Summary
Vi beskriver en protokoll for å indusere givende og nonrewarding opplevelser i fruktfluer (Drosophila melanogaster) ved hjelp av frivillig etanol forbruk som et mål for endringer i belønning stater.
Abstract
Vi beskriver en protokoll for å måle etanol egenadministrasjon i fruktfluer (Drosophila melanogaster) som en proxy for endringer i belønning stater. Vi viser en enkel måte å benytte seg av fly belønningssystem, modifisere erfaringer knyttet til naturlig belønning, og bruke frivillige etanol forbruk som et mål for endringer i belønning stater. Tilnærmingen fungerer som et relevant verktøy for å studere nevroner og gener som spiller en rolle i erfarings mediert endringer av intern tilstand. Protokollen er sammensatt av to atskilte deler: utsette fluene til givende og nonrewarding erfaringer, og analysering av frivillig etanolforbruk som et mål på motivasjon for å oppnå et medikament belønning. De to delene kan brukes uavhengig for å indusere den modulering av erfaring som et innledende trinn for videre nedstrøms analyser eller som en frittstående to-foring ad lib assay, respektivt. Protokollen krever ikke et komplisert oppsett, og kan derfor anvendes i en hvilken som helst laboratory med grunnleggende flue kultur verktøy.
Introduction
Endring av atferd som svar på erfaring gjør at dyrene å tilpasse sin atferd til endringer i deres miljø en. I løpet av denne prosessen, dyr integrere sine interne fysiologiske tilstand med endrede forhold til det ytre miljø, og deretter velge en handling over en annen for å øke sjansene for overlevelse og reproduksjon. Belønningssystemer utviklet seg til å motivere atferd som er nødvendig for overlevelsen av individer og arter ved å forsterke atferd som forbedrer umiddelbare overlevelse, slik som å spise eller drikke, eller de som sikre langsiktig overlevelse, for eksempel seksuell atferd eller omsorg for avkom to. Kunstige forbindelser som narkotiske stoffer påvirker også belønningssystemer ved co-optisk nervebaner som formidler naturlige belønninger 2.
I løpet av de siste to tiårene, bananflue Drosophila melanogaster er etablert som en lovende modell for å studere Molecular og nevrale mekanismer som er forme effekten av etanol på atferd 3,4.
Tidligere har vi identifisert en undergruppe av peptidergic nevroner i fluer (NPF / NPF reseptor (R) nevroner) som par naturlige belønninger, for eksempel seksuell erfaring, motivasjon for å skaffe narkotika belønninger 5. NPF uttrykk er følsom for både seksuelle erfaringer og narkotika belønninger, for eksempel etanol rus. Endringer i NPF uttrykk nivåer blir konvertert til endringer i etanol selvadministrering 5, der høy NPF reduserer og lav NPF øker preferanse å konsumere etanol. Aktivering NPF nevroner er givende for fluer, som de viser sterk preferanse for en lukt forbundet med aktivering, som også gjenspeiles ved redusert etanol forbruk. Enda viktigere, aktivering av NPF nevroner interfererer med evnen av fluene til å danne en positiv sammenheng mellom etanol rus og en lukt signalet. Den årsakssammenheng mellom NPF / Rsystem, belønning hukommelse, og etanolforbruk tyder på at man kan bruke etanol selvadministrering som et mål for endringer i belønnings tilstander 5.
