Introduction
Инфаркт миокарда (ИМ) является ведущей причиной смерти и инвалидности во всем мире. Ишемическая болезнь сердца является основной причиной; MI приводит к ишемии последовательных коронарных событий, таких как окклюзии. Когда реперфузионного не выполняется в течение первых 6 ч, ишемия вызывает необратимый некроз миокарда. У пациентов, характеристика инфаркта миокарда зависит от различных диагностических инструментов, включая клинические признаки, электрокардиографии, оценка плазменных уровней биомаркеров, эхокардиография, МРТ и гистологического анализа 1. Острые и хронические MI классифицируются как две разные фазы травмы в зависимости от сроков некроза миокарда относительно времени окклюзии коронарной артерии. Острая фаза, происходит в течение первых 7 дней, связано с потерей кардиомиоцитов, обширные воспаления, а также набора фибробластов. Подострой фазы, характеризуется заживлению сердечной ткани и формирование рубца, происходитот 1 до 4 - 6 недель. Расширение инфарктом, желудочек утонением стенки и дилатацией желудочков характеризуют хроническую фазу. Обширный ремоделирования левого желудочка прогрессивно приводит к тяжелой сердечной недостаточности 2.
М. И. индуцированное постоянным левой передней нисходящей артерии (LAD) перевязки представляет собой стандартную модель грызуна хронического инфаркта миокарда. Коронарные лигатур подражает коронароокклюзии. Размер инфаркта зависит от места лигатуры. Характеристика миокарда ишемического повреждения в модели грызуна классически осуществляется с использованием плазменных уровней биомаркеров, таких как тропонин I и Т 3, эхокардиография, МРТ, гистологии и 4,5. уровни биомаркеров коррелируют со степенью смерти кардиомиоцитов. Эхокардиография оценивает нарушения функции левого желудочка в результате региональных аномалий движения стенки. Кроме того, неинвазивных методов визуализации, таких как МРТ или высокого разрешенияэхокардиография, позволяют оценивать сокращения движения стенки, объем области рубца с пониженной перфузией и жизнеспособного миокарда, а также утонением стенки. Размеры LV позволяют точную оценку размера инфаркта. И, наконец, определение количества жизнеспособных и мертвую миокарда может быть выполнена с использованием специфических вскрытие пятна гистологических срезов добываемых сердца и позволяет проверить размер инфаркта (ИР). Еще одной важной особенностью является оценка индекса расширения инфарктов (EI) 6. ЭИ связан с трансмурального инфаркта и начинается в течение первых 3-х дней. EI характеризуется прогрессирующим уменьшением толщины стенки, увеличение размеров полости ЛЖ, и последующие изменения в форме ЛЖ.
Для оценки терапевтической эффективности новых методов лечения - в частности, регенеративные стратегии на основе клеток, матриц, и ген-доставки точная оценка ИМ у грызунов имеет первостепенное значение.При измерении на одном поперечном сечении, полученной на уровне папиллярных мышц, размер может быть неточными в связи с большой изменчивостью, которая существует в развитии инфаркта следующие ЛАД перевязки; апекс Инфаркт может быть затем затемнена. Важно отметить, что более точные методологии для определенной размера MI были описаны для мышей или крыс 7-9 10. Тем не менее, IS недостаточно для точного количественного определения ремоделирования ЛЖ или терапевтически индуцированные сокращения (или) предупреждения ремоделирования. В самом деле, обычно выражается в процентах от общего объема ЛЖ, оцениваемой сечениях сердца. Хотя этот метод действует для острого инфаркта миокарда, истончение стенки ЛЖ , произошедшей в ходе ремоделирования остается под оценивали 11,12. Полный морфометрического Количественное размера инфаркта и структурных изменений следует провести количественную оценку нескольких параметров, таких как эндокарда и эпикарда длины и диаметра, а также инфаркту и здоровых районов. Описан методологический провертренере, чтобы точно оценить ИМ и ремоделирования в хронической крысиной модели.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Все животные получали гуманного ухода в соответствии с Европейской конвенцией по уходу за животными. Хирургические процедуры были выполнены в соответствии с Законом о швейцарской охране животных после получения разрешения Государственной ветеринарной службы, Фрибург, утвержденным Швейцарского Федерального ветеринарного бюро, Швейцарии.
