Introduction
أمراض الشرايين التاجية ومضاعفاتها هي من بين الأسباب الرئيسية للوفاة في جميع أنحاء العالم. الاستراتيجيات العلاجية الحالية تركز على إعادة تأسيس تدفق الدم، إما عبر توسيع الأوعية ضاقت أو عن طريق إنشاء الالتفافية. وصفت التاجي تطعيم مجازة الشريان (التاجي) باستخدام طعم ذاتي الوريد لأول مرة في عام 1968 ونقحت على مر السنين. وبصرف النظر عن إعادة التوعي من الجزء الأمامي الأيسر النازل الشريان التاجي، وتستخدم القنوات الوريد الصافن الأكثر شيوعا 1. ومع ذلك، لا يزال الكسب غير المشروع المباح كعب أخيل الطعوم الوريد الصافن (SVG). بعد سنة واحدة لعملية جراحية، الكسب غير المشروع المباح هو 85٪، وانخفض إلى 61٪ بعد عشر سنوات 2،3. وبالتالي الكشف عن الآليات والأسباب المرضية من SVG فقدان المباح هو مهمة هامة.
يوضح هذا الفيديو الوريد نموذج مداخلة الفئران للتحقيق في الوريد فقدان الكسب غير المشروع. الأهداف العامة لهذه الطريقة هي لاستكشاف pathobiological الكامنةوالعمليات -physiological أثناء تطور المرض وتطوير نموذج مناسب لمكافحة المخدرات أو العلاجية اختبار الخيار. عن طريق زرع الوريد الشرسوفي السطحي في النظام الشرياني، وهذا نموذج يحاكي عن كثب السريرية من التاجي تطعيم مجازة الشريان. الصدمة الجراحية، نقص التروية، والإجهاد الجدار هي محفزات هامة للتغيرات الأوعية الدموية المرضية وتقليد في النموذج الذي وصفها.
تتوفر للتحقيق في الوريد الكسب غير المشروع خسارة المباح النماذج والأنواع المختلفة. نماذج حيوانية كبيرة، مثل الخنازير 4 والأغنام 5، 6 كلاب، والقرود 7، تشبه سفينة البشرية والهياكل التشريحية، وبالتالي تمكين الاستراتيجيات العلاجية المعقدة، مثل الدعامات تجاوز أو تقنيات جراحية جديدة، لفحصها 8. ومع ذلك، هناك حاجة المساكن الخاصة، والمعدات، والموظفين. وبالإضافة إلى ذلك، ارتفاع التكاليف والحاجة إلى التخدير أثناء الجراحة إضافية تعيق تطبيقها على نطاق أوسع بهم. خجميع الحيوانات، بما في ذلك الفئران، من السهل التعامل معها، لا تحتاج إلى مساكن خاصة، ولها تكاليف إدارتها. مقارنة نماذج الماوس 9،10، ونماذج الفئران لديها ميزة أفضل عمليات التشغيل وتقلب بالتالي أقل في النتيجة. الفئران هي من الناحية الفسيولوجية وراثيا أكثر مماثلة على البشر من الفئران 11،12. وبالإضافة إلى ذلك، فإن معظم الفئران من النوع البري تطوير فقط محدودة myointima 13، والتي تجعل نماذج الماوس عرضة لكتابة الأخطاء الثاني. الأنسجة الأوردة الماوس الرئيسية، مثل الوريد الأجوف السفلي، ويتكون فقط من عدد قليل من طبقات الخلايا ويجعل تقييم في وقت مبكر من الصعب 13. والعيب آخر هو كمية صغيرة من نسيج المتاحة لتحليلها لاحقا بعد الشفاء الكسب غير المشروع.
