Introduction
التصاقات في البطن هي شكل من أشكال ندبا التي تشكل في البطن ردا على الالتهابات، عادة بعد الجراحة أو العدوى داخل البطن. الالتصاقات هي سبب رئيسي من آلام في البطن المزمن والعقم، وهي السبب الأكثر شيوعا لانسداد الأمعاء الدقيقة 1. وجود التصاقات يجعل تنفيذ عملية في البطن الثانية أكثر صعوبة ويزيد من احتمال حدوث مضاعفات 2.
وعلى الرغم من سنوات من البحث، والآليات الكامنة وراء تشكيل الالتصاقات لا تزال غير مفهومة. ومن المعروف أن إصابة الأولية لسطح البريتوني يؤدي إلى نضح السوائل الليفين الغني، الذي ثم تشكل الجلطة التي تربط أسطح الأمعاء وجدار البطن معا 3. وفي وقت لاحق، الخلايا الليفية والخلايا الأخرى تهاجر في الفضاء لاصقة وتفرز النسيج الضام 4. وعلى مدى أشهر إلى سنوات التصاق ينضج من خلال تطوير الأوعية الدموية والأعصاب وتوجد العديد من المنتجات التجارية التي تم تصميمها للحد من تشكيل الالتصاقات بعد عملية جراحية في البطن (على سبيل المثال، Seprafilm). جميع هذه المنتجات تعمل كحواجز الميكانيكية ووقف تشكيل التصاق عن طريق منع الاتصال الجسدي بين حلقات من الأمعاء وجدار البطن 6،7. رغم وجود أدلة من المحاكمة للرقابة التي حاجزا التصاق الجراحية يقلل من تشكيل الالتصاقات 8، العديد من الجراحين الروايات المتناقلة قد أصيب بخيبة أمل مع فعالية المنتجات حاجز الميكانيكية. حاليا لا توجد علاجات مضادة للالتصاق القائم على المخدرات، وهو ما يعكس حقيقة أن العمليات الدقيقة التي تدخل في تشكيل التصاق وغير مفهومة. تطوير العلاج الذي يستهدف على وجه التحديد وكلاء الخلوية أو الجزيئية تشارك في تشكيل الالتصاقات سوف تحتاج إلى فهم أفضل للأحداث التي تشارك في تشكيل الالتصاق. عدة مجموعةحددت الصورة المسارات الجزيئية التي قد تكون مهمة لتكوين الالتصاق 9-11. توفر النماذج الحيوانية بيئة رائعة لدراسة تشكيل الالتصاقات. وقد نشرت العديد من الدراسات التي تصف خلق الجراحي من التصاق في العديد من الحيوانات، ولا سيما في الجرذان والفئران 6،12-14. نظرا تجربتنا مع دراسة تليف في الماوس وتوافر واسعة من الفئران المعدلة وراثيا والأجسام المضادة القائمة على الماوس، اخترنا الماوس كما نموذجنا لدراسة التصاقات. هنا، نحن تقرير تقنية أننا قد وضعت لإنشاء بتكاثر وموثوق التصاقات في البطن في الماوس.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
تمت الموافقة على بروتوكول التالية من قبل لجنة جامعة ستانفورد المؤسسية رعاية الحيوان واستخدام (IACUC) ويتوافق مع جميع المبادئ التوجيهية الأخلاقية المؤسسية فيما يتعلق باستخدام حيوانات التجارب.
1. إنشاء البطن الالتصاقات
- بدء تشغيل الماوس على نظام غذائي طعام المضادات الحيوية قبل أسبوع واحد لهذا الإجراء.
- تعقيم الأدوات الجراحية وقبل دافئ الحل الري بالمياه المالحة.
- تخدير الماوس باستخدام 2٪ الأيزوفلورين استنشاقه.
- باستخدام المقص الشعر تليها تطبيق سريع (5-10 ثانية) وكيل مزيل الشعر، إزالة الشعر من الغالبية العظمى من سطح البطن. تماما إزالة عامل مزيل الشعر عن طريق المسح برفق مع الشاش الرطب، واختياريا، عن طريق التغميس بعناية النصف السفلي من الفأرة في الماء الدافئ. تجف تماما والحيوان.