1. Сердце Уборочная
ПРИМЕЧАНИЕ: Все хирургические вмешательства проводились под анестезией изофлуран. Были предприняты усилия, чтобы уменьшить страдания животных. В частности, все животные получали подкожную инъекцию 0,1 мг / кг бупренорфина предоперационного. Хирургический протокол для индуцирования инфаркта миокарда был описан ранее в другом месте 13.
- Выполните стернотомию на myocardially инфарктом животных под наркозом (интубированного животное, 2,5% изофлуран, собственно анестезии подтверждается лапой пинч рефлекса).
- Открыть животное путем резки кожи, а затем мышцыс хирургическими ножницами. Нарезать ребра слева и справа, а затем удалить грудь.
- Удалите спаек оставшиеся после предыдущей операции (ЛАД лигирования). Вырезать аорту и удалить сердце. Поместите ткань в 1 М KCl (в PBS), а затем промыть его с PBS.
2. Подготовка ткани
- Поместите инфарктом сердца в продольном направлении в акриловой матрице сердца крысы. Хранить ее при -20 ° С в течение 1 часа.
- Вырезать сердце непосредственно в матрице, используя лезвие бритвы с поперечно. Убедитесь, что каждый ломтик толщиной 2 мм. Вырезать приблизительно 5 - 7 слайдов для каждого сердца (на основе уровня ремоделирования); это называется систематический отбор.
- На этом этапе выполнения окрашивания 2,3,5-трифенилтетразолий (TTC) является необязательным (сохранить ориентацию срезов сердца основанием к вершине).
- Выдержите в 1% ТТС в PBS в течение 50 мин при 37 ° С. Выдержите его в 4% параформальдегида (PFA) в течение 20 мин до 1 ч. Положите секции betweeп две стеклянные пластины с 2-мм прокладками и снимать с стереологического микроскопа в сочетании с камерой при 15X увеличении.
ВНИМАНИЕ! Параформальдегид является токсичным.
- Выдержите в 1% ТТС в PBS в течение 50 мин при 37 ° С. Выдержите его в 4% параформальдегида (PFA) в течение 20 мин до 1 ч. Положите секции betweeп две стеклянные пластины с 2-мм прокладками и снимать с стереологического микроскопа в сочетании с камерой при 15X увеличении.
- Slide заморозка (1 - й вариант)
- Поместите каждый слайд в пластиковые формы (10 х 10 х 5 мм) с монтажной средой для cryotomy (оптимальная температура резания, ОКТ), сохранить ориентацию (поместите апекс-ориентированной стороне секции вниз на дно формы). Замораживание блоки с парами 2-метилбутан под жидким азотом охлаждения в течение 10 - 15 мин. И, наконец, хранить ткань при температуре -80 ° С.
- Paraffinization (2 - й вариант)
- Поместите каждый слайд в встраивание кассеты (поддерживать ориентацию путем размещения апекс-ориентированной стороне секции вниз на нижней части кассеты), а затем в 4% PFA в течение 24 часов. Положите его в машине на ночь процессор ткани.
- Выдержите его в этаноле 70% в течение 2 часов. Выдержите его в Этанол 95% в течение 2 часов. Выдержите его в этаноле на 100% в течение 3 часов. Выдержите его в ксилоле в течение 4 часов. Выдержите его в парафин (расплавленной при 60 ° С в печи) в течение 5 часов. И, наконец, сделать блоки путем встраивания каждого сердца слайд в парафин.
- Поместите каждый слайд в встраивание кассеты (поддерживать ориентацию путем размещения апекс-ориентированной стороне секции вниз на нижней части кассеты), а затем в 4% PFA в течение 24 часов. Положите его в машине на ночь процессор ткани.