النموذج الذي وصفها في هذا الفيديو هو تكرار، وغير مكلفة، والسهل القيام بها، وأنه يمكن أن تنشأ بسرعة وبشكل موثوق. انها مناسبة خاصة لتقييم العوامل العلاجية التجريبية باهظة الثمن، مثل ناقلات فيروسيةللعلاج بالجينات، بطريقة اقتصادية.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
تلقى الحيوانات الرعاية الإنسانية وفقا لدليل لمبادئ الحيوانات المختبرية، من معهد الثروة الحيوانية مختبر أعد ونشر من قبل المعاهد الوطنية للصحة. تمت الموافقة على جميع البروتوكولات الحيوان من قبل السلطة المحلية المسؤولة ( "FÜR مبلغ الدفعة Gesundheit اوند Verbraucherschutz، Hansestadt (مكتب الصحة وحماية المستهلك) هامبورغ").
1. رعاية الحيوان
- الحصول على الفئران لويس (LEW / CRL) الجرذان وROSA /-وسيفيراز ليو الفئران المعدلة وراثيا وزنها 300-350 غرام من معهد الحيوانات المختبرية.
- الحفاظ على الفئران في ظل الظروف التقليدية في خزانات التهوية وإطعامهم طعام الفئران القياسية وتعقيمها المياه libitum الإعلانية.
- إجراء زرع الكسب غير المشروع باستخدام ROSA /-وسيفيراز ليو الفئران المعدلة وراثيا مثل الجهات المانحة وsyngenic الفئران LEW / CRL كما المتلقين.
2. إعداد الجرذ المانحة
- استخدام جندأيون غرفة لتخدير الفئران مع isoflurane (2.5-3٪).
- وضع فأر على ظهرها والحفاظ على التخدير مع قناع يغطي الفم والأنف. تحقق من عمق كاف من التخدير بواسطة معسر القدمين الخلفيتين والتحقق من عدم وجود ردود الفعل. تطبيق بعض مرهم التعليم والتدريب المهني للعيون لمنع جفاف بينما تحت التخدير.
- نشر رجليه الخلفيتين وتحديد موقفهم باستخدام الشريط.
- حلق شعر الإربي مع الانتهازي الشعر وتطهير المنطقة بأكملها باستخدام بوفيدون اليود تليها الايثانول 80٪. كرر الخطوة تطهير مرتين.
ملاحظة: منطقة العمليات الجراحية والشاش، والأدوات الجراحية ويجب تعقيم. الحفاظ على مجال معقم طوال الإجراء وارتداء استخدام مرة واحدة، والقفازات الجراحية المعقمة، والأقنعة، والقبعات. - تحت المجهر، إجراء شق عمودي على طول الخط الأربي. استخدام اثنين من ملقط لفصل بلطف الأنسجة تحت الجلد وفضح الوريد الشرسوفي السطحي من أوري لالجن في الوريد الفخذي. بعناية عزل الوريد الشرسوفي السطحي من الأنسجة المحيطة بها.
- وقف تدفق الدم في الوريد الشرسوفي السطحي باستخدام اثنين من المشابك الصغيرة.
- حصاد شريحة حوالي 0،5-1 سم من الوريد عن طريق رفع بعناية الوريد معزولة مع ملقط وقطع طريق السفينة مع microscissors. ترك المشابك الصغيرة على الجذع السفينة لمنع فقدان الدم. ضع قطعة إزالة الوريد على شاش معقم. وضع بعناية إبرة 30 G داخل واحدة من نهاية الوريد حصادها وطرد السفينة مع الهيبارين (50 وحدة / مل).
ملاحظة: التعامل مع الوريد مع الرعاية وتجنب الضرر أثناء رفع، والقطع، والتنظيف. تأكد من مسح الكسب غير المشروع مع كمية مناسبة من الهيبارين. - إبقاء جزء السفينة في 1٪ ليدوكائين على الجليد حتى زرع في الفئران المتلقي لمنع تشنج الأوعية.
- الموت ببطء الفئران المانحة عن طريق زيادة التخدير إلى 5٪ الأيزوفلورين. بعد 2-3 دقائق، مرجع سابقأون البطن على طول الخط الأبيض، وقطع من خلال الحجاب الحاجز، وإزالة القلب لوقف التداول.
3. إعداد الجرذ مستلم
- تخدير وعلاج هذه الفئران المتلقي في نفس الطريقة كما في الفئران المانحة.
