Introduction
מחלת לב כלילית והסיבוכים שלהם הם בין הגורמים המובילים למוות ברחבי העולם. אסטרטגיות טיפוליות נוכחי להתמקד לבסס מחדש את זרימת הדם, בין אם על ידי מתרחבים כלי הצטמצמו או על ידי יצירת מעקף. השתלת מעקפים (CABG) באמצעות autografts וריד תוארה לראשונה בשנת 1968 שוכללה במרוצת השנים. מלבד וסקולריזציה של הקדמי השמאלי היורד לב כלילית, תעלות וריד saphenous הם נפוצות ביותר 1. עם זאת, patency השתל נותר העקב אכילס של שתלי וריד saphenous (SVG). שנה לאחר הניתוח, patency השתל הוא 85%, יורד ל -61% לאחר עשר שנים 2,3. חשיפת המנגנונים והגורמים pathophysiological של אובדן patency SVG לכן משימה חשובה.
וידאו זה מדגים מודל ביון וריד עכברוש לחקור אובדן שתל הווריד. מטרות העל של שיטה זו הן לחקור את pathobiological שבבסיסותהליכי -physiological במהלך התקדמות מחלה ואת לפתח מודל מתאים תרופה או בדיקת אופציה טיפולית. על ידי השתלת הווריד ברום הבטן השטחית לתוך מערכת העורקים, מודל זה יחקה את ההגדרה הקלינית של השתלת מעקפים. טראומה ניתוחית, איסכמיה, ומתח קיר הם גורמים חשובים של שינויים בכלי דם הפתולוגיים מחקות במודל המתואר.
דגמים ומינים שונים זמינים לחקור אובדן patency וריד שתל. במודלים של בעלי חיים גדולים, כגון חזירים 4, כבשים 5, כלבים 6, וקופי 7, להידמות כלי אנושי מבנים אנטומיים ובכך לאפשר אסטרטגיות טיפוליות מורכבות, כגון סטנט מעקפים או טכניקות ניתוחיות חדשות, להיבדק 8. עם זאת, דיור מיוחד, ציוד, וצוות נדרש. בנוסף, מחיר גבוה והן בשל צורך מרדים נוסף במהלך הניתוח לעכב היישום הרחב יותר שלהם. Smהחיות כל, כוללים חולדות, קלות לטפל, אינו דורש דיור מיוחד, ויש להם עלויות לניהול. לעומת דגמי עכבר 9,10, במודלים של עכברים יש את היתרון של אפשרות לשוב ולבצע טוב יותר ולכן השתנות פחות בתוצאה. חולדות הן מבחינה פיזיולוגית וגנטית יותר דומים לבני אדם מאשר עכברים 11,12. בנוסף, עכברי-בר ביותר רק לפתח myointima המוגבל 13, ההופך במודלים של עכברים נוטים שגיאות מסוג ב'. היסטולוגיה של ורידי העכבר העיקריים, כגון נחות הווריד הנבוב, מורכב רק של כמה שכבות תא הופכת 13 קשה הערכה המוקדמת. חסרון נוסף הוא הכמות הקטנה של רקמה זמינה לניתוח שלאחר מכן לאחר החלמת שתל.
המודל המתואר בסרט הזה ניתן לשחזור, זול, וקל לביצוע, והוא ניתן להקים במהירות ובאופן אמין. זה מתאים במיוחד בהערכת סוכנים טיפוליים ניסיוני יקרים, כגון וקטורים ויראלייםעבור ריפוי גנטי, באופן חסכוני.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
בעלי החיים קבלו טיפול הומאני באמות מורה העקרונות בחיות מעבדה, שהוכן על ידי מכון משאבים בחיות מעבדה ופורסם על ידי ה- National Institutes of Health. כל הפרוטוקולים החיים אושרו על ידי הרשות המקומית האחראית ( "für Amt Gesundheit und Verbraucherschutz, Hansestadt (משרד בריאות הגנת הצרכן) המבורג").
1. טיפול בבעלי חיים
- השג חולדות לואיס (Lew / CRL) חולדות וחולדות מהונדסות ROSA / בלוציפראז- Lew במשקל 300-350 גרם מהמכון בחיות מעבדה.
