. Soc. Mass Spectrom. 27, 1314-1321 (2016).
- Hsiao, C. -H., et al. Comprehensive Molecular Imaging of Photolabile Surface Samples with Synchronized Dual-Polarity Time-of-Flight Mass Spectrometry. Rapid Commun. Mass Spectrom. 25, 834-842 (2011).
- Vorm, O., Roepstorff, P., Mann, M. Improved Resolution and Very High-Sensitivity in MALDI TOF of Matrix Surfaces Made by Fast Evaporation. Anal. Chem. 66, 3281-3287 (1994).
- Gabriel, S. J., Schwarzinger, C., Schwarzinger, B., Panne, U., Weidner, S. M. Matrix Segregation as the Major Cause for Sample Inhomogeneity in MALDI Dried Droplet Spots. J. Am. Soc. Mass Spectrom. 25, 1356-1363 (2014).
- Mampallil, D., Eral, H. B., van den Ende, D., Mugele, F. Control of Evaporating Complex Fluids through Electrowetting. Soft Matter. 8, 10614-10617 (2012).