- حلق الجانب الإنسي في الساقين مع الانتهازي الشعر وتطهير ثلاث مرات باستخدام بوفيدون اليود و 80٪ من الإيثانول.
- رصد عمق التخدير والتأكد من أنها غير كافية من خلال التحقق من عدم وجود ردود الفعل عندما معسر القدمين الخلفيتين.
- إجراء شق الفخذ متوسط من الركبة إلى حظيرة الإربي. تحت المجهر، واستخدام ملقط 2 لفصل الشريان الفخذي عن محيطها.
- استخدام المشابك الصغيرة لوقف تدفق الدم. وضع المشبك الداني الأولى، تليها المشبك البعيدة.
- قطع قطعة صغيرة من الشريان الفخذي فرضت مع microscissors وتخلص منه. تقصير الجذع الشرياني المتبقية مع microscissors، وخلق فجوة وهذا هو1-2 ملم أكبر من الكسب غير المشروع الوريد. تدفق الجذع الشرياني مع الهيبارين باستخدام إبرة 30 G.
ملاحظة: إذا كان يبرز البرانية قليلا خارج الجذع السفينة، واستخدام الملقط لسحب ما يزيد قليلا عن نهاية السفينة وإزالة قطعة. - وضع الوريد المقطوع من الخطوة 2.8 بين جذوعها الشرايين وضبط طول بحيث يناسب بشكل مناسب في هذه الفجوة. ملاحظة اتجاه الوريد.
- إجراء مفاغرة الداني أولا باستخدام خياطة 10-0 البرولين. إجراء غرز واحدة في الترتيب الظاهر (1D الشكل). تبدأ مع خياطة على كل الجانب الوحشي قبل أن يضيف ثلاثة خيوط أكثر على الجانب البطني. بعد ذلك، وضع ثلاث غرز على الجانب الظهري من السفينة لاستكمال مفاغرة.
- ربط السفن البعيدة مع الكسب غير المشروع باستخدام نفس الأسلوب بالنسبة للمفاغرة الداني هو موضح في الخطوة 3.8. مرة أخرى، وتبدأ مع خياطة على كل جانب الجانبي، ثم ضع ثلاثة الغرز على سيد بطنيه والجانب الظهري.
- تحميل اثنين من المحاقن 1 مل مع عنصر الليفين الغراء 1 و 2. رفع بعناية الكسب غير المشروع مع ملقط وإسقاط ما يقرب من 100 ميكرولتر من الفيبرين عنصر الغراء 1 تحت الكسب غير المشروع، يليه عنصر 2.
ملاحظة: تأكد من أن المكونات 1 و 2 وتطبق في نسبة 1: 1. - وضع الكسب غير المشروع مرة أخرى في موقفها وإسقاط 100 ميكرولتر إضافية من المكونات 1 و 2 على رأس الكسب غير المشروع. مما لا شك فيه أن الصمغ يغطي كلا من الكسب غير المشروع ومفاغرة لمنع قصور تفاغري وأكثر من انتفاخ من الكسب غير المشروع الوريد.
- بعناية فتح المشبك البعيدة، تليها الداني.
- تأكيد عملية جراحية ناجحة عن طريق التحقق من نبض المرئي في الوريد المزروعة والشريان البعيدة من الكسب غير المشروع.
- إزالة الغراء الزائد، مما يعوق إغلاق الجلد. استخدام ملقط لرفع الغراء الشفاء وإزالة الزائدة مع microscissors. إغلاق طبقات الجلد مع 5-0 الغرز البرولين.
- حقن 4-5 مجم / كجم كاربروفين تحت الجلد قبل السماح الفئران ليستيقظ. لا تترك الحيوان غير المراقب حتى استعاد وعيه كافية للحفاظ على الاستلقاء القصية. حفاظ على الحيوانات في قفص واحد حتى يتم الشفاء منها تماما.
- إضافة ميتاميزول لمياه الشرب (50 ملغ ميتاميزول لكل 100 مل)، ومسكنات للألم لمدة 3 أيام بعد ورصد حيوان يوميا.