- שמור על החולדות בתנאים קונבנציונליים בארונות מאווררים ולהאכיל אותם צ'או עכברוש סטנדרטי כרצונך מי autoclaved.
- בצע השתלת שתל באמצעות החולדות המהונדסות ROSA / Lew-בלוציפראז תורמי חולדות Lew / CRL syngenic כמו הנמענים.
2. הכנת העכברוש התורם
- השתמש ולהכשרהתא יון לטשטש עכברוש עם isoflurane (2.5-3%).
- מניחים את החולדה על הגב שלה ולשמור על הרדמה עם facemask כיסוי הפה והאף. בדוק עומק מספיק של הרדמה על ידי צובט את הרגליים האחוריות ואימות בהעדר רפלקסים. החל משח וטרינר על העיניים כדי למנוע יובש לאחר הרדמה.
- מורחים את הרגליים האחוריות ולתקן את עמדתם באמצעות קלטת.
- לגלח את השיער מפשעתי עם גוזם שיער ולחטא את האזור כולו באמצעות יוד povidone ואחריו 80% אתנול. חזור על שלב החיטוי פעמים.
הערה: אזור הניתוח, גזה, ומכשירי ניתוח צריכה להיות מעוקרות. יש לשמור על שדה סטרילי לאורך כל ההליך וללבוש-ליחד, כפפות כירורגי סטרילי, מסכות, וכובעים. - תחת מיקרוסקופ, לבצע חתך אנכי לאורך inguinalis המנחה. השתמש בשני מלקחיים כדי להפריד את הרקמות התת עורית בעדינות ולחשוף את הווריד ברום הבטן השטחי מן האורים שלוג'ין על וריד הירך. בזהירות לבודד את הווריד ברום הבטן השטחי מן הרקמות הסובבות.
- תפסיק את זרימת דם בווריד ברום הבטן השטחי באמצעות שני מלחציים מיקרו.
- קציר פלח 0.5 עד 1 ס"מ כ הווריד ידי הרמת וריד מבודד בזהירות עם מלקחיים חיתוך דרך כלי עם microscissors. השאירו את מהדק מיקרו על גדם כלי כדי למנוע אובדן דם. מניחים את פיסת הסיר של וריד על גזה סטרילי. בזהירות במקום מחט 30 G בתוך קצה אחד של הווריד שנקטף ולשטוף את הכלי עם הפרין (50 יחידות / מיליליטר).
הערה: ידית הווריד בזהירות ולהימנע נזק במהלך הרמת, חיתוך, ו הסמקה. הקפד לשטוף את השתל עם הכמות הנכונה של הפרין. - שמור במגזר כלי ב לידוקאין 1% על הקרח עד להשתלה לתוך עכברוש הנמען למנוע התכווצות כלי.
- להרדים את העכברוש התורם על ידי הגדלת ההרדמה עד 5% isoflurane. לאחר 2-3 דקות, open הבטן לאורך alba Linea, לחתוך דרך הסרעפת, ולהסיר את הלב לעצור את זרימת הדם.
3. הכנת עכברוש הנמען
- להרדים ולתקן החולדה הנמען באותה צורה כמו עכברוש התורם.
- לגלח את הצד המדיאלי של הרגליים עם גוזם שיער ולחטא שלוש פעמים באמצעות יוד povidone ו -80% אתנול.
- צג את עומק ההרדמה ולהבטיח שזה מספיק ידי אימות בהעדר רפלקסים כאשר צובט את הרגליים האחוריות.
- בצע חתך הירך החציוני מהברך אל חיק מפשעתי. תחת מיקרוסקופ, השתמש 2 מלקחיים כדי להפריד את עורק הירך מסביבתה.
- השתמש מלחציים מיקרו לעצור את זרימת הדם. מניחים את מהדק הפרוקסימלית הראשון, ואחריו מהדק דיסטלי.
- לגזור קטע קצר של עורק הירך הדק עם microscissors וזורק אותו. לקצר את גדם עורקי נותרים עם microscissors, יצירת פער זה1-2 מ"מ גדול יותר שתל הווריד. שטוף את הגדם עורקי עם הפרין באמצעות מחט 30 G.
הערה: אם adventitia שבולט מעט מעבר גדם הכלי, להשתמש במלקחיים כדי למשוך אותו מעט מעל הקצה של הכלי ולהסיר חלק. - מניח את הווריד שנקטף מן הצעד 2.8 בין גדמי העורקים ולהתאים את האורך כך שהוא נכנס כראוי לתוך הפער. הערה לכיוון הווריד.
