Introduction
Abdominalen Adhäsionen sind eine Form von Narbengewebe, das in Reaktion auf eine Entzündung im Abdomen bilden, in der Regel nach einem chirurgischen Eingriff oder intraabdominale Infektion. Adhäsionen sind eine der Hauptursachen für chronische Bauchschmerzen und Unfruchtbarkeit, und sind die häufigste Ursache von Dünndarmobstruktion 1. Das Vorhandensein von Adhäsionen macht die Durchführung einer zweiten Bauchoperation schwieriger und erhöht die Wahrscheinlichkeit von Komplikationen 2.
Trotz jahrelanger Forschung, bleiben die Mechanismen, die die Bildung von Adhäsionen zugrunde liegenden schlecht verstanden. Es ist bekannt , dass eine anfängliche Schädigung der peritonealen Oberfläche eine Exsudation von Fibrin-reichen Flüssigkeit verursacht, die dann ein Gerinnsel bildet , das die Oberflächen des Darms und der Bauchwand 3 zusammen bindet. Später wandern Fibroblasten und andere Zellen in die Klebefläche und Bindegewebe 4 absondern. Über Monate bis Jahre reift die Adhäsion von Blutgefäßen entwickeln und Nerven Mehrere kommerzielle Produkte existieren, die die Bildung von Adhäsionen nach Bauchchirurgie (zB Seprafilm) zu reduzieren sollen. Alle diese Produkte wirken als mechanische Barrieren und Adhäsionsbildung stoppen durch physischen Kontakt zwischen Darmschlingen und der Bauchwand 6,7 verhindern. Trotz des Beweises aus einer kontrollierten Studie , die eine chirurgische Adhäsionsbarriere die Bildung von Adhäsionen verringert 8, anekdotisch viele Chirurgen haben mit der Wirksamkeit der mechanischen Barriere Produkte enttäuscht worden. Momentan gibt es keine Drogen-basierte Anti-Adhäsions-Therapien, was die Tatsache widerspiegelt, dass die genauen in Adhäsionsbildung beteiligten Prozesse kaum verstanden werden. Entwicklung einer Therapie, die bei der Bildung beteiligten zellulären oder molekularen Mittel von Adhäsionen speziell Ziele wird ein verbessertes Verständnis der Ereignisse erfordern, die in der Bildung der Adhäsion beteiligt sind. Mehrere Gruppes haben molekularen Mechanismen identifiziert , die für die Bildung von Adhäsionen 9-11 wichtig sein kann. Tiermodelle bieten eine hervorragende Umgebung für die Bildung von Verwachsungen zu studieren. Viele Studien wurden in mehreren Tieren, insbesondere Ratten und Mäusen 6,12-14 beschreibt die chirurgische Schaffung Haftung veröffentlicht. Aufgrund unserer Erfahrung Fibrose in der Maus und der breiten Verfügbarkeit von transgenen Mäusen und Maus-basierten Antikörper mit dem Studium, wählten wir die Maus als unser Modell für die Untersuchung von Adhäsionen. Hier berichten wir über die Technik, die wir entwickelt haben, reproduzierbar und zuverlässig Verwachsungen in der Maus erstellen.
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Protocol
Das folgende Protokoll wurde von der Stanford University Institutional Animal Care und Use Committee (IACUC) und erfüllt alle institutionellen ethischen Richtlinien in Bezug auf die Verwendung von Versuchstieren genehmigt.
1. Schaffung von Verwachsungen
- Beginnen Sie mit der Maus auf Antibiotika-Chow-Diät eine Woche vor dem Eingriff.
- Autoclave die chirurgischen Instrumente und vorwärmen die Salz Spüllösung.
- Anesthetize die Maus 2% inhalativen Isofluran verwenden.
- Mit Hilfe einer Haarschneidemaschine durch eine schnelle Anwendung gefolgt (5 - 10 s eingestellt) von Enthaarungsmittel, entfernen Sie das Haar von der Mehrheit der Oberfläche des Bauches. Gründlich entfernen Sie das Enthaarungsmittel, indem Sie vorsichtig mit nassen Gaze abgewischt und gegebenenfalls durch sorgfältig die untere Hälfte der Maus in warmes Wasser tunken. Gründlich trocknen das Tier.
