우리는 여기서 획득 및 호중구 유래 거 식세포의 새로운 특징 모집단을 식별하는 방법을 설명합니다. 이 세포는 신선한 인간의 혈액 호중구에서 문화를 개발하고, 식균 작용, 자식 작용, 상당히 큰 크기, 확장 된 수명을 특징으로한다. 이 방법은 또한 독특한 호중구 유래 모집단을 조사하기 위해 필수적이다.
호중구 (PMN)는 가장 병원균 미생물 침입에 대해 자신의 식세포 기능 알려져있다. 그들은 백혈구 사이와 구조적으로 세포 사멸하기 위해 최선을 다하고 있습니다 그들의 비 활성화 된 상태에서 짧은 반감기를 가지고있다. 염증을 해결하는 염증 부위로 보충하면, 이들은 강력한 항균 죽이는 세포 독성 분자의 배열을 생성한다. 이러한 강력한 세포 독성 분자가 제어되지 않는 방식으로 발표 될 때 그러나, 그들은 주변 조직에 손상을 줄 수 있습니다. 그러나 최근 몇 년 동안, 호중구 다양성은 점점 소성 및 면역 기능을 보여줌으로써, 입증된다. 최근 예컨대 과립구 콜로니 자극 인자 (GM-CSF)와 같은 사이토 카인 / 성장 인자를 첨가하지 않고 표준 배양 조건에서 자연적 발전 새로운 호중구 유래 모집단 / 인터루킨 (IL)을 -4 확인했다. 호중구 나머지 자신의 탐식 능력은 크게 자신의 증가에 기여대단히 크기; 따라서 그들이라고 한 거 식세포 (Gφ). 호중구는 달리, Gφ은 오랫동안 문화에 살고있다. 그들은 차별화 (CD) 호중구 마커 CD66b / CD63 / CD15 / CD11b를 / 마이 엘 로퍼 옥시 다제 (MPO) / 호중구 엘라 스타 제 (NE)의 클러스터를 표현하고, / CD16 / CD163 및 수지상 CD1c / CD141 마커 단핵구 혈통 마커 CD14없는입니다 . 또한 라텍스와 자이 모산을-차지, 그리고 옵 소닌 – 자이 모산와 PMA로 자극에 산화 버스트에 의해 반응한다. Gφ 또한 캐빈은 CD68 / CD36 수용체 표현하고, 호중구는 달리, 산화 – 저밀도 지단백 (oxLDL)를 내면화. 또한, 신선한 호중구 또는 단핵구 배양 달리, 이들은 증가 된 활성 산소 종 (ROS)에 의해 생산 oxLDL 흡수에 반응한다. 또한 이러한 식세포는 자식 작용의 활성화를 나타내는 미세 소관 – 관련 단백질 1 빛 체인 3B (LC3B) 코팅 액포가 포함되어 있습니다. 특정 억제제를 사용하는 것은 그 식세포와 자식 작용 모두 prerequisi 것을 분명종속 ROS 산화 효소들이 개발 가능성이 NADPH에 대한 TES. 우리는 여기에서 배양 긴 수명, 호중구 유래 식세포 세포들이 식별 및 현재 알려진 특성의 새로운 모집단의 제조 방법을 설명한다. 이 프로토콜은 획득 더욱 그 의미와 기능을 조사하기 위해 Gφ의 특성에 필수적이다.
