Introduction
Hjärtinfarkt (MI) är en ledande orsak till död och handikapp i hela världen. Kranskärlssjukdom är den främsta orsaken; MI resultat från ischemi i rad till koronara händelser såsom ocklusion. När reperfusion inte utförs inom de första 6 h inducerar ischemi irreversibel myokardnekros. Hos patienter, karakterisering av MI är beroende av olika diagnosverktyg, inklusive kliniska tecken, EKG, utvärdering av plasmanivåerna av biomarkörer, ekokardiografi, MRI, och histologiska analyser 1. Akut och kronisk Ml klassificeras som två olika faser av skada beroende på tidpunkten för myokardnekros förhållande till tiden för den koronara ocklusionen. Den akuta fasen, som inträffar under de första 7 dagarna, är förknippad med förlust av hjärtmuskelceller, omfattande inflammation, och rekryteringen av fibroblaster. Den subakuta fasen, som kännetecknas av läkning av hjärtvävnaden och bildandet av ett ärr, uppstårmellan 1 och 4 - 6 veckor. Utbyggnad av infarkt, ventrikeln vägg gallring, och kammare dilatation karakterisera den kroniska fasen. Omfattande ombyggnad av den vänstra kammaren resulterar successivt i svår hjärtsvikt 2.
MI inducerad av permanent vänstra främre nedåtgående artär (LAD) ligering representerar standard gnagare modell av kronisk hjärtinfarkt. Krans ligatur härmar koronar ocklusion. Storleken på infarkt beror på platsen för ligatur. Karakterisering av myokardiell ischemisk skada i en gnagarmodell är klassiskt utfördes med användning av biomarkörer plasmanivåer, såsom troponin I och T 3, ekokardiografi, MRI, och histologi 4,5. Biomarkörer nivåer är korrelerade med graden av cardiomyocyte död. Ekokardiografi utvärderar vänsterkammarfunktion till följd av regionala vägg rörelse avvikelser. Dessutom icke-invasiva avbildningstekniker, såsom MRI eller hög upplösningekokardiografi, att en bedömning av minskningen av väggrörelsen, volymen av ärr med minskad perfusion och livskraftiga hjärtmuskeln, och väggen gallring. LV dimensioner tillåta noggrann utvärdering av infarktstorlek. Slutligen kan utföras kvantifiering av livsdugliga och döda hjärtmuskeln obduktion med användning av specifika fläckar av histologiska sektioner av skördade hjärtan och tillåter kontroll av infarktstorleken (IS). En annan viktig egenskap är den utvärdering av infarktexpansionsindexet (EI) 6. EI är associerad med transmural infarkt och startar inom de första 3 dagarna. EI kännetecknas av en gradvis minskning i väggtjocklek, en ökning av LV hålrum storlek, och därmed förändringar i LV form.
För att utvärdera den terapeutiska effekten av nya behandlingar - i synnerhet de regenerativa strategier baserade på celler, matriser och genleverans-korrekt bedömning av MI hos gnagare är av största vikt.När den mäts på ett enda tvärsnitt erhålls vid papillarmuskeln nivå, kan IS storlek vara förspänd grund av den stora variationen som finns i infarkt utveckling efter LAD ligation; apex infarkt kan sedan avskärmas. Viktigt har mer exakta metoder som skall fastställas MI storlek beskrivits för möss 7-9 eller råttor 10. Ändå är otillräcklig för att exakt kvantifiera LV ombyggnad eller terapeutiskt inducerade minskningar (eller preventions) av ombyggnad. I själva verket är vanligen uttryckt i procent av den totala LV volym bedömdes på tvärsnitt av hjärtat. Även om denna metod är giltig för akut hjärtinfarkt, förblir förtunning av LV väggen inträffar under ombyggnad under utvärderas 11,12. En komplett morfometriska kvantifiering av infarktstorlek och strukturella förändringar bör kvantifiera flera parametrar, såsom endokardiella och epikardiella längder och diametrar, samt infarkt och friska områden. Vi beskriver en metod ca.oach att exakt bedöma MI och ombyggnad i en kronisk råttmodell.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alla djur fick human vård i enlighet med den europeiska konventionen om djuromsorg. Kirurgiska ingrepp genomfördes i enlighet med den schweiziska djurskyddslagen efter tillstånd av den statliga veterinärmyndigheten, Freiburg, som godkänts av det schweiziska schweiziska veterinärmyndigheterna, Schweiz.
