Summary

Анионной полимеризации амфифильного Сополимер по подготовке блоксополимера мицелл, стабилизированных π-л стэкинг-взаимодействий

Published: October 10, 2016
doi:

Summary

Основные этапы живой анионной полимеризации фенилглицидиловый эфира (PheGE) на метокси-полиэтиленгликоль (MPEG- б) -PPheGE описаны. Результирующие блок-сополимера мицеллы (BCMS) загружались с доксорубицином 14% (мас%) и замедленное высвобождение лекарственного средства в течение 4-х дней при физиологически получали соответствующие условия.

Abstract

В этом исследовании, амфифильный сополимер , который включает в себя базовую образующий блок с фенильными группами, синтезировали живой анионной полимеризации фенилглицидиловый эфир (PheGE) на метокси-полиэтиленгликоль (MPEG- б -PPheGE). Определение характеристик сополимера показал узкое молекулярно -массовое распределение (PDI <1,03) и подтвердили степень полимеризации мПЭГ 122B – (PheGE) 15. Критическая концентрация мицелл сополимера оценивали с использованием установленного способа флуоресценции с поведением агрегации оценивали с помощью динамического рассеяния света и передачи электронной микроскопии. Потенциал сополимера для использования в приложениях для доставки лекарственных средств оценивали в предварительном порядке , включая в пробирке биосовместимость, загрузка и высвобождения гидрофобного противоракового препарата доксорубицина (DOX). Стабильная рецептура мицелл DOX был подготовлен с уровнем загрузки лекарственного средства до 14% (мас%), погрузка наркотиков efficiencies> 60% (вес / вес) и замедленное высвобождение препарата в течение 4-х дней при физиологически соответствующих условиях (кислых и нейтральных рН, присутствие альбумина). Уровень загрузки высокого наркотиков и замедленным высвобождением приписывается стабилизирующих π-pi; взаимодействия между DOX и центральным блоком формирования мицелл.

Introduction

В водной среде, амфифильные блок-сополимеры, собираются, чтобы сформировать нано-размера блок-сополимера мицелл (BCMS), которые состоят из гидрофобной сердцевины, окруженной оболочкой гидрофильных или короны. Ядро мицеллы может служить в качестве резервуара для включения гидрофобных лекарственных средств; в то время как гидрофильный коронный обеспечивает интерфейс между ядром и внешней средой. Поли (этиленгликоль) (ПЭГ) и его производные являются одним из наиболее важных классов полимеров , и один из наиболее широко используемых в лекарственной композиции. 1-3 BCMS оказались достойной платформой для доставки лекарственных средств с несколько составов , опираясь на этот технологии в настоящее время в поздней стадии клинической разработки. 4 Чаще всего, гидрофобный блок – сополимера состоит из поликапролактон, поли (D, L-лактида), поли (пропиленоксид) или поли (β-бензил-L-аспартат). 5 -9

Группа Катаока исследовала сферические мицеллы , образованные из ПЭО б </em> -PBLA И поли (окись этилена) – б . – (Доксорубицин полиаспарагиновой кислоты с сопряженными) для доставки доксорубицина (DOX) 10,11 В своих докладах они выдвинули , что π-pi ; взаимодействие между препаратом полимерконъюгированных или PBLA и свободный DOX действовать, чтобы стабилизировать ядро ​​мицеллы, что приводит к увеличению нагрузки и удержания лекарственного средства. Установлено , что совместимость или взаимодействие между лекарственным средством и блок основного формирования являются определяющими ключевых параметров , связанных с производительностью. 12 В дополнение к DOX, ряд терапии рака включают ароматические кольца в пределах своей основной структуры (например, метотрексат, olaparib, С.Н. -38).

В результате существует значительный интерес к синтезу сополимеров, которые включают бензиловый кольца в их основных образующих блоков. Анионные полимеризация с раскрытием кольца ПЭГ и его производных позволяют контролировать молекулярной массой и привести к материалам с низкой полидисперсностью с хорошим выходом. 13,14 EthyleОксид пе с фенилглицидиловый эфиром (PheGE) или оксид стирола (SO) может быть (со) полимеризуется с образованием блок – сополимеров , которые образуют мицеллы для солюбилизации гидрофобных лекарственных средств. 15-18 В настоящем докладе описываются необходимые шаги для живой анионной полимеризации фенил глицидилэфир мономера на Mpeg-ОН , как макроинициатора (Рисунок 1). Полученный блок-сополимер и его агрегаты затем охарактеризованы с точки зрения свойств релевантности для использования в доставке лекарств.