I denne publikasjonen viser vi en helhetlig tilnærming for å hanke inn fly naturlige belønningssystem og analysering av endringer i belønning stater. Tilnærmingen består av to separate deler, en treningsprotokoll for å manipulere naturlige belønningsrelaterte opplevelser, etterfulgt av en to-valg kapillær mater assay (CAFE) for å vurdere etanol selvadministrering som et estimat for endringer i belønning stater. Kafeen analysen er analog til de to-flaske valg analyser som brukes i gnagere for narkotika egenadministrasjon og har vist seg å reflektere visse egenskaper for avhengighet-lignende oppførsel i fluer 6.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Merk: Generell oversikt over eksperimentell design: Den eksperimentelle designet inkluderer en tilpasset protokoll for frieri undertrykkelse 7-9 der mannlige fluer er utsatt for givende og nonrewarding opplevelser i 3 påfølgende treningsøkter i løpet av 4 d. Ved slutten av den erfaring fasen blir fluene testet i en to-valg frivillig etanolforbruk assay i 3 - 4 d. Protokollen heri inkluderer flere forberedende trinn, hvorav noen kan gjøres på forhånd for å bli brukt i mer enn ett eksperiment, mens andre bør skje på en riktig måte før begynnelsen av forsøket (tabell 1).
1. Forberedende trinn
- Klargjøring av kapillær mater systemet
- Varm en 27 G nål og bruke den til å punktere små hull langs en ampulle (figur 1).
- Skjær flasken plugg i halvparten (diagonalt) med et barberblad. Mark fire poeng på overflaten av pluggen, og skaper en square formen å plassere kapillær holdere til. Bruk en 18 G nål for å lage 4 hull gjennom pluggen (Figur 1b).
- Bruk et barberblad for å kutte micropipets slik at de kan holde fast 5 mL glasskapillærer, som fungerer som adaptere.
- Sett 4 kapillære adaptere i forberedt plugger.
- Markere posisjonen til de 2 etanol- og to nonethanol holdig kapillærer på pluggen.
Merk: Det anbefales å holde posisjonene til de 2 typer kapillærene konsistente på tvers av alle hetteglass. Ta hensyn til størrelsen på hullene, så store hull tillate utslipp av fluer ut av hetteglassene. I tillegg anbefales det å bruke den glatte siden av pluggen (vanligvis motsatt kuttet side) som den siden som vender ned når de settes inn i hetteglasset, som å kutte ut kontakten skaper noen små, løse fibre som fluer kan få tangled i . - Forbered et stort antall hetteglass og adaptere som skal brukes til kapillær matesystem (CAFE)Forsøkene som er beskrevet i trinn 2,3.
- Forbereder liten glass mat ampuller
- En dag før innsamling av fluer (trinn 1.4), arrangerer 200 hetteglass på mikro tube racks. Smelt fly mat (i henhold til cornmeal melasse oppskrift, se Table of Materials) med en mikrobølgeovn. Hell 2 ml av fly mat inn i hetteglass (prøv å ikke smøre maten på hetteglassvegger). La maten stivne, og dekke hetteglass med plastfolie.
MERK: hetteglass inneholdende mat kan oppbevares ved 4 ° C i flere uker. - På dagen for fly samling, ta hetteglassene ut av kjøleskapet og la dem nå romtemperatur før du bruker dem til å huse fluer.
MERK: Hvis mat ampuller er flere uker gamle, sørg for at maten er fortsatt intakt og ikke løsrevet fra hetteglasset, som fluer kan være fanget i sprekkene mellom maten og glass.
- En dag før innsamling av fluer (trinn 1.4), arrangerer 200 hetteglass på mikro tube racks. Smelt fly mat (i henhold til cornmeal melasse oppskrift, se Table of Materials) med en mikrobølgeovn. Hell 2 ml av fly mat inn i hetteglass (prøv å ikke smøre maten på hetteglassvegger). La maten stivne, og dekke hetteglass med plastfolie.
- Making lager mat løsning for kapillær mater analysen
- å prePare lager mat-oppløsning (5% sukrose, 5% gjærekstrakt), oppløse 5,88 g gjærekstrakt og 5,88 g sukrose i 100 ml destillert vann.