다형 핵 호중구 (PMN)는 세포 독성 분자의 다양한 제조하여 병원체 침입을 우선적으로 보호로서, 혈중 백혈구의 가장 큰 집단을 구성한다. 전통적인보기는 긴 병원균과 유해 입자의 간극에 감염과 지원을 방지하기 위해 급성 염증 사이트에 도착 최초로 순환 혈액, 짧은 살았 전문 식세포,의를하고있다. 하나는 비 활성화 된 상태에서, 호중구 세포 사멸에 구조적으로 노력하고 있습니다. 염증 부위에 혈액에서 마이그레이션 할 때, 중성 백혈구는 염증을 해결하기 위해 정품 인증을받을. 이들은 탐식 및 호중구 엘라 스타 제 (NE)와 강력한 살균 활성을 카 텝신 같은 세포 독성 분자 등의 활성 산소 종 (ROS), 용균 효소들의 어레이를 생성함으로써, 미생물이 침입 죽인다. 트랩 병원균을 위해, 호중구는 세포 외 트랩 (그물을 해제) 항균 펩티드 및 다양한 용균 효소를 함유하는 핵 염색질 스레드를 구성한다. 그러나, 호중구에서 이러한 세포 독성 분자의 제어되지 않은 버전은 또한 염증 반응을 영속과 주변 조직의 손상을 야기 할 수 있음. 2 따라서, 대 식세포에 의한 세포 사멸 호중구의 효과적인 틈새 (Mφ)와 수지상 세포 (DC)는 염증을 해결하기 위해 매우 중요합니다. 3, 4, 5, 6
그러나 최근 몇 년 동안, 그것은 호중구가 매우 누구의 기능까지 식균 작용과 병원균을 죽이는 넘어 다양한 세포 것을 점점 더 분명되고있다. 프라이밍 또는 활성화가 진행함으로써 6, 7, 호중구 가소성 점차 주목 받고있다. 예를 들면, 마이코 박테리아 도전 호중구 나타났다면역 조절 반응의 존재를 제안, 인터루킨 (IL) -10을 분비와 염증 반응을 제어 할 수 있습니다. 8 포스트 유사 분열 호중구 Mφ 유사 세포 또는 분해함으로써 사이토 카인과 성장 인자, 9, 10로 처리시 항원 단편 제시 선천적 적응성을 통합에 중요한 역할을 제공함으로써 DC 유사 세포로 – 분화 트랜스 나타났다 응답. 도 3은, 성장 인자에 의해 6 활성화는 염증 부위에 이물질이 간극 염증의 해상도, 3, 9 Mφ / DC 통관 시스템 11 불충분하거나 압도 특히 12 용이하여 사멸 호중구 또는 세포 파편의 말림을 촉진 잠재적 인 '자율 규제'를 제안하는 것은 재를 도움염증 반응을 해결한다. 이것은, 이후 아폽토시스 세포 독성 화합물의 세포 외 방출을 억제하고, 따라서 주변 조직에 손상을 방지 할 수 규제 자기 죽음의 한 형태이다. 6
장기간 생존 호중구 활성화의 또 다른 특징이며, 예컨대 과립구 콜로니 자극 인자 (G-CSF), 과립구 – 대 식세포 콜로니 자극 인자 (GM-CSF), 인터페론과 같은 염증성 사이토 카인 (각종 숙주 유래 인자로 처리함으로써 입증되었다 IFN) -γ, 종양 괴사 인자 (TNF) -α 및 / 또는 병원체 유래의 제품, 즉, 호중구 생존 반응을 조절할 수 있도록. 도 6은 실제로 호중구 생존율은 가소성을위한 필수 조건이며 탐식을 수행하는 능력과 관련이 있었다. 도 6에서, (13) 따라서, 또한 의존적이다 표현형 및 기능의 변화와 연관 나타났다호중구 수명 연장에 관여하는 새로운 단백질의 합성을 유도하여 상향 조절 된 유전자 발현 및 감소 세포 사멸에 DED. (10)
