Summary
Denna studie beskriver ett invasivt förfarande för induktion av accelererad åderförkalkning hos möss. I jämförelse med andra metoder med hjälp av elektrisk- eller kryo-inducerad skada, mekanisk-inducerad skada härmar människans villkor för restenosis efter revascularization terapier och är idealisk för studier av de molekylära mekanismer som är inblandade.
Abstract
Åderförkalkning är en proliferativ fibro-inflammatorisk sjukdom utvecklas i den arteriella väggen, förmå en bristfällig blodflödet eller en brist på blodflödet. Genom bristning av den defekta kärlväggen inducerar atheroskleros dessutom ocklusionsbildning, som representerar den främsta orsaken till hjärtinfarkt eller stroke och den vanligaste dödsorsaken. Trots framstegen inom det kardiovaskulära området förblir många frågor obesvarade, och ytterligare grundforskning är avgörande för att förbättra vår förståelse av de molekylära mekanismerna under åderförkalkning och dess effekter. På grund av begränsade kliniska studier, det finns ett behov av representativa djurmodeller återskapa aterosklerotiska förhållanden såsom neointima bildas efter stent implantation, ballong angioplastik, eller endarterectomy. Eftersom musen presenterar många fördelar och är den mest använda modellen för att studera molekylära processer, föreslår den aktuella studien ett invasivt förfarande av endotel denudation, även känd som tråd-skada modell, som är representativ för det mänskliga tillståndet för neointima bildning i artärer efter revascularization förfaranden.
Introduction
Åderförkalkning är den huvudsakliga patologin bakom kardiovaskulära händelser som hjärtinfarkt eller stroke. De viktigaste mekanismerna som utlöser akuta hjärt-syndrom är plack bristning, ytlig erosion och trombbildning. Det finns flera kliniska situationer som är kopplade till plack utveckling: infödda aterosklerotiska plack, restenosis efter endarterectomy, och restenosis efter ballong angioplastik med/utan stent implantation1. Efter arteriell skada, undertryckande av de inflammatoriska processer2,3 och återvinning av endotelavdelningen är väsentliga för att förhindra ytterligare komplikationer1. Klinisk forskning är begränsad till vävnad och blodprov på grund av etiska överväganden, kostnader, och en brist på kunskap i grundläggande mekanismer. Av dessa skäl finns det ett behov av att studera molekylära mekanismer i djurmodeller4-6, som kan återskapa de kliniska tillstånden. Vår modell av accelererad neointima bildning i samband med åderförkalkning är resultatet av många års erfarenhet av genomförandet av dessa modeller i små djur7-11. Musmodellen är den mest attraktiva modellen för forskning, på grund av dess enkel hantering, förmågan att ha stora djurgrupper på grund av låga kostnader relaterade till djurinköp och vård, och tillgången på olika transgena och knockout-stammar.
Den stora nackdelen med musmodellen är den lilla storleken på de viktigaste artärerna utsätts för aterosklerotisk sjukdom (halspulsådern, aorta, och lårbensartären), som kräver kvalificerad kirurgisk expertis och färdigheter för att manipulera kärlen och att invasivt framkalla en aterosklerotisk plack. Därför är modellen av accelererade neointima bildandet, i samband med restenosis efter endarterectomy eller stent implantation, som föreslås i detta dokument med en steg-för-steg riktlinje och förslag för att underlätta införandet för intresserade personal. En annan nackdel är att denudation görs på den normala arteriella väggen, och därför kommer neo-intima formationen måttlig jämfört med den kliniska situationen. Den höga nivån av plasmakolesterol som nåtts i apolipoprotein E knockout (Apoe-/-) möss som matas med en hög fett-diet skapar en ordentlig pro-inflammatorisk miljö som behövs för neo-intima formation.
Operationen utförs under ett stereomikroskop. Halspulsådern exponeras av ett mediananser i ventrala livmoderhalscancer området. Anatomiska strukturer ovanpå och kring halspulsådern är minimalt manipulerade för att minska postkirurgisk inflammation. Halspulsådern bifurkation är utsatt. För att inducera accelererad neointima bildning, inre och yttre halspulsådern är förberedda för blodflödet upphörande och efterföljande gemensamma halspulsådernsvärning. Sammanfattningsvis kan metoden läras av personal med minimal erfarenhet av djuroperationer.