- Legen Sie die Schnauze des Tieres in die Betäubung Bugnase. Während der gesamten Operation sorgfältig überwachen die respiratory Rate des Tieres und titriert das Anästhetikum Flussrate nach Bedarf.
- Verwenden, um eine Erwärmungsvorrichtung, wie beispielsweise ein Heizkissen oder eine Wärmelampe, Hypothermie zu verhindern.
- Vor den Bauch prepping, sichern Sie die Maus mit Klebestreifen über und unter dem Bauch gelegt von der Maus zu verhindern, während der Operation zu verschieben. Desinfizieren Sie den Bauch mit betadine, dann folgen mit 70% Ethanol. Fügen Sie so viel Fläche wie möglich in der Vorbereitung, an den Rändern des rasierten Bereich der Haare darunter. Legen Sie ein steriles Tuch über die Maus. (Figur 1)
- Subkutan injizieren 0,1 mg / kg Buprenorphin oder 3 ug für eine 30 g-Maus.
- Machen Sie den Hautschnitt.
- mit einer scharfen Schere Beginnend in der unteren Bauchmittellinie, fassen Sie die Haut mit einer Pinzette und einem flachen vertikalen Schnitt in der Haut.
- Tragen Sie den Schnitt kranial zum Xyphoid mit der Schere. Achten Sie darauf, nur die Haut zu gelangen.
- Da die Bauchmuskulatur ist now sichtbar die Eingeweide bedeckt, greifen die Mittellinie der Muskulatur mit einer Pinzette und sehr sorgfältig einen kleinen Schnitt in sie mit einer scharfen Schere machen. Achten Sie darauf, nicht aus Versehen in ein Bauchorgan zu schneiden.
- die Bauchraum mit einem kleinen Schnitt und zu sehen, die Muskelschicht ziehen weg von der Bauchorgane nach der Eingabe erweitern den Schnitt nach kranial und kaudal durch die Schere in die Öffnung einsetzen und vorsichtig in beide Richtungen schneiden. Erweitern Sie den Schnitt aus der Xyphoid kranial bis über die Blase inferior. (Figur 2)
- Nun, da der Darm ausgesetzt sind, suchen Sie den Blinddarm und sanft exteriorisieren. Vermeiden Sie den Blinddarm mit gezahnten oder scharfe Zange greifen. Verwenden Sie stattdessen eine atraumatische Zange wie einer Adson gezackten Zange.
- Schürfen die Blinddarm mit Schmirgelpapier.
- Sanft abzuschleifen 30 die gesamte Oberfläche beider Seiten des Blinddarms mit 100 Schleifpapier - 60 Sekunden, bis die Oberfläche appea weniger glänzend und Petechien wirdr auf der Oberfläche. Wenn der Chirurg rechtshändig ist, hilft es, den Blinddarm mit der Spitze nach rechts gerichtet zu orientieren und den Blinddarm über den Chirurgen linken Zeigefinger drapieren. (Figur 3)
- Führen Sie die Schleif sanft, da es leicht versehentlich eine Perforation der dünnen Blinddarmwand verursachen. Eine kleine Menge von Sandigkeit sollte empfunden werden, wie das Schleifpapier entlang der Blinddarmoberfläche bewegt wird. Wenn das Sandpapier wiederholt auf den Blinddarm zu spüren ist zu kontrollieren, wird dies wahrscheinlich eine Träne in der Blinddarmwand verursachen. Achten Sie sorgfältig, um sicherzustellen, dass Partikel von Schmirgelpapier nicht lösen und im Bauch bleiben, da dies eine übermäßige Fremdkörperreaktion hervorrufen kann.
- Wenn ein Riss in der Blinddarmwand auftritt, das Verfahren zu beenden und das Tier einschläfern.