수명이 짧고 구성 적 문화에서 세포 자멸사를 받아야하거나 수명을 연장 한 상기 사이토 카인 / 성장 인자 활성화 된 호중구, 호중구는 달리, 우리는 최근 장기간의 표준 문화에 자발적으로 개발 호중구의 새, 작은 모집단을 확인했다 외부 사이토 카인 또는 성장 인자를 첨가하지 않고 갓 고립 된 인간 혈액 호중구에서 조건. (14) 문헌에서 이전에 설명하지 않은이 호중구 유래 세포,라고 한 거 식세포 (Gφ). Gφ 문화의 수명을 연장 한 그들은 완전히 5-7일에서 개발하고, 독특한 형태 학적 특징, 표현형의 발현과 기능을 특징으로한다. 그들은 크게 autophago로 인해 확대된다액포 죽은 호중구 잔재의 cytosis 및 포함 phagolysosomes. Gφ 특정 호중구 과립 마커를 표현 – 차별화 (CD) (66B)의 클러스터는 분홍 – 보라색의 과립 마커 – CD63 및 마이 엘 로퍼 옥시 다제 (MPO) 및 CD11b를, NE, CD15, 같은 추가 호중구 마커를 NADPH 산화 효소 서브 유닛 gp91- phox 및 p22- phox, 그리고 자식 작용 마커 -LC3BII. 14, 15 기능적으로, 그들은 적극적으로 라텍스 구슬과 자이 모산 입자 최대 가지고 가고, 자이 모산 및 포르 12 미리 스테이트 (13) – 아세테이트 (PMA) 자극에 반응하여 ROS를 생성합니다. 흥미롭게도, 신선한 호중구는 달리, Gφ도 집중적으로 스 캐빈 저 수용체 CD68 및 CD36 표현, 감기는 저밀도 지단백 (oxLDL)를 산화 및 oxLDL 자극에 반응하여 ROS를 생성합니다. 또한, Gφ는 단핵구 혈통 마커 CD14, CD16 및 CD163 또는 수지상 마커 CD1c 및 CD141없는 상태입니다. 또한, PHAgocytosis와 자식 작용 가능성 기능 NADPH 산화 효소는 개발을위한 전제 조건이다. 이 식균 작용 억제제의 cytochalsin의 B, 때문에, 자식 작용 억제제 3- 메틸 아데닌 (3-MA)과 bafilomycin (BafA1)와 NADPH 산화 효소 억제제 – 디 페닐 렌 요오드 (DPI)는 – 자신의 발전을 방지. 또한, 지속적인 저산소증에 호중구 적응은 분명 단핵구 / 호중구의 공동 문화뿐만 아니라 자신의 발전을 방해 간헐적 저산소증에 노출했다 반면. 14, 15 문화에서 그들의 제안 된 개발 본 논문에서는 그림 1 국지적 인 프로토콜에 도시는 단계별에게에서 Gφ의 준비를 설명 갓 인간의 혈액 호중구, 자신의 개발, 식별 및 몇 가지 기본적인 특성을 순환입니다. 이 프로토콜은 추가 조사를하고 폭 넓은 스펙트럼을 나타 내기 위해 사용될 수의 역할이 새롭게 설명과 흥미로운 호중구 유래 위해 Gφ하는 characteriz하기자신의 중요성과 잠재적 기능을 전자.
그림 1 : 7 일 호중구 문화에 거대한 세포 개발의 도식 표현. 염증 부위에서 자식 작용 메커니즘을 트리거 핵 파편, 과립 (녹색과 빨간색 점)을 포함하는 조각 및 기타 세포 내 성분 (1) 호중구가 사멸 세포의 죽음을 받아야하고, (2) 분리 막 둘러싸여 것이 좋습니다. 기능 NADPH의 oxidase.They을 유지하는 것은 다양한 호중구 CD66b + / CD63 특징으로하는 동안 (3) 거 식세포 (Gφ), 세포 사멸 기관 및 호중구 파편을 내재화하여 사이토 카인이나 성장 인자없는 장기간의 호중구 문화 발전 + / MPO + / CD15 + / CD11b를 + / NE 마커, 과립 세포 파편 및 캐빈 수용체 CD36 및 CD68을 둘러싸는 큰 phagosomes. 