- ضع خطم الحيوان في مخروط الأنف مخدر. أثناء الجراحة بأكملها، ترصد بدقة صمعدل espiratory الحيوان وعاير معدل التدفق مخدر حسب الحاجة.
- استخدام جهاز الاحتباس الحراري، مثل وسادة التدفئة أو مصباح الاحتباس الحراري، لمنع انخفاض حرارة الجسم.
- قبل الإستعداد البطن، وتأمين الفأر مع شرائح من الشريط وضعت فوق وتحت البطن لمنع الماوس من التحول أثناء الجراحة. تطهير البطن مع betadine، ثم اتبع مع 70٪ من الإيثانول. تشمل أكبر قدر من مساحة ممكنة في الإعدادية، بما في ذلك الشعر على حواف منطقة حلق. وضع الستارة العقيمة على الماوس. (الشكل 1)
- تحت الجلد حقن 0.1 ملغم / كغم البوبرينورفين، أو 3 ميكروغرام لمدة 30 ز الماوس.
- جعل شق الجلد.
- بدءا من خط الوسط أسفل البطن، فهم الجلد بالملقط واجراء خفض الضحلة العمودي في الجلد باستخدام مقص حاد.
- حمل قطع متفوق إلى سيفي الشكل مع مقص. احرص على إدخال فقط الجلد.
- كما أن عضلات البطن هي نآه مرئية تغطي الأحشاء، فهم خط الوسط من العضلات مع ملقط وبعناية فائقة وجعل قطع صغير في ذلك باستخدام مقص حاد. تأكد من عدم قطع طريق الخطأ في جهاز البطن.
- بعد دخول الفضاء البريتوني مع قطع صغيرة ورؤية الطبقة العضلية سحب بعيدا عن أعضاء البطن، وتمديد خفض متفوق ودون المستوى عن طريق إدراج مقص في افتتاح وقطع بعناية في كلا الاتجاهين. تمديد شق من سيفي الشكل متفوق إلى فوق المثانة دون المستوى. (الشكل 2)
- الآن التي تتعرض الأمعاء، حدد موقع الأعور والداخل للظاهر برفق. تجنب استيعاب الأعور مع ملقط مسنن أو حادة. بدلا من ذلك استخدام ملقط ارضحي مثل أدسون ملقط مسنن.
- كشط الأعور مع الصنفرة.
- كشط بلطف على كامل سطح جانبي الأعور مع 100 الصنفرة حصى ل30 - 60 ثانية حتى يصبح السطح أقل لامعة ونمشات appear على السطح. إذا كان الجراح هو اليد اليمنى، فإنه يساعد على توجيه الأعور مع طرف تواجه للحق وثنى الأعور على السبابة اليسرى الجراح. (الشكل 3)
- أداء الرملي بلطف، لأنه من السهل أن تسبب بطريق الخطأ ثقب في جدار الأعور رقيقة. يجب أن يرى وهناك كمية صغيرة من رمل كما يتم نقل الصنفرة على طول سطح الأعور. إذا شعرت الصنفرة مرارا وتكرارا على التقاط الأعور، وهذا من المرجح أن يؤدي إلى تمزق في جدار الأعور. مشاهدة بعناية للتأكد من أن جزيئات من ورق زجاج لا طرد ويبقى في البطن، لأن هذا قد يسبب الإفراط في رد فعل جسم غريب.
- في حالة حدوث تمزق في جدار الأعور، إنهاء إجراءات والموت ببطء الحيوان.
- إذا تم المنفصمة والأوعية الدموية الأعور بواسطة الصنفرة ويسبب النزيف، واجراء الضغط لمدة تصل إلى دقيقتين مع الشاش. ومع ذلك، إذا استمر النزيف بعد هذا الوقت، ضع الرقم ثمانية و7-0 حيدة الخيط حولدرجة النزيف. هذا سيوقف موثوق النزيف في جميع الحالات تقريبا. الحرص على عدم إدراج كمية كبيرة من جدار الأعور إلى خياطة، لأن ذلك المخاطر تسبب نخر من جانب المعنيين من الجدار.
- تجرح جدار البطن الصحيح.