Protocol
Experiment som presenteras i denna uppsats utförs enligt den tyska lagen och till de europeiska riktlinjerna för djurvård. Djuren föds upp i djuranläggningen vid Institutet för laboratoriedjursvetenskap, Universitetssjukhuset Aachen, Tyskland, under överinseende av Prof. Dr. R. Tolba och Dr. A. Teubner (djurskyddsansvarig).
1. Djurvård
- Håll mössen i en specialiserad vårdenhet, vilket garanterar korrekt tillgång till mat och specialiserad veterinärkontroll och behandling. Om djuren flyttas eller köps från tredje part, vänligen säkerställa en en vecka boendeperiod innan de genomgår förfarandet.
2. Hyperlipidemi Inducering
- Foder 6 - 8 vecka gammal, 18 - 20 g, hona (valfritt) ApoE-/- möss med en aterogen diet (21% fett, 0,15% kolesterol, 19,5% casein, wt/wt) en vecka före det kirurgiska ingreppet och fortsätta dieten tills den aterosklerotiska plackanalysen ska utföras.
3. Kirurgisk förberedelse
- Bedöva mössen med hjälp av en intraperitoneal injektion på 100 mg/kg ketamin genom kroppsvikt och 10 mg/kg xylazin genom kroppsvikt. Bekräfta korrekt anesthetization före kirurgi av bristen på reflexer och morrhår rörelse. Placera en liten mängd steril ögonsalva i ögat för att minimera torkning.
- Säkerställa upprätthållandet av sterila tillstånd för att undvika infektioner under operation genom att använda sterila material och instrument.
- Raka mössen i regionen ventral hals. Desinficera huden med betadin före snitt. Gör en 1 cm hud snitt i medianregionen i nackområdet, ovanpå luftstrupen.
- Separera de två feta kropparna för att säkerställa en korrekt bild över trakealregionen. Använd upprullningsdon för att hålla muskelskiktet och exponera halspulsådern. Om närvarande, utför den trubbiga-dissektion av det tunna muskelskiktet som täcker halspulsådern.
- Använd skarpa böjda tärnor för att separera halspulsådern från vagusnerven och halsvenen. Således bör bifurkationsområdet med den inre och yttre halspulsådern vara synlig. Använd 0,9% NaCl för att undvika vävnad torrhet under det kirurgiska ingreppet.
4. Tråd-skada
- Placera en 7 cm lång 0/5 siden sutur under halspulsådern, proximala till aortavalvet. Gör en öppen slinga, redo att stängas när som helst.
- Placera två 0/7 sidensuturer (vardera 1,5 cm långa) runt den yttre halspulsådern: en slinga nära bifurkationspunkten, och en slinga så distala som möjligt. Förbered dem som en öppen slinga, redo att stängas när som helst.
- Placera en 0/7 sidensutur (1,5 cm lång) under den inre halspulsådern. Förbered det som en öppen slinga, redo att stängas när som helst.
- Placera musbordet med mushuvudet mot operatören för att säkerställa korrekt positionering för ledarens infogning under denudationen (Bild 1A).
- Under den mikroskopiska vyn, stoppa blodflödet genom den gemensamma halspulsådern genom att hålla och dra ändarna av 0/5 silke sutur med hemostat tärna.
- Omedelbart efter den gemensamma halspulsådern ligatur, stäng suturöglorna som placeras på den inre halspulsådern och den distala suturen på den yttre halspulsådern tätt (Figur 1B).
- Utför ett litet snitt (arteriotomy, hälften av kärlets diameter) distala till den yttre halspulsådern, mellan de två slingorna, med hjälp av små saxar (Figur 1C). Om snittet är för stort, följ instruktionerna för felsökning (se Diskussion).
- Använd kommersiellt polerade ledare eller använd in-house specialiserad personal för att polera guidetrådarna. Desinficera 14 tums polerad flexibel guide-tråd med alkohol och fukta den i en droppe på 0,9% NaCl för att säkerställa korrekt glidande in i kärlet.
- För in ledaren i den gemensamma halspulsådern via den tvärgående arteriotomi av den yttre halspulsådern (Figur 1D). Erhåll endotelförstärkring genom att föra ledaren längs kärlet medan den roterar. Upprepa den här proceduren tre gånger. Bibehålla samma amplitud av rotationsrörelse i varje mus för att öka reproducerbarheten.
- Stäng den proximala slingan på den yttre halspulsådern tätt. Återställ blodflödet i halspulsådern genom att klippa suturen runt vanliga artär och suturen runt den inre halspulsådern.
5. Sutur och återhämtning
- Ta bort upprullningsdonen och återför muskellagret och de två feta kropparna till fysiologiskt läge.