- בצע השקת הפרוקסימלי הראשון באמצעות תפר 10-0 prolene. לנהל תפרים יחידים לפי הסדר המוצג (1D איור). התחל עם תפר בכל צד לרוחב לפני הוספת שלושה תפרים יותר בצד הגחון. לאחר מכן, למקם שלושה תפרים בצד הגבי של הכלי להשלמת ההשקה.
- חבר את כלי דיסטלי עם שתל תוך שימוש באותה טכניקה כמו השקה הפרוקסימלי כמתואר בשלב 3.8. שוב, להתחיל עם תפר בכל צד לרוחב, ולאחר מכן למקם שלושה תפרים על sid הגחוןדואר ואת הצד הגבה.
- טען שני מזרקים 1 מ"ל עם רכיב דבק הפיברין 1 ו -2 הרם בזהירות את השתל עם מלקחיים ושחרר כ 100 μl של רכיב דבק הפיברין 1 תחת השתל, ואחריו רכיב 2.
הערה: ודא כי רכיבים 1 ו -2 מיושמים ביחס של 1: 1. - מניחים את השתל ן למקומו ושחרר 100 μl נוסף של רכיבים 1 ו -2 על גבי השתל. הקפד כי הדבק מכסה גם את השתל ואת השקה כדי למנוע אי ספיקה anastomotic ושוב-התנפחות של השתל הווריד.
- בזהירות לפתוח את מהדק דיסטלי, ואחריו הפרוקסימלי.
- אשר ניתוח מוצלח על ידי בדיקת דופק גלוי בווריד המושתל ועורקים הדיסטלי של השתל.
- הסר דבק מופרז, אשר מעכבת סגירת עור. שימוש במלקחיים כדי להרים את הדבק לרפא ולהסיר את העודפים עם microscissors. סגור את שכבות העור עם 5-0 תפרים prolene.
- להזריק 4-5 מ 'g / ק"ג Carprofen תת עורי לפני המאפשר החולדה להתעורר. אין להשאיר את החיה ללא השגחה עד שהוא שב להכרתו מספיק כדי לשמור שכיבה sternal. שמור את החיה בכלוב אחד עד שהוא התאושש לחלוטין.
- להוסיף דיפירון למי השתייה (50 מ"ג דיפירון ל -100 מ"ל) כמו משככי כאבים במשך 3 הימים הבאים ולפקח החיה יומי.
4. דופלקס sonography
הערה: sonography השתמש duxplex לדמיין את זרימת הדם הלא פולשני בחולדות 14.
- לטשטש חולדה בתא אינדוקציה (2% isoflurane). מניחים את החולדה על הגב שלה ולשמור הרדמה עם facemask המכסה את האף.
- השתמש קוצץ שיער הסרת שיער קרם להסרת שיער סביב האזור של הירך.
- החל ג'ל אולטרסאונד לירך. ודא שאין בועות אוויר. לרכוש תמונות sonography דופלקס באמצעות מתמר 400 MS (התדר המרכזי: 30 Mרץ) עם קצב פריימים של 230-400 מסגרות / sec.
5. Histopathology
הערה: קציר להכתים את הכלי עם trichrome המכתים של מסון לניתוח morphometric 15.
- תקן את כלי שנקטפו 4% paraformaldehyde לילה ליבש אותו ריכוז גדל והולך של אתנול. שבץ מדגם פרפין ופצע אותו לתוך 5 מיקרומטר פרוסות עבות באמצעות microtome.
הערה: Paraformaldehyde רעיל צריך להיות מטופלים עם טיפול מיוחד. - Deparaffinize השקופיות לפני השארתם trichrome פתרון מכתים. מייבשים את השקופיות מוכתמים, לנקות אותם עם קסילן, ולעגן אותם הרכבה בינונית. לאחר ייבוש שקופיות, להציג את הדוגמאות עם מיקרוסקופ.
6. הדמיה פליטת אור (BLI)
הערה: שתל לאחר הניתוח הייתה במעקב לאורך זמן in vivo על ידי מדידת אות bioluminescent 16.