기가 바이트1; 다양한 입자와 산화 LDL을 내면화 할 수있는 대부분의 단핵 세포, 그리고 ROS를 생성합니다. Gφ을 채우는 공포의 멤브레인은 자식 작용과 거대한 식세포 형성 사이의 엄격한 연결을 제안, (진한 파란색으로 표시) LC3B, autophagosomal 막의 마커를 포함한다. Gφ는 GM-CSF / IL-4를 포함하는 배지에서 개발하지 않습니다. 또한, 예 NADPH 산화 효소 억제제 억제제 – 디 페닐 요오도 늄 (DPI)는 자식 작용 억제제 3- 메틸 아데닌 (3-MA) 및 bafilomycin (BafA1) 및 포식 작용 억제제 사이토의 B (. 사이토 B)는 그 형성을 폐지. (4) 생체 내에서 잠재적 인 Gφ 기능 항 또는 프로 염증과 동맥 경화 과정에 참여를 (이 그림은 우리의 연구 결과 14, 15을 기반으로하고 B로 첨부 편집에서 수정 포함 할 수있다erton 20). 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
거 식세포 (Gφ)는 이러한 CD66b / CD15 / CD63 / MPO / NE와 같은 근본적이고 구체적인 호중구 마커를 발현하는 호중구 유래 세포의 새로 정의 된 모집단 있습니다. 호중구 식세포 유래의이 유형은 이전 문헌에 기재되지 않았다. 짧은 수명이며, 세포 자멸사를 받아야 호중구와는 달리, Gφ는 넥신 – V-음과 확장 수명을 표시합니다. 그러나, 호중구처럼 Gφ은 입자를 내면화하고 그 입자와 PMA에 대한 응답으로 NADPH 산화 효소에 의존 ROS를 생산하고 있습니다. 그러나, 그들의 능력은 ROS가 Gφ의 고유 한 기능입니다 생산 결과적으로 OxLDL을 내면화하고 있습니다. (14)
다수의 인자 배양 그들의 발전에 영향을 나타내었다. 성장 배지의 외부 사이토킨 또는 성장 인자의 부족이 중요하다 (구체적으로는 GM-CSF / IL-4). 그러나, IL-8으로 호중구의 이동은 dev에 그들 사이의 차별 요인을 입증Gφ에 눈 맞아 달아과 그렇지 않은 사람들. 그들의 억제 Gφ 형성 (그림 1)을 방지하기 때문에 또한, 세포 사멸 호중구에서 발생하는 파편의 국제화, 자식 작용 단백질 (LC3B) 및 기능 NADPH 산화 효소의 발현은 모두 자신의 발전을위한 필수적 것으로 나타났다. 명백하게, 호중구에서 발생하는 이러한 거대 세포의 발달은 단핵구 / 대 식세포 리니지 것을 특징 거대 세포 형성 다르다. 호중구 Gφ 여기에 세포 잔재를 덮어에 의해, autophagocytosis를 통해 개발 기술 된 반면, 다양한 만성 염증성 질환, 20, 21과 관련된 후자의 형태로 멀티 핵 거대 세포는 대부분 모노 핵 남아 자신의 개발을 통해, 14 (드물게 그러나, 때로는 두 번째 핵)이 관찰 될 수있다. 또한, 제어 장치의 개수가 호중구 원점을 설정한다 : (1) expre특정 neutropilic 마커의 ssion과 수지상 및 단핵구 혈통 마커의 부재, 단핵구 (2) 자신의 방해 개발 / PMN 공동 문화, (3) 라이브 세포 이미징 및 시간에 의해 입증 식세포 (에서 문화 운동의 서로 다른 패턴 -lapse 현미경) 플라스틱 요리와 순수한 CD15 + / CD14에서 (5) 자신의 개발, 14 (4) 자신의 빛을 준수 – PMN 유동 세포 계측법에 의해 인수했다.