3. Массон-Гольднер трехцветный Окрашивание
- Сделать срезы ткани из парафиновых блоков с ручным микротома (толщина: 5 мкм) или из ОКТ блоков с криостат установлен до -18 ° С (толщина: 7 мкм).
- Пятно один слайд из каждого сердца части для каждой крысы (3 - 4 поперечных срезов на слайде) с Массон-Goldner трехцветный окрашивания (см . Приложение)
ПРИМЕЧАНИЕ: Начните с этого шага для парафиновых срезов.- Растопить слайды при 60 ° С в печи. Под вытяжкой, deparaffinize их в ксилоле два раза в течение 10 минут каждый. Увлажняет их в 100% этаноле, 95% этанола, 70% этанола и дистиллированной воде в течение 3 минут каждый.
ПРИМЕЧАНИЕ: Начните с этого шага для cryosections. - Закрепите их в растворе на ночь Bouin. Затем промойте их в проточной водопроводной воде в течение 10 - 15 мин. Промыть их в дистиллированной воде. Выдержите их в гематоксилином Майера в течение 3 мин.
- Удалить слайды и оставить их в дистиллированной воде в течение 5 мин. Затем, инкубировать их в кислой фуксин-пунцовый в течение 5 мин. Промыть их в 1% -ной уксусной кислоты в течение 1 мин.
- Затем, инкубировать их в фосфорно кислоты Оранжевый G в течение 1 мин. Промыть их в 1% -ной уксусной кислоты в течение 1 мин, инкубировать их в светло-зеленого красителя в течение 10 мин, и полоскание их в 1% -ной уксусной кислоты в течение 1 мин.
- Высушить их в 70% этаноле (30 сек), 95% этанола (30 сек), и 100% этанола (5 мин). Положите одну каплю смолистым монтажной среды на срезах тканей, покрывают их покровные, и дайте им высохнуть.
- Растопить слайды при 60 ° С в печи. Под вытяжкой, deparaffinize их в ксилоле два раза в течение 10 минут каждый. Увлажняет их в 100% этаноле, 95% этанола, 70% этанола и дистиллированной воде в течение 3 минут каждый.
4. Инфаркт Размер Анализ
- Приобретайте одно изображение из каждого слайда на стереомикроскопа (15x увеличение) в сочетании с камерой. Сфотографировать линейку с той же настройкойs.
- С помощью программного обеспечения для анализа изображений для измерения толщины рубец в середине инфарктом, толщина перегородки, области полости левого желудочка (ЛЖ), области инфаркта, а также область ткани левого желудочка с использованием.
- Установите шкалу с линейкой изображения (рисунок 1А).
- Нажмите по измерениям затем выберите Set Коэффициент преобразования. Нарисуйте линию на панели калибровки. Щелкните правой кнопкой мыши на картинку и нажмите на End калибровки. Обратите внимание на значение бар, а затем нажмите кнопку OK.
- Выберите LV из окрашенного сердца картины (рис 1B). Используйте Multiple инструмент сегмента. Выберите точку за точкой левого желудочка, а затем щелкните правой кнопкой мыши Копировать / Вставить в любом месте.
- Измерьте толщину рубца и перегородку с помощью инструмента измерения одного сегмента (рис 1C
- Автоматическое определение LV полости, инфаркт, и LV областей с помощью инструмента автоматического измерения площади в режиме RGB (Рисунок 1D).
- Нажмите на инструмент. Активировать только границы и Прилежащей в режиме RGB. Наконец, щелкните внутри области, представляющей интерес для его обнаружения. При необходимости, используйте точных инструментов.
- Установите шкалу с линейкой изображения (рисунок 1А).
- Вычислить размер инфаркта, как отношение площади инфаркта к площади ЛЖ.
