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Medicine

नस क्षेपक आदर्श: अध्ययन करने के लिए बाईपास भ्रष्टाचार प्रत्यक्षता एक उपयुक्त मॉडल

Published: January 15, 2017 doi: 10.3791/54839
Automatic Translation
1,2,3,4, 1,2,3, 4, 4, 1,2,3,4, 1,2,3,4
1Transplant and Stem Cell Immunobiology Lab, University Heart Center Hamburg, 2Department of Surgery, Transplant and Stem Cell Immunobiology Lab, University of California San Francisco (UCSF), 3Cardiovascular Research Center (CVRC) and DZHK German Center for Cardiovascular Research), partner site Hamburg/Kiel/Luebeck, 4Cardiovascular Surgery, University Heart Center Hamburg

Introduction

कोरोनरी धमनी रोग और उनकी जटिलताओं दुनिया भर में मौत के प्रमुख कारणों में से एक हैं। वर्तमान चिकित्सकीय रणनीति ध्यान केंद्रित रक्त के प्रवाह को फिर से स्थापित करने पर, या तो संकुचित पोत विस्फारित द्वारा या एक बाईपास बनाने के द्वारा। कोरोनरी धमनी बाईपास ग्राफ्टिंग (CABG) नस autografts का उपयोग कर सबसे पहले 1968 में वर्णित किया गया था और पिछले कुछ वर्षों में परिष्कृत किया गया है। इसके अलावा बाएं पूर्वकाल के revascularization कोरोनरी धमनी उतरते, saphenous नस नाली सबसे अधिक 1 उपयोग किया जाता है। हालांकि, भ्रष्टाचार प्रत्यक्षता saphenous नस ग्राफ्ट (एसवीजी) की दुखती एड़ी बनी हुई है। एक साल सर्जरी के बाद, भ्रष्टाचार प्रत्यक्षता, 85% है दस साल 2,3 के बाद 61% तक गिर। pathophysiological तंत्र और एसवीजी प्रत्यक्षता नुकसान के कारणों का अनावरण इसलिए एक महत्वपूर्ण कार्य है।

इस वीडियो नस भ्रष्टाचार नुकसान की जांच के लिए एक चूहे नस क्षेपक मॉडल को दर्शाता है। इस विधि के समग्र लक्ष्यों अंतर्निहित pathobiological का पता लगाने के लिए कर रहे हैंऔर रोग प्रगति के दौरान और -physiological प्रक्रियाओं दवा या चिकित्सकीय विकल्प के परीक्षण के लिए एक उपयुक्त मॉडल विकसित करने के लिए। धमनी प्रणाली में सतही अधिजठर नस रोपाई से, इस मॉडल को बारीकी से कोरोनरी धमनी बाईपास ग्राफ्टिंग के नैदानिक ​​सेटिंग mimics। शल्य आघात, ischemia, और दीवार तनाव रोग संवहनी परिवर्तन के महत्वपूर्ण चलाता है और मॉडल वर्णित में नक़ल कर रहे हैं।

विभिन्न मॉडल और प्रजातियों नस भ्रष्टाचार प्रत्यक्षता नुकसान की जांच करने के लिए उपलब्ध हैं। ऐसे सूअरों 4, 5 भेड़, कुत्तों 6, और बंदरों 7 के रूप में बड़े पशु मॉडल, मानव पोत और शारीरिक संरचनाओं जैसे लगते हैं और इस तरह इस तरह के बाईपास स्टेंटिंग या नई शल्य चिकित्सा तकनीक के रूप में जटिल चिकित्सकीय रणनीति, 8 का परीक्षण किया जा करने के लिए सक्षम है। हालांकि, विशेष आवास, उपकरण, और कर्मचारियों के लिए आवश्यक हैं। इसके अलावा, उच्च लागत और सर्जरी के दौरान एक अतिरिक्त एनेस्थेटिस्ट के लिए जरूरत के लिए अपने व्यापक आवेदन में बाधा। एस.एम.चूहों सहित सभी जानवरों, संभाल करने के लिए, विशेष आवास की आवश्यकता नहीं है आसान कर रहे हैं, और प्रबंध लागत है। माउस मॉडल 9,10 की तुलना में, चूहे मॉडल परिणाम में बेहतर operability का लाभ और इसलिए कम परिवर्तनशीलता है। चूहे physiologically और आनुवंशिक रूप से अधिक चूहों 11,12 से मनुष्यों के समान हैं। इसके अलावा, सबसे प्रकार के जंगली चूहों केवल सीमित myointima 13 है, जो माउस मॉडल द्वितीय त्रुटियों को टाइप करने का खतरा बना विकसित करना। इस तरह के अवर रग Cava के रूप में मुख्य माउस नसों, के ऊतक विज्ञान, केवल कुछ सेल परतों के होते हैं और जल्दी मूल्यांकन मुश्किल 13 प्रदान करता है। एक और नुकसान यह भ्रष्टाचार वसूली के बाद बाद के विश्लेषण के लिए उपलब्ध ऊतक की छोटी राशि है।

