Introduction
Kranspulsåren sygdomme og deres komplikationer er blandt de førende dødsårsager på verdensplan. Aktuelle terapeutiske strategier fokuserer på at genetablere blodgennemstrømningen, enten ved at dilatere den indsnævret fartøj eller ved at oprette en bypass. Koronar bypass podning (CABG) ved hjælp af vene autotransplantater blev første gang beskrevet i 1968 og er blevet forfinet gennem årene. Bortset fra revaskularisering af den venstre forreste nedadgående koronararterie, er vena saphena ledninger mest almindeligt anvendte 1. Men graft åbenheden forbliver den akilleshæl saphenavene transplantater (SVG). Et år efter operationen, graft åbenhed er 85%, faldende til 61% efter ti år 2,3. Afsløring af de patofysiologiske mekanismer og årsager til SVG åbenhed tab er derfor en vigtig opgave.
Denne video viser en rotte vene indskydning model til at undersøge venegraft tab. De overordnede mål for denne metode til at undersøge den underliggende patobiologiskeog -physiological processer under sygdomsprogression og udvikle en passende model til lægemiddel eller terapeutisk mulighed test. Ved at transplantere den overfladiske epigastriske vene i det arterielle system, denne model efterligner nøje den kliniske af koronararterie bypass transplantation. Kirurgisk trauma, iskæmi og væg stress er vigtige udløser af patologiske vaskulære ændringer og imiteres i den beskrevne model.
Forskellige modeller og arter er tilgængelige til at undersøge venegraft åbenhed tab. Store dyremodeller, såsom grise 4, får 5, hunde 6 og aber 7, ligner menneskelige beholder og anatomiske strukturer og dermed gøre det muligt for komplekse terapeutiske strategier, såsom bypass stent eller nye kirurgiske teknikker, der skal testes 8. Dog er særlige boliger, udstyr og personale påkrævet. De høje omkostninger og behovet for en yderligere narkoselæge under kirurgi hindre deres videre anvendelse. smalle dyr, herunder rotter, er nemme at håndtere, ikke kræver særlige boliger, og har overskuelige omkostninger. Sammenlignet med musemodeller 9,10, rottemodeller har den fordel, bedre operabilitet og derfor mindre variabilitet i resultatet. Rotter er fysiologisk og genetisk mere ligner mennesker end mus 11,12. Desuden er det kun de fleste vildtypemus udvikle begrænset myointima 13, som gør musemodeller tilbøjelige til type II fejl. Histologien af de vigtigste mus vener, såsom vena cava inferior, kun består af nogle få cellelag og gør tidlig evaluering vanskelig 13. En yderligere ulempe er den lille mængde væv til rådighed til efterfølgende analyse efter graft recovery.
Den i dette video model er reproducerbar, billig og let at udføre, og det kan konstateres, hurtigt og pålideligt. Det er især velegnet til evaluering dyre eksperimentelle terapeutiske midler, såsom virale vektorertil genterapi, på en økonomisk måde.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Dyrene fik human måde i overensstemmelse med vejledningen for principperne af laboratoriedyr, udarbejdet af Institut for forsøgsdyr Ressourcer og offentliggjort af National Institutes of Health. Alle dyr protokoller blev godkendt af den ansvarlige kommune ( "Amt für Gesundheit und Verbraucherschutz, Hansestadt (Kontoret for sundhed og forbrugerbeskyttelse) Hamburg").
1. Animal Care
- Opnå Lewis rotter (LEW / CRL) rotter og ROSA / luciferase-LEW transgene rotter, der vejede 300-350 g fra Institut for forsøgsdyr.
- Hold rotterne under konventionelle betingelser i ventilerede skabe og foder dem standard rottefoder og autoklaveres vand ad libitum.
- Udfør en graft transplantation ved hjælp af ROSA / luciferase-LEW transgene rotter som donorerne og syngene LEW / CRL rotter som modtagerne.
2. Forberedelse af Donor Rat
- Brug en indføringion kammer til bedøve en rotte med isofluran (2,5-3%).
- Placer rotte på ryggen og vedligeholde anæstesi med en ansigtsmaske, der dækker munden og næsen. Check for tilstrækkelig dybde af anæstesi ved at knibe bagtæerne og kontrol af fravær af reflekser. Anvende nogle dyrlæge salve til øjnene for at forhindre tørhed, mens under anæstesi.
- Spred bagbenene og fastsætte deres position ved hjælp tape.