- ממיסים 1 גרם של מלח אשלגן D-Luciferin ב 22 מ"ל של PBS ו להזריק אותו intraperitoneally לתוך חולדה (375 מ"ג / ק"ג משקל גוף). חכה 15 דקות עבור luciferin להסתובב החיה.
- מניח את החולדה לתוך מערכת כימות bioluminescent בזמן אמת ולגשת אות פליטת האור.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
המודל ביון עכברוש וריד מתאים ללמוד את הפיתוח של היפרפלזיה myointima ו לכישלון השתל הווריד. בעלי חיים לשחזר היטב מהניתוח ולהראות אחרי הניתוח בכושר גופני מצוין. איור 1 מציג את השלבים כירורגית המפתח. לאחר החתך בעור לאורך Linea inguinalis, וריד שטחי ברום הבטן ואת עורק הירך מזוהים (איור 1 א). קציר של השתל צריך להתבצע בזהירות, מבלי לפגוע השתל (איור 1B), כמו זה יכול להוביל לכישלון השתל מוקדם ואובדן patency. לאחר הצבת השתל בתוך החיה הנמען (תרשים 1C), תפרים השקה מבוצעות לפי הסדר המוצג באיור 1D. שתל ביון הוורידים הושלמו מופיע חיוור (1E איור) וצריך להיות אדום ולהראות פעימה לאחר רה-פרפוזיה (איור 1F).
Integrati המוצלח על הווריד לתוך patency העורק שתל הירך לאחר ההשתלה ניתן לאשר sonography דופלקס הלא פולשני באמצעות (איור 2 א). על ידי השתלת הווריד של עכברוש לוק חיובי לעכברוש syngeneic לוק-שלילי, הדמיה פליטת אור ניתן להשתמש כדי לפקח על נוכחות השתל לאורך זמן (איור 2 ב).
היפרפלזיה Myointima מפתחת בהדרגה השתל לאורך זמן. מכתים היסטולוגית עם trichrome של מסון מדגים myointima היווצרות בתוך lamina אלסטי הפנימי (איור 2 ג). חישוב הכחדה לומינל, (חלוקת שטח חתך של לומן ע"י השטח בתוך lamina אלסטי פנימי) חשפה אובדן הדרגתי של patency שתל מהיום 7 עד היום 28 שלאחר הניתוח, ובכך אישר את הדינמיקה לשחזור של היפרפלזיה myointima במודל חולדה זו (איור 2).
בתשובה לשאלה 1 "src =" / files / ftp_upload / 54839 / 54839fig1.jpg "/>
איור 1: תוכנית מפורטת של הליך כירורגי. (א) האנטומיה של האזור מפשעתי. קציר (B) שתל הווריד השטחי ברום הבטן. (ג) צבת שתל הווריד בין גדמי העורקים של חית הנמען. (ד) להזמין תפרי השקה. (ה) אתר לאחר הקמת שתל ורידים. (F) באתר זה לאחר רה-פרפוזיה של השתל ביון ורידים. חיצים שחורים לסמן את הווריד השטחי ברום הבטן. סרגל הסולם = 5 מ"מ. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.
איור 2: אפיון של במודל חיה. (א) sonography דופלקס של ביון ורידי שתל immed iately לאחר ההשתלה (0d) ו -28 ימים אחרי הניתוח (28d). (ב) BLI מן לוק חיובי שתלי הושתלו חולדות לוק שלילי ב 0 ימים ו -28 ימים לאחר הניתוח. (C) חתכי נציג שתל שנקטפו לאחר ימים 7, 14, 21, ו -28 ומוכתם trichrome של מייסון. (פנל עליון: בר Scale = 400 מיקרומטר; פנל תחתון: בר Scale = 100 מיקרומטר) (D) ההכחדה לומינל באחוזים מחושב על ידי חלוקת לומן הפנימי החדש מן לומן לשעבר. הבדלים בין קבוצתיים הוערכו על ידי ניתוח חד סטרי שונה (ANOVA) עם מבחן פוסט הוק של Bonferroni. p <0.01. ברי השגיאה הם סטיית ההתקן (SD). אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.