- Wenn ein Blinddarm Blutgefäß durch das Schmirgelpapier geschert wird und verursacht Blutungen, halten Druck für bis zu zwei Minuten mit Gaze. Wenn jedoch Blutungen nach dieser Zeit bestehen, stellen eine Figur einer Acht 7-0 Monofilament Naht um diePunkt von Blutungen. Dies wird die Blutung in fast allen Fällen zuverlässig stoppen. Achten Sie darauf, nicht eine große Menge an Blinddarmwand in die Naht zu übernehmen, da diese Nekrose des betroffenen Teils der Wand Risiken verursachen.
- Verletzen die rechte Bauchseitenwand.
- Verwenden eines Streifens aus Schleifpapier der peritonealen Oberfläche des Muskel der rechten Bauchseitenwand abzuschleifen. Seien Sie aggressiver mit dem Schleif hier als auf der Blinddarm und fortgesetzt, bis die gesamte Oberfläche der rechten Bauchseitenwand erscheint aufgeraut. Vermeiden Sie so hart Schleifen, dass die Haut durch Öffnungen in der Muskelschicht sichtbar ist. (Figur 4)
- Mit einem Castro-Viejo Nadeltreiber, zwischen zwei und vier Ziffer-acht 4-0-Seiden Stiche in die Muskelschicht der rechten Bauchseitenwand. Lassen Sie die Schwänze etwa 5 mm lang. Achten Sie darauf, nicht versehentlich Darmwand in die Naht zu fangen. (Figur 5)
- Mit einem 10-ml-Spritze gefüllt with erwärmten Salzlösung, um den Darm mehrmals bewässern. Richten Sie den Strom von Kochsalzlösung in die Bauchhöhle als auch das Innere zu bewässern. Wenn die Oberfläche der Unterseite der Maus getränkt wird, bewegen Sie die Maus über oder um die Oberfläche zu ersetzen, um Unterkühlung zu vermeiden.
- Verwenden Sie eine sterile Gaze über den Schnitt gelegt, um überschüssige Bewässerung aufzusaugen.
- Nehmen Sie eine Prise Stärke und streuen Sie es auf die Oberfläche des rechten Bauchseitenwand und auf beiden Seiten des Blinddarms. (Figur 6)
- Stellen Sie sicher, dass es keine aktive Blutung ist. Wenn vorhanden ist, verwenden Sie einen Gazeschwamm Druck direkt auf den Punkt von Blutungen gelten bis zum Anschlag. Wenn die Blutung nicht ohne weiteres zu stoppen, setzen Sie eine hämostatische Naht, wie oben beschrieben.
- Mit dem stumpfen Ende der Zange und einem Finger, drücken Sie vorsichtig den Darm wieder in die Bauchhöhle. Positionieren Sie den Blinddarm neben den Nähten in der rechten Bauchseitenwand, um die Bildung von Adhäsionen zu maximieren.
- Cverlieren die Bauchschnitt.
- Mit 6-0 resorbierbaren geflochtenen Naht, legen Sie einen Vorstich in die Muskelschicht an der Spitze des Einschnitts.
- Führen Sie den Faden nach unten in Richtung des Bodens des Einschnitts, womit sich die Muskelschicht zusammen. Reisen von etwa 3 mm und 3 mm nehmen Bissen mit jeder neuen Masche. Achten Sie darauf, nicht zu nehmen versehentlich einen Bissen von Darm, während Nähte setzen.
- An der Unterseite des Einschnitts, um eine Schleife der Naht aus dem vorherigen bite verlassen und verwenden diese, um das Instrument Nahtverbindungs. Schneiden Sie die Naht verlassen 5 mm Schwänze.
- Wiederholen Sie die obigen drei Schritte mit 6-0 Nylon-Monofilament Naht der Haut zu schließen.
- Verwalten einer 20 ml / kg subkutan Salz Bolus (etwa 0,5 ml für eine 30 g Maus).
- Mit einem trockenen Gaze, gründlich trocknen das gesamte Tier, wie die dorsale Fell während der Bewässerung zu nass neigt.