- Barber lyskelymfeknuder hår med en hår trimmer og desinficere hele området ved hjælp af povidon-jod efterfulgt af 80% ethanol. Gentag desinfektion trin to gange.
BEMÆRK: kirurgiske område, gaze, og kirurgiske instrumenter skal steriliseres. Oprethold et sterilt felt under hele proceduren og slid engangsbrug, sterile kirurgiske handsker, masker, og hætter. - Under et mikroskop, udføre en lodret snit langs linea inguinalis. Brug to pincet til forsigtigt at adskille de subkutane væv og udsætte den overfladiske epigastriske vene fra dens origin på den femorale vene. isolere omhyggeligt den overfladiske epigastriske vene fra de omgivende væv.
- Stop blodgennemstrømningen i den overfladiske epigastriske vene ved anvendelse af to mikro klemmer.
- Harvest en omtrent 0,5 til 1 cm segment af venen ved forsigtigt at løfte det isolerede vene med pincet og skære gennem beholderen med microscissors. Efterlad mikro klemmer på fartøjet stump for at forhindre tab af blod. Placer den fjernede stykke vene på steril gaze. Placer forsigtigt en 30 G nål inde i en ende af den høstede vene og skyl beholderen med heparin (50 enheder / ml).
BEMÆRK: Håndter venen med omhu og undgå skader under løft, skæring, og rødmen. Sørg for at skylle transplantatet med den rette mængde heparin. - Holde skibet segment i 1% lidocain på is indtil transplantation i recipient rotte for at forhindre et fartøj krampe.
- Aflive donor rotte ved at øge anæstesi til 5% isofluran. Efter 2-3 min, opOr maven langs linea alba, skære gennem membranen, og fjern hjertet til at stoppe cirkulationen.
3. Forberedelse af Modtager Rat
- Bedøve og løse modtageren rotte på samme måde som donor rotte.
- Barbere den mediale side af benene med et hår trimmer og desinficere tre gange under anvendelse af povidon-iod og 80% ethanol.
- Overvåg anæstesidybden og sikre, at det er tilstrækkeligt ved at kontrollere fravær af reflekser, når klemme bagtæerne.
- Udfør en median femoral snit fra knæet til lyskelymfeknuder fold. Under et mikroskop, bruge 2 pincet til at adskille den femorale arterie fra sine omgivelser.
- Brug mikro klemmer til at stoppe strømmen af blod. Placer den proximale klemme først, efterfulgt af den distale klemme.
- Klip et kort segment af den fastspændte femorale arterie med microscissors og kassér den. Afkort resterende arterielle stump med microscissors, skabe et hul, der er1-2 mm større end venegraft. Skyl arterielle stump med heparin ved anvendelse af en 30 G nål.
BEMÆRK: Hvis adventitia stikker lidt ud over skibet stump, bruge pincet til at trække det lidt over enden af karret og fjerne et stykke. - Placer høstede vene fra trin 2.8 mellem arterielle stubbe og justere længden, så den passer hensigtsmæssigt ind i mellemrummet. Bemærk retningen af venen.
- Udfør den proximale anastomose først med en 10-0 prolene sutur. Gennemføre enkelte sting i den viste (Figur 1D) rækkefølge. Start med en sutur på hver laterale side, før du tilføjer yderligere tre suturer på den ventrale side. Bagefter placere tre masker på dorsale side af skibet at fuldføre anastomose.
- Forbind de distale fartøjer med transplantatet med den samme teknik som for den proximale anastomose beskrevet i trin 3.8. Igen, start med en sutur på hver laterale side, og derefter placere tre suturer på den ventrale side og strækkes.
- Load to 1-ml sprøjter med fibrinklæber komponent 1 og 2. Løft forsigtigt transplantatet med pincet og slippe cirka 100 ul fibrinklæber komponent 1 under transplantatet, efterfulgt af komponent 2.
BEMÆRK: Sørg for, at komponenterne 1 og 2 anvendes på en 1: 1-forhold. - Placer implantatet tilbage i sin position og slippe yderligere 100 pi komponenter 1 og 2 oven af implantatet. Vær sikker på, at limen dækker både transplantatet og anastomosen for at forhindre anastomotiske insufficiens og over-udspiling af venegraft.
- Åbn forsigtigt distale klemme, efterfulgt af den proximale.
- Bekræft en vellykket operation ved at kontrollere for en synlig impuls i den transplanterede vene og distale arterie af transplantatet.