_upload / 54839 / 54839Sup1.jpg "/>
קובץ נוסף 1: איור סכמטי של הליך כירורגי. חתך אנכי לאורך inguinalis Linea מבוצע על העכברוש התורם, חושף את הווריד ברום הבטן הנח. זרימת הדם נעצרת עם שני מלחציים מיקרו, וכן קטע וריד ארוך 0.5-1.0 ס"מ שנקטפו. בשנת החולדה הנמען, חתך הירך החציוני מתבצע, חשיפת וריד, עורק הירך, ועצב. לאחר מהדק את עורק הירך, קטע כלי מוסר ובמקומו שתל הווריד שנקטף. אנא לחץ כאן כדי להציג משלימה קובץ 1 (או לחץ לחיצה ימנית כדי להוריד).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
וידאו זה מדגים מודל ביון וריד עכברוש לחקור אובדן שתל וריד כדי לאפשר חקירה של תהליכים פתולוגיים הבסיס לבין בדיקות של תרופות חדשות או אופציות טיפוליות.
הרדמה היא היבט חיוני של הליכים כירורגיים. מערכת ההרדמה inhalative רציפה מומלצת, שכן פעולה זו מהווה שיטה בטוחה וקלה, במיוחד במהלך פעילות ממושכת. זה יכול להיות בעל חשיבות רבה במהלך שלב ההכשרה, בתום המבצע לוקח יותר מ 1 hr.
עם כל כבוד ההליך הכירורגי, זה קריטי לא לפגוע שתל הווריד במהלך מסיק וההשתלה 17. הוא נאחז adventitia של כלי השיט יכול למנוע ניזק שתל הווריד למנוע היווצרות פקיק עתידית לכישלון שתל. patency שתל ניתן לקבוע מייד לאחר וריד בניית שתל דרך התצפית של זרימת דם ושל פעימה ב שתל הווריד או distaעורק l, וכן באמצעות sonography דופלקס.
עוד היבט קריטי של ההליך הוא למנוע-ההתנפחות מעל של שתל הווריד. חשיפה פתאומית של שתל הווריד למערכת לחץ הדם מביאה למתח קיר מוגבר, לאחר יתר ההתנפחות, ושינויי תבנית זרימה. אלה הם מקורות של פקקת, אי ספיקת anastomotic, וכישלון שתל מוקדם. תמיכת שתל הווריד עם דבק הפיברין יכולה למנוע מתנפחת מבוקרת ולהגן אינטימה ומדיה מהשמדה מכאנית. מכסה קולגן נספג הוא אלטרנטיבת דבק הפיברין יכול לשמש perivenous מכסה 18.
השלב הקריטי ביותר בתוך פרוטוקול זה הוא ללא ספק ההשקה בין שתל הווריד העורק. יש להקפיד לא לנקב שני הקירות של כלי השיט, כמו זה יוביל לצמצום של השקה, דבר אשר עלול לגרום לכשל מוקדם של השתל. בנוסף, attentio מיוחדn חייב להיות משולם על הלוקליזציה של תפרים. קונגרואנסי של עמדות תפר בעורק וריד מבטיח patency שתל ומונע אי ספיקה. כדי להקל על זה, תפרים יכולים להתבצע לפי הסדר המוצג באיור 1D.
מידת הקושי הטכני ניתן לצפות כהגבלה של הטכניקה, כי טירון חייב להיות הראשון מכיר את ציוד מיקרו ואת גודל קטן של מבנים אנטומיים. עם זאת, מודלים אחרים המשמשים להציג אותם הקשיים, ואנו מאמינים כי וידאו זה יעזור למנתחי טירון לשלוט בטכניקה זו תוך זמן קצר.
במודלים של בעלי חיים קטנים רבים לכישלון שתל ורידים תוארו בספרות. עם זאת, ברוב הדגמים מספקים רק בכמויות קטנות מאוד של רקמות לניתוח 13. היתרון של שיטה זו הוא כמות יחסית גדולה של רקמות כי ניתן להשיג. שתל אחד ניתן לחלק לחלקים מרוביםnd המשמש מבחנים שונים, ובכך להפחית את מספר בעלי חי ניסוי הנדרש.
