Bu yazıda, yetişkin farelerde ve diseksiyon olarak kasların sonraki manipülasyonlar, dondurma, kesme, rutin boyama ve myofiber kesit alanı analizi akut iskelet kas yenilenmesini meydana ayrıntılı bir protokol açıklamaktadır.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Cardiotoxin Enjeksiyonu ile Akut İskelet Kası Regeneration indüksiyon
Bu makalede
Özet
Özet
İskelet kası yenilenmesi yaralanma ya da hastalık yanıt olarak, yetişkin iskelet kaslarının oluşan bir fizyolojik bir süreçtir. Akut yaralanma kaynaklı iskelet kası rejenerasyon kas rejenerasyonu yanı sıra mekanizmaları ve farklı oyuncular yer alan olayları incelemek için yaygın olarak kullanılan bir, güçlü modeli sistemidir. Gerçekten de, bu sürecin ayrıntılı bilgi, iskelet kas dejenerasyonu neden patolojik durumların daha iyi anlaşılması için gerekli olan ve yeni hedef tedavi stratejileri belirleme yardımcı olur. Bu çalışma cardiotoxin tek bir intramüsküler enjeksiyon (CTX) aracılığıyla farelerde akut iskelet kas rejenerasyonu ikna etmek için ayrıntılı ve tekrarlanabilir bir protokol açıklar. CTX yılan zehiri toksinler ailesine aittir ve sonunda rejenerasyon olaylarını tetikleyen myofibers bir myolysis neden olur. iskelet kası rejenerasyon dinamikleri, kas bölümleri histolojik analizi ile değerlendirilir. ayrıca protokol, Diseksiyon donma ve tibialis anterior kas yanı sıra yaygın sonraki morfolojik ve morfometrik analizi için kullanılan rutin Hematoksilen & Eosin boyama kesmek için deneysel prosedürler göstermektedir.
Giriş
Memeli yetişkin iskelet kas kasılması için özel olan çok çekirdekli kas hücreleri (myofibers) arasında fasiküller grupları ile oluşturulmaktadır. Her myofiber düzenli ve sürekli olarak düzenlenen kontraktil proteinlerin (aktin ve myosin filamanların) oluşur sarcolemma (plazma membran) içeren ve myofibrils çevrili bir ince uzun sinsityum vardır. Erişkin yaşamda ve dinlenme koşullarında, iskelet kasları kendi myonuclei 1 çok düşük bir ciro var; Gerçekten, sarcolemma altında, myofiber çevresinde yer almaktadır myonuclei, hücre döngüsünün G0 fazında tutuklandı ve 1,2 çoğalırlar edemiyoruz vardır.
İskelet kasları, zarar a....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Bütün deneyler, hayvan araştırmaları için kurumsal talimatlarına göre yapılan ve Deney Hayvanları yasalara uygun Halk Sağlığı, Hayvan Sağlığı, Beslenme ve İtalyan Sağlık Bakanlığı Gıda Güvenliği Dairesi tarafından onaylanmıştır. Servikal dislokasyon prosedürleri IACUC veya eşdeğer gereksinimlerine göre kurumdan kuruma değişebilir.
Tibialis anterior kas 1. Cardiotoxin Enjeksiyon
- işleme başlamadan önce, steril fosfat tamponlu tuz (PBS) içinde ya da su içinde cardiotoxin stok çözelti seyreltilerek cardiotoxin (CTX) çalışma çözeltisinin 10 uM hazırlayın.
Not: CTX 1 mg / ml su içinde çözünür. 70 mcM stok solüsyonu hazırlayın. -20....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
H & E boyama iskelet kası rejenerasyon sırasında belirli zaman noktalarında yenileme işleminin morfolojisinin değerlendirilmesi yapılır. Şekil 3, yabani tip farelerin yaralı ta kasları üzerinde gerçekleştirilen zaman süreci analizi gösterir. Şekil 3A'da şematik olarak kaslar, CTX enjeksiyonundan sonra 3, 7, 15, ve 30 gün sonra izole edilmiştir. H & E boyalı enine kesitler temsili görüntü (Şekil 3B-D), zaman içinde, iskelet kası t.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Burada, iskelet kasında (yani, CTX kas içi enjeksiyon) akut hasara yol için bir protokol açıklar. Bu yaygın in vivo iskelet kası yenilenme dinamiklerini incelemek için güçlü bir araç olarak kullanılmaktadır. CTX enjeksiyon sarcolemma bir depolarizasyon ve elyaf 12 kasılması neden olur kas lifleri, yozlaşmasına neden olur ve kas yenilenme yol açan olaylar zincirini tetikler. İskelet kas deney ihtiyaçlarına göre, enjeksiyon ve yaralanma sonrası istenen zaman noktalarında kesilir, ve daha sonra.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.
Teşekkürler
Hayvan Barınağı'na ve IGB-CNR'nin Entegre Mikroskopi Tesislerine teşekkür ederiz. Bu çalışma, Avrupa Topluluğu'nun Yedinci Çerçeve Programı'ndan ENDOSTEM (Kas dokusunun onarımı ve bakımı için vaskülatürle ilişkili kök hücrelerin ve kas kök hücrelerinin aktivasyonu, hibe sözleşmesi numarası 241440), İtalyan Eğitim-Üniversite-Araştırma Bakanlığı (MIUR-PRIN2 010-2011) projesinde G.M. ve S.B. ve PON Kümesi IRMI'den GM'ye yönelik araştırma fonundan yararlanmıştır. ve CARIPLO vakfı G.M. ve S.B.'ye.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Kardiyotoksin Naja mossambica mossambica | SIGMA ALDRICH | C9759 | |
| İnsülin İçin Şırınga BD Micro-Fine+ İğne 30 G x 8 mm - Da 0.3 mL | BD | 324826 | |
| Tragacanth Gum | MP BIOMEDICALS,LLC | ||
| 2-Metilbütan (İzopentan) | SIGMA ALDRICH | 78-78-4. | |
| OCT Killik Inklüm Solüsyonu Dahil Etme Kriyostat | Biyo-optika | 05-9801 | |
| Tüy Mikrotom Bıçağı S35 | Bio-optica | 01-S35 | |
| Cam Kaydırak Superfrost Plus | Menzel-Glä ser | 09-OPLUS | |
| Dumon #5 Ayna Kaplama Forseps | 2BİYOLOJİK ALETLER | 11251-23 | |
| Makas Düz Keskin/Keskin | 2BİYOLOJİK ALETLER | 15024-10 | |
| Makas Noyes Düz | 2BİYOLOJİK ALETLER | 15012-12 | |
| İnce İris Makas Düz Keskin/Keskin 10,5 cm | 2BİYOLOJİK ALETLER | 14094-11 | |
| Eukitt | Bio-optica | 09-00100 | |
| Slayt Lamel | BIOSIGMA | VBS651 | |
| Ksilen | SIGMA ALDRICH | 214736 | |
| Etanol% 100 | sigma-Aldrich | 02860-2.5L | |
| Hematoksilen | JT BAKER | 3873 | |
| Eosin | SIGMA ALDRICH | HT110116 | |
| Kriyostat | LEICA | CM3050 S |
Kaynaklar
- Morgan, J. E., Partridge, T. A. Muscle satellite cells. Int J Biochem Cell Biol. 35 (8), 1151-1156 (2003).
- Roca, I., Requena, J., Edel, M. J., Alvarez-Palomo, A. B. Myogenic Precursors from iPS Cells for Skeletal Muscle Cell Replacement Therapy. J Clin Med. 4 (2), 243-259 (201....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