- Fjern overdreven lim, hvilket vanskeliggør huden lukning. Brug pincet til at løfte den hærdede lim og fjerne den overskydende med microscissors. Luk hudlag med 5-0 prolene suturer.
- Sprøjt 4-5 mg / kg Carprofen subkutant før de tillader rotten til at vågne op. Lad ikke dyret uden opsyn, indtil det har genvundet tilstrækkelig bevidsthed til at opretholde brystleje. Hold dyret i et enkelt bur, indtil den er fuldt tilbagebetalt.
- Tilføj Metamizol til drikkevandet (50 mg Metamizol per 100 ml) som smertestillende medicin for de følgende 3 dage og overvåge dyret dagligt.
4. Duplex Sonography
BEMÆRK: Brug duxplex sonografi at visualisere blodgennemstrømningen ikke-invasivt i rotter 14.
- Bedøve en rotte i en induktion kammer (isofluran 2%). Placer rotte på ryggen og opretholde anæstesi med en ansigtsmaske, der dækker næsen.
- Brug hårklippemaskiner og hårfjerning creme til at fjerne hår rundt om det område af låret.
- Påfør ultralyd gel til låret. Sørg for at der ikke er luftbobler. Anskaf duplex sonografi billeder med en MS 400 transducer (center frekvens: 30 MHz) med en billedfrekvens på 230-400 billeder / sek.
5. Histopatologi
BEMÆRK: Høst og plette fartøj med Massons trichromfarvning for morfometrisk analyse 15.
- Fastgør høstede fartøj i 4% paraformaldehyd natten over og dehydrere den i stigende koncentrationer af ethanol. Integrer prøven i paraffin og skær den i 5 um tykke skiver ved hjælp af en mikrotom.
BEMÆRK: Paraformaldehyd er giftigt og bør håndteres med særlig omhu. - Afparaffiniser slides før farvning dem med trichromfarvning opløsning. Dehydreres farvede objektglas, klare dem med xylen, og montere dem i montering medium. Efter tørring slides, se prøverne med et mikroskop.
6. Bioluminescens Imaging (BLI)
BEMÆRK: postoperative transplantat blev sporet over tid in vivo ved at måle bioluminescerende signal 16.
- Opløs 1 g D-Luciferin kaliumsalt i 22 ml PBS og indsprøjtes intraperitonealt i rotter (375 mg / kg legemsvægt). Vent 15 minutter for luciferin at cirkulere i dyret.
- Placer rotte i en real-time selvlysende kvantificering systemet og få adgang til bioluminescens signal.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Rotte vene indskydning model er egnet til at undersøge udviklingen af myointima hyperplasi og venegraft fiasko. Dyr inddrive godt fra kirurgi og viser fremragende fysiske tilstand efter operation. Figur 1 viser de vigtigste kirurgiske trin. Efter huden snit langs linea inguinalis, er epigastriske overfladisk vene og arteria femoralis identificeret (figur 1A). Høst af transplantatet bør udføres omhyggeligt, uden at beskadige implantatet (figur 1B), da dette kan føre til tidlig transplantatsvigt og åbenhed tab. Efter positionering af transplantatet i recipientdyret (figur 1C), er anastomose sting udføres i den i figur 1 D rækkefølge. Den færdige venøse indskydning graft synes bleg (figur 1E) og bør blive rød og vise pulsering efter reperfusion (figur 1F).
De succesfulde Integrati på af venen i den femorale arterie og graft åbenhed efter transplantation kan bekræftes ikke-invasivt ved hjælp duplex sonografi (figur 2A). Ved at transplantere venen af en Luc-positiv rotte i en syngen Luc-negative rotte, kan bioluminescens billeddannelse anvendes til at overvåge graft tilstedeværelse over tid (figur 2B).
Myointima hyperplasi udvikler gradvist i transplantatet over tid. Histologisk farvning med Masson trichrom demonstrerer myointima dannelsen inde i indre elastiske lamina (fig 2C). Beregningen af luminal udslettelse, (dividere tværsnitsarealet af hulrummet med arealet inden for det indre elastiske lamina) afslørede et gradvist tab af transplantat åbenhed fra dag 7 til dag 28 efter kirurgi, hvilket bekræftede de reproducerbare dynamik myointima hyperplasi i denne rottemodel (figur 2D).