MERK: Stamoppløsningen er svært utsatt for forurensning. Derfor er det anbefalt å autoklavere den (121 ° C, 30 min, og uten et tørkesyklus) og den delmengde i 850 ul alikvoter som arbeider for å bli oppbevart ved 4 ° C inntil videre anvendelse. Konsentrasjonen av bestanddelene i stamløsningen er 5,88%, og vil nå sluttkonsentrasjon på 5% etter tilsetning av 15% etanol eller vann (150 ul til 850 ul av forhåndslagde mat oppløsning) like før bruk i trinn 2,3.
- å prePare lager mat-oppløsning (5% sukrose, 5% gjærekstrakt), oppløse 5,88 g gjærekstrakt og 5,88 g sukrose i 100 ml destillert vann.
- Samle eksperimentelle fluer
- Samle 200 naive mannlige fluer ved hjelp av en CO 2 pad.
Merk: Bruk en lab belastning relevant for den eksperimentelle spørsmålet. 250 fluer kan lett samles fra fem flasker fluer på deres eklosjonshormon pick fase. Ved innsamling av fluer, vær svært oppmerksom på colge fluer som nylig har eclosed (jomfruelige utseende fluer: lyse fluer med mekonium flekk på magen). Eksperimentelle fluer bør holdes enkeltvis i små glassflasker inneholdende mat og alderen til 3 - 4 d gamle før de blir brukt i forsøket. - Bruk myke plugger å lukke hetteglassene.
MERK: De samme myke plugger vil være svært nyttig for opplæringsfasen ved bruk av munn aspirasjon å sette kvinner inn og ut av hetteglassene under hospiteringsperioden.
- Samle 200 naive mannlige fluer ved hjelp av en CO 2 pad.
- Samle trener fluer
MERK: Alle innsamlede fluer bør holdes i en 12 h / 12 h lys / mørk inkubator ved 25 ° C og 70% relativ fuktighet (RH). Den 12 t / 12 t lys / mørke syklus kan endres til en praktisk starttid.- Jomfru kvinnelige trener fluer
- Samle 500 jomfru kvinnelig trener flyr fra en WT lager eller en virginator lager for bruk som jomfru mottakelige kvinner. Hold kvinnelige fluer i grupper på 25 per vanlig størrelse mat hetteglass, og alleow dem til alder til 3-4 d gammel før du bruker dem i forsøket.
- Parret kvinnelige trener fluer
- Samle 300 jomfruelige kvinnelige fluer fra en WT lager eller en virginator lager for å gjennomgå parring før opplæringsfasen (trinn 1.6.1).
MERK: Kvinnelige fluer holdes i grupper på 10 hunner per vanlig størrelse mat ampulle og alderen til 3 - 4 d gamle før de blir brukt i forsøket.
- Samle 300 jomfruelige kvinnelige fluer fra en WT lager eller en virginator lager for å gjennomgå parring før opplæringsfasen (trinn 1.6.1).
- Mannlige fluer som brukes til å generere parret kvinnelige trener fluer
- Samle 150 mannlige fluer (ikke nødvendigvis jomfru).
MERK: Fluer holdes i grupper på 15 menn per vanlig størrelse mat hetteglass og alderen til 3-4 d gamle før de blir koblet sammen med jomfru kvinnelige flyr å skape de parret trener kvinner.
- Samle 150 mannlige fluer (ikke nødvendigvis jomfru).
- Jomfru kvinnelige trener fluer
- Generering parret kvinnelige trener fluer
- For å generere parret kvinnelige flyr å bli brukt som trenere, par grupper på 10 jomfru kvinnelige fluer med 15 mannlige fluer ved å vippe en mannlig holdig ampulle inn i en kvinnelig-Containing hetteglass 16 - 18 timer før treningsfase (trinn 2.1) 10.
MERK: Dette skal normalt skje kvelden før treningsøkten. Den 1,5: 1 forhold mellom mannlige flyr til kvinnelige fluer sikrer at alle kvinner skal parres. - På dagen for eksperimentet, skille paret kvinner fra hannene ved å aspirere hannene ut av hetteglasset ved hjelp av en munn aspirator. Utfør denne rett før begynnelsen av hver treningsdag.