시험관 식별 된 기능 중 일부는 우리에게 생체 내에서 잠재적 기능에 대한 단서를 제공 할 수 있습니다. 선천성 면역 신호 전달 경로와 규제 상호 작용을 통해 염증 감소에 기여 자식 작용 단백질 22 – – 예를 들어, Gφ의 능력 호중구 과립 이물질 큰 액포의 존재 및 발현 LC3B 대량 소비 모두 지원 소거 능력. 이와 같이이러한 연구 결과는 또한 Gφ가 Mφ / DC 시스템이 부족하거나 압도 염증 부위에서 작동 할 수 있음을 나타냅니다, 따라서 염증의 해결에 기여한다. 이 개념은 혼합 단핵구 / 호중구 배양 Gφ 개발을 방해한다는 사실에 의해지지 될 수있다. (14) 또한, Gφ는, oxLDL 포착 수용체 (CD36, CD68)을 표현 oxLDL을 내면화하고, 응답으로 ROS를 생산, 그들이 염증을 해결하기 위해 동맥 경화 과정에 관여하는 것을 나타낼 수있다 주어진. Gφ는 IL-8으로 마이그레이션 호중구와 IL-8은 급성 염증 부위에 호중구 모집을 나타냅니다으로 내피 단일 층에서 호중구 '윤회에서 개발 때문에이 연구 결과는 또한 항 염증 기능을 지원할 수있다. 반대로, 특정 염증성 질환에서 Gφ의 성능 기준에 기여하므로, 과립제 성분 및 ROS를 배출 할 수 있도록 수도일관된 염증과 조직 손상. (20) 그러나, 전체, 그들의 autophagic 능력 Gφ 가능성이 염증 반응을 감소보다는 그것을 영속에 참여하고 있음을 나타냅니다.
흥미롭게도 우리는 최근에 인간의 동맥 경화성 플라크의 Gφ의 존재를 확인했다. (준비). 그러나 질문의 큰 숫자는 풀어 될 남아있다. 예를 들어, Gφ의 프로 또는 항 염증은? 시험 관내 또는 생체 내에서 자신의 형성과 기능을 결정하는 요소는 무엇인가? Gφ에 자신의 개발을 촉진 자신의 전구 세포가 특정되는 호중구 하위 집단인가? 그들은 특정 병리하고있는 관련 있는가? 종합적으로, 그 기원과 잠재적 기능에 대한 흥미로운 질문 포즈.
프로토콜 내에서 그러나 중요한 단계와 함정 염두에 보관해야합니다. Gφ의 난의 개발에서 중요한 단계들 사이토 카인, 성장 인자 또는 항생제의 중간없는에서 순수 호중구를 배양. 또 다른 중요한 단계는 Gφ가 오염 단핵 세포에서 개발하는 것을 배제하고 Gφ의 호중구 출처를 확인하는 것입니다. 마커 – 따라서, 불연속 구배에 의한 혈액 분리 한 후, 호중구 더 과립구 게이팅 및 CD15 + / CD14를 사용하여 유동 세포 계측법에 의해 정화의 추가 단계를 하였다. 현상 Gφ 추가의 정제 공정이 실시되지 않은 것과는 다르지 않았다 분리 유동 세포 계측법에 의해 정제 된 호중구로부터 획득. 따라서, 대부분의 실험으로 인해 추가적인 세포 손실로 정제 단계 유세포없이 수행 하였다. 참고로, 일부 드문 경우에 일부 호산구는 문화에 주목했다. 이들의 크기는 배양 기간 동안 변화가 없었다. 우리는 또한주의해야 그 방법의 숫자가 있지만인간의 혈액에서 호중구의 분리, 여기에 설명 된 방법은 우리가 사용하는 유일한 방법이며, 따라서 우리는 호중구 분리 가능한 다른 방법에 의해 Gφ 개발을 비교할 수 없습니다.
Gφ 조사에서 가장 큰 함정은 다양한 생화학 적 분석에 적합한 순수 Gφ 인구의 충분한 숫자를 얻기 위해 무능력의 결과. 그것은 우리의 실험이 실시 된 조건에서 기본적으로 불가능하다. 첫째, Gφ의 수율이 낮다. 200 Gφ 혈액 기증자에 따라 문화 7 일 후에 개발 – 1.0 × 10 (6)에서 PMN 약 100 시드. 둘째, 접시 나머지 호중구 파편 문화 현상 Gφ을 분리 순간 기본적으로 곤란하다. 이러한 제한은 사실상 불가능 생화학 적 또는 분자 생물학적 방법에 의해 세포들을 분석 하였다. 따라서,이 프로토콜은 광을 이용하여 Gφ 식별 및 기능을 설명하기에 집중및 공 초점 현미경. 문화 Gφ에 호중구에서 이들의 형태 학적 변화는 라이브 세포 이미징 및 시간 경과 현미경으로 이어졌습니다. 14 분명히, 더 큰 혈액 볼륨을 얻을 낮은 수율을 생화학 적 또는 분자 생물학 방법을 구현하고 극복하기 위해와 접시에 호중구 '파편에서 가능한 Gφ 분리에 필요할 수 있습니다.