re en "src =" / files / ftp_upload / 54839 / 54839fig1.jpg "/>
Figur 1: Detaljeret ordning for det kirurgiske indgreb. (A) Anatomi af inguinale region. (B) Høst epigastriske overfladisk vene graft. (C) anbringelse af venegraft mellem arterielle stubbe af recipientdyret. (D) bekendtgørelse af anastomose sting. (E) Webstedet efter venøs graft konstruktion. (F) site efter reperfusion af venøs indskydning graft. Sorte pile markerer epigastriske overfladisk vene. Scale bar = 5 mm. Klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 2: Karakterisering af Animal Model. (A) Duplex sonografi af en venøs indskydning pode immed iately efter transplantation (0d) og 28 dage efter operation (28d). (B) BLI fra Luc-positive transplantater transplanteret i Luc-negative rotter ved 0 dage og 28 dage efter kirurgi. (C) Repræsentative podede tværsnit høstet efter dag 7, 14, 21 og 28 og farvet med Masson trichrom. (Overpanel: Scale bar = 400 um; Underpanel: Scale bar = 100 um) (D) Luminal udslettelse i procent beregnes ved at dividere de nye indvendige lumen fra de tidligere lumen. Forskelle mellem grupperne blev vurderet ved envejs variansanalyse (ANOVA) med Bonferroni post-hoc test. p <0,01. Fejlsøjlerne er standardafvigelsen (SD). Klik her for at se en større version af dette tal.
_upload / 54839 / 54839Sup1.jpg "/>
Supplerende Fil 1: Skematisk illustration af den kirurgiske procedure. En lodret snit langs linea inguinalis udføres på donor rotte, udsætter den ringere epigastriske vene. Blood flow standses med to mikro klemmer, og en blodåre segment 0,5-1,0 cm lange høstes. I modtagerens rotte, er en median femoral snit udført, og udsætter den femorale vene, arterie, og nerve. Efter fastspænding den femorale arterie, er et fartøj segment fjernet og erstattet af den høstede venegraft. Klik her for at se Supplemental File 1 (eller højreklik for at downloade).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Denne video viser en rotte vene indskydning model til at undersøge venegraft tab og give mulighed for udforskning af de underliggende patologiske processer og afprøvning af nye lægemidler eller terapeutiske muligheder.
Anæstesi er et afgørende aspekt af kirurgiske procedurer. En kontinuerlig inhalativ anæstesi systemet anbefales, da dette er en sikker og nem metode, specielt ved langvarig drift. Dette kan være af stor betydning under træningen fase når operationen tager mere end 1 time.
Med hensyn til den kirurgiske procedure, er det kritisk ikke at beskadige venegraft under høst og implantation 17. Gribende adventitia i skibet kan forhindre skade på venegraft og undgå efterfølgende thrombusdannelse og graft svigt. Graft åbenhed kan bestemmes umiddelbart efter venegraft konstruktion gennem observation af blodgennemstrømningen og pulsering i venegraft eller distal arterie, samt gennem duplex sonografi.
Et andet kritisk aspekt af proceduren er at forhindre over-udspiling af venegraft. Pludselig eksponering af venegraft til det arterielle tryk systemet fører til øget væg spænding, efterfølgende over-udspiling, og ændringer i strømningsmønster. Disse er kilder til trombose, anastomotiske insufficiens, og tidlig svigt graft. Støtte til venegraft med fibrinklæber kan forhindre ukontrolleret ballooning og beskytte intima og medier fra mekanisk ødelæggelse. Absorberbare collagen bagsider er et alternativ til fibrinklæber og kan anvendes som perivenøs dækker 18.
Det mest kritiske trin i denne protokol er utvivlsomt anastomosen mellem venegraft og arterien. Der må drages omsorg for ikke at gennembore de to vægge af beholderen, da dette vil føre til indsnævring af anastomosen, som kan resultere i tidligt svigt af implantatet. Hertil kommer, særlig attention skal betales til lokalisering af suturer. Kongruens af suturen positioner i arterie og vene sikrer graft åbenhed og forhindrer insufficiens. For at lette dette kan suturer udføres i den i figur 1 D rækkefølge.
Graden af tekniske vanskeligheder kan ses som en begrænsning af teknikken, fordi en novice først må blive fortrolige med mikrokirurgisk udstyr og de små størrelser af de anatomiske strukturer. Men andre modeller, der anvendes udstille, de samme problemer, og vi mener, at denne video vil hjælpe nybegyndere kirurger til at mestre denne teknik inden for kort tid.