- For å generere parret kvinnelige flyr å bli brukt som trenere, par grupper på 10 jomfru kvinnelige fluer med 15 mannlige fluer ved å vippe en mannlig holdig ampulle inn i en kvinnelig-Containing hetteglass 16 - 18 timer før treningsfase (trinn 2.1) 10.
2. Eksperimentelle Steps
- Sette opp hospiteringen
- Starte eksperimentet så nær som mulig til begynnelsen av den lette fasen i inkubatoren. Plasser trener kvinner (både jomfru og parret) i oppførselen kammeret.
MERK: Det anbefales å utføre eksperimentet i en atferd kammer, eller noen avsidesliggende miljø som er stille og satt til 25 ° C og 60 - 65% RH. Holde fuktighet over 50% er svært viktig, siden frieri og paring atferds er avhengig av feromon sensing, som er kjent for å være følsomme for fuktighet.
- Starte eksperimentet så nær som mulig til begynnelsen av den lette fasen i inkubatoren. Plasser trener kvinner (både jomfru og parret) i oppførselen kammeret.
- Utsette mannlige fluer til givende og nonrewarding erfaringer
- Ordne hetteglass som inneholder enkelt mannlige fluer på mikrosentrifugerør stativer, posisjonering ampullene langs kantene av rack.
MERK: Denne ordningen gjør at eksperimentator å enkelt observere par fluer som gjennomgår copulation uten å ta hetteglassene ut av stativet. - Forbered (som beskrevet i trinn 2.2.1) 2 grupper av 100 hetteglass som inneholder enkeltmanns flyr på separate stativer for menn som gjennomgår givende og nonrewarding parings erfaringer (dvs. avvist og parret).
- Sug trener hunner og legge dem til hvert hetteglass som inneholder mannlige fluer. Sett timeren i 1 time. Fra og med den avviste gruppen, legge til en parret hunn til hvert hetteglass. Deretter gå videre til menn å bli parret og legge til en jomfru hunn til hvert hetteglass.
- Se de tilpassede møter tettå sørge for at hannene i samspill med jomfruelige hunner parrer seg med suksess i den første timen, og at hannene i samspill med de tidligere parret kvinner ikke pare seg. For å overvåke avvist kohort i løpet av en time, satt en annen tidtaker for 15 min og se hannene hvert 15 min.
- Utslipp hannene fra avviste kohorten som klarte å parre seg, og menn fra parret kohort som ikke ender opp med parring ved utgangen av første treningsøkt.
- Fullfør den første treningsøkten ved å aspirere ut tidligere parret kvinnelige trenere til en vanlig flue mat hetteglass, og holde dem for neste condition sesjon. Følg dette trinnet ved å forsiktig aspirere hunnene fra parret mannlige gruppen.
- La fluene hvile i 1 time.
- Gjenta trinn 2.2.3 - 2.2.7 to ganger.
- Gjenta treningsøkt i trinn 2.2.3 - 2.2.8 hver dag for tre mer d.
- Ordne hetteglass som inneholder enkelt mannlige fluer på mikrosentrifugerør stativer, posisjonering ampullene langs kantene av rack.
- Opptak forbruk (CAFE)
- Ved slutten av den siste conditioning session (fjerde dag), aspirer enkelt hanner og gruppere dem inn i kapillær mater ampuller. Bruk en myk plugg for å dekke kapillær materen hetteglasset mens du setter fluene, og erstatte den raskt med ferdige kapillær mater plugg etter alle fluene har blitt satt inn. Gruppe 6 - 8 fluer fra hver av de eksperimentelle grupper i et hetteglass, skaper ikke mindre enn 8 ampuller per tilstand.
- Fukt pluggene ved forsiktig tilsetning av 5 ml vann til toppen av pluggen. Vær forsiktig når du legger til vann for å unngå søl inn i hetteglass. Legg til en lik mengde vann til hver ampulle.