1. Heart Skörd
OBS: Alla kirurgiska ingrepp utfördes under isoflurananestesi. Ansträngningar gjordes för att minska djurens lidande. I synnerhet, fick alla djur en subkutan injektion av 0,1 mg / kg buprenorfin pre-anestesi. Det kirurgiska protokollet för inducting myokardinfarkt har tidigare beskrivits på annan plats 13.
- Utför en sternotomi på en myocardially infarkt djuret under anestesi (intuberade djur, 2,5% isofluran, korrekt anestesi bekräftas av tass nypa reflex).
- Öppna djuret genom att skära huden och sedan musklernamed kirurgisk sax. Skär revbenen på vänster och höger, och sedan ta bort bröstet.
- Ta bort sammanväxningar som kvarstår efter tidigare operation (LAD ligation). Skär aorta och ta hjärtat. Sätta vävnaden i 1 M KCl (i PBS), och sedan tvätta den med PBS.
2. Vävnadsberedning
- Sätta infarkt hjärtat längsgående i en akrylråtthjärta matris. Hålla den vid -20 ° C under 1 timme.
- Skär hjärtat direkt i matrisen med hjälp av ett rakblad med en tvärgående. Säkerställa varje skiva är 2 mm tjock. Skär ungefär 5-7 bilder för varje hjärta (baserat på ombyggnad nivå); detta kallas systematisk provtagning.
- I detta steg, utför 2,3,5-trifenyltetrazoliumklorid (TTC) färgning är valfritt (hålla orienteringen av hjärt skivor bas-spets).
- Inkubera i 1% TTC i PBS under 50 min vid 37 ° C. Inkubera den i 4% paraformaldehyd (PFA) under 20 min till 1 h. Sätta sektionerna between två glasskivor med 2 mm distanser och ta bilder med en stereologisk mikroskop i kombination med en kamera på 15X förstoring.
FÖRSIKTIGHET! Paraformaldehyd är giftigt.
- Inkubera i 1% TTC i PBS under 50 min vid 37 ° C. Inkubera den i 4% paraformaldehyd (PFA) under 20 min till 1 h. Sätta sektionerna between två glasskivor med 2 mm distanser och ta bilder med en stereologisk mikroskop i kombination med en kamera på 15X förstoring.
- Skjut frysning (1 st tillval)
- Lägg varje bild i en plastform (10 x 10 x 5 mm) med monteringsmedium för cryotomy (optimal skärtemperatur, oktober), bibehålla orienteringen (placera spetsen orienterade sidan av sektionen ner på botten av formen). Frysa blocken med 2-metylbutan ångor under flytande kväve kylning under 10 - 15 min. Slutligen, lagra vävnaden vid -80 ° C.
- Paraffinization (2 nd option)
- Placera varje bild i inbäddning kassetter (bibehålla orienteringen genom att placera spetsen orienterade sidan av sektionen på botten av kassetten) och därefter i 4% PFA under 24 h. Lägga den i en vävnadsprocessor maskin natten.
- Inkubera det i etanol 70% under 2 h. Inkubera den i ethanol 95% under 2 h. Inkubera det i etanol 100% under 3 h. Inkubera det i xylol under 4 timmar. Inkubera det i paraffin (smält vid 60 ° C i en ugn) under 5 timmar. Slutligen gör block genom att bädda in varje hjärta bild i paraffin.