- Locker einen Klebstoff wickeln um den Bauch, den Einschnitt zu decken Dressing. Achten Sie darauf, nicht das eine zu beschränkennimal Beine oder Atemmechanik mit dem Dressing.
- sorgfältig überwachen, um das Tier, wie es aus der Narkose erholt. Verabreichen Buprenorphin alle 12 Stunden für 2-3 Tage nach dem Eingriff zur Schmerzkontrolle.
2. Ernte Adhesion Tissue
- Warten Sie mindestens sieben Tage nach der ersten Operation. Auch chirurgische Instrumente im Autoklaven und die Maus mit Isofluran anästhesiert.
- Sterilisieren Sie den Bauch mit betadine um 70% Ethanol. Rasur und enthaaren zusätzliche Haare von der rechten Seite des Bauches so daß die Haftung Probe Haut enthalten, nicht in Haar bedeckt werden, die Histologie erschwert.
- Verwenden Sie einen links paramedian Einschnitt, da Darm oft auf den ursprünglichen Schnitt geklebt wird. Beginnend am unteren Ende des Bauches, ca. 5 mm nach links von der Unterseite des ursprünglichen Einschnitt, fassen Sie die Haut mit kleinen Zahnzange und Schnitt in die Haut mit einer scharfen Schere. Erweitern Sie diese schneiden überlegenly auf den Brustkorb. (Figur 7)
- Mit einer Schere, schneiden in die Muskelschicht und nach dem Peritonealraum eintritt, erweitern den Schnitt an der Ober- und Unterseite des Einschnitts. Es werden Klebstoffgewebe sein, das Zökum und Dünndarm verursachen an der rechten Seitenwand des Bauches zu haften und gegebenenfalls auch auf den ursprünglichen Einschnitts. (Figur 8)
- Mit Hilfe der Schere und beginnend am Rand des Einschnitts, über dem Niveau des Blinddarms, starten rund um den Bereich in einem Kreis in die Bauchdecke schneiden, wo der Darm haftet.
- Abwechselnd oberhalb und unterhalb der Ebene des Blinddarms, nach und nach den ganzen Weg um die Haftung geschnitten und der Kreis, eine "Insel" von Haut und Bauchwand verwachsen den Darm führt. (Figur 9)
- Wieder mit der Schere, in den Darm schneiden und trennen den anhaftenden Teil vom Rest des Darms, ein Sandwich von Gewebe ergibt, die Wand von Haut und Bauch bestehtauf der einen Seite, des Darms auf der anderen Seite, und Klebstoffgewebe Verbinden der beiden dazwischen. (Abbildung 10)
- Gegebenenfalls kann ein spitzer Schere verwenden, um scharf die Haut von der Bauchwand Muskeln trennen. Für die Histologie betrachten sich die Haut immer angebracht ist, sondern für die Verdauung und Zellisolierung kann die Haut entfernt werden. Wenn das Gewebe für die Histologie verwendet werden, stellen Sie sicher, so viel Nahtmaterial wie möglich zu entfernen, ohne übermäßig die Klebstoff-Schnittstelle zu stören. Für die Verdauung und Zellisolierung ist es akzeptabel, die Nähte an Ort und Stelle zu verlassen, solange die Gewebe digest filtriert.
- Haftung Gewebe Nach Exzision, einschläfern die Maus eine humane Methode, indem Sie Ihre institutionellen Tiernutzung Ausschuss genehmigt werden.
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Representative Results
Um sieben Tage nach der Operation, Caecum und möglicherweise Colon ascendens, Leber und Dünndarmschlingen sollte auf die rechtsseitige Bauchwand anhaftenden sein. (Abbildung 8) Abgeschnittene Gewebe eingebettet und geschnitten werden und ausgezeichnete histologischen Schnitten ergeben. (11, 12)
Wenn das Verfahren korrekt durchgeführt wird, sollte 100% der Mäuse haben erhebliche Verwachsungen an sieben Tage. Mortalität sollte weniger als 5% betragen.