MERK: Dette trinnet er gjort for å redusere fordampning fra kapillærene. Derfor er det gjentatt hver dag for resten av forsøket. Avhengig av den relative luftfuktigheten, kan følgende dager krever mindre vann som skal tilsettes til pluggene. - Fremstille to separate matvare løsninger ved tilsetning av etanol eller vann til de lager matvare alikvoter for å lage en sluttkonsentrasjon på 15%.
- For å fylle capillværen med de to mat løsninger, skape 5 ul flytende matvare faller på en laboratorie filmremsen og tillate oppløsningen å fylle kapillær til den når 5 ul merket. Sørg for å bruke den klare enden av kapillært, som ligger i nærheten av 5 mL svart merke linje.
MERK: For å fylle flere kapillærer på en gang, er det mulig å koble 6 - 8 kapillær adaptere sammen og bruke dem som et innstikk til å holde kapillærene. - Trykk kapillærene forsiktig på parafin stripen for å plassere maten løsning nøyaktig på det svarte merket. Forsegl kapillarene ved å dyppe enden av hver kapillar i små dråper mineralolje. Dette trinnet reduserer potensielle fordampning av mat oppløsning.
- Sett to etanolholdig kapillærer og to nonethanol inneholder kapillærer gjennom de 4 adaptere / holdere i pluggen til de utsatte sidene av kapillærene knapt titte fra det indre av hetteglasset (1 mm eller mindre fra pluggen overflate).
NOTAT:Holde åpningen av kapillærene nær våt plugg reduserer fordampning og gir enkel tilgang til mat, som fluer normalt sitte på pluggene og klatre ned på den eksponerte kapillær å mate. - I tillegg til hetteglass som inneholder eksperimentelle fluer, utarbeide en mock hetteglass uten fluer. Denne kontrollen tjener til å vurdere naturlig fordampning.
MERK: Prøv å opprettholde relativt lik plassering av kapillær åpning i forhold til pluggene, som forskjeller kan føre til variable fordampning og villedende forbruksdata. Opprettholde tilstrekkelig fuktighet i løpet av eksperimentet og posisjonere kapillære åpninger så tett som mulig til den våte plugg, som lav fuktighet og stor avstand fra det våte pluggen kan både resultat i ukontrollerte fordampning. - Ta opp den relative posisjon av væsken i hver av de kapillærer i forhold til den sorte streken i mm ved hjelp av en linjal, og skrive disse verdiene ned.
MERK: Hvis løsningen er plassert nøyaktig på den svarte line, bør verdien være lik null, og hvis den er over eller under, bør det være positive eller negative verdier, henholdsvis. De første nivåene av væsken sette referansepunkter for endelig O / N forbruksverdier. - Still ampuller tilbake i inkubatoren i 24 timer. Skift kapillærer ved en konstant tid gjennom hele forsøket.
- Fjern de kapillærer forsiktig fra ampullene og måle nivået av væske i forhold til den svarte markeringslinjen.
- Nøye kontrollere væskenivået i mock hetteglasset.
MERK: Hvis nivåene falt mer enn 2 mm, indikerer det at fordampningen er høy og forbruksnivået er ikke pålitelige. - Fukt pluggene forsiktig med 2 ml vann og sette inn et nytt sett med kapillærer, som angitt i trinn 2.3.3 - 2.3.10. Still ampuller tilbake i inkubatoren i 24 timer.
- bestemme preferanse
- Beregn det totale forbruket av hver kapillar ved å subtrahere den endelige nivå fra den initial nivå ved startpunktet.
- Kombiner verdiene av begge kapillærer med samme mat (dvs. nonethanol kapillærer separat fra etanol-inneholdende kapillærer).
- Beregn etanol preferanse ved å trekke beløpet konsumert fra de ikke-etanol kapillærer fra mengden konsumert fra etanolholdig kapillærer og dele verdien av de totale forbruksverdier fra alle kapillærene i samme hetteglass.