- Placera varje bild i inbäddning kassetter (bibehålla orienteringen genom att placera spetsen orienterade sidan av sektionen på botten av kassetten) och därefter i 4% PFA under 24 h. Lägga den i en vävnadsprocessor maskin natten.
3. Masson-Goldner trikromfläckning
- Göra vävnadssnitt från paraffinblock med en manuell mikrotom (tjocklek: 5 ^ m) eller från ULT block med en kryostat inställd på -18 ° C (tjocklek: 7 | j, m).
- Färga ett objektglas från varje hjärta del för varje råtta (3 - 4 tvärsektioner per bild) med Masson-Goldner trikromfläckning (se bilaga).
OBS: Start från detta steg för paraffin.- Smält bilderna vid 60 ° C i en ugn. Under en huv, Avparaffinera dem i xylol två gånger under 10 min vardera. Rehydrera dem i 100% etanol, 95% etanol, 70% etanol, och destillerat vatten i 3 min vardera.
OBS: Start från detta steg för kryosektions. - Fäst dem i Bouin lösning över natten. Sedan skölja dem i rinnande kranvatten under 10 - 15 min. Skölj dem i destillerat vatten. Inkubera dem i Mayers hematoxylin under 3 min.
- Ta bilderna och lämna dem i destillerat vatten under 5 minuter. Sedan inkubera dem i syrafuxin-Ponceau under 5 min. Skölja dem i 1% ättiksyra under 1 min.
- Därefter inkubera dem i fosfomolybdensyra Orange G under 1 min. Skölja dem i 1% ättiksyra under 1 min, inkubera dem i ljusgrönt färgämne under 10 minuter, och skölj dem i 1% ättiksyra under 1 min.
- Dehydratisera dem i 70% etanol (30 sek), 95% etanol (30 sek), och 100% etanol (5 min). Sätt en droppe av en hartsmonteringsmedium på vävnadssnitt, täcka dem med täck, och låt dem torka.
- Smält bilderna vid 60 ° C i en ugn. Under en huv, Avparaffinera dem i xylol två gånger under 10 min vardera. Rehydrera dem i 100% etanol, 95% etanol, 70% etanol, och destillerat vatten i 3 min vardera.
4. Infarktstorlek Analys
- Förvärva en bild från varje bild på en stereomikroskop (15X förstoring) i kombination med en kamera. Fotografera en linjal med samma inställnings.
- Använd bildanalys programvara för att mäta ärr tjocklek i mitten av infarkt, septum tjocklek, den vänstra kammaren (LV) kavitet område, infarkt området, och vävnadsområdet LV använder.
- Ställ in skalan med linjalen bild (Figur 1A).
- Klicka på Mätningar välj sedan Set konverteringsfaktorn. Rita en linje på kalibreringsfältet. Högerklicka på bilden och klicka på Avsluta kalibrering. Notera bar värdet, och klicka på OK.
- Välj LV från färgade hjärt bilden (Figur 1B). Använd flera verktygssegmentet. Välj LV punkt för punkt, och sedan högerklicka Kopiera / Klistra in någonstans.
- Mät ärr och septum tjocklek med hjälp av enskild mätning segmentverktyg (Figur 1C
- Automatisk identifiering av LV hålrum, infarkt, och LV områden med hjälp av automatiska området mätverktyget i RGB-läge (Figur 1D).
- Klicka på verktyget. Aktivera endast gränser och Sammanhängande i RGB-läge. Slutligen, klicka i området av intresse för att upptäcka det. Om det behövs, använder precisionsverktyg.
- Ställ in skalan med linjalen bild (Figur 1A).
- Beräkna infarktstorlek som förhållandet av infarktområdet till LV området.
- Beräkna expansionsindexet enligt följande: [LV hålrum område / hela LV område] / [infarkt tjocklek / septum tjocklek], med hela LV området inklusive både LV hålrum och LV vävnadsområden.