- استخدام شريط من ورق زجاج لكشط سطح البريتوني لعضلات جدار البطن الصحيح. أن تكون أكثر عدوانية مع الرملي هنا من التركيز على الأعور وتستمر حتى كامل سطح جدار البطن الصحيح يبدو بخشونة. تجنب الرملي من الصعب جدا أن الجلد هو واضح من خلال الفتحات الموجودة في الطبقة العضلية. (الشكل 4)
- استخدام برنامج تشغيل إبرة كاسترو فيجو، تضع بين اثنين وأربعة الرقم ثمانية و4-0 غرز الحرير في الطبقة العضلية لجدار البطن الصحيح. ترك ذيول حوالي 5 ملم طويلة. الحرص على عدم قبض بطريق الخطأ جدار الأمعاء في خياطة الجروح. (الشكل 5)
- باستخدام حقنة 10 مل شغل ثاستعد إيث المالحة، لري الأمعاء عدة مرات. توجيه تيار من المياه المالحة في تجويف البطن للري الداخل أيضا. إذا كان السطح تحت الماوس يصبح غارقة، حرك الماوس فوق أو استبدال السطح، من أجل تجنب انخفاض حرارة الجسم.
- استخدام شاش معقم وضعت على الجرح لامتصاص الري الزائد.
- خذ قليل من النشا ويرشه على سطح جدار البطن اليمنى على كلا الجانبين من الأعور. (الشكل 6)
- تأكد من عدم وجود نزيف نشط. إذا كان هناك استخدام اسفنجة الشاش لممارسة الضغط مباشرة على درجة النزيف حتى يتوقف. إذا لم يتوقف النزيف بسهولة، ضع خياطة مرقئ كما هو موضح أعلاه.
- باستخدام نهاية حادة من الملقط وإصبع، ودفع بلطف الأمعاء مرة أخرى إلى تجويف البطن. ضع الأعور بجانب الغرز في جدار البطن الصحيح من أجل تحقيق أقصى قدر من تشكيل الالتصاق.
- Cتفقد شق البطن.
- باستخدام 6-0 امتصاص خياطة مضفر، وضع غرزة الوقوع في الطبقة العضلية في الجزء العلوي من شق.
- تشغيل خياطة أسفل باتجاه الجزء السفلي من شق، والجمع بين طبقة العضلات. السفر حوالي 3 ملم ويستغرق 3 لدغات ملم مع كل غرزة جديدة. الحرص على عدم اتخاذ قصد لدغة من الأمعاء في حين وضع الغرز.
- في الجزء السفلي من شق، وترك حلقة من الخيط من لدغة السابقة، واستخدام هذا لأداة ربط الخيط. قطع الخيط وترك 5 ملم ذيول.
- كرر الخطوات الثلاث المذكورة أعلاه مع 6-0 النايلون حيدة خياطة لإغلاق الجلد.
- إدارة 20 مل / كغ تحت الجلد المالحة بلعة (حوالي 0.5 مل لمدة 30 ز الماوس).
- باستخدام شاش جافة، يجف تماما الحيوان كله، والفراء ظهري يميل إلى الحصول على الرطب أثناء الري.
- فضفاضة التفاف لاصقة خلع الملابس حول البطن لتغطية الجرح. الحرص على عدم تقييد لالساقين نيمال أو الميكانيكا التنفس مع الملابس.
- ترصد بدقة الحيوان لأنه يتعافى من التخدير. إدارة البوبرينورفين كل 12 ساعة لمدة 2-3 أيام بعد العملية للسيطرة على الألم.
2. حصاد التصاق الأنسجة
- الانتظار مدة لا تقل عن سبعة أيام بعد الجراحة الأولية. مرة أخرى، الأوتوكلاف الأدوات الجراحية وتخدير الماوس مع isoflurane.
- تعقيم البطن مع betadine تليها الايثانول 70٪. حلاقة ويزيل الشعر الشعر إضافية من الجانب الأيمن من البطن بحيث لن تكون مشمولة في عينة التصاق يحتوي الجلد في الشعر، مما يجعل الأنسجة أكثر صعوبة.