השיפורים האחרונים בטכנולוגיה nuclease אבץ אצבעות לאפשר לדור של חולדות בנוקאאוט 19. על ידי בחירת חולדות נוק-אאוט מתאימים, אובדן patency שתל ניתן ללמוד בתנאי מחלה שונים. לדוגמא, חולדות בנוקאאוט רנין יכולות להיות מנוצלות כדי ללמוד יתר לחץ דם 20. ניתן לשלב רקע הגנטי אלה עם מודל זה חי כדי ללקט מידע על המנגנונים לכישלון שתל וריד במסגרות שונות או על ההשפעה של גנים מסוימים בפיתוח של היפרפלזיה myointima.
לסיכום, המודל שתואר בסרט הזה ניתן לשחזור, זול, וקל לביצוע, והוא ניתן להקים במהירות ובאופן אמין. Myointima היפרפלזיה, המהווה את הגורם העיקרי לכישלון שתל וריד, ומתפתחת בקצב מואץ מזה ארבעה שבועות, וכתוצאה מכך ההכחדה לומינל פרוגרסיבי. טיפול נבדק בהצלחהאפשרויות במודל זה ניתן כמו כן, אישר במודלים של בעלי חיים גדולים.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Acknowledgments
המחברים מודים כריסטיאן Pahrmann לקבלת הסיוע הטכני שלה. מחקר זה מומן על ידי דויטשה Stiftung fuer Herzforschung (F / 28/14). DW נתמכה על ידי בפרס הנסיעות מן האגודה הבינלאומית לב והשתלות ריאה. TD קיבל מלגת הצטיינות קרונה אחר מן Else-קרונה-Fresenius-Stiftung (2012_EKES.04). SS קיבלו מענקי מחקר מן (DFG; DE2133 / 2-1, TD ו SCHR992 / 3- 1, SCHR992 / 4-1, ש.ש).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Rat LEW/Crl | Charles River | Stock number 004 | |
| Rat LEW-Tg(Gt(ROSA)26Sor- 1 luc)11Jmsk |
Institute of laboratory animals, Kyoto University, Japan | NBPR rat number 0299 | http://www.anim.med.kyoto-u.ac.jp/NBR/ |
| PFA 4% | Electron Microscopy Sciences | #157135S | 20% |
| hair clipper | WAHL | 8786-451A ARCO SE | |
| Forene | AbbVie | PZN 10182054 Art.Nr.: B506 | Isoflurane |
| microsurgical clamp | Fine Science Tools | 18055-04 | Micro-Serrefine - 4 mm |
| clamp applicator | Fine Science Tools | 18056-14 | |
| hair removal creme | Rufin cosmetic | 27618 | |
| Povidone-Iodine | Betadine Purdue Pharma | NDC:67618-152 | |
| 10-0 Ethilon suture | Ethicon | 2814G | |
| 5-0 prolene suture | Ethicon | EH7229H | |
| Rimadyl | Pfizer | 400684.00.00 | Carprofen |
| Novaminsulfon | Ratiopharm | PZN 03530402 | Metamizole |
| Heparin | Rotexmedica | PZN: 3862340 | 25.000 I.E./ ml |
| Xylocain 1% | AstraZeneca | PZN: 1137907 | Lidocain |
| EVICEL | J&J Med.Ethicon Biosur | PZN 7349697 Art. Nr.:EVK01DE | fibrin glue |
| NaCl 0.9% | B.Braun | PZN 06063042 Art. Nr.: 3570160 | |
| Vevo 770 high-resolution in vivo micro-imaging system | VisualSonics | duplex sonography | |
| Ecogel 100 ultrasound gel | Eco-med | 30GB | |
| D-Luciferin Firefly, potassium salt | Biosynth | L-8220 | |
| PBS pH 7.4 | Gibco | 10010023 | |
| Xenogen Ivis 200 | Perkin Elmer | bioluminescence imaging | |
| Weigerts iron hematoxylin Kit | Merck | 1.15973.0002 | Trichrome staining |
| Resorcine-Fuchsine Weigert | Waldeck | 2.00E-30 | Trichrome staining |
| Acid Fuchsin | Sigma-Aldrich | F8129-25G | Trichrome staining |
| Ponceau S solution | Serva Electrophoresis | 33427 | Trichrome staining |
| Azophloxin | Waldeck | 1B-103 | Trichrome staining |
| Molybdatophosphoric acid hydrate | Merck | 1.00532.0100 | Trichrome staining |
| Orange G | Waldeck | 1B-221 | Trichrome staining |
| Light Green SF | Waldeck | 1B-211 | Trichrome staining |
| Vitro-Clud | Langenbrinck | 04-0001 | |
| Glacial Acetic Acid | Sigma-Aldrich | 537020 | |
| 37% HCl | Sigma-Aldrich | H1758 | |
| Xylene | Th. Geyer | 3410 | |
| Paraffin | Leica biosystems | REF 39602004 | |
| Ethanol absolute | Th. Geyer | 2246 | |
| Ethanol 96% | Th. Geyer | 2295 | |
| Ethanol 70% | Th. Geyer | 2270 | |
| Slide Rack | Ted Pella | 21057 | |
| Staining dish | Ted Pella | 21075 | |
| Bepanthen Eye and Nose ointment | Bayer | 1578675 | Eye ointment |
References
- Sabik, J. F., 3rd, Understanding saphenous vein graft patency. Circulation. 124, 273-275 (2011).