- Slutligen, beräkna en "genomsnittlig" för varje hjärta på följande sätt: [genomsnitt expansionsindex från infarkt diabilder] * [Antal infarcerade diabilder / Totalt antal bilder].
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Sex veckor efter LAD ligation, var hjärtan skördas från Lewis-råttor. 2-mm vävnadssektioner erhölls från apex till bas. En TTC färgningsproceduren utfördes för att visualisera infarktområdet, som visas i vitt, och den friska hjärtmuskeln, som visas i rött (Figur 2). Beroende på platsen för ligering av LAD, varierar infarktstorleken. För stora MI ades transmurala infarkter observeras från spetsen till basen (Figur 2A). Mindre infarkter presenteras vitt infarktvävnad synlig från spetsen till den mellersta delen av hjärtat (figur 2B). För små icke-transmurala infarkter ades fibrotisk vävnad observeras på bara ett eller två avsnitt från spetsen (figur 2C).
Tunna 5-ìm sektioner från varje hjärta skiva skars och färgades med Masson-Goldner trikrom. Bilder av hela tvärsnittet av hjärtat varförvärvats under ett stereomikroskop (Figur 3). Friska vävnader dök upp i rött och bindväv i grönt. Diskriminering mellan varje färg kan lätt utföras med ett bildanalysprogram.
Tjocklekarna hos infarkt och membranet, LV hålrum området och LV totala ytan mättes och beräknades för att beräkna El (tabell 1). EI beräknades för varje avsnitt. Beroende på hjärtstorlek, antalet sektioner varierade från 5 till 7. För varje hjärta, är EI ett genomsnitt av det EI från varje sektion. EI varierade från 0 till 0,278 och avslöjade ett brett spektrum av hjärtinfarkter, med en CV av 58%. I jämförelse, den genomsnittliga andelen infarkt till LV varierade från 0 till 0,241, med en CV på 54% (tabell 1). EI och andelen infarkt var signifikant korrelerade; en icke-parametrisk Spearman analys gav en korrelationskoefficient r-value av 0,491 (p = 0,005) (Figur 4A). För nära EI värden, såsom 0,11 och 0,13, andelen infarktvarierade från 5,8 till 24,1%.
Hjärtfunktion utvärderades genom högupplösande ekokardiografi vid 6 veckor post-LAD ligation på bedövade djur och utfördes en gång före hjärt skörd. EI beräknat från histologiska kvantifiering korrelerade signifikant med EF. En icke-parametrisk Spearman analys gav ett r-värde på -0,709 (p = 0,005) (Figur 4B).
Figur 1. Steg-för-steg Illustration av användningen av bildanalysmjukvara. Automatisk färg avgränsning och längdmätningar ingår flera steg. A. Kalibrering: Omfattningen av bilden inrättades. En bild aven linjal togs i samma skick som hjärtat sektionen. Längden på linjalen markerades för att definiera den skala omvandlingsfaktor. Omvandling från pixel till millimeter utfördes. B. LV urval: Den högra ventrikeln skars ut ur bilden med markeringsverktyget av programvaran. C. LV vägg och septum tjockleksmätning: Den enda mätverktyg användes för att kvantifiera avstånd. Skal Staplarna anger 3 mm. D. Automatisk område kvantifiering: Automatisk färg avgränsning utfördes i RGB-läge. Auto-val genomfördes efter att ha valt den automatiska läget. Färgbaserad val kan ändras; utredaren utfört visuell kontroll av den valda grön vävnad och ökas eller minskas det markerade området som behövs. Skal Staplarna anger 3 mm. Klicka här för att se en större version av denna siffra. 