요약하면, 우리는 최근 배양 처음 호중구 기원 장수 식세포의 서브 모집단을 Gφ의 발전을 설명 하였다. 위에서 언급 한 두 가지 제한 사항을 극복한다하더라도 따라서,이 배양 Gφ를 얻을 현재 사용할 수있는 유일한 방법이다합니다 (Gφ의 낮은 수율은 배양 얻어진 배양에서 호중구 파편 현상 Gφ를 분리 할 수 없다는 요리). 그럼에도 불구하고,이 프로토콜에 제시된 자신의 준비와 식별, 된 essentia입니다더 Gφ의 잠재적 의미와 기능을 조사하기 위해, 염증 반응 및 호중구 생물학 및 소성에 관심이 과학자 리터.
The authors have nothing to disclose.
저자는 공 초점 현미경 연구와 함께 그녀의 귀중한 도움 박사 에디스 수스 – 토비 감사합니다. 본 연구는 KAMEA 프로그램 (LD 및 AP)의 틀에서 이민 흡수의 교육부와 기획위원회 및 고등 교육에 대한위원회의 예산에 의해 지원되었다. 우리는 또한 감사 연구 레이디 데이비스 재단 포스트 박사 연구 활동에서 연구원 (OR)의 지원을 인정합니다.
Sterile scalp vein set (21GX3/4) | Bio Diagnostics Ltd. | # 20080312 | A strile needle for venipancture |
VACUETTE HOLDEX Single-Use Holder PP | Greiner Bio-One | # 450263 | For securing during venipuncture |
VACUETTE Tube K3E K3EDTA (16×100/9 ml) | Greiner Bio-One | # 455036 | Sterile tube for blood collection |
Nunclon MultiDish (24 wellx1ml) | Thermo Scientific | # 142475 | |
Polypropylene conical centrifuge tube (50 ml) | Greiner Bio-One | # E14103PJ | |
Transwell-24 well (transmigration assay) | Corning | # CA-3415 | Polycarbonate membrane, 6.5 mm diameter, 3 μm pores) |
RPMI-1640 medium | BioIndustries | # 01-100-1A | Do not add antibiotics |
EA.hy926 (ATCC CRL2922) | BioIndustries | # CRL-2922 | |
ATCC-formulated Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium | BioIndustries | # 302002 | complete growth medium |
Polysucrose – Histopaque1119 | Sigma-Aldrich | # 1119-1 | Tissue culture grade |
Polysucrose – Histopaque1077 | Sigma-Aldrich | # 1077-1 | Tissue culture grade |
Phosphate buffered saline (PBS) – ion free | BioIndustries | # 02-023-1A | Cell biology and molecular biology grade |
Heat inactivated Fetal calf serum (HI-FCS) | BioIndustries | # 04-121-1B | Cell biology grade or tissue culture grade, low LPS |
NaCl | Sigma | # S3014 | Molecular biology grade, suitable for cell culture |
Paraformaldehyde, 16% | Electron Microscopy Sciences | # 15710 | Cell bology grade or tissue culture grade (only 16% PFA) |
Triton X-100 | Sigma-Aldrich | # 9002-93-1 | Molecular biology grade |
Normal Goat Serum | BioIndustries | # 04-009-1 | Cell biology and molecular biology grade |
Trypan blue | BioIndustries | # 031021B | Tissue culture grade |
May-Grünwald | Sigma-Aldrich | # MG500 | Cell biology grade-(procedure No GS-10) |
Giemsa stain Kit | Sigma | # 48900 | Cell biololgy grade-(procedure No GS-10) |
Fibronectin | BioIndustries | # 03090105 | |
Human Interleukin-8 (CXCL8) | PeproTech | # 200-08-5 | |
Anti-CD14 (clone 5A3B11B5) | Santa Cruz Biotechnologies | # sc-58951 | Mouse IgG2b; expressed by monocytes |
Anti-CD63 (clone MX-49.129.5) | Santa Cruz Biotechnologies | # sc-5275 | Mouse IgG1; expressed by neutrophils |