- Goldman, S., et al. Long-term patency of saphenous vein and left internal mammary artery grafts after coronary artery bypass surgery: results from a Department of Veterans Affairs Cooperative Study. J Am Coll Cardiol. 44, 2149-2156 (2004).
- Fitzgibbon, G. M., et al. Coronary bypass graft fate and patient outcome: angiographic follow-up of 5,065 grafts related to survival and reoperation in 1,388 patients during 25 years. J Am Coll Cardiol. 28, 616-626 (1996).
- O'Brien, J. E., et al. Wound healing around and within saphenous vein bypass grafts. J Thorac Cardiovasc Surg. 114, 38-45 (1997).
- El-Kurdi, M. S., et al. Ovine femoral artery bypass grafting using saphenous vein: a new model. J Surg Res. 193, 458-469 (2015).
- Yuda, A., et al. Angiotensin II receptor antagonist, L-158,809, prevents intimal hyperplasia in dog grafted veins. Life Sci. 68, 41-48 (2000).
- McCann, R. L., Hagen, P. O., Fuchs, J. C. Aspirin and dipyridamole decrease intimal hyperplasia in experimental vein grafts. Ann Surg. 191, 238-243 (1980).
- Thomas, A. C. Animal models for studying vein graft failure and therapeutic interventions. Curr Opin Pharmacol. 12, 121-126 (2012).
- Hu, Y., Xu, Q. New mouse model of vein bypass graft atherosclerosis. Heart Lung Circ. 11, 182-188 (2002).
- Salzberg, S. P., et al. Increased neointimal formation after surgical vein grafting in a murine model of type 2 diabetes. Circulation. 114, I302-I307 (2006).
- Abbott, A. Laboratory animals: the Renaissance rat. Nature. 428, 464-466 (2004).
- Lindblad-Toh, K. Genome sequencing: three's company. Nature. 428, 475-476 (2004).
- Yu, P., Nguyen, B. T., Tao, M., Campagna, C., Ozaki, C. K. Rationale and practical techniques for mouse models of early vein graft adaptations. Journal of vascular surgery. 52, 444-452 (2010).
- Olver, D. T., Lacefield, J. C., Shoemaker, K. J. Evidence of bidirectional flow in the sciatic vasa nervorum. Microvascular research. 94, 103-105 (2014).
- Stubbendorff, M., et al. Inducing myointimal hyperplasia versus atherosclerosis in mice: an introduction of two valid models. Journal of visualized experiments : JoVE. , (2014).
- Conradi, L., et al. Immunobiology of fibrin-based engineered heart tissue. Stem cells translational medicine. 4, 625-631 (2015).
- Dashwood, M. R., Tsui, J. C. 'No-touch' saphenous vein harvesting improves graft performance in patients undergoing coronary artery bypass surgery: A journey from bedside to bench. Vascular Pharmacology. 58, 240-250 (2013).
- Bekler, H. I., Rosenwasser, M. P., Akilina, Y., Bulut, G. The use of an absorbable collagen cover (NeuraWrap) improves patency of interpositional vein grafts. Acta orthopaedica et traumatologica turcica. 44, 157-161 (2010).
- Geurts, A. M., et al. Knockout rats via embryo microinjection of zinc-finger nucleases. Science. 325, 433 (2009).
- Moreno, C., et al. Creation and characterization of a renin knockout rat. Hypertension. 57, 614-619 (2011).