Figur 2. Hjärt sektioner färgade med TTC. 2 mm delar av hela hjärtat färgades med TTC. Friska hjärtmuskeln dök upp i rött och fibrotiska vävnader i vitt. Tre hjärtan med olika infarktstorlekar presenteras. A: stor transmural infarkt, B: medel infarkt, och C: liten infarkt. Skal Staplarna anger 3 mm. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 3. Hjärt Sektioner färgades med Masson-Goldner Trichrome. 5-im sektioner skars från varje hjärta sektion erhölls 6 veckor efter LAD ligation. Stagranskat sektioner placerades under ett stereomikroskop. Bilder från hela sektioner erhölls med 15X förstoring. Den representativ bild, som erhållits på samma nivå som papillarmusklerna (bakåtpilen), visar friska hjärtmuskeln i rött och fibrotiska vävnader i grönt. Bilden visar den automatiska färg avgränsningen med mjukvara för bildanalys, liksom platsen där infarkt och septum tjocklek mättes (svarta linjer). Skal Staplarna anger 3 mm. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 4. Korrelation mellan expansionsindex (EI) och andelen infarkt relaterad till LV (A) eller ejektionsfraktion (EF) (B). Den linjära regressionen (svart linje) och 95% anförtrorNCE intervall (streckade linjer) är representerade. Den icke-parametriska Spearman r-värdet har rapporterats. A: Andelen infarkt och EI signifikant korrelerade (r = 0,567; p = 0,003). Infarkt expansionsindex (EI) beräknades som [LV hålrum område / hela LV område] / [infarkt tjocklek / septum tjocklek]. Hela LV-området mättes som den kombinerade LV hålrum och LV vävnadsområdet. Den procentuella andelen av infarkt beräknades som LV vävnadsarea / infarktvävnad område. B: Funktionen utvärderas vid 6 veckor efter LAD-ligering med användning av en högupplösande ekokardiografi signifikant korrelerad till EI. Båda parametrarna signifikant korrelerade (r = -0,709, p = 0,005). Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Tabell1: Parametrar mätt på Masson Goldner-färgade hjärta avsnitten.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Kritiska steg i protokollet
Fibrotisk vävnad exakt kan bedömas i en kronisk MI råttmodell med hjälp av systematisk provtagning av den skördade hjärta och bildanalyser av trikromatiska-färgade histologiska sektioner som erhållits från basen till spetsen. Två steg är särskilt viktigt för ett framgångsrikt genomförande protokoll. För det första, användningen av KCl för hjärt skörd medger hjärtmuskeln för att bibehållas i ett avslappnat tillstånd. Detta steg är viktigt för jämförelser av infarkt dimensioner från olika hjärtan. För det andra är det natten fixering av det avsnitt i Bouin lösning kritisk för att erhålla ljus trikromfläckning.
Ändringar och felsökning
Frånvaro av färgning kan bero på svårigheter under fixering av det avsnitt i Bouin lösning, såsom minskad inkubationstid eller förfallit Bouin lösningar. TTC färgning är valfritt och could användas för att visualisera den infarktstorleken i en snabb men icke-kvantitativt sätt. Det är viktigt att notera att TTC kan utföras för samma hjärta före införandet i antingen oktober eller paraffin.
Begränsningar av tekniken
Den nuvarande modellen tillåter en att välja mellan paraffininbäddade och kryo-bevarad hjärtsektioner och kan användas för immunfärgning. Icke desto mindre har det fulla hjärta som skall sektioneras, och vävnaden kan inte användas för ytterligare analys, såsom western blot eller RT-PCR med avseende på protein och analys av genuttryck.
Betydelsen av tekniken med avseende på befintliga / alternativa metoder
Eftersom de förfaranden kvantifiering och i synnerhet antalet analyserade sektioner varierar kraftigt mellan utredningar, definierar minimalt antal sektioner som är nödvändiga för att få en tillförlitlig kvantifiering är av största vikt. Takagawa et al. 9 visade att tillförlitligheten är maximerad med en minimal hjärta skiva antal 6 - 8 delar av hela hjärtat av en mus med hjälp av 1 mm mellanrum. I det nuvarande protokollet, 5 - var delar av hela råtthjärta 7 erhålls vid utförande 2 mm tjock sektionering. Dessutom 2 mm sektioner är standard och används ofta storlek för TTC färgning. Dessutom är den systemsamplings enkelt att tillämpa och presenterar en periodisk aspekt som medger karakterisering av hela hjärtat.