- Вычислить индекс расширения следующим образом: [площадь полости ЛЖ / вся область LV] / [толщина инфаркта / толщина перегородки], со всей области ЛЖ, включая как полости ЛЖ и областей ткани ЛЖ.
- И, наконец, вычислить «средний» для каждого сердца следующим образом: [среднее значение индекса расширения с инфарктом слайдов] * [Количество инфарктом слайдов / общее количество слайдов].
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Через шесть недель после ЛАД лигирования, сердца собирали из крыс Льюиса. Срезы ткани 2-мм были получены от вершины до основания. TTC процедура окрашивания была выполнена для визуализации области инфаркта, который появляется в белом цвете, а здоровый миокард, который отображается красным цветом (Рисунок 2). В зависимости от места перевязки ЛАД, размер инфаркта изменяется. При больших ИМ, наблюдались трансмуральных инфаркты от вершины до основания (Рисунок 2А). Более мелкие инфаркты представлены белую ткань пораженного инфарктом видимый от вершины до средней части сердца (Фигура 2В). Для небольших , не трансмуральных инфарктов, фиброзных тканей наблюдалось только на одной или двух секций от вершины (рис 2C).
Тонкие 5-мкм срезы каждого среза сердца разрезали и окрашивали Массон-Goldner трихромом. Фотографии всему поперечному сечению сердца былиприобрела под стереомикроскопа (рисунок 3). Здоровые ткани появились в красном и соединительной ткани в зеленый цвет. Различение каждого цвета может быть легко выполнена с программным обеспечением для анализа изображений.
Толщины инфарктом и перегородку, площадь полости ЛЖ и общей площади ЛЖ были измерены и вычислены для расчета EI (таблица 1). EI рассчитывался для каждого раздела. В зависимости от размера сердца, количество секций варьируется от 5 до 7. Для каждого сердца, EI представляет собой среднее значение ЭИ из каждой секции. ЭИ варьировали от 0 до 0,278 и выявили широкий спектр инфарктов миокарда, с CV 58%. Для сравнения, средний процент инфаркта к ЛЖ варьировала от 0 до 0,241, с CV 54% (Таблица 1). EI и процент инфаркта значительно коррелируют; непараметрический анализ Спирмена при условии, коэффициент корреляции г-ваLUE из 0,491 (р = 0,005) (рис 4A). При близких значениях EI, таких как 0,11 и 0,13, процент инфарктом варьировала от 5,8 до 24,1%.
Функция сердца оценивали с высокой разрешающей способностью эхокардиографии через 6 недель после ЛАД перевязки на наркотизированных животных и проводили один раз до сбора урожая сердца. EI рассчитывается по гистологической количественной оценки достоверно коррелирует с EF. Непараметрический анализ Спирмена при условии , г-значение -0.709 (р = 0,005) (рис 4б).
Рисунок 1. Шаг за шагом Иллюстрация использования анализа изображений программного обеспечения. Автоматический цвет размежевание и длины измерения включали в себя несколько стадий. A. Калибровка: Масштаб изображения был создан. Картинаправитель был взят в том же состоянии, что и секции сердца. Длина линейки был отмечен, чтобы определить масштабный коэффициент конверсии. Переход от пикселя в миллиметрах была выполнена. B. Выбор LV: Правый желудочек был вырезан из изображения с помощью инструмента выбора программного обеспечения. С. Л. Измерение стены и перегородки Толщина: Единственный инструмент измерения был использован для количественного определения расстояний. Масштабные полоски указывают на 3 мм. D. Автоматическая площадь Количественное: Автоматическое определение границ цвета проводилось в режиме RGB. Автоматический выбор был выполнен после выбора режим автоматического выбора. Выбор цвета на основе могут быть изменены; исследователь осуществляется визуальный контроль выбранного зеленой ткани и увеличивать или уменьшать выбранный регион по мере необходимости. Масштабные полоски указывают на 3 мм. Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры. 