- Stäng huden med tre separerade suturer 0/6, om echocardiographic mätningar behövs. Om ingen avbildning behövs, använd metalliska klipp för att stänga huden.
- Lägg musen ner på sin vänstra sida under det infraröda ljuset tills det vaknar. Lämna inte ett djur utan uppsikt och inte heller i sällskap med andra djur förrän det är helt återställt.
- För framtida identifiering, markera musen med hjälp av det lokala systemet. Fråga djurskyddsombudet från den lokala institutionen.
6. Analys av den aterosklerotiska plack
- Bedöva mössen vid sluttidspunkten med hjälp av en intraperitoneal injektion på 100 mg/kg ketamin genom kroppsvikt och 10 mg/kg xylazin genom kroppsvikt. Bekräfta korrekt anesthetization av bristen på reflexer och morrhår rörelse.
- Utför exsanguination genom retro-orbital eller hjärtpunktion och samla in blodet för vidare analys2.
- Desinficera huden med betadin. Öppna brösthålan och ta bort hjärtats högra aurikulum. Genomsyra fosfatbuffrad lösning genom vänster kammare för att avlägsna det återstående blodet från kärlet och sedan genomsyra 4% PFA för att fixera vävnaden.
- Om ingen fixering krävs, explantera halspulsådern omedelbart eftertvättning 2,4,11. Utför standardprotokoll med analyser av intresse: paraffininbäddning, kryosektion, mRNA eller proteinanalys etc.
- För morfometriska mätningar, noggrant explant den halspulsådern inklusive bifurkation, med minimal manipulation, som proximala till aorta arch med hjälp av böjda tlys och små saxar.
- Bädda in halspulsådern i paraffinblocket med hjälp av standardinbäddningsprotokoll. För att utföra transversal snittning, placera halspulsådern upprätt på bifurkation. Skär 5 μm tjocka seriesektioner som börjar med bifurkationen och samla dem alla på belagda histologiska objektglas (Figur 2A).
- Stain varje 10:e avsnitt med Movat färgning för att markera laminas2,4,11. Efter att ha samlat mikroskopiska bilder på alla fartyg (med hjälp av en 10X-målsättning), mäta lumen, samt den interna och externa lamina för varje avsnitt, med hjälp av särskild utformadprogramvara 2,4,11, som visas i figur 2B. Beräkna fartygens skrämmande tillväxt och media.
- Analysera glatta muskelceller och makrofaginnehåll, eller endotelåtervinning i serieavsnitt, med vanliga immunohistologiska färgning2 (Figur 2C).
Representative Results
Den aterosklerotiska plack induktionsproceduren tar 15 - 20 min och visar en minimal dödlighet, främst på grund av den blödning som inträffar under förfarandet. Efter operationen återhämtar sig mössen från anestesi inom 20 - 25 min. Ingen fysisk funktionsnedsättning, såsom förlamning, eller utfodring störning observerades efter operationen.
Tråd-skada inducerar en de-endothelialization, härma Vaskulär skador efter ballong denudation eller stent-implantation. Omedelbart efter skada kommer den denuded kärlväggen att täckas med ett lager av trombocyter, som förmedlar och gynnar vidhäftningen av monocyterna12. Aktiverade glatta muskelceller från media kommer att föröka sig och migrera in i de skrämmande utrymmena och bilda neointima. Andra progenitorer för glatta muskelceller kommer att migrera från blodet (beräknas vara 40%) och bidra till neointimatillväxten. Plackbildningen kommer att upphöra efter den fullständiga åter endothelialization, vanligen 4 veckor efter tråd-skada.
Neointimaformationen kan bedömas med hjälp av Movat-färgning. Plakettens storlek beräknas för varje objektglas med hjälp av programvara enligt figur 2B. Den totala plackstorleken (vänster halspulsåder) kan variera mellan 70 000 - 100 000 μm², medan kontrollkärlsstorleken (höger halspulsåder) kan variera mellan 7 000 - 8 000 μm². Dessa värden beror till stor del på kirurgen. Därför rekommenderar vi starkt att använda samma kirurg under experimenten för samma studie.