- Gjennomsnittlig preferanse indeksene til alle ampuller med samme eksperimentelle gruppen.
MERK: Nonethanol 1 (NE1), Nonethanol 2 (NE2), Etanol 1 (E1), Etanol 2 (E2), Total nonethanol (Total NE) = NE1 + NE2, Total etanol (Total E) = E1 + E2, Total sum forbruk (Total Sum) = Total NE + Total E, og etanol preferanse Index (PI)
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
FPreviously, Devineni et al. viste at når fruktfluer er gitt valget mellom å konsumere etanolholdig mat, viser de en sterk preferanse for etanolholdig mat over nonethanol inneholder mat 6. Vist her er noen representative resultatene vi oppnådde ved analysering av medfødt etanol preferanse for naive mannlige fluer som ikke gjennomgår opplæring protokollen.
Naive Canton S mannlige fluer ble samlet inn ved eklosjonshormon, alderen til fire dager gammel, og analysert for deres medfødte preferanser å konsumere etanol i løpet av 4 d (figur 2). Analysere mengder konsumert fra etanol- og nonethanol holdige løsninger viser at fluer utstillings en robust preferanse for forbruker 15% etanol mat over nonethanol mat (figur 2).
Ved hjelp av motstridende seksuellerfaringer, har vi tidligere vist at mannlige fluer som fikk lov til å pare seg i grupper ( "parret-gruppert") skjerm lavere etanol preferanse enn enkeltvis-plassert hanner som ble avvist av tidligere parret kvinner ( "forkastet-isolert"). Vi har brukt flere kontroller for å frakople huset erfaring fra den sammenpassende-relatert erfaring og viste at differensial preferanse er et resultat av den sammenpassende erfaring 5.
Ved hjelp av trening protokollen beskrevet her, vi genererte enkeltvis-paret og forkastet mannlige fluer som gjennomgikk lignende bolig- og paring regimer. Enkelt mannlige Canton S fluer ble utsatt i løpet av fire d til ulike parring opplevelser. En kohort av hannene fikk lov til å samhandle og pare seg med jomfruelige kvinnelige fluer (single parret kohort), og den andre kullet ble trent med tidligere parret kvinnelige fluer (single avvist kohort). Etter opplæringsfasen, single menn from de to kohortene ble gruppert (8 / hetteglass) og plassert i kapillær mater ampuller; deres frivillig etanolforbruk ble registrert for 4 d (figur 3A). Preferansen for å konsumere etanol ble beregnet fra forbruksdata ved bruk av formelen i trinn 2.4 (figur 3B). Positive verdier indikerer preferanse for etanolholdig mat, og negative verdier indikerer aversjon mot etanolholdig mat.
Den nåværende eksperimentet støtter våre tidligere funn, noe som tyder på at seksuell erfaring, og ikke bolig tilstand, modulerer etanol forbruk. Vellykket parring øker interne belønnings nivåer, noe som i sin tur senker etanol forbruk. Avslag, oppfattet som mangel på belønning, føre til en økning i belønningssøkende atferd (Figur 3B).