- استخدام شق ناصف اليسار، منذ الأمعاء غالبا ما تمسك شق الأصلي. بدءا من النهاية السفلية من البطن، حوالي 5 ملم إلى اليسار من أسفل شق الأصلي، فهم الجلد بالملقط مسننة الصغيرة وقطع في الجلد مع مقص حاد. تمديد هذا خفض متفوقةلاي إلى القفص الصدري. (الشكل 7)
- باستخدام مقص، وقطع في الطبقة العضلية وبعد دخول الفضاء البريتوني، تمديد خفض إلى أعلى وأسفل من شق. سيكون هناك أنسجة لاصقة تسبب الأعور والأمعاء الدقيقة على التمسك جدار الأيمن من البطن، وربما أيضا إلى شق الأصلي. (الشكل 8)
- باستخدام مقص والبدء على حافة الجرح، فوق مستوى الأعور، البدء في قطع في جدار البطن في دائرة حول المنطقة حيث الأمعاء هو ملتصقة.
- بالتناوب فوق وتحت مستوى الأعور، وقطع تدريجيا على طول الطريق نحو الالتصاق وإكمال الدائرة، العائد في "الجزيرة" من الجلد والبطن ملتصقة الجدار إلى الأمعاء. (الشكل 9)
- مرة أخرى باستخدام مقص، وقطع في الأمعاء وفصل جزء ملتصقة عن بقية الأمعاء، مما أسفر عن شطيرة من الأنسجة التي تتكون من الجلد وجدار البطنعلى جانب واحد، الأمعاء على الجانب الآخر، والأنسجة لاصقة يربط بين اثنين من بينهما. (الشكل 10)
- اختياريا، واستخدام مقص وأشار إلى فصل حاد في الجلد من العضلات جدار البطن. لالأنسجة النظر في ترك الجلد المرفقة، ولكن للهضم وزنزانة انفرادية الجلد يمكن إزالتها. إذا كان سيتم استخدام الأنسجة لالأنسجة، تأكد من إزالة أكبر قدر ممكن من المواد خياطة ممكن من دون إزعاج بشكل مفرط واجهة لاصقة. للهضم والعزلة خلية من المقبول ترك الغرز في مكان طالما أن الأنسجة التي تمت تصفيتها هضم.
- بعد استئصال الأنسجة التصاق، الموت ببطء الماوس باستخدام طريقة إنسانية افقت لجنة استخدام الحيوان المؤسسية الخاص بك.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
في سبعة أيام بعد الجراحة، والأعور وربما القولون الصاعد، والكبد، وحلقات من الأمعاء الدقيقة ينبغي أن تكون ملتصقة إلى اليمين من جانب وجدار البطن. (الشكل 8) الأنسجة رفعه يمكن أن تكون جزءا لا يتجزأ ومقطوع وسوف تسفر عن الشرائح النسيجية ممتازة. (الشكل 11، 12)
عندما يتم تنفيذ الإجراء بشكل صحيح، يجب أن يكون 100٪ من الفئران التصاقات كبيرة في سبعة أيام. وينبغي أن يكون معدل وفيات أقل من 5٪.
الشكل 1: التحضير للجراحة (أ) وقد تم تأمين هذا الحيوان مع الشريط والبطن هيأهم مع betadine (ب) تم مسح betadine مع مسحة الكحول وتم وضع الستارة العقيمة..ام / ملفات / ftp_upload / 54450 / 54450fig1large.jpg "الهدف =" _ فارغة "> الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 2:.. شق يجب شق تمتد من مستوى المثانة إلى سيفي الشكل الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل (3): كشط من الأعور (أ) اللف الأعور على السبابة اليسرى مع طرف لافتا إلى اليمين يتيح للقاعدة من الأعور إلى أن يستقر بواسطة الإبهام الأيسر (ب) المستوى المناسب من الرملي يترك. الأعور مع سطح خشن أن أقل لامعة من قبل، ومع عدة نقاط دموية صغيرة من النزيف. ينبغي اتخاذ الحذر في حين الرملي قرب الجانب المساريقي، والأوعية هنا سوف تنزف أكثر بخفة. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الرقم 4: كشط جدار البطن والأحشاء اجتاحت جانبا وغطى بالرمل السطح البريتوني في الجدار العضلي حتى يظهر الخام. الأوعية الدموية ينظر فقط فوق الصنفرة في كثيرا ما واجهت جدار البطن ولكن لن تنزف بشكل كبير. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الرقم 5: التنسيب للخياطة الرقم من بين ثمانية والحرير الرقم ثمانية وخياطة وضعها في الجدار العضلي، قبل تعادلهما بانخفاض الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الرقم 6: تطبيق لصناعة النشا ورش طبقة خفيفة من النشا خلال جدار البطن والأمعاء. اثنين من الرقم ثمانية وتعتبر الغرز في الجدار العضلي. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الرقم 7: شق لجراحة الثانية (أ) بدأ شق فقط إلى يسار شق الأصلي (ب) يجب أن يمتد الشق الجديد من مستوى المثانة إلى القفص الصدري.. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الرقم 8: والتصاق حلقات من الأمعاء الدقيقة (SB) هي ملتصقة على جدار الصحيح ولبعضها البعض. شق الأصلي خط الوسط، وشفى الآن، وينظر (المؤتمر الوطني العراقي). الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل (10): عينة قطع في الأمعاء سوف تسفر عن شطيرة من الأنسجة مع الأمعاء على جانب واحد (أ) والجلد على الجانب الآخر (ب). يجب إزالة قطعة من الخيط مرئية إذا العينة هي لاستخدامها في الأنسجة. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الرقم 11: علم الأنسجة والهيماتوكسيلين ويوزين (H & E) ملطخة قسم من التصاق في سبعة أيام بعد الجراحة تظهر الجلد وجدار البطن (أسفل) تعلق عبر واجهة لاصق على الأعور (أعلى). في هذه المرحلة وقت مبكر من المرجح الالتزام الأعور إلى جدار البطن بشكل رئيسي من خلال الفيبرين والجزيئات الأخرى، وندبا كبيرة لم تتشكل بعد. يرجى النقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.
الرقم 12: التصوير مناعي مقطع من التصاق في سبعة أيام بعد الجراحة الملون immunofluorescently ل-α السلس ميلان العضلات.القصدير، والتي تبين تلطيخ الحقيقي للبصيلات الشعر الجلد (يسار) والجدار العضلي الأعور (وسط)، وتلطيخ غير محددة من سطح اللمعية الأعور (يمين). الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
الخطوات الحاسمة في هذا الإجراء هي: الكشط بدقة الأعور دون التسبب في ثقب، وضع خيوط في جدار البطن، وتطبيق كمية مناسبة من النشا. تنطبق إلا الصنفرة لالأعور، أو لجزء معين صغير من الأمعاء. استخدام واسع من الصنفرة على كميات كبيرة من الأمعاء الدقيقة يميل إلى أن يسبب الشلل اللفائفي كبير. الحرص على كشط الأعور مع ما يكفي من القوة أن يصبح سطح خشن، ولكن ليس لدرجة أن الدموع الجدار. يمكن العثور على هذا التوازن سوف تستغرق بعض الوقت. التعامل دائما الأمعاء بعناية وتجنب استخدام الملقط حادة أو مسننة للتلاعب الأمعاء. فمن السهل أن تتسبب عن طريق الخطأ النزيف عن طريق الاستيلاء مساريق الأمعاء الدقيقة مع ملقط أو من خلال سحب على الأمعاء بقوة مفرطة.
في حالة حدوث تمزق في جدار الأعور، يجب إنهاء الإجراءات والموت الرحيم للحيوان. في تجربتنا، والنتائج المسيل للدموع الأعور في موت الحيوان بعد أيام قليلة، حتى لو المسيل للدموع هو تصليح هياكلIRED جيدا. وبالإضافة إلى ذلك، سوف المسيل للدموع من الجدار الأعور يسبب تسرب البراز من شأنها أن تؤثر على الاستجابة الالتهابية بطريقة لا يمكن التنبؤ بها.
يجب أن يكون الارقاء الكامل في نهاية هذا الإجراء. وبعض السفن نزيف إعادة فتح ويبدأ ينزف بعد ظهوره قد توقف. عندما تكون في شك، وضع حيدة الرقم ثمانية وخياطة للامتصاص حول نقطة النزيف. هذا النوع من خياطة أفضل من الحرير أو مضفر خياطة للامتصاص لأنه يمكن سحبها على الرغم من أن الأنسجة مع الحد الأدنى من المقاومة. ومع ذلك فقد وجدنا أن الحرير أو مضفر خياطة للامتصاص هو الأكثر فعالية في جدار البطن لإحداث الالتصاقات، وحيدة هي أقل حدة.