Abbildung 1: Vorbereitung für Chirurgie (a) Das Tier wurde mit Band und dem Bauch prepped mit betadine gesichert (b) Der betadine mit einem Alkoholtupfer gelöscht wurde und ein steriles Tuch platziert wurde...om / files / ftp_upload / 54450 / 54450fig1large.jpg "target =" _ blank "> Bitte hier klicken, um eine größere Version dieser Figur zu sehen.
Abbildung 2:.. Incision Der Schnitt aus der Ebene der Blase auf die Xyphoid verlängern sollte Bitte klicken Sie hier um eine größere Version dieser Figur zu sehen.
Abbildung 3:. Abrieb des Blinddarms (a) Drapieren der Blinddarm über den linken Zeigefinger mit der Spitze nach rechts zeigen , ermöglicht die Basis des Blinddarms durch den linken Daumen stabilisiert werden (b) Ein angemessenes Niveau Schleifblätter der. Zökum mit einer rauen Oberfläche, dass glänzend kleiner als zuvor, und mit mehreren petechial Punkte von Blutungen. Besondere Sorgfalt sollte beim Schleifen in der Nähe der mesenterialen Seite genommen werden, da die hier Schiffe zügig die meisten bluten. Bitte klicken Sie hier , um eine größere Version dieser Figur zu sehen.
Abbildung 4:. Abrieb der Bauchwand Die Eingeweide werden aufgehoben und die Peritonealdialyse Oberfläche der Muskelwand gekehrt wird geschliffen , bis sie rau erscheint. Das Blutgefäß direkt über dem Sandpapier in der Bauchwand zu sehen ist häufig anzutreffen , aber nicht wesentlich bluten. Bitte hier klicken , um eine größere Version dieser Figur zu sehen.
Abbildung 5:.. Die Platzierung der Figur einer Acht Suture Ein Seiden Ziffer-acht Naht in die Muskelwand platziert, vor dem nach unten gebunden zu sein Bitte hier klicken , um eine größere Version dieser Figur zu sehen.
Abbildung 6:. Die Anwendung von Stärke eine leichte Schicht von Stärke wird über die Bauchseitenwand und Darm gestreut. Zwei Zahl-von-acht Fäden in der Muskelwand zu sehen sind. Bitte klicken Sie hier , um eine größere Version dieser Figur zu sehen.
7: Incision für die zweite Operation (a) Der Schnitt nur auf der linken Seite des ursprünglichen Einschnitt gestartet wird (b) Der neue Schnitt aus der Ebene der Blase auf den Brustkorb erweitern sollte... Bitte hier klicken , um eine größere Version zu sehen diese Figur.
Abb . 8: Die Haftung Dünndarmschlingen (SB) sind anhaftend an der rechten Seitenwand und zueinander. Der ursprüngliche Mittelschnitt, jetzt geheilt wird (Inc) zu sehen. Bitte klicken Sie hier , um eine größere Version dieser Figur zu sehen.
Abbildung 10:. Die Probe Schneiden über den Darm wird auf der einen Seite ein Sandwich von Gewebe mit Darm ergeben (a) und die Haut auf der anderen Seite (b). Die Stücke der Naht sichtbar entfernt werden sollten , wenn die Probe für die Histologie verwendet werden soll. Bitte klicken Sie hier , um eine größere Version dieser Figur zu sehen.
Abb . 11: Histologie A Hämatoxylin und Eosin (H & E) Abschnitt einer Haft an sieben Tage nach der Operation zeigt Haut und Bauchwand (unten) angebracht über die Klebe Schnittstelle zum Blinddarm (oben) gefärbt. Zu diesem frühen Zeitpunkt ist der Blinddarm an der Bauchdecke vor allem durch Fibrin und andere Moleküle wahrscheinlich eingehalten und erhebliche Narbengewebe noch nicht gebildet. Bitte hier klicken , um eine größere Version dieser Figur zu sehen.