Рисунок 2. Сердце Секции Окраска ТТС. 2-мм секции полного сердца окрашивали TTC. Здоровый миокард появился в красном и фиброзных тканей в белом. Три сердца с различными размерами инфаркта представлены. A: большой трансмуральный инфаркт, B: средняя инфарктов и C: маленький инфаркт. Масштабные полоски указывают на 3 мм. Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.
Рисунок 3. Сердце срезах , окрашенных Массон-Goldner Trichrome. участки 5 мкм вырезают из каждой секции сердца, полученного через 6 недель после ЛАД перевязки. станцияIned участки были помещены под стереомикроскопа. Фотографии полных сечений были получены с 15X увеличением. Показательная картина, полученная на уровне папиллярных мышц (спина стрелка), показывает здоровый миокард в красных и фиброзных тканей в зеленый цвет. Картина иллюстрирует автоматический цвет размежевание с программным обеспечением для анализа изображений, а также сайт, на котором были измерены толщина инфарктов и перегородку (черные линии). Масштабные полоски указывают на 3 мм. Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.
Рисунок 4. Корреляция между расширительным Index (EI) и процент от Инфаркт , связанных с ЛВ (А) или фракция выброса (EF) (B). Линейной регрессии (черная линия) и 95% Confideпредставлены интервалы NCE (пунктирные линии). Непараметрический Спирмен г-значение сообщается. A: Процент инфаркта и EI достоверно коррелирует (г = 0,567; р = 0,003). Индекс расширения инфарктов (EI) была рассчитана как [области левого желудочка полости / вся область LV] / [толщина инфарктом / толщина перегородки]. Вся область LV была измерена как комбинированная ЛЖ полости и области ткани левого желудочка. Процент инфаркта рассчитывают как площади область ткани, LV / инфарктом ткани. B: Функция оценивали через 6 недель после ЛАД перевязки с использованием высокого разрешения эхокардиографию значительно коррелирует с EI. Оба параметра были достоверно коррелировали (г = -0,709; р = 0,005). Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.
Таблица1: Параметры на Массон Гольднер-окрашенными Сердце секций.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Критические шаги в рамках Протокола
Фиброзной ткани могут быть точно оценены в хронической крысиной модели MI с использованием систематической выборки собранного сердца и образа анализа трехцветных окрашенных гистологических срезов, полученных от основания к вершине. Два шага особенно важны для успешной реализации протокола. Во-первых, использование KCl для уборки сердца позволяет сердечной мышцы, чтобы поддерживать в ненапряженном состоянии. Этот шаг важен для сравнений размеров инфарктом из разных сердец. Во-вторых, в течение ночи фиксации секции в растворе Bouin имеет решающее значение для получения ярко трехцветный окрашивания.
Модификации и устранение неисправностей
Отсутствие окрашивания может быть из-за трудностей во время фиксации секции в растворе Bouin, такие как снижение времени инкубации или истек растворы Буэна. TTC окрашивания является необязательным и Клd использоваться для визуализации размер инфаркта в быстром, но не количественно. Важно отметить, что ТТС может быть выполнена для того же сердца перед включением в любом OCT или парафином.
Ограничения техники
Рассмотренный подход позволяет одному выбирать между залитых парафином и крио-консервированный отделов сердца и может быть использован для иммунологического окрашивания. Тем не менее, полное сердце должно быть разрезали, и ткань не могут быть использованы для дальнейшего анализа, например, вестерн-блоттинга или ОТ-ПЦР на содержание белка и экспрессии генов анализов.
Значимость техники в отношении существующих / альтернативных методов
Поскольку процедуры количественной оценки и, в частности, число анализируемых участков сильно различаются между исследованиями, определяя минимальное число секций, необходимых для получения надежной Количественное имеет первостепенное значение. Takagawa ет и др. 9 показано , что надежность является максимальным с минимальным сердца ломтика количестве 6 - 8 секций всего сердца мыши с использованием интервалов 1-мм. В настоящем протоколе, 5 - 7 секций всего сердца крысы были получены при выполнении 2-мм толщиной секционирования. Кроме того, 2-мм секции являются стандартными и часто используется размер для TTC окрашивания. Кроме того, системная выборка проста в применении и представляет собой периодический аспект, который позволяет характеристику всего сердца.