تطبيق النشا في نهاية الإجراء يساعد على زيادة تشكيل الالتصاقات، ولكن اكتشفنا أن كمية زائدة من النشا سوف يسبب رد فعل للالتهابات التي تسبب الموت. يجب رش نشا على lightlذ. لا ينبغي أن يكون هناك الكثير بحيث تشكل طبقة صلبة.
عندما تعلم لأول مرة هذا الإجراء، فإنه من الشائع أن يخسر عدة الفئران. في تجربتنا الأسباب الأكثر شيوعا للوفاة هي الجفاف يرجع إلى العلوص الناجم عن تآكل قوية أكثر من اللازم من الأمعاء، وتعفن الدم بسبب انثقاب الأمعاء. يمكن أن تحدث الوفاة الناتجة عن النزيف إذا لم يتم تحقيق الإرقاء الكامل في نهاية عملية جراحية.
إذا تشكيل التصاق غير كاف، النظر في استخدام تآكل أكثر عدوانية من الأعور وجدار الصحيح، وترك المزيد من النشا، أو وضع المزيد من الغرز على جدار البطن. في تجربتنا، والانتظار لمدة تقل عن أسبوع قبل إعادة فتح نتائج البطن في أقل من تشكيل التصاق كاف. من ناحية أخرى، إذا كان معدل وفيات الفئران بعد الجراحة عالية، والنظر في استخدام تآكل أقل عدوانية من الأعور، وتفتيش عن كثب لالارقاء، وتطبيق أقل النشا. ومن المهم أيضا أن ترصد بدقةمعدل التنفس من الفأرة أثناء الجراحة. وبمجرد أن يحصل على مكاسب الجراح مع هذا الإجراء، يجب أن يكون معدل وفيات أقل من 10٪.
تم تصميم هذه التقنية لتشكيل المقام الأول التصاقات بين الأعور والحق في جدار البطن. والتصاقات أيضا غالبا ما تشكل بين الأمعاء الدقيقة والكبد، وشق خط الوسط. باستخدام هذه التقنية عادة لا يسبب التصاقات على الجانب الأيسر من البطن. وجود قيود على هذا الأسلوب هو أن التصاقات بين الأمعاء وجدار البطن هم أكثر عرضة للتشكيل من التصاقات بين حلقات من الأمعاء. وبالإضافة إلى ذلك، فإنه ليس من المحتمل أن يؤدي في كامل البطن المجمدة تماما من نسيج لاصق، والتي غالبا ما ينظر في البشر الذين لديهم عمليات جراحية متعددة.
كما نوقش في المقدمة، العديد من التقنيات لإنتاج التصاقات في البطن لدى الفئران وغيرها من الأنواع، وخاصة الفئران، وقد وصفت في الأدب 6،12-14. هناك عدد أقل بكثير من protoco المنشورة ليرة سورية لإنشاء التصاقات في الفئران. نحن التكهن بأن لأنه خلق من التصاقات في الفئران أكثر صعوبة مما كان عليه في الفئران، واختار معظم الباحثين على تطوير تقنيتهم في الفئران. ومع ذلك، نظرا لتوافر قدر أكبر من الفئران المعدلة وراثيا والأجسام المضادة لمكافحة فأر، ونحن نعتقد أنه من المفيد أن نموذج قوي لخلق التصاق في الفئران، على الرغم من صعوبة فنية أكبر. وضعنا هذا البروتوكول بعد محاولة العديد من البروتوكولات الفئران التي تم نشرها. لقد وجدنا أن وسائل لخلق التصاقات في الفئران، مثل استخدام كهربي على الأعور، وغالبا ما تسبب الفئران أن يموت. لم نكن راضين عن كثافة الالتصاقات التي تنتجها التقنيات التي تستخدم تدخل واحد، مثل وضع جدار أزرار الدماغية وحده، أو فقط الكشط الأعور. تقنية نقدم هنا تمثل مجموعة من التدخلات التي وجدنا من خلال التجربة والخطأ، لإنتاج التصاقات باستمرار مع التقليل من الوفيات.