मॉडल इस वीडियो में वर्णित है, प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य सस्ती है, और आसान करने के लिए है, और यह जल्दी और मज़बूती से स्थापित किया जा सकता है। यह इस तरह के वायरल वैक्टर के रूप में महंगा प्रयोगात्मक चिकित्सीय एजेंट, मूल्यांकन के लिए विशेष रूप से उपयुक्त हैजीन थेरेपी, एक किफायती फैशन में है।

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Protocol

पशु प्रयोगशाला पशु के सिद्धांतों, प्रयोगशाला पशु संसाधन संस्थान द्वारा तैयार की और राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थान द्वारा प्रकाशित के लिए गाइड के अनुपालन में मानवीय देखभाल प्राप्त किया। सभी पशु प्रोटोकॉल जिम्मेदार स्थानीय प्राधिकारी ( "राशि फर Gesundheit und Verbraucherschutz, Hansestadt (स्वास्थ्य और उपभोक्ता संरक्षण के लिए कार्यालय) हैम्बर्ग") द्वारा अनुमोदित किया गया।

1. पशु की देखभाल

  1. प्राप्त लुईस चूहों (LEW / सीआरएल) चूहों और रोजा / luciferase-LEW ट्रांसजेनिक चूहों प्रयोगशाला पशु के संस्थान से 300-350 ग्राम वजन।
  2. हवादार मंत्रिमंडल में पारंपरिक शर्तों के तहत चूहों रखें और उन्हें मानक चूहे चाउ और autoclaved पानी यथेच्छ खिलाओ।
  3. दाताओं और प्राप्तकर्ता के रूप में syngenic LEW / CRL चूहों के रूप में रोजा / luciferase-LEW ट्रांसजेनिक चूहों का उपयोग कर एक भ्रष्टाचार प्रत्यारोपण प्रदर्शन करना।

2. दाता चूहे की तैयारी

  1. एक को शामिल प्रयोग करेंआयन चैम्बर isoflurane (2.5-3%) के साथ एक चूहा चतनाशून्य करने के लिए।
  2. अपनी पीठ पर चूहे की जगह और मुंह और नाक को कवर एक facemask के साथ संज्ञाहरण बनाए रखें। पिछले पैर बन्द रखो और सजगता के अभाव की पुष्टि करने से संज्ञाहरण की पर्याप्त गहराई के लिए जाँच करें। आंखों के लिए कुछ पशु चिकित्सक मरहम जबकि संज्ञाहरण के तहत सूखापन को रोकने के लिए लागू करें।
  3. पिछले पैरों बिखरा हुआ है और टेप का उपयोग कर अपनी स्थिति को ठीक।
  4. एक बाल trimmer के साथ वंक्षण बाल दाढ़ी और povidone आयोडीन 80% इथेनॉल के बाद का उपयोग कर पूरे क्षेत्र कीटाणुरहित। कीटाणुशोधन कदम दो बार दोहराएँ।
    नोट: शल्य चिकित्सा क्षेत्र, धुंध, और शल्य चिकित्सा उपकरण निष्फल होना चाहिए। प्रक्रिया के दौरान एक बाँझ क्षेत्र को बनाए रखने और एकल उपयोग, बाँझ सर्जिकल दस्ताने, मास्क, और टोपी पहनते हैं।
  5. एक माइक्रोस्कोप के तहत, LINEA inguinalis के साथ एक ऊर्ध्वाधर चीरा प्रदर्शन करते हैं। दो संदंश का प्रयोग धीरे चमड़े के नीचे के ऊतकों को अलग करने और अपने मूल से सतही अधिजठर नस का पर्दाफाशऊरु नस पर जिन। ध्यान से आसपास के ऊतकों से सतही अधिजठर नस अलग।
  6. सतही अधिजठर नस दो सूक्ष्म अकड़न का उपयोग करने में रक्त के प्रवाह को बंद करो।
  7. ध्यान से संदंश के साथ अलग-थलग नस उठाने और microscissors के साथ पोत के माध्यम से काटने से नस की एक लगभग 0.5 से 1 सेमी खंड हार्वेस्ट। पोत स्टंप पर सूक्ष्म अकड़न छोड़ दो खून की कमी को रोकने के लिए। बाँझ धुंध पर नस हटा टुकड़ा रखें। ध्यान से काटा नस के एक छोर के अंदर एक 30 जी सुई जगह और हेपरिन के साथ पोत (50 इकाइयों / एमएल) फ्लश।
    नोट: देखभाल के साथ नस संभाल और उठाने, काटने, और फ्लशिंग के दौरान नुकसान से बचें। हेपरिन की उचित राशि के साथ भ्रष्टाचार फ्लश करने के लिए सुनिश्चित करें।
  8. जब तक प्राप्तकर्ता चूहे में प्रत्यारोपण के एक पोत ऐंठन को रोकने के लिए बर्फ पर 1% lidocaine में पोत खंड रखें।
  9. 5% isoflurane संज्ञाहरण में वृद्धि से दाता चूहे euthanize। बाद 2-3 मिनट, सेशनLINEA अल्बा के साथ पेट एन, डायाफ्राम के माध्यम से कटौती, और प्रचलन को रोकने के लिए दिल को हटा दें।