4. دوبلكس بالموجات فوق الصوتية
ملاحظة: استخدام التصوير فوق الصوتي duxplex لتصور تدفق الدم غير جراحية في الفئران (14).
- تخدير الفئران في غرفة الاستقراء (الأيزوفلورين 2٪). وضع فأر على ظهرها والحفاظ على التخدير مع قناع يغطي الأنف.
- استخدام قص الشعر وكريم إزالة الشعر لإزالة الشعر في جميع أنحاء منطقة الفخذ.
- تطبيق هلام الموجات فوق الصوتية في الفخذ. تأكد من عدم وجود أي فقاعات الهواء. الحصول على صور بالموجات فوق الصوتية المزدوجة باستخدام MS 400 محول (مركز تردد: 30 مهرتز) مع معدل إطارات من 230-400 لقطة / ثانية.
5. التشريح المرضي
ملاحظة: الحصاد وصمة عار على السفينة مع تلطيخ ثلاثي الألوان ماسون لتحليل المورفومترية 15.
- إصلاح السفينة التي تحصد في 4٪ بارافورمالدهيد بين عشية وضحاها ويذوى في زيادة تركيزات الإيثانول. تضمين نموذج في البارافين وتقطيعه إلى 5 ميكرون شرائح سميكة باستخدام مشراح.
ملاحظة: لامتصاص العرق هي سامة، وينبغي التعامل مع رعاية خاصة. - Deparaffinize الشرائح قبل تلطيخ لهم ثلاثي الألوان حل تلطيخ. يذوى الشرائح ملطخة، واضحة لهم مع زيلين، وجبل لهم في تصاعد المتوسطة. بعد تجفيف الشرائح، وعرض العينات مع المجهر.
6. ضوء بارد التصوير (BLI)
وقد تعقب الكسب غير المشروع بعد العملية الجراحية على مر الزمن في الجسم الحي عن طريق قياس إشارة للإضاءة الحيوية 1: ملاحظة6.
- حل 1 غرام من مد وسيفيرين الملح والبوتاسيوم في 22 مل من برنامج تلفزيوني وحقنه داخل الصفاق في الفئران (375 ملغم / كغم من وزن الجسم). انتظر 15 دقيقة لوسيفيرين أن تعمم في الحيوان.
- وضع الفئران في الوقت الحقيقي نظام القياس الكمي للإضاءة الحيوية والوصول إلى إشارة تلألؤ بيولوجي.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
نموذج مداخلة الفئران الوريد هو مناسب لدراسة تطوير تضخم myointima والفشل الوريد الكسب غير المشروع. الحيوانات على التعافي بشكل جيد من الجراحة وتظهر حالة ممتازة البدنية بعد العملية. ويبين الشكل 1 الخطوات الجراحية الرئيسية. بعد شق الجلد على طول الخط الأربية، ويتم تحديد الوريد السطحي شرسوفي والشريان الفخذي (الشكل 1A). يجب أن يتم تنفيذ حصاد الكسب غير المشروع بعناية، دون الإضرار الكسب غير المشروع (الشكل 1B)، وهذا يمكن أن يؤدي إلى فشل الكسب غير المشروع في وقت مبكر وفقدان المباح. بعد تحديد المواقع الكسب غير المشروع في الحيوان المتلقي (الشكل 1C)، يتم تنفيذ غرز مفاغرة في النظام هو مبين في الشكل 1D. يظهر مداخلة الكسب غير المشروع وريدي الانتهاء شاحب (الشكل 1E)، وينبغي أن تصبح حمراء وتظهر نبض بعد ضخه (الشكل 1F).
وintegrati ناجحة على من الوريد الى الشريان والكسب غير المشروع المباح الفخذ بعد الزرع ويمكن التأكد من عدم جراحية باستخدام التصوير فوق الصوتي على الوجهين (الشكل 2A). عن طريق زرع الوريد من الفئران لوك إيجابية في الفئران لوك سلبية مسانج، والتصوير تلألؤ بيولوجي يمكن أن تستخدم لرصد وجود الكسب غير المشروع على مر الزمن (الشكل 2B).