Från var och en av de två-mm skivor, var 5-im sektioner skars och färgades. För varje 5-um sektion, var kvantifiering av septumet tjocklek, ärr tjocklek och längd, total ärr område, total LV-området, och LV hålighet område utförs, och genomsnittet av varje parameter beräknades per djur. Vi använde Masson-Goldner färgning av tunna sektioner i stället för TTC färgning av 2 mm sektioner för att förbättra noggrannheten av både den automatiska färgdetektering och bedömningav längder. I själva verket är TTC färgning mestadels intressant för tidig fas eller ischemiska reperfusion modeller för att upptäcka riskområdet 8,14, snarare än för kroniskt stadium.
Ml induceras från LAD-ligering kan variera beroende på ligaturen plats. I den presenterade kronisk hjärtinfarkt modell, var ligeringen storlek avsiktligt förändrad för varje djur, och resultat för olika villkor för infarktstorlek och ombyggnad var närvarande efter 6 veckor. Följaktligen visade den beräknade EI ett brett spektrum av hjärtinfarkter och stödde skillnad observeras i hjärtfunktion korrelerad med EF. När omfattande gallring av infarkt segmentet inträffade, den del av infarkt minskades kraftigt i fallet med transmural fibros. I detta tillstånd, som definierar den infarktstorleken genom att beräkna arean av infarktvävnad i förhållande till hela LV (uttryckt som en procentandel av LV) skulle svagt bedöma omfattningen av infarkten. Bristen på cn behandling för ombyggnad-inducerad LV utvidgning och extrem uttunning av infarkt LV väggen kan underskatta infarktstorleken, medan en infarkt närvarande i frånvaro av väggen gallring skulle överskatta infarktstorleken, som representeras av värdena utanför 95% konfidensintervall intervall. Denna brist skulle kunna elimineras genom beräkning av EI.
Det har visat sig att LV formförändring är positivt korrelerad med EI och vägg gallring 15, 16. Även EI kan vara en prediktor för vänsterkammarfunktion, är det viktigt att betona att ekokardiografi och histologiska analyser är komplementära metoder för att bedöma hjärtinfarkt på funktionella och vävnadsnivå, respektive. Ekokardiografi tillåter longitudinell studie, och histologiska analyser ger grundläggande slutpunktsanalyser som tillåter ytterligare kvantifiering av LV morfologi, såsom väggtjocklek.
Framtida tillämpningar eller riktningar akterutER Maste denna teknik
Den systemiska provtagning av hela hjärtat och beräkningen av den EI är av särskilt intresse vid bedömningen av kronisk Ml. Dessutom kommer denna metod att vara lämpliga för utvärdering av behandlingseffektivitet, speciellt för nya behandlingar, såsom cell- och matrix-baserade behandlingar som syftar till att minska infarktstorleken och ombyggnad. Tillförlitlig kvantifiering av infarkt expansion är av största vikt för jämförelser mellan obehandlade och behandlade djur, som slutpunkt histologiska analyser utesluter jämförelse av infarktstorlek före och efter behandling.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Acrylic rat heart matrix 2 mm | 72-5015 | Harvard Appartus | |
| Inspira advanced volume controlled ventilator | Harvard Apparatus | 557058 | |
| Catheter Insyte 14 G | BD | 381267 | |
| O.C.T | BDHA361603E | VWR | |
| TTC | T8877-10G | Sigma Aldrich | |
| Mayer hematoxylin | MHS32-1L | Sigma Aldrich | |
| Acid Fuchsin CI 42685 |
F8129-50G | Sigma Aldrich | |
| Ponceau Xylidin CI 16150 |
P2395-25G | Sigma Aldrich | |
| Orange G CI 16230 |
O3756-100G | Sigma Aldrich | |
| Light green CI 42095 |
L5382-25G | Sigma Aldrich | |
| KCl | P9333-500G | Sigma Aldrich | |
| Xylol | 10315083 | HoneyWell | |
| Ethanol absolute | 10303990 | HoneyWell | |
| 2-methylbutane | M32631-1L | Sigma Aldrich | |
| Stereogical microscope | SM2800 | Nikon | |
| Formaldehyde | 99340 | Reactolab | |
| Embedding cassette | K113.1 | Carl Roth | |
| Bersoft Image measurement Software | Bersoft.com | Licensed software |
References
- Amsterdam, E. A., et al. AHA/ACC Guideline for the Management of Patients with Non-ST-Elevation Acute Coronary Syndromes: a report of the American College of Cardiology/American Heart Association Task Force on Practice Guidelines. J Am Coll Cardiol. 64, e139-e228 (2014).