Abbildung 12: Immunfluoreszenz - Imaging Ein Abschnitt der Adhäsion an sieben Tage nach der Operation immunofluorescently für α-smooth muscle ac gefärbt.Zinn, wahre Färbung der Haut Haarfollikel (links) und cecal Muskelwand (Mitte) und nicht-spezifische Färbung der cecal luminalen Oberfläche (rechts) zeigt. Bitte hier klicken , um eine größere Version dieser Figur zu sehen.
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Discussion
Die kritischen Schritte in diesem Verfahren sind: gründlich den Blinddarm Abschleifen ohne Perforation verursacht, Nähte in der Bauchseitenwand und die Anwendung die richtige Menge an Stärke setzt. Nur Schleifpapier Caecum anzuwenden oder zu einem kleinen spezifischen Teil des Darms. Breiter Einsatz von Schmirgelpapier auf große Mengen von Dünndarm neigt erhebliche Ileus zu verursachen. Achten Sie darauf, den Blinddarm mit genug Kraft, um abzuschleifen, dass die Oberfläche rau wird, aber nicht so sehr, dass die Wand reißt. Diese Balance zu finden, kann einige Zeit dauern. Fassen Sie den Darm sorgfältig und vermeiden Sie scharfe oder Zahn Pinzette Darm zu manipulieren. Es ist leicht, aus Versehen eine Blutung zu verursachen, indem sie den Dünndarm Gekröse mit einer Pinzette greifen oder zu stark auf den Darm ziehen.
Wenn ein Riss in der Blinddarmwand auftritt, sollte das Verfahren beendet werden und das Tier eingeschläfert. In unserer Erfahrung ist cecal tear Ergebnisse in Tod des Tieres nach einigen Tagen, selbst wenn der Riss repaired gut. Darüber hinaus Riss der Blinddarmwand wird verschüttetes Stuhl verursachen, die die entzündliche Reaktion auf unvorhersehbare Weise beeinflussen wird.
Hämostase muss am Ende des Verfahrens vollständig sein. Einige blutenden Gefäße werden wieder zu öffnen und starten, nachdem bluten nicht mehr gezeigt zu haben. Im Zweifelsfall setzen ein resorbierbares Monofilament Figur einer Acht Naht um den Punkt der Blutung. Diese Art von Faden ist vorzuziehen Seide oder geflochtenen absorbierbaren Naht, weil es, obwohl das Gewebe mit minimalem Widerstand herausgezogen werden kann. Wir haben jedoch festgestellt, dass Seide oder geflochtenen absorbierbaren Naht am effektivsten in der Bauchseitenwand Adhäsionen zum Induzieren als Monofilament weniger Entzündungs ist.
Anwendung von Stärke am Ende des Verfahrens hilft, die Bildung von Adhäsionen zu erhöhen, aber wir haben herausgefunden, dass eine übermäßige Menge an Stärke wird eine Entzündungsreaktion verursachen, die den Tod verursacht. Die Stärke sollte auf lightl gestreut werdeny. Es sollte nicht so viel sein, dass es eine feste Schicht bildet.
Als erste Verfahren lernen, ist es üblich, mehrere Mäuse zu verlieren. Nach unserer Erfahrung sind die häufigsten Todesursachen sind Austrocknung durch Ileus durch zu kräftiges Abrieb des Darmes verursacht und Sepsis aufgrund Darm-Perforation. Tod durch Blutungen verursacht werden, können auftreten, wenn eine vollständige Hämostase ist am Ende der Operation nicht erreicht.
Wenn die Bildung von Adhäsionen unzureichend ist, sollten Sie aggressiver Abrieb des Blinddarms und der rechten Seitenwand, die eine größere Stärke zu verlassen, oder mehr Nähte an der Bauchseitenwand platzieren. Nach unserer Erfahrung wartet auf weniger als eine Woche vor dem Bauch Ergebnisse in weniger als ausreichende Haftung Bildung wieder zu öffnen. Verwendung von weniger aggressiven Abrieb des Blinddarms, genauer zur Hämostase Inspizieren und Anwendung weniger Stärke auf der anderen Seite, wenn die Mortalitätsrate von Mäusen nach der Operation hoch ist, in Betracht ziehen. Es ist auch wichtig, sorgfältig zu überwachendie Atemfrequenz der Maus während der Operation. Wenn der Chirurg gewinnt Erfahrungen mit diesem Verfahren sollte die Mortalität als weniger als 10%.