3. प्राप्तकर्ता चूहा की तैयारी

  1. Anesthetize और दाता चूहे के रूप में एक ही रास्ते में प्राप्तकर्ता चूहे को ठीक।
  2. एक बाल trimmer के साथ पैर की औसत दर्जे का पक्ष दाढ़ी और povidone आयोडीन और 80% इथेनॉल का उपयोग तीन बार कीटाणुरहित।
  3. संज्ञाहरण की गहराई पर नजर रखने और सुनिश्चित करें कि यह सजगता के अभाव की पुष्टि करने के लिए जब पिछले पैर pinching द्वारा पर्याप्त है।
  4. वंक्षण गुना करने के लिए घुटने से एक औसत ऊरु चीरा प्रदर्शन करना। एक माइक्रोस्कोप के तहत, 2 संदंश का उपयोग अपने परिवेश से और्विक धमनी अलग करने के लिए।
  5. रक्त के प्रवाह को रोकने के लिए माइक्रो अकड़न का प्रयोग करें। समीपस्थ दबाना पहले, बाहर का दबाना द्वारा पीछा किया रखें।
  6. microscissors के साथ clamped और्विक धमनी की एक छोटी खंड बाहर कट और यह त्यागें। microscissors के साथ शेष धमनी स्टंप छोटा, एक अंतर है कि बनाने1-2 मिमी नस भ्रष्टाचार से भी बड़ा। एक 30 जी सुई का उपयोग हेपरिन के साथ धमनी स्टंप फ्लश।
    नोट: adventitia थोड़ा पोत स्टंप से परे protrudes हैं, संदंश का उपयोग पोत के अंत पर थोड़ा इसे खींचने के लिए और एक टुकड़े को हटाने के लिए।
  7. धमनी स्टंप के बीच 2.8 कदम से काटा नस की जगह है और इतनी है कि यह खाई में उपयुक्त रूप से फिट बैठता लंबाई को समायोजित। नोट नस की दिशा।
  8. पहली बार एक 10-0 Prolene सीवन का उपयोग समीपस्थ सम्मिलन प्रदर्शन करना। दिखाए (चित्रा -1) क्रम में एकल टांके आचरण। प्रत्येक पार्श्व पक्ष पर एक सीवन उदर पक्ष पर तीन टांके अधिक जोड़ने से पहले साथ शुरू करो। बाद में, सम्मिलन पूरा करने के लिए पोत के पृष्ठीय पक्ष पर तीन टांके जगह है।
  9. भ्रष्टाचार 3.8 चरण में वर्णित समीपस्थ सम्मिलन के लिए के रूप में उसी तकनीक का उपयोग कर के साथ बाहर का वाहिकाओं कनेक्ट करें। फिर, प्रत्येक पार्श्व पक्ष पर एक सीवन के साथ शुरू, और फिर उदर सिड पर तीन टांके जगहई और पृष्ठीय पक्ष।
  10. लोड दो आतंच गोंद घटक 1 और 2 के साथ 1-एमएल सीरिंज ध्यान संदंश के साथ भ्रष्टाचार उठा और भ्रष्टाचार के तहत आतंच गोंद घटक 1 के लगभग 100 μl ड्रॉप, घटक 2 द्वारा पीछा किया।
    नोट: 1 अनुपात: सुनिश्चित करें कि घटक 1 और 2 1 में लागू कर रहे हैं।
  11. भ्रष्टाचार में अपनी स्थिति में वापस जगह और भ्रष्टाचार के शीर्ष पर घटकों 1 और 2 के एक अतिरिक्त 100 μl ड्रॉप। सुनिश्चित करें कि गोंद दोनों भ्रष्टाचार और व्यवस्था anastomotic कमी और नस भ्रष्टाचार के ओवर-बढ़ाव को रोकने के लिए सम्मिलन शामिल किया गया हो।
  12. ध्यान से बाहर का दबाना, समीपस्थ द्वारा पीछा किया खुला।
  13. प्रत्यारोपित नस और भ्रष्टाचार के बाहर का धमनी में एक दृश्य नाड़ी के लिए जाँच करके एक सफल सर्जरी की पुष्टि करें।
  14. अत्यधिक गोंद, जो त्वचा के बंद होने में बाधा उत्पन्न करती निकालें। ठीक गोंद उठा और microscissors के साथ अधिक दूर करने के लिए संदंश का प्रयोग करें। 5-0 Prolene sutures के साथ त्वचा की परतों को बंद करें।
  15. 4-5 मीटर इंजेक्षनग्राम / किलो Carprofen subcutaneously चूहे जागृत करने के लिए अनुमति देने से पहले। पशु छोड़ पहुंच से बाहर है जब तक यह पर्याप्त होश आ गया है स्टर्नल लेटना बनाए रखने के लिए नहीं है। जब तक यह पूरी तरह से ठीक है एक भी पिंजरे में पशु रखें।
  16. निम्नलिखित 3 दिनों के लिए पीने के पानी (100 मिलीलीटर प्रति 50 मिलीग्राम Metamizole) दर्द की दवा के रूप में Metamizole जोड़ें और दैनिक जानवर की निगरानी।