Myointima تضخم يتطور تدريجيا في الكسب غير المشروع مع مرور الوقت. تلطيخ النسيجي مع ثلاثي الألوان ماسون يوضح myointima تشكيل داخل رقيقة داخلية (الشكل 2C). كشف حساب طمس اللمعية، (تقسيم مساحة المقطع العرضي لمعة من منطقة داخل رقيقة داخلية) الفقدان التدريجي من المباح الكسب غير المشروع من يوم 7 إلى 28 يوم بعد الجراحة، مما يؤكد ديناميكية استنساخه من تضخم myointima في هذا النموذج الفئران (الشكل 2D).
إعادة 1 "SRC =" / ملفات / ftp_upload / 54839 / 54839fig1.jpg "/>
الشكل 1: مفصلة مخطط العملية الجراحية. (A) تشريح المنطقة الأربية. (ب) حصاد والشرسوفي السطحي الوريد الكسب غير المشروع. (ج) وضع الكسب غير المشروع الوريد بين جذوعها الشرايين من الحيوان المتلقي. (D) وسام غرز مفاغرة. (E) الموقع بعد بناء الكسب غير المشروع وريدي. (F) الموقع بعد ضخه من الكسب غير المشروع مداخلة الوريدي. السهام السوداء علامة الوريد السطحي شرسوفي. شريط مقياس = 5 ملم. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 2: توصيف نموذج الحيوان. (A) دوبلكس التصوير فوق الصوتي لمداخلة الوريدي الكسب غير المشروع IMMED iately بعد زرع (0D) و 28 أيام بعد العملية (28D). (ب) BLI من لوك إيجابية الطعوم المزروعة في الفئران لوك سلبية في 0 أيام و 28 أيام بعد الجراحة. (ج) ممثل المقاطع العرضية الكسب غير المشروع تحصد بعد أيام 7 و 14 و 21 و 28 والملون مع ثلاثي الألوان ماسون. يتم احتساب (D) محو اللمعية في النسبة المئوية بقسمة التجويف الداخلي جديدة من التجويف السابقة:.: (شريط مقياس = 100 ميكرون لوحة العليا وحة انخفاض شريط مقياس = 400 ميكرون). تم تقييم الاختلافات بين المجموعات التي تحليل التباين الأحادي (ANOVA) مع اختبار ما بعد المخصصة بونفيروني ل. ف <0.01. أشرطة الخطأ هي الانحراف المعياري (SD). الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
_upload / 54839 / 54839Sup1.jpg "/>
التكميلي ملف 1: توضيح تخطيطي لعملية جراحية. يتم إجراء شق عمودي على طول الخط الأربي على الفئران المانحة، وفضح الوريد الشرسوفي السفلي. توقف تدفق الدم مع اثنين من المشابك الصغيرة، ويتم حصاد شريحة الوريد 0.5-1.0 سم. في الفئران المتلقي، يتم تنفيذ شق الفخذ متوسط، وفضح الفخذ الوريد، الشريان، والعصبية. بعد تحامل على الشريان الفخذي، تتم إزالة شريحة السفن والاستعاضة عن الكسب غير المشروع الوريد المقطوع. الرجاء انقر هنا لعرض الملف التكميلي 1 (أو انقر بزر الماوس الأيمن للتحميل).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
يوضح هذا الفيديو الوريد نموذج مداخلة الفئران للتحقيق في الوريد فقدان الكسب غير المشروع والسماح للتنقيب عن العمليات المرضية الكامنة واختبار الأدوية الجديدة أو الخيارات العلاجية.
التخدير هو جانب هام من العمليات الجراحية. ينصح نظام التخدير inhalative المستمر، وهذا هو وسيلة آمنة وسهلة، وخصوصا خلال عمليات طويلة. وهذا يمكن أن تكون ذات أهمية كبيرة خلال مرحلة التدريب، عندما تأخذ العملية أكثر من 1 ساعة.