Diese Technik wurde entwickelt, um in erster Linie Verwachsungen zwischen dem Blinddarm und der rechten Bauchseitenwand bilden. Adhäsionen wird auch oft zwischen Dünndarms, der Leber und der Mittelschnitt bilden. Mit dieser Technik werden in der Regel nicht dazu führen Adhäsionen auf der linken Seite des Bauches. Eine Einschränkung dieser Technik ist, dass Adhäsionen zwischen Darm und Bauchwand eher als Adhäsionen zwischen Darmschlingen zu bilden. Darüber hinaus ist es nicht wahrscheinlich, in einem völlig gefroren Bauch voller Klebstoff Gewebe zu führen, die oft bei Menschen gesehen, die mehrere Operationen gehabt haben.
Wie in der Einleitung erörtert wurde , viele Techniken zur Herstellung von abdominalen Adhäsionen in Mäusen und anderen Spezies, insbesondere Ratten, sind in der Literatur beschrieben worden ist 6,12-14. Es gibt viel weniger veröffentlichten Protoco ls für die Schaffung von Adhäsionen in Mäusen. Wir vermuten, dass, weil die Bildung von Adhäsionen in Mäusen schwieriger als bei Ratten, die meisten Forscher wählten ihre Technik in der Ratte zu entwickeln. Jedoch wegen der größeren Verfügbarkeit von transgenen Mäusen und Anti-Maus-Antikörper, glauben wir, dass es wertvoll ist ein robustes Modell für die Haftung Schöpfung bei Mäusen zu haben, trotz der größeren technischen Schwierigkeiten. Wir entwickelten dieses Protokoll nach vielen der veröffentlichten Ratte Protokolle versuchen. Wir fanden, dass Methoden zur Adhäsionen bei Ratten, wie die Verwendung von Elektrokoagulation am Blinddarm zu schaffen, die oft dazu führen, Mäuse sterben. Wir waren nicht zufrieden mit der Dichte von Adhäsionen durch Techniken hergestellt, die eine einzige Intervention zu verwenden, wie zum Beispiel Seitenwand platzieren ischämischen Tasten allein oder nur die Blinddarms Abschleifen. Die Technik, die wir hier präsentieren stellt eine Kombination von Maßnahmen, die wir durch Versuch und Irrtum gefunden, Verwachsungen produzieren konsequent, während die Sterblichkeit zu minimieren.
Inhalt "> Da diese Technik konsequent Klebstoff Gewebe verursacht zwischen dem Blinddarm und der Seitenwand zu bilden, glauben wir, dass es in den Test Interventionen ideal ist entworfen Adhäsionsbildung zu reduzieren. Auch diese Technik, um die molekularen Wege und Zelltypen zu erforschen verwendet werden, sind beteiligt Adhäsionsbildung. Das Gewebe Adhäsion leicht ausgeschnitten und bereit für die Histologie und liefert hervorragende histologische Bilder (Abbildungen 11, 12) werden kann.Einige Forscher kann ein Modell wünschen, in der Adhäsionen bilden weniger als 100% der Zeit. die Anwendung von Stärke Weglassen wird die Haftung Rate auf rund 80% zu reduzieren. Verringern der Anzahl von Seidenfäden in den rechten Bauchseitenwand angeordnet wird, die Haftung Rate weiter zu reduzieren.
Nach unserer Erfahrung Tag sieben nach der Operation ist der erste Zeitpunkt, zu dem der Darm in die Bauchdecke konsequent haftet. Jedoch können auch andere Zeitpunkte relevanter sein, jeauf den Fokus des Projekts. Beispielsweise in der Migration von Neutrophilen und Makrophagen in den Haftraum interessierte Forscher möchte kann Gewebe in den ersten fünf Tagen nach der Operation zu ernten. Auf der anderen Seite nimmt die Ablagerung von Kollagen durch Fibroblasten Ort für Wochen nach der anfänglichen Verletzung, und hierfür ist es sinnvoller sein, Gewebe zu Zeitpunkten zu untersuchen, für mehrere Wochen nach der Operation verteilt.