От каждого из ломтиков 2 мм, 5 мкм срезы и окрашивали. Для каждой секции 5 мкм, количественное определение толщины перегородки, толщина рубца и длины, общая площадь рубца, общая площадь LV, и площадь полости ЛЖ были выполнены, и среднее значение каждого параметра рассчитывали на одно животное. Мы использовали Массона-Гольднер окрашивания тонких срезов, а не TTC окрашивания срезов 2-мм для повышения точности как автоматического обнаружения цвета и оценкидлин. Действительно, ТТС окрашивания в основном интересен для ранней фазы или ишемических модели реперфузионных для обнаружения зоны риска 8,14, а не на хронической стадии.
М. И. индуцированное из ЛАД перевязки может меняться в зависимости от лигатуры сайта. В представленной модели хронической миокарда, размер Лигирование намеренно модифицирована для каждого животного, и результаты для различных условий размера инфаркта и ремоделирование присутствовали через 6 недель. Соответственно, рассчитанное ЭИ показало широкий спектр инфарктов миокарда и поддерживается наблюдаемая разница в сердечной функции коррелируют с EF. Когда обширные истончение инфарктом сегмента произошло, площадь инфаркта была значительно снижена в случае трансмурального фиброза. В этом состоянии, определяя размер инфаркта путем вычисления площади инфаркт- ткани по отношению ко всей ЛЖ (выраженное в процентах от ЛЖ) будет слабо оценить степень инфарктом. Отсутствие Consideration для ремоделирования индуцированных ЛЖ дилатация и экстремальных истончение миокарда стенки левого желудочка может недооценивать размер инфаркта, в то время как инфаркт присутствует в отсутствие утонением стенки будет переоценивать размер инфаркта, как представлено значениями за пределами 95% уверенности в промежуток. Этот недостаток может быть устранен путем расчета EI.
Было показано , что изменение формы ЛЖ положительно коррелирует с EI и утонением стенки 15, 16. Хотя EI может быть предвестником функции ЛЖ, важно подчеркнуть, что эхокардиографию и гистологические анализы являются взаимодополняющими методов оценки инфаркт миокарда на функциональном уровне и ткани, соответственно. Эхокардиография позволяет продольное исследование, а также гистологическое анализы обеспечивают фундаментальные анализы конечных точек, которые позволяют количественно оценить дополнительные морфологии ЛЖ, такие как толщина стенки.
Будущие приложения или направления на кормеэр Овладение этой техники
Системная выборка всего сердца и вычисление EI представляют особый интерес при оценке хронического ИМ. Кроме того, этот метод будет пригоден для оценки эффективности лечения, в частности, для новых методов лечения, таких как клеточно и матрицы на основе процедуры, которые направлены на уменьшение размера инфаркта и ремоделирование. Надежное количественное определение расширения зоны инфаркта имеет первостепенное значение для сравнения между необработанными и обработанными животными, в качестве конечной точки гистологический анализ исключает сравнение размера инфаркта до и после лечения.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Acrylic rat heart matrix 2 mm | 72-5015 | Harvard Appartus | |
| Inspira advanced volume controlled ventilator | Harvard Apparatus | 557058 | |
| Catheter Insyte 14 G | BD | 381267 | |
| O.C.T | BDHA361603E | VWR | |
| TTC | T8877-10G | Sigma Aldrich | |
| Mayer hematoxylin | MHS32-1L | Sigma Aldrich | |
| Acid Fuchsin CI 42685 |
F8129-50G | Sigma Aldrich | |
| Ponceau Xylidin CI 16150 |
P2395-25G | Sigma Aldrich | |
| Orange G CI 16230 |
O3756-100G | Sigma Aldrich | |
| Light green CI 42095 |
L5382-25G | Sigma Aldrich | |
| KCl | P9333-500G | Sigma Aldrich | |
| Xylol | 10315083 | HoneyWell | |
| Ethanol absolute | 10303990 | HoneyWell | |
| 2-methylbutane | M32631-1L | Sigma Aldrich | |
| Stereogical microscope | SM2800 | Nikon | |
| Formaldehyde | 99340 | Reactolab | |
| Embedding cassette | K113.1 | Carl Roth | |
| Bersoft Image measurement Software | Bersoft.com | Licensed software |
References
- Amsterdam, E. A., et al. AHA/ACC Guideline for the Management of Patients with Non-ST-Elevation Acute Coronary Syndromes: a report of the American College of Cardiology/American Heart Association Task Force on Practice Guidelines. J Am Coll Cardiol. 64, e139-e228 (2014).