4. द्वैध सोनोग्राफी

नोट: duxplex सोनोग्राफी का प्रयोग चूहों 14 में रक्त के प्रवाह में कल्पना करने के लिए गैर invasively।

  1. एक प्रेरण कक्ष (isoflurane 2%) में एक चूहा चतनाशून्य। अपनी पीठ पर चूहे की जगह और नाक को कवर एक facemask के साथ संज्ञाहरण बनाए रखें।
  2. जांघ के क्षेत्र के आसपास बाल हटाने के लिए बाल कतरनी और बालों को हटाने क्रीम का प्रयोग करें।
  3. जांघ को अल्ट्रासाउंड जेल लागू करें। सुनिश्चित करें कि कोई हवाई बुलबुले देखते हैं कि सुनिश्चित करें। एक एमएस 400 ट्रांसड्यूसर का उपयोग कर द्वैध सोनोग्राफी छवियों का मोल (केंद्र आवृत्ति: 30 मीहर्ट्ज) 230-400 फ्रेम / सेकंड की एक फ्रेम दर के साथ।

5. हिस्तोपैथोलोजी

नोट: हार्वेस्ट और morphometric विश्लेषण 15 के लिए मेसन के trichrome धुंधला के साथ पोत दाग।

  1. रात भर 4% paraformaldehyde में काटा पोत को ठीक करें और इथेनॉल की सांद्रता बढ़ाने में यह निर्जलीकरण। पैराफिन में नमूना एम्बेड और यह 5 माइक्रोन मोटी स्लाइस एक microtome का उपयोग कर में कटौती।
    ध्यान दें: Paraformaldehyde विषैला होता है और विशेष देखभाल के साथ संभाला जाना चाहिए।
  2. उन्हें trichrome धुंधला समाधान साथ धुंधला से पहले स्लाइड Deparaffinize। दाग स्लाइड निर्जलीकरण, xylene साथ उन्हें स्पष्ट है, और उन्हें बढ़ते मध्यम में माउंट। स्लाइड सूखने के बाद, एक खुर्दबीन के साथ नमूने देखें।