Chirurgische Lupen sind für eine Vergrößerung des Operationsfeldes sehr hilfreich, während der Durchführung dieses Verfahrens. Ein Operationsmikroskop kann auch aber der Chirurg Fähigkeit, aus unterschiedlichen Winkeln das Operationsfeld zu inspizieren begrenzt verwendet werden. Das Verfahren kann auch ohne Vergrößerung überhaupt durchgeführt werden.
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Disclosures
Die Autoren erklären, dass sie keine finanziellen Interessen haben.
Acknowledgments
CDM wurde von der American College of Surgeons (ACS) Resident Research Stipendium unterstützt. MSH wurde vom California Institute for Regenerative Medicine (CIRM) Klinische Fellow Ausbildungsförderung TG2-01159 unterstützt. MSH, HPL und MTL wurden von der American Society of MKG-Chirurgen (ASMS) / MKG-Chirurgen Foundation (MSF) Research Grant-Award unterstützt. HPL wurde von NIH Zuschusses R01 GM087609 und ein Geschenk von Ingrid Lai und Bill Shu zu Ehren von Anthony Shu unterstützt. HPL und MTL wurden vom Hagey Labor für Pädiatrische Regenerative Medizin und der Oak Foundation unterstützt. MTL wurde von der Gunn / Olivier Fund unterstützt.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Fisherbrand Absorbent Underpads, 20" x 24" | Fisher Scientific | 14-206-62 | |
| Polylined Sterile Field, 18" x 24" | Busse Hospital Disposables | 696 | Cut a rectangular hole of the appropriate size |
| Isothesia isoflurane | Henry Schein | 050033 | |
| Fisherbrand Sterile cotton gauze pad, 4" x 4" | Fisher Scientific | 22-415-469 | |
| Puralube petrolatum ophthalmic ointment, 1/8 oz. tube | Dechra Veterinary Products | NDC 17033-211-38 | |
| Nair depilatory cream | Church & Dwight Co. | 22339-05 | |
| Buprenex buprenorphine 0.3 mg/ml | Reckitt Benckiser Pharmaceuticals Inc. | NDC 12496-0757-5 | |
| 1 cc insulin syringe, 27 G | Becton Dickinson | 329412 | |
| Povidone Iodine Prep Solution | Medline | MDS093944H | |
| Webcol alcohol prep swabs | Covidien | 6818 | |
| General-Purpose Labarotory Labeling tape | VWR | 89097-912 | |
| BioGel PI surgical gloves | Mölnlycke Health Care | ALA42675Z | |
| Micro Forceps with teeth | Roboz | RS-5150 | |
| Fine scissors- sharp | Fine Science Tools | 14060-09 | |
| Straight serrated forceps | Fine Science Tools | 11050-10 | |
| Castro-Viejo needle driver | Fine Science Tools | 12565-14 | |
| 100 grit 1/4 sheet sandpaper | ACE Hardware | 1010446 | Cut into strips |
| 4-0 silk suture, 30", SH needle | Ethicon | K831 | |
| 7-0 PDS II absorbable monofilament suture, 30", BV-1 needle | Ethicon | Z135 | Usually comes double-armed. Cut the suture at the midway point to generate two usable sutures. |
| Rice starch | MP Biomedicals | 102955 | |
| 0.9% Sodium Chloride Irrigation | Baxter | BHL2F7121 | Warm to 37 °C prior to use |
| 10 ml syringe | Becton Dickinson | 309604 | |
| 6-0 Vicryl absorbable braided suture, 18", RB-1 taper needle | Ethicon | J212H | |
| 6-0 Ethilon nylon monofilament suture, 18", P-3 needle, | Ethicon | 1698G | |
| Tegaderm Transparent Film Dressing Frame Style, 6 cm x 7 cm | 3M | 1624W | Cut in half lengthwise |
References
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