Figur 2. Et eksempel på medfødt preferanse å konsumere Etanol. Naive WT hanner ble gruppert i grupper på åtte hanner / ampulle, og deres forbruk av etanol- og nonethanol holdige oppløsninger ble registrert i løpet av 96 timer. Fluene forbrukes en større mengde av 15% etanol som ing mat (** P <0.01, *** p <0,001, to-veis gjentatte tiltak ANOVA med Bonferroni post-tester, n = 8). Data som vises er gjennomsnittet + SEM eller mener - SEM. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 3. motstander Mating Erfaringer mModulate Etanol preferanser. (A) Skjematisk fremstilling av den kombinerte protokollen. Enkelt jomfru WT menn har lov til å parre seg med jomfru hunner eller blir utsatt for 3x 1t frieri-undertrykkelse treningsøkter (avbildet som "T") adskilt med 1 time med hvile (avbildet som "R"). Trening gjentas for 4 d. Ved slutten av hver dag, blir fluene plasseres i inkubatoren (angitt som "PÅ"). Etter 4 d med trening, ble hannene plassert i hetteglass der de kunne velge å mate frakapillærer som inneholder mat løsninger med eller uten 15% etanol. (B) Enkelt avvist menn viste høyere etanol preferanse enn enkelt parret menn (** p <0,01, to-veis gjentatt tiltak ANOVA med Bonferroni post-tester, n = 9, sammenligninger er mellom behandlingsgruppene over 3 d etter utløpet av opplæring). Data som vises er gjennomsnittet + SEM eller mener - SEM. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
| Referanse seksjon | Merknader |
| 1.1 | Kan brukes i mange eksperimenter |
| 1.2 | Kan holdes i 4 ° C i flere uker |
| 1.3 | Hold 4 ° C etter autoklav |
| 1.4 | I alderen 3 - 4 d førsom brukes i eksperimentet |
| 1.5 | Dette trinnet bør skje kvelden før hver treningsøkt |
| 2.1 | Dette trinnet bør skje morgenen hver treningsøkt |
| 2.2 | Å bli gjentatt i 3 påfølgende treningsøkter i løpet av 4 d |
| 2.3 | Dump pluggene med vann, måle forbruk og erstatte kapillærene i løpet av 4 d |
| 2.4 | Dette trinnet er gjort hver gang før du skifter kapillærene i løpet av to-valg assay |
Tabell 1. Oversikt over protokollen som viser rekkefølgen og tidsforløpet for de forskjellige trinnene.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Acknowledgments
Vi takker U. Heberlein og A. Devineni for langvarige diskusjoner og tekniske råd. Vi takker også Shohat-Ophir lab medlemmer, A. Benzur, L. Kazaz, og O. Shalom, for hjelpen med å demonstrere metoden. Spesial takknemlighet går til Eliezer Costi for å etablere flue systemene i laboratoriet. Dette arbeidet ble støttet av Israel Science Foundation (384/14) og Marie Curie Career Integration Grants (CIG 631 127).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Polystyrene 25 x 95 mm Vials | FlyStuff | 32-109 | |
| narrow plastic vials flugs | FlyStuff | 42-102 | |
| Disposable Sterile Needle 18 G and 27 G | can be acquired by any company | 1.20 X 38 mm (18 G x 1 1/2") , 0.40 X 13 mm (27 G x 1/2") | |
| 10 x 75 mm Borosilicate Glass Disposable Culture Tubes | kimble chase | 73500-1075 | |
| calibrated pipets 5 μL | VWR | 53432-706 | color coded white to contain 5 μL |
| Mineral Oil | Sigma-Aldrich | M5904 | |
| Sucrose, Molecular Biology Grade | CALBIOCHEM | 573113 | |
| Yeast extract Powder for microbiology | can be acquired by any company | ||
| Ethanol | Sigma-Aldrich | 32221 | |
| standard pipette Tips (micro-pipetts) | ThermScientific | T114R-Q | volume: 0.1 - 20 μL (ultramicro) |
| IDENTI-PLUGS (Foam Tube Plugs) | Jaece | L800-A | fits opening 6 - 13 mm |
| IDENTI-PLUGS (Foam Tube Plugs) | Jaece | L800-D | fits opening 35 - 45 mm |
| virginator fly stock | bloomington drosophila stock center | #24638 | |
| Narrow Vials, Tray Pack (PS) | Genesee Scientific Corporation | # 32-109BR | |
| Drosophila Media Recipes and Methods | Bloomington Drosophila Stock Center | http://flystocks.bio.indiana.edu/Fly_Work/media-recipes/molassesfood.htm | |
| propionic acid | Sigma-Aldrich | P5561 | |
| phosphoric acid | Sigma-Aldrich | W290017 | |
| Methl 4-Hydroxybenzoate | Sigma-Aldrich | H3647 | |
| Agar Agar | can be acquired by any company | ||
| corn meal | can be acquired by any company | ||
| Grandma's molasses | B&G Foods, Inc | not indicated | |
| instant dry yeast | can be acquired by any company |
References
- Robinson, G. E., Fernald, R. D., Clayton, D. F. Genes and social behavior. Science. 322, 896-900 (2008).