وفيما يتعلق الإجراء الجراحي، فمن الأهمية بمكان عدم تلف الكسب غير المشروع الوريد أثناء الحصاد والزرع 17. يمكن أن تجتاح البرانية للسفينة منع الأضرار التي لحقت الكسب غير المشروع الوريد وتجنب تشكيل خثرة لاحقة وفشل الكسب غير المشروع. الكسب غير المشروع المباح يمكن تحديد فورا بعد الوريد البناء الكسب غير المشروع من خلال مراقبة تدفق الدم ونبض في الكسب غير المشروع الوريد أو distaل الشرايين، وكذلك من خلال التصوير فوق الصوتي على الوجهين.
وثمة جانب آخر بالغ الأهمية من هذا الإجراء هو لمنع الإفراط في انتفاخ من الكسب غير المشروع الوريد. التعرض المفاجئ من الكسب غير المشروع الوريد إلى نظام ضغط الدم يؤدي إلى زيادة التوتر الجدار، بعد الإفراط في انتفاخ، والتغيرات في نمط التدفق. وهذه هي مصادر تخثر الدم، قصور تفاغري، وفشل الكسب غير المشروع في وقت مبكر. يمكن دعم الكسب غير المشروع الوريد مع الغراء الليفين منع تضخم الجامح وحماية البطانية وسائل الإعلام من الدمار الميكانيكية. يغطي الكولاجين امتصاص هي بديل لالغراء الليفين، ويمكن استخدامها كغطاء محيط بالوريد 18.
الخطوة الأكثر أهمية في هذا البروتوكول هو بلا شك مفاغرة بين الكسب غير المشروع الوريد والشريان. يجب الحرص على عدم اختراق الجدران اثنين من السفينة، وهذا سيؤدي إلى تضييق مفاغرة، مما قد يؤدي إلى فشل في وقت مبكر من الكسب غير المشروع. وبالإضافة إلى ذلك، attentio خاصيجب أن تدفع ن لتوطين الغرز. التطابق في المواقف خياطة في الشريان والوريد يضمن الكسب غير المشروع المباح، ويمنع قصور. ولتيسير ذلك، خيوط لا يمكن أن يؤديها في النظام هو مبين في الشكل 1D.
درجة الصعوبة التقنية يمكن اعتبار وجود قيود على التقنية، لأن المبتدئ يجب أن تصبح أول مطلعة المعدات المجهرية وأحجام صغيرة من الهياكل التشريحية. ومع ذلك، والنماذج الأخرى المستخدمة يحمل نفس الصعوبات، ونحن نعتقد أن هذا الفيديو سوف تساعد الجراحين المبتدئين لإتقان هذه التقنية في غضون فترة زمنية قصيرة.
وقد وصفت العديد من نماذج حيوانية صغيرة لفشل الكسب غير المشروع وريدي في الأدب. ومع ذلك، فإن معظم النماذج لا توفر سوى كميات صغيرة جدا من الأنسجة لتحليل 13. ميزة هذه الطريقة هي كمية كبيرة نسبيا من الأنسجة التي يمكن الحصول عليها. ويمكن تقسيم واحد الكسب غير المشروع إلى أجزاء متعددة لالثانية تستخدم لفحوصات مختلفة، مما يقلل من عدد من حيوانات التجارب المطلوبة.
التطورات الحديثة في تكنولوجيا نوكلياز الزنك الاصبع مكنت جيل من الفئران خروج المغلوب 19. عن طريق اختيار الفئران مناسبة خروج المغلوب، وفقدان المباح الكسب غير المشروع يمكن دراستها في ظروف مرضية مختلفة. على سبيل المثال، يمكن استخدام الفئران خروج المغلوب الرينين لدراسة ارتفاع ضغط الدم 20. هذه خلفيات وراثية يمكن الجمع بين هذا نموذج حيواني لجمع المعلومات حول آليات فشل الكسب غير المشروع الوريد في بيئات مختلفة أو عن تأثير جينات معينة في تطور تضخم myointima.