Anti-CD66b (clone 80H3) | AbD Serotec | # MCA216 | Mouse IgG1; expressed by neutrophils |
Anti-CD1c (BDCA-1) (clone AD5-8E7) | MACS Miltenyi Biotec | # 130-090-695 | Mouse IgG2a; expressed by dendritic cells |
Anti-CD15 (clone MY-1) | Abcam | # ab754 | Mouse IgM; expressed by neutrophils |
Anti-Cytochrome b-245 Light Chain (p22-phox) (clone 44.1) | BioLegend | # 650001 | Mouse IgG2a; to recognize neutrophil NADPH oxidase complex |
Anti-CD68 | Protein Tech | # 16192-1-AP | Rabbit IgG; to recognize oxLDL scavenger receptor |
Anti-LC3B | Sigma | # L7543 | Rabbit IgG |
Anti-Myeloperoxidase | Abcam | # ab45977 | Rabbit IgG |
Anti-Neutrophil elastase | Calbiochem | # 481001 | Rabbit IgG |
Anti-NOX2 (gp91-phox) | Abcam | # ab131083 | Rabbit IgG |
Anti-CD36 (SR-B3) | Novus Biologicals | # NB400-144 | Rabbit IgG |
Purified Mouse IgG1, κ Isotype Control (clone MG1-45) | BioLegend | # 401401 | Antibody used as isotype control |
Purified Mouse IgG2a, κ Isotype Control (clone MOPC-173) | BioLegend | # 400263 | Antibody used as isotype control |
Normal rabbit IgG | Santa Cruz Biotechnologies | # sc-2027 | Antibody used as isotype control |
CF488A Goat Anti-Rabbit IgG (H+L) | Biotium | # 20012 | Anti-Rabbit IgG with the green fluorescent dye CF488A |
CF647 Goat Anti-Rabbit IgG (H+L) | Biotium | # 20043 | Anti-Rabbit IgG with the red fluorescent dye CF647 |
CF488A Goat Anti-Mouse IgG (H+L) | Biotium | # 20010 | Anti-Mouse IgG with the green fluorescent dye CF488A |
CF647 Goat Anti-Mouse IgG (H+L) | Biotium | # 20040 | Anti-Mouse IgG with the red fluorescent dye CF647 |
Fluorescent Mounting Medium with DAPI | Vectashield H-1000; Vector Lab Inc. | # E19-18 | Nuclear staining |
Confocal laser scanning microscope (LSM 700) | Carl Zeiss | Ser.# 3523000380 | Plan Apo x40 immersion oil objective |
Zeiss CLSM software (ZEN 2010) | Carl Zeiss MicroImaging GmbH | version 6.0 | For colocalization analysis |
ImageJ software | Wayne Rasband, NIH, USA | version 1.49k | For determination of cell areas and fluorescence intensity |
Light microscope (Axiovert 25) | Carl Zeiss | Ser.# 201060153 | Examination of cells in culture |
Centrifuge (Megafuge 1.0 R) | Heraeus Instruments | # D-37520 | Cells separation from blood; cytospins preparation |
Inverted fluorescent microscope (Zeiss Axio Observer Z.1) | Carl Zeiss | Ser.# 3834001470 | Demonstration of giant phagocytes development |
Temperature-controlled incubation system (Cube&Box) | Life Imaging Services | Temperature control system for microscopes | |
High resolution digital CCD camera (AxioCam HRm) | Carl Zeiss | Ser.# 117090279 | For capturing high-contrast image data from an examined cell objects |