Den utvecklade plack liknar i stent restenosis, som huvudsakligen består av prolifererade och migrerade glatta muskelceller från media. Den cellulära kompositionen som bestäms av immunologiska färgningsförfaranden visar att den glatta muskelcellhalten är ungefär 30 - 40%, medan makrofager finns i 15 - 25% av det skadade kärlets neointima. Den re-endothelialization kan mätas efter färgning för en endotel markör, och beräknas som andelen omkrets färgas över hela omkretsen av lumen. Vanligtvis åter endotelialisering når 80 - 90% efter 3 veckor, och bör nästan vara komplett efter 4 veckor (Figur 2C). För att spåra plakettens tillväxt under dess utveckling kan samma analys upprepas för varje tid-punkt efter trådskadan, beroende på intresse och det ämne som studerats (se tabell 1).
Bild 1. Schematisk representation av operativt förfarande. (A) Positionsanställning av operationstabellen mot operatören under tråd-skada förfarandet (B) Förstorad vy av den gemensamma halspulsådern och dess grenar, som det visas under mikroskopet vid 10X förstoring (C) Snittets storlek i den yttre halspulsådern under mikroskopet vid 10X förstoring (D) Schematisk representation av tråd-skada förfarande med hjälp av 14 tums guide tråd. Vänligen klicka här för att visa en större version av denna figur.
Bild 2. Analys av Restenosis Plakett. (A) Schematisk representation av plackanalys i den gemensamma halspulsådern, 4 veckor efter tråd-skada induktion (B) Neointima bildandet 4 veckor efter tråd-skada och schematisk representation av huvudparametrar som används för analys. Intima (grönområde) är skillnaden mellan lumen (röd) och lamina interna (grön linje). Media (gult område) är skillnaden mellan lamina-externa (gul linje) och interna (grön linje). Skala bar 100 μm (C) Representativa bilder av färgningen av de viktigaste celltyper som är involverade i neointimabildning. Glatta muskelceller (glatt muskulatur aktin -röd, skala bar 100 μm), makrofager (Mac 2- grön, skala bar 100 μm) och endotelceller (CD31- röd, pilar, skala bar 50 μm). Vänligen klicka här för att visa en större version av denna figur.
| Tid | Trombus | Plack (μm²) |
Makrofager (% från Plaque) |
Glatta muskelceller (% från Plaque) |
Åter-endotelialisering (% lumen omkrets) |
| 1 dag | Närvarande | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 1 vecka | - | < 30 000 | > 10 | < 50 | < 50 |
| 2 veckor | - | < 50 000 | > 10 | < 50 | > 50 |
| 3 veckor | - | < 70 000 | 15-25 | 30-40 | 80-90 |
| 4 veckor | - | 70 000 – 100 000 | 15-25 | 30-40 | Komplett |
Tabell 1. Tidsberoende Plaques utveckling.
| Modell | Djur | Fördelar | Disanvantages |
| Kost-inducerad infödda åderförkalkning | Liten |
|
|
| Stora |
|
|
|
| Ballong dilatation | Liten |
|
|
| Stora |
|
|
|
| Tråd skada | Liten |
|
|
| Stent implantation | Liten |
|
|
| Stora |
|
|
Tabell 2. Fördelar och nackdelar med Existent Modeller av arteriell skada.
Discussion
I detta papper ger vi användbara tips för att utföra tråd-skada förfarandet även av personal med minimal erfarenhet av djuroperationer. Det finns två kritiska steg i att utföra denna procedur: snittet av den externa halspulsådern och införandet av tråden. Snittet i den yttre halspulsådern behöver utföras så långt som möjligt från bifurkationen, för att säkerställa tillräckligt med kvarvarande material (Figur 1C). Snittet bör inte vara för stort, på grund av risken att skära hela fartyget. Det andra kritiska steget är den höga risken för blödning under artäriotomi och införandet av ledaren om blodflödet inte effektivt upphör. Dessutom kan endotel denudation inte äga rum eller artärbrist är möjligt om ledaren inte är korrekt införd i lumenkärlet. För att undvika detta måste ledarens yta putsas försiktigt före operationen.
För att optimera protokollet, positionen för operationsbordet med mus-huvudet mot kirurgen säkerställer en bättre vy, tillgänglighet och kontroll för rätt guide tråd manipulation. Dessutom, för att öka reproducerbarheten, använd samma ledare i alla studier. Eftersom trådstorleken inte förändras är det viktigt att tänka på och eliminera alla möjliga skillnader mellan mössen genom att använda samma kön, ålder och vikt för alla möss som ingår i en studie. Därefter kommer Evans-Blue färgning hjälpa kirurgen bestämma effektiviteten i denudation. Att det finns lämplig utrustning är en förutsättning för att förfarandet skall lyckas. En 10X stereomicroscope är viktigt för att utföra denna procedur. Den korrekta beredningen av ledaren (till exempel polering det) är avgörande. Därför rekommenderar vi starkt att ledarens förberedelser utförs av specialiserad teknisk personal där det finns.