6. bioluminescence इमेजिंग (BLI)

नोट: पश्चात भ्रष्टाचार bioluminescent संकेत 1 मापने के द्वारा विवो में समय के साथ लगाया गया था6।

  1. पीबीएस के 22 मिलीलीटर में डी luciferin पोटेशियम नमक 1 ग्राम भंग और यह intraperitoneally चूहा (375 मिलीग्राम / किग्रा शरीर के वजन) में इंजेक्षन। luciferin जानवर में प्रसारित करने के लिए 15 मिनट तक प्रतीक्षा करें।
  2. चूहे एक वास्तविक समय bioluminescent मात्रा का ठहराव प्रणाली में रखें और bioluminescence संकेत का उपयोग।

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Representative Results

चूहे नस क्षेपक मॉडल myointima हाइपरप्लासिया और नस भ्रष्टाचार विफलता के विकास का अध्ययन करने के लिए उपयुक्त है। पशु शल्य चिकित्सा से अच्छी तरह से उबरने के लिए और उत्कृष्ट शारीरिक हालत के बाद ऑपरेशन को दिखाने के। चित्रा 1 कुंजी शल्य कदम से पता चलता। LINEA inguinalis साथ त्वचा चीरा के बाद, अधिजठर सतही नस और और्विक धमनी (चित्रा 1 ए) पहचाने जाते हैं। भ्रष्टाचार की कटाई सावधानी के रूप में इस प्रारंभिक भ्रष्टाचार की विफलता और प्रत्यक्षता हानि हो सकती है, भ्रष्टाचार (चित्रा 1 बी) को नुकसान पहुँचाए बिना, किया जाना चाहिए। प्राप्तकर्ता जानवर (चित्रा 1 सी) में भ्रष्टाचार स्थिति के बाद, सम्मिलन टांके चित्रा -1 में दिखाया क्रम में प्रदर्शन कर रहे हैं। पूरा शिरापरक क्षेपक भ्रष्टाचार दिखाई देता है पीला (चित्रा 1E) और लाल हो जाते हैं और बाद में reperfusion (चित्रा 1F) धड़कन दिखाना चाहिए।

सफल integrati और्विक धमनी और भ्रष्टाचार प्रत्यक्षता में नस का प्रत्यारोपण पर बात की पुष्टि की जा सकती है, के बाद गैर invasively द्वैध सोनोग्राफी का उपयोग कर (2A चित्रा)। एक syngeneic ल्यूक नकारात्मक चूहे में एक ल्यूक पॉजिटिव चूहे की नस रोपाई करके, bioluminescence इमेजिंग समय (चित्रा 2 बी) पर भ्रष्टाचार उपस्थिति पर नजर रखने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है।

Myointima हाइपरप्लासिया समय के साथ भ्रष्टाचार में उत्तरोत्तर विकसित करता है। मेसन के साथ trichrome ऊतकीय धुंधला आंतरिक लोचदार पटल (चित्रा 2 सी) के अंदर myointima गठन को दर्शाता है। ल्यूमिनल विस्मृति की गणना, (आंतरिक लोचदार पटल के भीतर क्षेत्र द्वारा लुमेन के पार के अनुभागीय क्षेत्र को विभाजित) एक क्रमिक 28 दिन के बाद सर्जरी के लिए 7 दिन से भ्रष्टाचार प्रत्यक्षता की हानि का पता चला है, इस प्रकार myointima हाइपरप्लासिया की प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य गतिशीलता की पुष्टि इस चूहे मॉडल में (चित्रा 2 डी)।