وفي الختام، والنموذج هو موضح في هذا الفيديو هو تكرار، وغير مكلفة، والسهل القيام بها، وأنه يمكن أن تنشأ بسرعة وبشكل موثوق. Myointima تضخم، والذي هو السبب الرئيسي للفشل الوريد الكسب غير المشروع، نموا سريعا على مدى أربعة أسابيع، مما أدى إلى طمس اللمعية التدريجي. العلاج اختبرت بنجاحالخيارات في هذا النموذج يمكن زيادة مؤكدة في نماذج حيوانية كبيرة.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Acknowledgments
الكتاب أشكر كريستيان Pahrmann للحصول على المساعدة الفنية لها. وقد تم تمويل هذه الدراسة من قبل دويتشه ستيفتونغ الامناء Herzforschung (F / 28/14). وأيد DW من قبل جائزة السفر من الجمعية الدولية للالقلب وزراعة الرئة. تلقى الدفتيريا سلع أخرى كرونة التميز الراتب من شيء آخر-كرونر-فريزنيوس شتيفتونغ (2012_EKES.04). تلقى SS المنح البحثية من جمعية الألمانية للبحوث (DFG، DE2133 / 2-1، TD وSCHR992 / 3- 1، SCHR992 / 4-1، SS).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Rat LEW/Crl | Charles River | Stock number 004 | |
| Rat LEW-Tg(Gt(ROSA)26Sor- 1 luc)11Jmsk |
Institute of laboratory animals, Kyoto University, Japan | NBPR rat number 0299 | http://www.anim.med.kyoto-u.ac.jp/NBR/ |
| PFA 4% | Electron Microscopy Sciences | #157135S | 20% |
| hair clipper | WAHL | 8786-451A ARCO SE | |
| Forene | AbbVie | PZN 10182054 Art.Nr.: B506 | Isoflurane |
| microsurgical clamp | Fine Science Tools | 18055-04 | Micro-Serrefine - 4 mm |
| clamp applicator | Fine Science Tools | 18056-14 | |
| hair removal creme | Rufin cosmetic | 27618 | |
| Povidone-Iodine | Betadine Purdue Pharma | NDC:67618-152 | |
| 10-0 Ethilon suture | Ethicon | 2814G | |
| 5-0 prolene suture | Ethicon | EH7229H | |
| Rimadyl | Pfizer | 400684.00.00 | Carprofen |
| Novaminsulfon | Ratiopharm | PZN 03530402 | Metamizole |
| Heparin | Rotexmedica | PZN: 3862340 | 25.000 I.E./ ml |
| Xylocain 1% | AstraZeneca | PZN: 1137907 | Lidocain |
| EVICEL | J&J Med.Ethicon Biosur | PZN 7349697 Art. Nr.:EVK01DE | fibrin glue |
| NaCl 0.9% | B.Braun | PZN 06063042 Art. Nr.: 3570160 | |
| Vevo 770 high-resolution in vivo micro-imaging system | VisualSonics | duplex sonography | |
| Ecogel 100 ultrasound gel | Eco-med | 30GB | |
| D-Luciferin Firefly, potassium salt | Biosynth | L-8220 | |
| PBS pH 7.4 | Gibco | 10010023 | |
| Xenogen Ivis 200 | Perkin Elmer | bioluminescence imaging | |
| Weigerts iron hematoxylin Kit | Merck | 1.15973.0002 | Trichrome staining |
| Resorcine-Fuchsine Weigert | Waldeck | 2.00E-30 | Trichrome staining |
| Acid Fuchsin | Sigma-Aldrich | F8129-25G | Trichrome staining |
| Ponceau S solution | Serva Electrophoresis | 33427 | Trichrome staining |
| Azophloxin | Waldeck | 1B-103 | Trichrome staining |
| Molybdatophosphoric acid hydrate | Merck | 1.00532.0100 | Trichrome staining |
| Orange G | Waldeck | 1B-221 | Trichrome staining |
| Light Green SF | Waldeck | 1B-211 | Trichrome staining |
| Vitro-Clud | Langenbrinck | 04-0001 | |
| Glacial Acetic Acid | Sigma-Aldrich | 537020 | |
| 37% HCl | Sigma-Aldrich | H1758 | |
| Xylene | Th. Geyer | 3410 | |
| Paraffin | Leica biosystems | REF 39602004 | |
| Ethanol absolute | Th. Geyer | 2246 | |
| Ethanol 96% | Th. Geyer | 2295 | |
| Ethanol 70% | Th. Geyer | 2270 | |
| Slide Rack | Ted Pella | 21057 | |
| Staining dish | Ted Pella | 21075 | |
| Bepanthen Eye and Nose ointment | Bayer | 1578675 | Eye ointment |
References
- Sabik, J. F., 3rd, Understanding saphenous vein graft patency. Circulation. 124, 273-275 (2011).