Mange små dyremodeller for venøs graft svigt er blevet beskrevet i litteraturen. Men de fleste modeller kun give meget små mængder af væv til analyse 13. En fordel ved denne fremgangsmåde er den forholdsvis store mængde væv, der kan opnås. Et transplantat kan opdeles i flere dele ennd anvendes til forskellige assays, hvorved antallet af forsøgsdyr, der kræves.
Nylige fremskridt i zink-finger nuklease teknologi aktiveret generering af knockout rotter 19. Ved at vælge egnede knock-out rotter, kan transplantat åbenhed tab studeres i forskellige sygdomstilstande. For eksempel kan renin knockout rotter anvendes til at studere hypertension 20. Disse genetiske baggrunde kan kombineres med denne dyremodel for at indsamle oplysninger om de mekanismer venegraft svigt i forskellige indstillinger eller indvirkningen af visse gener i udviklingen af myointima hyperplasi.
Som konklusion er beskrevet i denne video model er reproducerbar, billig og let at udføre, og det kan konstateres, hurtigt og pålideligt. Myointima hyperplasi, som er den vigtigste årsag til venegraft svigt, udviklet sig hurtigt i løbet af fire uger, hvilket resulterer i progressiv luminal udslettelse. Succesfuld testet behandlingmuligheder i denne model kan yderligere bekræftet i store dyremodeller.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Acknowledgments
Forfatterne takker Christiane Pahrmann for hendes teknisk bistand. Denne undersøgelse blev finansieret af Deutsche Stiftung fuer Herzforschung (F / 28/14). DW blev støttet af Travel Award fra International Society for Heart og Lung Transplantation. TD fik Else Kröner Excellence Stipend fra Else-Kröner-Fresenius-Stiftung (2012_EKES.04). SS modtaget forskningsbevillinger fra Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG, DE2133 / 2-1, TD og SCHR992 / 3- 1, SCHR992 / 4-1, SS).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Rat LEW/Crl | Charles River | Stock number 004 | |
| Rat LEW-Tg(Gt(ROSA)26Sor- 1 luc)11Jmsk |
Institute of laboratory animals, Kyoto University, Japan | NBPR rat number 0299 | http://www.anim.med.kyoto-u.ac.jp/NBR/ |
| PFA 4% | Electron Microscopy Sciences | #157135S | 20% |
| hair clipper | WAHL | 8786-451A ARCO SE | |
| Forene | AbbVie | PZN 10182054 Art.Nr.: B506 | Isoflurane |
| microsurgical clamp | Fine Science Tools | 18055-04 | Micro-Serrefine - 4 mm |
| clamp applicator | Fine Science Tools | 18056-14 | |
| hair removal creme | Rufin cosmetic | 27618 | |
| Povidone-Iodine | Betadine Purdue Pharma | NDC:67618-152 | |
| 10-0 Ethilon suture | Ethicon | 2814G | |
| 5-0 prolene suture | Ethicon | EH7229H | |
| Rimadyl | Pfizer | 400684.00.00 | Carprofen |
| Novaminsulfon | Ratiopharm | PZN 03530402 | Metamizole |
| Heparin | Rotexmedica | PZN: 3862340 | 25.000 I.E./ ml |
| Xylocain 1% | AstraZeneca | PZN: 1137907 | Lidocain |
| EVICEL | J&J Med.Ethicon Biosur | PZN 7349697 Art. Nr.:EVK01DE | fibrin glue |
| NaCl 0.9% | B.Braun | PZN 06063042 Art. Nr.: 3570160 | |
| Vevo 770 high-resolution in vivo micro-imaging system | VisualSonics | duplex sonography | |
| Ecogel 100 ultrasound gel | Eco-med | 30GB | |
| D-Luciferin Firefly, potassium salt | Biosynth | L-8220 | |
| PBS pH 7.4 | Gibco | 10010023 | |
| Xenogen Ivis 200 | Perkin Elmer | bioluminescence imaging | |
| Weigerts iron hematoxylin Kit | Merck | 1.15973.0002 | Trichrome staining |
| Resorcine-Fuchsine Weigert | Waldeck | 2.00E-30 | Trichrome staining |
| Acid Fuchsin | Sigma-Aldrich | F8129-25G | Trichrome staining |
| Ponceau S solution | Serva Electrophoresis | 33427 | Trichrome staining |
| Azophloxin | Waldeck | 1B-103 | Trichrome staining |
| Molybdatophosphoric acid hydrate | Merck | 1.00532.0100 | Trichrome staining |
| Orange G | Waldeck | 1B-221 | Trichrome staining |
| Light Green SF | Waldeck | 1B-211 | Trichrome staining |
| Vitro-Clud | Langenbrinck | 04-0001 | |
| Glacial Acetic Acid | Sigma-Aldrich | 537020 | |
| 37% HCl | Sigma-Aldrich | H1758 | |
| Xylene | Th. Geyer | 3410 | |
| Paraffin | Leica biosystems | REF 39602004 | |
| Ethanol absolute | Th. Geyer | 2246 | |
| Ethanol 96% | Th. Geyer | 2295 | |
| Ethanol 70% | Th. Geyer | 2270 | |
| Slide Rack | Ted Pella | 21057 | |
| Staining dish | Ted Pella | 21075 | |
| Bepanthen Eye and Nose ointment | Bayer | 1578675 | Eye ointment |
References
- Sabik, J. F., 3rd, Understanding saphenous vein graft patency. Circulation. 124, 273-275 (2011).