Protocol

Рисунок 1. Схема , показывающая девять ключевых шагов в подготовке б -PPheGE сополимера MPEG-. Пожалуйста , нажмите здесь…

Representative Results

Рисунок 3. Иллюстрация анионной полимеризации фенилглицидиловый эфира на мПЭГ макроинициатора для получения видеоданных MPEG – B – (PheGE) 15 для получения блок – сополимеров мице…

Discussion

В связи с хорошим контролем, что анионной полимеризации обеспечивает более молекулярным весом является одним из наиболее прикладных процессов в промышленности для получения полимеров на основе оксиэтиленовых мономеров (ПЭГ и ППГ). Оптимальные и жесткие условия должны быть использов?…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

CA acknowledges a Discovery grant from the Natural Sciences and Engineering Research Council of Canada. CA acknowledges a Chair in Pharmaceutics and Drug Delivery from GSK. The authors declare no competing financial interest.

Materials

DMEM/HAMF12 Gibco, Life Technologies 12500 Supplemented with 10%FBS. Warm in 37 °C water bath
                          
Trypsin-EDTA(0.25%) Sigma-Aldrich T4049 Warm in 37 °C water bath 
Fetal bovine serum (FBS) Sigma-Aldrich F1051 Canada origin
MDA-MB-468 cell line ATCC HTB-132
MTS tetrazolium reagent PROMEGA G111B
Phenazine ethosulfate (PES) Sigma-Aldrich P4544 >95%
mPEG5K (Mn 5400 g/mol) Sigma-Aldrich 81323 PDI=1.02
Dimethylsolfoxide (DMSO) Sigma-Aldrich D4540 >99.5%
Naphthalene Sigma-Aldrich 147141 >99%
Phenyl glycidyl ether Sigma-Aldrich A32608 >85%
Benzophenone Sigma-Aldrich 427551 >99%
Potassium Sigma-Aldrich 451096 >98%
Tetrahydrofuran Caledon Laboratory Chemicals 8900 1 ACS
Hexane Caledon Laboratory Chemicals 5500 1 ACS
Calcium hydride (CaH2) ACP C-0460 >99.5%
Diethyl Ether Caledon Laboratory Chemicals 1/10/4800 ACS
Microplate reader BioTek Instruments
Differential scanning calorimetry (DSC) TA Instruments Inc DSC Q100
Gel permeation chromatography (GPC) Waters 2695 separation moldule / 2414 detector  2 Columns: Agilent Plgel 5µm Mixed-D
NMR spectroscopy Varian Mercury 400MHz
Chloroform-d Sigma-Aldrich 151858 99.96%
DMSO-d Sigma-Aldrich 156914 99.96%
Vaccum pump  Gardner Denver Welch Vacuum Tech, Inc. Ultimate  pressure 1.10-4 torr
Drierit with indicator, 8 mesh Sigma-Aldrich 238988 Regenerated at 230°C for 2 hrs