- Konstam, M. A., Kramer, D. G., Patel, A. R., Maron, M. S., Udelson, J. E. Left ventricular remodeling in heart failure: current concepts in clinical significance and assessment. JACC Cardiovasc Imaging. 4, 98-108 (2011).
- Frobert, A., et al. Prognostic Value of Troponin I for Infarct Size to Improve Preclinical Myocardial Infarction Small Animal Models. Front Physiol. 6, 353 (2015).
- Redfors, B., Shao, Y., Omerovic, E. Myocardial infarct size and area at risk assessment in mice. Exp Clin Cardiol. 17, 268-272 (2012).
- Guex, A. G., et al. Plasma-functionalized electrospun matrix for biograft development and cardiac function stabilization. Acta Biomater. 10, 2996-3006 (2014).
- Landa, N., et al. Effect of injectable alginate implant on cardiac remodeling and function after recent and old infarcts in rat. Circulation. 117, 1388-1396 (2008).
- Valente, M., et al. Optimized heart sampling and systematic evaluation of cardiac therapies inmouse models of ischemic injury: Assessment of cardiacremodeling and semi-automated quantification of myocardial infarctsize. Curr. Protoc. Mouse Biol. 5, 359-391 (2015).
- Csonka, C., et al. Measurement of myocardial infarct size in preclinical studies. J. Pharmacol. Toxicol. Methods. 61, 163-170 (2010).
- Zornoff, L. A., Paiva, S. A., Minicucci, M. F., Spadaro, J. Experimental myocardium infarction in rats: Analysis of the model. Arq. Bras Cardiol. 93, 434-440 (2009).
- Lichtenauer, M., et al. Myocardial infarct size measurement using geometric angle calculation. Eur J Clin Invest. 44, 160-167 (2014).
- Lutgens, E., et al. Chronic myocardial infarction in the mouse: cardiac structural and functional changes. Cardiovasc Res. 41, 586-593 (1999).
- Frobert, A., Valentin, J., Cook, S., Lopes-Vicente, L., Giraud, M. N. Cell-based therapy for heart failure in rat: double thoracotomy for myocardial infarction and epicardial implantation of cells and biomatrix. J Vis Exp. , e51390 (2014).
- Takagawa, J., et al. Myocardial infarct size measurement in the mouse chronic infarction model: comparison of area- and length-based approaches. J Appl Physiol (1985). 102, 2104-2111 (2007).
- Fishbein, M. C., et al. Early phase acute myocardial infarct size quantification: validation of the triphenyl tetrazolium chloride tissue enzyme staining technique. Am Heart J. 101, 593-600 (1981).
- Weisman, H. F., Bush, D. E., Mannisi, J. A., Weisfeldt, M. L., Healy, B. Cellular mechanisms of myocardial infarct expansion. Circulation. 78, 186-201 (1988).
- Mannisi, J. A., Weisman, H. F., Bush, D. E., Dudeck, P., Healy, B. Steroid administration after myocardial infarction promotes early infarct expansion. A study in the rat. J Clin Invest. 79, 1431-1439 (1987).