Det finns många felsökningssteg i det här protokollet. Om incising den yttre halspulsådern nära bifurkation, försiktigt binda den externa, nära bifurkation, så ingen blödning uppstår. Under skärning kan den externa halspulsådern inte ses. Därför anser bifurkation på nivån av silke sutur. Samla upp sektioner när sidensuturen försvinner. Om snittet i den yttre halspulsådern är för stort och kärlet är sprucket, se till att blodflödet in i halspulsådd communis och inre halspulsådern är effektivt avbryts och försöka hitta öppnandet av kärlet med hjälp av tärna. Efter införandet av ledaren och utför denudationen, bind kärlet nära bifurkationen. Under skärning, börja samla när silket från suturen börjar försvinna. Om artärruptur uppstår under denudationen med ledaren, kontrollera under mikroskopet om ledaren är ordentligt polerad.
Trots likheten mellan tråd-skada modellen kliniska situationer, många grupper är inriktade på infödda åderförkalkning hos möss, eller de väljer invasiva åderförkalkning induktioner, såsom ballong angioplastik hos råttor eller kaniner, på grund av bristen på utbildad personal som kan utföra små djur operationer. Trots fördelarna med att använda kaniner/råttor, t ex inget behov av miniatyriserad utrustning, erbjuder varken råttmodeller eller kaninmodeller en mängd olika knock-out-stammar, när det gäller att studera molekylära mekanismer som är involverade i neointimatillväxt och in-stent-trombos.
De befintliga modellerna för att studera i-stent restenosis i möss är svåra, kräver hög kirurgisk kompetens, och har hög risk för komplikationer såsom blödning eller förlamning. Till exempel åtföljs den mekaniska skadan eller stent-implantationen i bröstaorten via lårbensartären av en hög dödlighet (35%) grund av bakbensförlamning ellerblödning 13-15. Vi beskriver också stent implantation i halspulsådern av en mus16. Förfarandet är liknande; dock är vävnadsbehandlingen för analys komplicerad och är inte tillgänglig för alla laboratorier16. Halspulsådern är direkt tillgänglig, inte bara för operation förfaranden, men också för befintliga bildframställning metoder såsom ultraljudsavbildning. Andra skada induktioner i halspulsådern hos möss kan göras med hjälp av elektriska enheter17. Denna metod är enkel att utföra och säkerställer hög reproducerbarhet. Det inducerar dock skada i alla kärlskikt, som inte är identisk med mekanisk skada. Ballongtillämpningar har fördelar, t ex justeringen av kärldiametern i linje med den kliniska praxisen och har starkt inflytande på det patologiska utfallet. Även om mus ballonger finns, de är mycket dyra och därför inte används i stor utsträckning. Istället är tråd-skada den etablerade metoden, härma i-stent stenos.
Denudation utförs på den normala arteriell väggen, fast med en aterosklerotisk bakgrund. Därför kommer neointimabildningen att vara måttlig jämfört med den kliniska situationen. Det höga antalet prekliniska modeller visar att ingen av modellerna uppfyller alla de kriterier som krävs för att avslöja helheten av de cellulära och molekylära mekanismer som leder till patofysiologin hos människor (se tabell 2).
Efter att ha utfört tråd-skada förfarandet, kan andra biologiska och molekylära analys utföras för att identifiera celler, proteiner, mRNAs, microRNAs, gener eller andra biomarkörer, som kan användas som terapeutiska mål för att utveckla nya behandlingsstrategier för åderförkalkning, och i synnerhet för neointima bildas efter vaskulär skada. Om det finns tillgängligt kan plaketten tillväxt övervakas med högfrekvent ultraljud eller andra högupplösta avbildningstekniker. Dessutom skulle behärska denna teknik ge operatören möjlighet att anpassa protokollet till andra invasiva åderförkalkningsinducering modeller, såsom krage placering, partiell ligatur eller ens stent implantation.
Disclosures
Det finns inga upplysningar av författarna.