References

  1. Dickerson, T. J., Reed, N. N., Janda, K. D. Soluble Polymers as Scaffolds for Recoverable Catalysts and Reagents. Chemical Reviews. 102, 3325-3344 (2002).
  2. van Heerbeek, R., Kamer, P. C. J., van Leeuwen, P. W. N. M., Reek, J. N. H. Dendrimers as Support for Recoverable Catalysts and Reagents. Chemical Reviews. 102 (10), 3717-3756 (2002).
  3. Knop, K., Hoogenboom, R., Fischer, D., Schubert, U. S. Poly(ethylene glycol) in Drug Delivery: Pros and Cons as Well as Potential Alternatives. Angewandte Chemie International Edition. 49 (36), 6288-6308 (2010).
  4. Eetezadi, S., Ekdawi, S. N., Allen, C. The challenges facing block copolymer micelles for cancer therapy: In vivo barriers and clinical translation. Advanced Drug Delivery Reviews. 91, 7-22 (2015).
  5. Attwood, D., Booth, C., Yeates, S. G., Chaibundit, C., Ricardo, N. Block copolymers for drug solubilisation: Relative hydrophobicities of polyether and polyester micelle-core-forming blocks. International Journal of Pharmaceutics. 345 (1-2), 35-41 (2007).
  6. Matsumura, Y., Kataoka, K. Preclinical and clinical studies of anticancer agent-incorporating polymer micelles. Cancer Science. 100 (4), 572-579 (2009).
  7. Chan, A. S., Chen, C. H., Huang, C. M., Hsieh, M. F. Regulation of particle morphology of pH-dependent poly(epsilon-caprolactone)-poly(gamma-glutamic acid) micellar nanoparticles to combat breast cancer cells. Journal of Nanoscience and Nanotechnology. 10 (10), 6283-6297 (2010).
  8. Diao, Y. Y., et al. Doxorubicin-loaded PEG-PCL copolymer micelles enhance cytotoxicity and intracellular accumulation of doxorubicin in adriamycin-resistant tumor cells. International Journal of Nanomedicine. 6, 1955-1962 (2011).
  9. Mikhail, A. S., Allen, C. Poly(ethylene glycol)-b-poly(ε-caprolactone) Micelles Containing Chemically Conjugated and Physically Entrapped Docetaxel: Synthesis, Characterization, and the Influence of the Drug on Micelle Morphology. Biomacromolecules. 11 (5), 1273-1280 (2010).
  10. Kataoka, K., Harada, A., Nagasaki, Y. Block copolymer micelles for drug delivery: design, characterization and biological significance. Advanced Drug Delivery Reviews. 47 (1), 113-131 (2001).
  11. Nakanishi, T., et al. Development of the polymer micelle carrier system for doxorubicin. Journal of Controlled Release. 74 (1-3), 295-302 (2001).
  12. Liu, J., Xiao, Y., Allen, C. Polymer-drug compatibility: A guide to the development of delivery systems for the anticancer agent, ellipticine. Journal of Pharmaceutical Sciences. 93 (1), 132-143 (2004).
  13. Flory, P. J. Molecular Size Distribution in Ethylene Oxide Polymers. Journal of the American Chemical Society. 62 (6), 1561-1565 (1940).
  14. Kazanskii, K. S., Solovyanov, A. A., Entelis, S. G. Polymerization of ethylene oxide by alkali metal-naphthalene complexes in tetrahydrofuran. European Polymer Journal. 7 (10), 1421-1433 (1971).
  15. Crothers, M., et al. Micellization and Gelation of Diblock Copolymers of Ethylene Oxide and Styrene Oxide in Aqueous Solution. Langmuir. 18 (22), 8685-8691 (2002).
  16. Taboada, P., et al. Block Copolymers of Ethylene Oxide and Phenyl Glycidyl Ether: Micellization, Gelation, and Drug Solubilization. Langmuir. 21 (12), 5263-5271 (2005).
  17. Taboada, P., et al. Micellization and Drug Solubilization in Aqueous Solutions of a Diblock Copolymer of Ethylene Oxide and Phenyl Glycidyl Ether. Langmuir. 22 (18), 7465-7470 (2006).
  18. Attwood, D., Booth, C. . Colloid Stability. , 61-78 (2010).
  19. Le Devedec, F., et al. Postalkylation of a Common mPEG-b-PAGE Precursor to Produce Tunable Morphologies of Spheres, Filomicelles, Disks, and Polymersomes. ACS Macro Letters. 5 (1), 128-133 (2016).
  20. Chtryt, V., Ulbrich, K. Conjugate of Doxorubicin with a Thermosensitive Polymer Drug Carrier. Journal of Bioactive and Compatible Polymers. 16 (6), 427-440 (2001).