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चित्रा 1: सर्जिकल प्रक्रिया की विस्तृत योजना। (ए) वंक्षण क्षेत्र के एनाटॉमी। (बी) कटाई अधिजठर सतही नस भ्रष्टाचार। (सी) प्राप्तकर्ता जानवर की धमनी स्टंप के बीच नस भ्रष्टाचार रखकर। (डी) सम्मिलन टांके के आदेश। (ई) शिरापरक भ्रष्टाचार निर्माण के बाद साइट। (एफ) शिरापरक क्षेपक भ्रष्टाचार के reperfusion के बाद साइट। काला तीर अधिजठर सतही नस निशान। स्केल बार = 5 मिमी। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्र 2
चित्रा 2: पशु मॉडल की विशेषता। एक शिरापरक क्षेपक की (ए) द्वैध सोनोग्राफी immed भ्रष्टाचार iately प्रत्यारोपण (0 d) और 28 दिनों के बाद ऑपरेशन (28d) के बाद। (बी) ल्यूक पॉजिटिव 0 दिन और सर्जरी के बाद 28 दिनों में ल्यूक नकारात्मक चूहों में प्रत्यारोपित ग्राफ्ट से BLI। (सी) प्रतिनिधि भ्रष्टाचार पार वर्गों दिन 7, 14, 21 के बाद काटा, और 28 और मेसन की trichrome के साथ दाग। (ऊपरी पैनल: स्केल बार = 400 माइक्रोन, कम पैनल: स्केल बार = 100 माइक्रोन) (डी) के प्रतिशत में Luminal विस्मृति पूर्व लुमेन से नई भीतरी लुमेन विभाजित करके गणना की है। Intergroup मतभेद विचरण (एनोवा) Bonferroni पद के आधार पर पकड़ कर परीक्षण के साथ की एक तरह से विश्लेषण द्वारा मूल्यांकन किया गया। पी <0.01। त्रुटि सलाखों के मानक विचलन (एसडी) कर रहे हैं। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

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पूरक फ़ाइल 1: सर्जिकल प्रक्रिया के योजनाबद्ध चित्रण। LINEA inguinalis के साथ एक ऊर्ध्वाधर चीरा अवर अधिजठर नस को प्रकाश में लाने, दाता चूहे पर किया जाता है। रक्त प्रवाह दो सूक्ष्म clamps के साथ बंद कर दिया है, और एक नस खंड 0.5-1.0 सेमी लंबी काटा जाता है। प्राप्तकर्ता चूहे में, एक मंझला ऊरु चीरा उजागर ऊरु नस, धमनी, और तंत्रिका किया जाता है। और्विक धमनी clamping के बाद, एक पोत खंड हटा दिया है और काटा नस भ्रष्टाचार की जगह है। पूरक फ़ाइल 1 देखने के लिए यहाँ क्लिक करें (या डाउनलोड करने के लिए राइट क्लिक करें)।

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Discussion

इस वीडियो नस भ्रष्टाचार नुकसान की जांच करने और अंतर्निहित रोग प्रक्रियाओं के अन्वेषण और नई दवाओं या चिकित्सीय विकल्पों में से परीक्षण के लिए अनुमति देने के लिए एक चूहे नस क्षेपक मॉडल को दर्शाता है।

संज्ञाहरण शल्य चिकित्सा प्रक्रियाओं का एक महत्वपूर्ण पहलू है। एक सतत inhalative संज्ञाहरण प्रणाली की सिफारिश की है, क्योंकि यह एक सुरक्षित और आसान तरीका है, विशेष रूप से लंबे समय तक कार्रवाई के दौरान। यह प्रशिक्षण चरण, जब ऑपरेशन से ज्यादा 1 घंटा लेता दौरान बहुत महत्व का हो सकता है।

शल्य चिकित्सा की प्रक्रिया के संबंध में, यह फसल और आरोपण 17 के दौरान नस भ्रष्टाचार को नुकसान नहीं महत्वपूर्ण है। पोत के adventitia मनोरंजक नस भ्रष्टाचार को नुकसान को रोकने और बाद में thrombus गठन और भ्रष्टाचार की विफलता से बचने कर सकते हैं। भ्रष्टाचार प्रत्यक्षता नस भ्रष्टाचार या DISTA में रक्त के प्रवाह के अवलोकन के माध्यम से और धड़कन के भ्रष्टाचार निर्माण नस के तुरंत बाद निर्धारित किया जा सकताएल धमनी, साथ ही द्वैध सोनोग्राफी के माध्यम से।