- Konstam, M. A., Kramer, D. G., Patel, A. R., Maron, M. S., Udelson, J. E. Left ventricular remodeling in heart failure: current concepts in clinical significance and assessment. JACC Cardiovasc Imaging. 4, 98-108 (2011).
- Frobert, A., et al. Prognostic Value of Troponin I for Infarct Size to Improve Preclinical Myocardial Infarction Small Animal Models. Front Physiol. 6, 353 (2015).
- Redfors, B., Shao, Y., Omerovic, E. Myocardial infarct size and area at risk assessment in mice. Exp Clin Cardiol. 17, 268-272 (2012).
- Guex, A. G., et al. Plasma-functionalized electrospun matrix for biograft development and cardiac function stabilization. Acta Biomater. 10, 2996-3006 (2014).
- Landa, N., et al. Effect of injectable alginate implant on cardiac remodeling and function after recent and old infarcts in rat. Circulation. 117, 1388-1396 (2008).
- Valente, M., et al. Optimized heart sampling and systematic evaluation of cardiac therapies inmouse models of ischemic injury: Assessment of cardiacremodeling and semi-automated quantification of myocardial infarctsize. Curr. Protoc. Mouse Biol. 5, 359-391 (2015).
- Csonka, C., et al. Measurement of myocardial infarct size in preclinical studies. J. Pharmacol. Toxicol. Methods. 61, 163-170 (2010).
- Zornoff, L. A., Paiva, S. A., Minicucci, M. F., Spadaro, J. Experimental myocardium infarction in rats: Analysis of the model. Arq. Bras Cardiol. 93, 434-440 (2009).
- Lichtenauer, M., et al. Myocardial infarct size measurement using geometric angle calculation. Eur J Clin Invest. 44, 160-167 (2014).
- Lutgens, E., et al. Chronic myocardial infarction in the mouse: cardiac structural and functional changes. Cardiovasc Res. 41, 586-593 (1999).
- Frobert, A., Valentin, J., Cook, S., Lopes-Vicente, L., Giraud, M. N. Cell-based therapy for heart failure in rat: double thoracotomy for myocardial infarction and epicardial implantation of cells and biomatrix. J Vis Exp. , e51390 (2014).
- Takagawa, J., et al. Myocardial infarct size measurement in the mouse chronic infarction model: comparison of area- and length-based approaches. J Appl Physiol (1985). 102, 2104-2111 (2007).
- Fishbein, M. C., et al. Early phase acute myocardial infarct size quantification: validation of the triphenyl tetrazolium chloride tissue enzyme staining technique. Am Heart J. 101, 593-600 (1981).
- Weisman, H. F., Bush, D. E., Mannisi, J. A., Weisfeldt, M. L., Healy, B. Cellular mechanisms of myocardial infarct expansion. Circulation. 78, 186-201 (1988).
- Mannisi, J. A., Weisman, H. F., Bush, D. E., Dudeck, P., Healy, B. Steroid administration after myocardial infarction promotes early infarct expansion. A study in the rat. J Clin Invest. 79, 1431-1439 (1987).