  21. Kataoka, K., et al. Doxorubicin-loaded poly(ethylene glycol)-poly(β-benzyl-l-aspartate) copolymer micelles: their pharmaceutical characteristics and biological significance. Journal of Controlled Release. 64 (1-3), 143-153 (2000).
  22. Cammas, S., Matsumoto, T., Okano, T., Sakurai, Y., Kataoka, K. Design of functional polymeric micelles as site-specific drug vehicles based on poly (α-hydroxy ethylene oxide-co-β-benzyl l-aspartate) block copolymers. Materials Science and Engineering: C. 4 (4), 241-247 (1997).
  23. Lv, S., et al. Doxorubicin-loaded amphiphilic polypeptide-based nanoparticles as an efficient drug delivery system for cancer therapy. Acta Biomaterialia. 9 (12), 9330-9342 (2013).
  24. Kim, J. O., Oberoi, H. S., Desale, S., Kabanov, A. V., Bronich, T. K. Polypeptide nanogels with hydrophobic moieties in the cross-linked ionic cores: synthesis, characterization and implications for anticancer drug delivery. Journal of Drug Targeting. 21 (10), 981-993 (2013).
  25. Zhao, C. L., Winnik, M. A., Riess, G., Croucher, M. D. Fluorescence probe techniques used to study micelle formation in water-soluble block copolymers. Langmuir. 6 (2), 514-516 (1990).
  26. Wilhelm, M., et al. Poly(styrene-ethylene oxide) block copolymer micelle formation in water: a fluorescence probe study. Macromolecules. 24 (5), 1033-1040 (1991).
  27. Cammas, S., Kataoka, K. Functional poly[(ethylene oxide)-co-(β-benzyl-L-aspartate)] polymeric micelles: block copolymer synthesis and micelles formation. Macromolecular Chemistry and Physics. 196 (6), 1899-1905 (1995).
  28. Kwon, G., et al. Micelles based on AB block copolymers of poly(ethylene oxide) and poly(.beta.-benzyl L-aspartate). Langmuir. 9 (4), 945-949 (1993).
  29. Ahmed, F., Discher, D. E. Self-porating polymersomes of PEG-PLA and PEG-PCL: hydrolysis-triggered controlled release vesicles. Journal of Controlled Release. 96 (1), 37-53 (2004).
  30. Uhrig, D., Mays, J. W. Experimental techniques in high-vacuum anionic polymerization. Journal of Polymer Science Part A: Polymer Chemistry. 43 (24), 6179-6222 (2005).
  31. Parker, A. J. The effects of solvation on the properties of anions in dipolar aprotic solvents. Quarterly Reviews, Chemical Society. 16 (2), 163-187 (1962).
  32. Cram, D. J. . Fundamentals o] Carbanion Chemistry. , (1965).
  33. Szwarc, M. . ACS Symposium Series. 166, 1-15 (1981).
  34. Cho, Y. W., Lee, J., Lee, S. C., Huh, K. M., Park, K. Hydrotropic agents for study of in vitro paclitaxel release from polymeric micelles. Journal of Controlled Release. 97, 249-257 (2004).
  35. Dewhurst, P. F., Lovell, M. R., Jones, J. L., Richards, R. W., Webster, J. R. P. Organization of Dispersions of a Linear Diblock Copolymer of Polystyrene and Poly(ethylene oxide) at the Air−Water Interface. Macromolecules. 31 (22), 7851-7864 (1998).
  36. Opanasopit, P., et al. Block Copolymer Design for Camptothecin Incorporation into Polymeric Micelles for Passive Tumor Targeting. Pharmaceutical Research. 21 (11), 2001-2008 (2004).
  37. Allen, G., Booth, C., Price, C. VI-The physical properties of poly(epoxides). Polymer. 8, 414-418 (1967).
  38. Jada, A., Hurtrez, G., Siffert, B., Riess, G. Structure of polystyrene-block-poly(ethylene oxide) diblock copolymer micelles in water. Macromolecular Chemistry and Physics. 197 (11), 3697-3710 (1996).
  39. Attwood, D., Florence, A. T. . Surfactant systems : their chemistry, pharmacy, and biology. , (1983).
  40. Rekatas, C. J., et al. The effect of hydrophobe chemical structure and chain length on the solubilization of griseofulvin in aqueous micellar solutions of block copoly(oxyalkylene)s. Physical Chemistry Chemical Physics. 3 (21), 4769-4773 (2001).

Play Video

Cite This Article
Le Dévédec, F., Houdaihed, L., Allen, C. Anionic Polymerization of an Amphiphilic Copolymer for Preparation of Block Copolymer Micelles Stabilized by π-π Stacking Interactions. J. Vis. Exp. (116), e54422, doi:10.3791/54422 (2016).

View Video