محتوى "> لأن هذا الأسلوب يسبب باستمرار الأنسجة لاصقة لتشكيل بين الأعور وجدار، ونحن نعتقد أنه من المثالي لتدخلات اختبار مصممة للحد من تشكيل الالتصاق. أيضا هذه التقنية يمكن استخدامها لاستكشاف المسارات الجزيئية وأنواع الخلايا التي هي تشارك في تشكيل الالتصاق. الأنسجة التصاق يمكن بسهولة أن يستأصل وعلى استعداد لالأنسجة، وعوائد الصور النسيجية ممتازة (أرقام 11، 12).بعض الباحثين قد يرغب نموذج الذي التصاقات تشكل أقل من 100٪ من الوقت. وإهمال تطبيق النشا خفض معدل التصاق إلى ما يقرب من 80٪. سوف يقلل من عدد من الخيوط الحريرية وضعها في جدار البطن الأيمن خفض معدل التصاق أبعد من ذلك.
في تجربتنا، اليوم السابع بعد الجراحة هو نقطة لأول مرة حيث الأمعاء هو تمسكا باستمرار لجدار البطن. ومع ذلك، قد يكون نقطة زمنية أخرى أكثر أهمية اعتماداعلى تركيز المشروع. على سبيل المثال، والباحثين المهتمين هجرة العدلات والضامة في الفضاء التصاق قد ترغب في حصاد الأنسجة في الأيام الخمسة الأولى بعد الجراحة. من ناحية أخرى، وترسب الكولاجين الليفية يحدث لعدة أسابيع بعد الإصابة الأولية، ولهذا سيكون أكثر ملاءمة لفحص الأنسجة في نقاط زمنية متباعدة لعدة أسابيع بعد الجراحة.
loupes لالجراحية هي مفيدة جدا للتضخم الجراحي الميداني أثناء أداء هذا الإجراء. ويمكن أيضا المجهر الجراحي استخدامها ولكن يحد من قدرة الجراح لتفقد مجال الجراحة من زوايا مختلفة. ويمكن أيضا أن يتم ذلك الإجراء مع أي التكبير على الإطلاق.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
الكتاب تعلن أنه ليس لديهم مصالح مالية المتنافسة.
Acknowledgments
وأيد آلية التنمية النظيفة من قبل الكلية الأمريكية للجراحين (ACS) منحة بحثية المقيم. وأيد MSH من معهد كاليفورنيا للطب التجديدي (CIRM) التدريب زميل السريرية منحة TG2-01159. ودعمت MSH، هبل، وMTL من قبل الجمعية الأمريكية لجراحي الوجه والفكين (ASMS) / مؤسسة جراحي الوجه والفكين (أطباء بلا حدود) جائزة منحة بحثية. وأيد هبل من قبل منحة المعاهد الوطنية للصحة R01 GM087609 وهدية من إنغريد لاي وبيل شو تكريما لأنتوني شو. ودعمت هبل وMTL من قبل مختبر Hagey للأطفال الطب التجديدي، ومؤسسة أوك. وأيد MTL من الصندوق غن / أوليفييه.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Fisherbrand Absorbent Underpads, 20" x 24" | Fisher Scientific | 14-206-62 | |
| Polylined Sterile Field, 18" x 24" | Busse Hospital Disposables | 696 | Cut a rectangular hole of the appropriate size |
| Isothesia isoflurane | Henry Schein | 050033 | |
| Fisherbrand Sterile cotton gauze pad, 4" x 4" | Fisher Scientific | 22-415-469 | |
| Puralube petrolatum ophthalmic ointment, 1/8 oz. tube | Dechra Veterinary Products | NDC 17033-211-38 | |
| Nair depilatory cream | Church & Dwight Co. | 22339-05 | |
| Buprenex buprenorphine 0.3 mg/ml | Reckitt Benckiser Pharmaceuticals Inc. | NDC 12496-0757-5 | |
| 1 cc insulin syringe, 27 G | Becton Dickinson | 329412 | |
| Povidone Iodine Prep Solution | Medline | MDS093944H | |
| Webcol alcohol prep swabs | Covidien | 6818 | |
| General-Purpose Labarotory Labeling tape | VWR | 89097-912 | |
| BioGel PI surgical gloves | Mölnlycke Health Care | ALA42675Z | |
| Micro Forceps with teeth | Roboz | RS-5150 | |
| Fine scissors- sharp | Fine Science Tools | 14060-09 | |
| Straight serrated forceps | Fine Science Tools | 11050-10 | |
| Castro-Viejo needle driver | Fine Science Tools | 12565-14 | |
| 100 grit 1/4 sheet sandpaper | ACE Hardware | 1010446 | Cut into strips |