प्रक्रिया का एक अन्य महत्वपूर्ण पहलू नस भ्रष्टाचार के ओवर-बढ़ाव को रोकने के लिए है। धमनी दबाव प्रणाली के लिए नस भ्रष्टाचार के अचानक जोखिम बढ़ दीवार तनाव, बाद में ओवर-बढ़ाव की ओर जाता है, और प्रवाह पैटर्न में परिवर्तन। ये घनास्त्रता, anastomotic कमी है, और जल्दी भ्रष्टाचार विफलता के स्रोत हैं। आतंच गोंद के साथ नस भ्रष्टाचार सहायक अनियंत्रित गुब्बारों को रोकने और यांत्रिक विनाश से intima और मीडिया की रक्षा कर सकते हैं। Absorbable कोलेजन को शामिल किया गया आतंच गोंद के लिए एक विकल्प के रूप में कर रहे हैं और perivenous 18 को शामिल किया जा सकता है।

इस प्रोटोकॉल के भीतर सबसे महत्वपूर्ण कदम निस्संदेह नस भ्रष्टाचार और धमनी के बीच सम्मिलन है। केयर, पोत के दो दीवारों बेध नहीं लिया जाना चाहिए के रूप में इस सम्मिलन का संकुचन है, जो भ्रष्टाचार के शुरुआती विफलता में परिणाम हो सकता है को बढ़ावा मिलेगा। इसके अलावा, विशेष attention टांके का स्थानीयकरण करने के लिए भुगतान किया जाना चाहिए। धमनी और शिरा में सिवनी पदों के Congruency भ्रष्टाचार प्रत्यक्षता सुनिश्चित करता है और कमी रोकता है। इस सुविधा के लिए, टांके चित्रा -1 में दिखाया क्रम में किया जा सकता है।

तकनीकी कठिनाई की डिग्री है, तकनीक की एक सीमा के रूप में देखा जा सकता है क्योंकि एक नौसिखिया पहले microsurgical उपकरण और शारीरिक संरचनाओं के छोटे आकार के साथ परिचित हो जाना चाहिए। हालांकि, अन्य मॉडलों का इस्तेमाल किया ही कठिनाइयों का प्रदर्शन, और हमें विश्वास है कि इस वीडियो को नौसिखिया सर्जन मदद मिलेगी जो एक कम समय के भीतर इस तकनीक में महारत हासिल करने के लिए।

शिरापरक भ्रष्टाचार विफलता के लिए कई छोटे पशु मॉडल साहित्य में वर्णित किया गया है। हालांकि, अधिकांश मॉडल केवल विश्लेषण 13 के लिए ऊतक की बहुत थोड़ी मात्रा प्रदान करते हैं। इस पद्धति का एक लाभ यह ऊतक की अपेक्षाकृत बड़ी राशि है कि प्राप्त किया जा सकता है। एक भ्रष्टाचार के कई भागों में विभाजित किया जा सकता है एकएन डी विभिन्न assays के लिए प्रयोग किया जाता है, जिससे प्रयोगात्मक आवश्यक जानवरों की संख्या को कम करने।

जस्ता उंगली nuclease प्रौद्योगिकी के क्षेत्र में हाल के अग्रिमों पीटकर चूहों 19 की पीढ़ी सक्षम होना चाहिए। उपयुक्त नाकआउट चूहों का चयन करके, भ्रष्टाचार प्रत्यक्षता नुकसान अलग बीमारी की स्थिति में अध्ययन किया जा सकता है। उदाहरण के लिए, रेनिन पीटकर चूहों उच्च रक्तचाप 20 अध्ययन करने के लिए उपयोग किया जा सकता है। ये आनुवंशिक पृष्ठभूमि अलग सेटिंग्स में या myointima हाइपरप्लासिया के विकास में कुछ जीनों के प्रभाव पर नस भ्रष्टाचार विफलता के तंत्र के बारे में जानकारी बटोरने के लिए इस पशु मॉडल के साथ जोड़ा जा सकता है।

अंत में, मॉडल इस वीडियो में वर्णित है, प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य सस्ती है, और आसान करने के लिए है, और यह जल्दी और मज़बूती से स्थापित किया जा सकता है। Myointima हाइपरप्लासिया, जो नस भ्रष्टाचार असफलता का मुख्य कारण है, चार सप्ताह से अधिक तेजी से विकसित, प्रगतिशील ल्यूमिनल विस्मृति हो जाती है। सफलतापूर्वक परीक्षण किया उपचारइस मॉडल में विकल्प आगे बड़े पशु मॉडल में इस बात की पुष्टि की जा सकती है।