- Goldman, S., et al. Long-term patency of saphenous vein and left internal mammary artery grafts after coronary artery bypass surgery: results from a Department of Veterans Affairs Cooperative Study. J Am Coll Cardiol. 44, 2149-2156 (2004).
- Fitzgibbon, G. M., et al. Coronary bypass graft fate and patient outcome: angiographic follow-up of 5,065 grafts related to survival and reoperation in 1,388 patients during 25 years. J Am Coll Cardiol. 28, 616-626 (1996).
- O'Brien, J. E., et al. Wound healing around and within saphenous vein bypass grafts. J Thorac Cardiovasc Surg. 114, 38-45 (1997).
- El-Kurdi, M. S., et al. Ovine femoral artery bypass grafting using saphenous vein: a new model. J Surg Res. 193, 458-469 (2015).
- Yuda, A., et al. Angiotensin II receptor antagonist, L-158,809, prevents intimal hyperplasia in dog grafted veins. Life Sci. 68, 41-48 (2000).
- McCann, R. L., Hagen, P. O., Fuchs, J. C. Aspirin and dipyridamole decrease intimal hyperplasia in experimental vein grafts. Ann Surg. 191, 238-243 (1980).
- Thomas, A. C. Animal models for studying vein graft failure and therapeutic interventions. Curr Opin Pharmacol. 12, 121-126 (2012).
- Hu, Y., Xu, Q. New mouse model of vein bypass graft atherosclerosis. Heart Lung Circ. 11, 182-188 (2002).
- Salzberg, S. P., et al. Increased neointimal formation after surgical vein grafting in a murine model of type 2 diabetes. Circulation. 114, I302-I307 (2006).
- Abbott, A. Laboratory animals: the Renaissance rat. Nature. 428, 464-466 (2004).
- Lindblad-Toh, K. Genome sequencing: three's company. Nature. 428, 475-476 (2004).
- Yu, P., Nguyen, B. T., Tao, M., Campagna, C., Ozaki, C. K. Rationale and practical techniques for mouse models of early vein graft adaptations. Journal of vascular surgery. 52, 444-452 (2010).
- Olver, D. T., Lacefield, J. C., Shoemaker, K. J. Evidence of bidirectional flow in the sciatic vasa nervorum. Microvascular research. 94, 103-105 (2014).
- Stubbendorff, M., et al. Inducing myointimal hyperplasia versus atherosclerosis in mice: an introduction of two valid models. Journal of visualized experiments : JoVE. , (2014).
- Conradi, L., et al. Immunobiology of fibrin-based engineered heart tissue. Stem cells translational medicine. 4, 625-631 (2015).
- Dashwood, M. R., Tsui, J. C. 'No-touch' saphenous vein harvesting improves graft performance in patients undergoing coronary artery bypass surgery: A journey from bedside to bench. Vascular Pharmacology. 58, 240-250 (2013).
- Bekler, H. I., Rosenwasser, M. P., Akilina, Y., Bulut, G. The use of an absorbable collagen cover (NeuraWrap) improves patency of interpositional vein grafts. Acta orthopaedica et traumatologica turcica. 44, 157-161 (2010).
- Geurts, A. M., et al. Knockout rats via embryo microinjection of zinc-finger nucleases. Science. 325, 433 (2009).
- Moreno, C., et al. Creation and characterization of a renin knockout rat. Hypertension. 57, 614-619 (2011).