- Koob, G. F. Neurobiological substrates for the dark side of compulsivity in addiction. Neuropharmacol. 56, Suppl 1 18-31 (2009).
- Kaun, K. R., Devineni, A. V., Heberlein, U. Drosophila melanogaster as a model to study drug addiction. Hum Genet. 131, 959-975 (2012).
- Devineni, A. V., Heberlein, U. Addiction-like behavior in Drosophila. Commun Integr Biol. 3, 357-359 (2010).
- Shohat-Ophir, G., Kaun, K. R., Azanchi, R., Mohammed, H., Heberlein, U. Sexual deprivation increases ethanol intake in Drosophila. Science. 335, 1351-1355 (2012).
- Devineni, A. V., Heberlein, U. Preferential ethanol consumption in Drosophila models features of addiction. Curr Biol : CB. 19, 2126-2132 (2009).
- McBride, S. M., et al. Mushroom body ablation impairs short-term memory and long-term memory of courtship conditioning in Drosophila melanogaster. Neuron. 24, 967-977 (1999).
- Ejima, A., Smith, B. P., Lucas, C., Levine, J. D., Griffith, L. C. Sequential learning of pheromonal cues modulates memory consolidation in trainer-specific associative courtship conditioning. Curr Biol. 15, 194-206 (2005).
- Ejima, A., et al. Generalization of courtship learning in Drosophila is mediated by cis-vaccenyl acetate. Curr Biol. 17, 599-605 (2007).
- Keleman, K., Kruttner, S., Alenius, M., Dickson, B. J. Function of the Drosophila CPEB protein Orb2 in long-term courtship memory. Nat Neurosci. 10, 1587-1593 (2007).
- Kaun, K. R., Azanchi, R., Maung, Z., Hirsh, J., Heberlein, U. A Drosophila model for alcohol reward. Nat Neurosci. 14, 612-619 (2011).
- Xu, S., et al. The propensity for consuming ethanol in Drosophila requires rutabaga adenylyl cyclase expression within mushroom body neurons. Genes Brain Behav. 11, 727-739 (2012).
- Devineni, A. V., Heberlein, U. The evolution of Drosophila melanogaster as a model for alcohol research. Annu Rev Neurosci. 36, 121-138 (2013).
- Ro, J., Harvanek, Z. M., Pletcher, S. D. FLIC: high-throughput, continuous analysis of feeding behaviors in Drosophila. PloS one. 9, 101107 (2014).
- Itskov, P. M., et al. Automated monitoring and quantitative analysis of feeding behaviour in Drosophila. Nat Commun. 5, 4560 (2014).
- Yapici, N., Cohn, R., Schusterreiter, C., Ruta, V., Vosshall, L. B. A Taste Circuit that Regulates Ingestion by Integrating Food and Hunger Signals. Cell. 165, 715-729 (2016).
- Peru, Y. C., et al. Long-lasting, experience-dependent alcohol preference in Drosophila. Addict Biol. 19, 392-401 (2014).
- Dus, M., et al. Nutrient Sensor in the Brain Directs the Action of the Brain-Gut Axis in Drosophila. Neuron. 87, 139-151 (2015).
- Anderson, D. J., Adolphs, R. A framework for studying emotions across species. Cell. 157, 187-200 (2014).
- Gibson, W. T., et al. Behavioral responses to a repetitive visual threat stimulus express a persistent state of defensive arousal in Drosophila. Curr Biol. 25, 1401-1415 (2015).