- Goldman, S., et al. Long-term patency of saphenous vein and left internal mammary artery grafts after coronary artery bypass surgery: results from a Department of Veterans Affairs Cooperative Study. J Am Coll Cardiol. 44, 2149-2156 (2004).
- Fitzgibbon, G. M., et al. Coronary bypass graft fate and patient outcome: angiographic follow-up of 5,065 grafts related to survival and reoperation in 1,388 patients during 25 years. J Am Coll Cardiol. 28, 616-626 (1996).
- O'Brien, J. E., et al. Wound healing around and within saphenous vein bypass grafts. J Thorac Cardiovasc Surg. 114, 38-45 (1997).
- El-Kurdi, M. S., et al. Ovine femoral artery bypass grafting using saphenous vein: a new model. J Surg Res. 193, 458-469 (2015).
- Yuda, A., et al. Angiotensin II receptor antagonist, L-158,809, prevents intimal hyperplasia in dog grafted veins. Life Sci. 68, 41-48 (2000).
- McCann, R. L., Hagen, P. O., Fuchs, J. C. Aspirin and dipyridamole decrease intimal hyperplasia in experimental vein grafts. Ann Surg. 191, 238-243 (1980).
- Thomas, A. C. Animal models for studying vein graft failure and therapeutic interventions. Curr Opin Pharmacol. 12, 121-126 (2012).
- Hu, Y., Xu, Q. New mouse model of vein bypass graft atherosclerosis. Heart Lung Circ. 11, 182-188 (2002).
- Salzberg, S. P., et al. Increased neointimal formation after surgical vein grafting in a murine model of type 2 diabetes. Circulation. 114, I302-I307 (2006).
- Abbott, A. Laboratory animals: the Renaissance rat. Nature. 428, 464-466 (2004).
- Lindblad-Toh, K. Genome sequencing: three's company. Nature. 428, 475-476 (2004).
- Yu, P., Nguyen, B. T., Tao, M., Campagna, C., Ozaki, C. K. Rationale and practical techniques for mouse models of early vein graft adaptations. Journal of vascular surgery. 52, 444-452 (2010).
- Olver, D. T., Lacefield, J. C., Shoemaker, K. J. Evidence of bidirectional flow in the sciatic vasa nervorum. Microvascular research. 94, 103-105 (2014).
- Stubbendorff, M., et al. Inducing myointimal hyperplasia versus atherosclerosis in mice: an introduction of two valid models. Journal of visualized experiments : JoVE. , (2014).
- Conradi, L., et al. Immunobiology of fibrin-based engineered heart tissue. Stem cells translational medicine. 4, 625-631 (2015).
- Dashwood, M. R., Tsui, J. C. 'No-touch' saphenous vein harvesting improves graft performance in patients undergoing coronary artery bypass surgery: A journey from bedside to bench. Vascular Pharmacology. 58, 240-250 (2013).
- Bekler, H. I., Rosenwasser, M. P., Akilina, Y., Bulut, G. The use of an absorbable collagen cover (NeuraWrap) improves patency of interpositional vein grafts. Acta orthopaedica et traumatologica turcica. 44, 157-161 (2010).
- Geurts, A. M., et al. Knockout rats via embryo microinjection of zinc-finger nucleases. Science. 325, 433 (2009).
- Moreno, C., et al. Creation and characterization of a renin knockout rat. Hypertension. 57, 614-619 (2011).