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Acknowledgments

लेखकों उसे तकनीकी सहायता के लिए क्रिस्टियन Pahrmann धन्यवाद। इस अध्ययन में ड्यूश Stiftung Fuer Herzforschung द्वारा वित्त पोषित किया गया (एफ / 28/14)। DW के दिल और फेफड़ों प्रत्यारोपण के लिए इंटरनेशनल सोसायटी से यात्रा पुरस्कार द्वारा समर्थित किया गया। टीडी वरना-क्रोनर-फ्रेसेनियस-Stiftung (2012_EKES.04) से किसी और क्रोनर उत्कृष्टता वजीफा प्राप्त किया। एसएस ड्यूश Forschungsgemeinschaft से अनुसंधान अनुदान प्राप्त (DFG; DE2133 / 2-1, टीडी और SCHR992 / 3 1, SCHR992 / 4-1, एसएस)।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Rat LEW/Crl Charles River Stock number 004
Rat LEW-Tg(Gt(ROSA)26Sor- 1
luc)11Jmsk		 Institute of laboratory animals, Kyoto University, Japan NBPR rat number 0299 http://www.anim.med.kyoto-u.ac.jp/NBR/
PFA 4% Electron Microscopy Sciences #157135S 20%
hair clipper WAHL 8786-451A ARCO SE
Forene AbbVie PZN 10182054 Art.Nr.: B506 Isoflurane
microsurgical clamp Fine Science Tools 18055-04 Micro-Serrefine - 4 mm
clamp applicator Fine Science Tools 18056-14
hair removal creme Rufin cosmetic 27618
Povidone-Iodine Betadine Purdue Pharma NDC:67618-152
10-0 Ethilon suture Ethicon 2814G
5-0 prolene suture Ethicon EH7229H
Rimadyl Pfizer 400684.00.00 Carprofen
Novaminsulfon Ratiopharm PZN 03530402 Metamizole
Heparin Rotexmedica PZN: 3862340 25.000 I.E./ ml
Xylocain 1% AstraZeneca PZN: 1137907 Lidocain
EVICEL J&J Med.Ethicon Biosur PZN 7349697 Art. Nr.:EVK01DE fibrin glue
NaCl 0.9% B.Braun PZN 06063042 Art. Nr.: 3570160
Vevo 770 high-resolution in vivo micro-imaging system VisualSonics duplex sonography
Ecogel 100 ultrasound gel Eco-med 30GB
D-Luciferin Firefly, potassium salt Biosynth L-8220
PBS pH 7.4 Gibco 10010023
Xenogen Ivis 200 Perkin Elmer bioluminescence imaging
Weigerts iron hematoxylin Kit Merck 1.15973.0002 Trichrome staining
Resorcine-Fuchsine Weigert Waldeck 2.00E-30 Trichrome staining
Acid Fuchsin Sigma-Aldrich F8129-25G Trichrome staining
Ponceau S solution Serva Electrophoresis 33427 Trichrome staining
Azophloxin Waldeck 1B-103 Trichrome staining
Molybdatophosphoric acid hydrate Merck 1.00532.0100 Trichrome staining
Orange G Waldeck 1B-221 Trichrome staining
Light Green SF Waldeck 1B-211 Trichrome staining
Vitro-Clud Langenbrinck 04-0001
Glacial Acetic Acid Sigma-Aldrich 537020
37% HCl Sigma-Aldrich H1758
Xylene Th. Geyer 3410
Paraffin Leica biosystems REF 39602004
Ethanol absolute Th. Geyer 2246
Ethanol 96% Th. Geyer 2295
Ethanol 70% Th. Geyer 2270
Slide Rack Ted Pella 21057
Staining dish Ted Pella 21075
Bepanthen Eye and Nose ointment Bayer 1578675 Eye ointment

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References

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चिकित्सा अंक 119 बाईपास भ्रष्टाचार की विफलता myointimal हाइपरप्लासिया चूहे मॉडल
नस क्षेपक आदर्श: अध्ययन करने के लिए बाईपास भ्रष्टाचार प्रत्यक्षता एक उपयुक्त मॉडल
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Wang, D., Tediashvili, G., Pecha,… More

Wang, D., Tediashvili, G., Pecha, S., Reichenspurner, H., Deuse, T., Schrepfer, S. Vein Interposition Model: A Suitable Model to Study Bypass Graft Patency. J. Vis. Exp. (119), e54839, doi:10.3791/54839 (2017).

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