| 4-0 silk suture, 30", SH needle | Ethicon | K831 | |
| 7-0 PDS II absorbable monofilament suture, 30", BV-1 needle | Ethicon | Z135 | Usually comes double-armed. Cut the suture at the midway point to generate two usable sutures. |
| Rice starch | MP Biomedicals | 102955 | |
| 0.9% Sodium Chloride Irrigation | Baxter | BHL2F7121 | Warm to 37 °C prior to use |
| 10 ml syringe | Becton Dickinson | 309604 | |
| 6-0 Vicryl absorbable braided suture, 18", RB-1 taper needle | Ethicon | J212H | |
| 6-0 Ethilon nylon monofilament suture, 18", P-3 needle, | Ethicon | 1698G | |
| Tegaderm Transparent Film Dressing Frame Style, 6 cm x 7 cm | 3M | 1624W | Cut in half lengthwise |
References
- Ellis, H., et al. Adhesion-related hospital readmissions after abdominal and pelvic surgery: a retrospective cohort study. Lancet. 353 (9163), 1476-1480 (1999).
- Brochhausen, C., et al. Current strategies and future perspectives for intraperitoneal adhesion prevention. J Gastrointest Surg. 16 (6), 1256-1274 (2012).
- diZerega, G. S., Campeau, J. D. Peritoneal repair and post-surgical adhesion formation. Hum Reprod Update. 7 (6), 547-555 (2001).
- Hellebrekers, B. W., Kooistra, T. Pathogenesis of postoperative adhesion formation. Br J Surg. 98 (11), 1503-1516 (2011).
- Herrick, S. E., et al. Human peritoneal adhesions are highly cellular, innervated, and vascularized. J Pathol. 192 (1), 67-72 (2000).
- Beyene, R. T., Kavalukas, S. L., Barbul, A. Intra-abdominal adhesions: Anatomy, physiology, pathophysiology, and treatment. Curr Probl Surg. 52 (7), 271-319 (2015).
- ten Broek, R. P., et al. Benefits and harms of adhesion barriers for abdominal surgery: a systematic review and meta-analysis. Lancet. 383 (9911), 48-59 (2014).
- Becker, J. M., et al. Prevention of postoperative abdominal adhesions by a sodium hyaluronate-based bioresorbable membrane: a prospective, randomized, double-blind multicenter study. J Am Coll Surg. 183 (4), 297-306 (1996).
- Cassidy, M. R., Sherburne, A. C., Heydrick, S. J., Stucchi, A. F. Combined intraoperative administration of a histone deacetylase inhibitor and a neurokinin-1 receptor antagonist synergistically reduces intra-abdominal adhesion formation in a rat model. Surgery. 157 (3), 581-589 (2015).
- Thaler, K., et al. Coincidence of connective tissue growth factor expression with fibrosis and angiogenesis in postoperative peritoneal adhesion formation. Eur Surg Res. 37 (4), 235-241 (2005).
- Hong, G. S., et al. Effects of macrophage-dependent peroxisome proliferator-activated receptor gamma signalling on adhesion formation after abdominal surgery in an experimental model. Br J Surg. 102 (12), 1506-1516 (2015).
- Whang, S. H., et al. In search of the best peritoneal adhesion model: comparison of different techniques in a rat model. J Surg Res. 167 (2), 245-250 (2011).
- Buckenmaier, C. C. 3rd, Pusateri, A. E., Harris, R. A., Hetz, S. P. Comparison of antiadhesive treatments using an objective rat model. Am Surg. 65 (3), 274-282 (1999).
- Rajab, T. K., et al. An improved model for the induction of experimental adhesions. J Invest Surg. 23 (1), 35-39 (2010).