Acknowledgments
Detta arbete stöddes av Interdisciplinary Centre for Clinical Research IZKF Aachen (junior forskargrupp till E.A.L.) inom den medicinska fakulteten vid RWTH Aachen University. Vi tackar även mrs Roya Soltan för hjälp med immunhistokemifärgningen.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Stereomicroscope | Olympus | SZ/X9 | - |
| Forceps | FST, Germany | 91197-00 | standard tip curved 0,17 mm |
| Hemostat forceps | FST, Germany | 13007-12 | curved |
| Scissors | FST, Germany | 91460-11 | Straight |
| Vannas scissor | Aesculap, Germany | OC 498 R | - |
| Retractors | FST, Germany | 18200-10 | 2.5 mm wide |
| Retractors | FST, Germany | 18200-11 | 5 mm wide |
| Ketamine 10% | CEVA, Germany | - | - |
| Xylazine 2% | Medistar, Germany | - | - |
| Bepanthene eye and nose cream | Bayer, Germany | - | - |
| Silicon tube | IFK Isofluor, Germany | custom-made product | diameter 500 µm, |
| section thickness 100 µm, | |||
| polytetrafluorethylene catheter | |||
| PROLENE Suture 6/0 | ETHICON | 8707H | polypropylene monofilament suture, unresorbable, needle CC-1, 13 mm, 3/8 Circle |
| 7/0 Silk | Seraflex | IC 1005171Z | - |
| Michel Suture Clips | FST, Germany | 12040-01 | - |
| Clip Applying Forcep | FST, Germany | 12018-12 | - |
| 14”Wire for Catheter | Abbot | 1000462H | Use 10 cm from stiff part and equalize the ends |
| Mice | Charles River | Apolipoprotein E -/- mice with C57/Bl6 background | - |
References
- Simsekyilmaz, S., Liehn, E. A., Militaru, C., Vogt, F. Progress in interventional cardiology: challenges for the future. Thromb Haemost. 113 (3), 464-472 (2015).
- Kubo, N., McCurdy, S., Boisvert, W. A. Defective Fas Expression on Bone Marrow Derived Cells Alters Atherosclerotic Plaque Morphology in Hyperlipidemic Mice. Discoveries. 3 (1), e37 (2015).
- Saffarzadeh, M., et al. Characterization of rapid neutrophil extracellular trap formation and its cooperation with phagocytosis in human neutrophils. Discoveries. 2 (2), e19 (2014).
- Lindner, V., Fingerle, J., Reidy, M. A.
- Schwartz, R. S., et al. Preclinical evaluation of drug-eluting stents for peripheral applications: recommendations from an expert consensus group. Circulation. 110 (16), 2498-2505 (2004).
- Schwartz, R. S., et al. Restenosis and the proportional neointimal response to coronary artery injury: results in a porcine model. J Am Coll Cardiol. 19 (2), 267-274 (1992).
- Curaj, A., et al. Noninvasive molecular ultrasound monitoring of vessel healing after intravascular surgical procedures in a preclinical setup. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 35 (6), 1366-1373 (2015).
- Liehn, E. A., Schober, A., Weber, C. Blockade of keratinocyte-derived chemokine inhibits endothelial recovery and enhances plaque formation after arterial injury in ApoE-deficient mice. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 24 (10), 1891-1896 (2004).
- Liehn, E. A., Zernecke, A., Postea, O., Weber, C.
- Simsekyilmaz, S., et al. Role of extracellular RNA in atherosclerotic plaque formation in mice. Circulation. 129 (5), 598-606 (2014).
- Wu, Z., et al. Rhodamine-loaded intercellular adhesion molecule-1-targeted microbubbles for dual-modality imaging under controlled shear stresses. Circ Cardiovasc Imaging. 6 (6), 974-981 (2013).
- Schober, A., et al. Crucial role of the CCL2/CCR2 axis in neointimal hyperplasia after arterial injury in hyperlipidemic mice involves early monocyte recruitment and CCL2 presentation on platelets. Circ Res. 95 (11), 1125-1133 (2004).
- Ali, Z. A., et al. Increased in-stent stenosis in ApoE knockout mice: insights from a novel mouse model of balloon angioplasty and stenting. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 27 (4), 833-840 (2007).
- Chamberlain, J., et al. A novel mouse model of in situ stenting. Cardiovasc Res. 85, 38-44 (2010).
- Rodriguez-Menocal, L., et al. A novel mouse model of in-stent restenosis. Atherosclerosis. 209 (2), 359-366 (2010).
- Simsekyilmaz, S., et al. A murine model of stent implantation in the carotid artery for the study of restenosis. J Vis Exp. , e50233 (2013).
- Schroder, K., et al. NADPH oxidase Nox2 is required for hypoxia-induced mobilization of endothelial progenitor cells. Circ Res. 105 (6), 537-544 (2009).
