Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Immunology and Infection

Tüm kan İnsan monosit türevli dendritik hücrelerin oluşumu

doi: 10.3791/54968 Published: December 24, 2016

Introduction

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Dendritik hücreler (DC), bağışıklık sisteminin en önemli özel antijen sunan hücrelerdir. Olgunlaşmamış DC'ler (iDH'ler) deride veya mukozal dokularda bulunan ve işgalci patojenlere ile etkileşim ilk bağışıklık hücreleri arasında bu nedenle. Bu patojen tespiti, aşağıdaki T- ve B-hücresi tepkilerini aktifleştirme çünkü DH'ler, doğal ve adaptif bağışıklık sisteminin 1 arasında bir köprü oluşturmaktadır. Bundan başka, çünkü bu tür IL-1, IL-6 ve IL-12 gibi sitokinler yüksek miktarda salgılanması pro-enflamatuar bağışıklık tepkilerinin katkıda bulunur. DH'ler NK hücrelerini aktive ederek ve kemotaksi neden olduğu enfeksiyona sitesine başka bağışıklık hücrelerinin çeker.

DH'ler olgun olmayan dendritik hücreler (iDH'ler) ve bunların yapısının ve fonksiyonunun göre olgun dendritik hücreler (MDC) 2 ayrılabilir. Birçok örüntü tanıma reseptörlerinin biri (örn, paralı-benzeri reseptörler, C tipi yabancı antijenlerin alımdan sonralektinleri veya bol hücre yüzeyi üzerinde ifade edilen) reseptörleri güzelleştirmek, iDH'ler büyük değişiklikler geçmesi ve olgun başlar. Antijen sunumu için gerekli moleküllerin 3 yukarı regüle edilir ise, bu olgunlaştırma işlemi sırasında, antijen tutma reseptörleri, aşağı regüle edilir. Olgun DH'ler ana histokompatibilite kompleksi I ve II (MHC I ve II) yukarı doğru regüle, T lenfositlerin antijen sunumu ve aktivasyonu için gerekli olan CD80 ve CD86 gibi eş-uyarıcı moleküller. Buna ek olarak, hücre yüzeyi üzerinde kemokin reseptör CCR7 ekspresyonu lenf düğümlerine periferik dokularda DC'lerin geçişini sağlayan, indüklenir. Taşıma lenf düğümlerine 4-6 bir kemokin ligand 19 (CCL19 / MIP-3b) ve kemokin ligandı 21 (CCL21 / SLC) degrade boyunca DClerin "döner" ile kolaylaştırılır.

Göç eden, MDC ve böylece ini, CD4 + ve CD8 + T hücreleri naiv işlenmiş antijeniistilacı patojen 7 karşı edinilmiş bağışıklık tepki tiating. Lenf düğümlerindeki T hücreleri ile bu etkileşimi de virüsü 8 yayılması ile ilişkilidir. Diğer in vitro çalışmalar DC'ler verimli yakalamak ve güçlü bir enfeksiyon 9-12 Bu iletim sonuçlarına T hücrelerine ve HIV aktarmak olduğunu ortaya koydu. Bu deneyler lenf düğümlerine çevreden servisleri olarak in vivo HIV patlatır DC'ler vurgulayın. Antijen sunumu sırasında DH'ler efektör T yardımcı hücrelerinin farklılaşmasını şekil ve bu nedenle, mikrop karşı tüm bağışıklık tepkisinin sonucu bu çok etkileşim belirlenir önemli interlökinler salgılar. Yanı sıra tip 1 (Th1) ve tip 2 (Th2) efektör T hücreleri, CD4 + T yardımcı hücreleri (örneğin, tip 17 (Th17) ve tip 22 (Th22) T hücreleri) tarif edilmiştir ve diğer alt-gruplar ve bunların gidiş ve fonksiyon iyice incelenmiştir. DH'ler, ayrıca katılandüzenleyici T hücreleri (Tregs) 13,14 nesil. Bu hücreler bağışıklık ve durdurmak ya da indüksiyon veya efektör T hücrelerinin çoğalmasını aşağı düzenleyen ve böylece bağışıklık ve hoşgörüyü geliştirmek için çok önemli olabilir.

İnsan konvansiyonel DC'ler (CDCS) bir miyeloid kökenli hücrelerin çeşitli alt kümelerini oluşturan (yani, Langerhans Hücreleri (LCs) ve dermal ve interstisyel DC'ler) veya lenf kökenli (yani, plazmasitoid DC'ler (PDC)). In vitro deneylerde veya DC aşılama stratejileri, monosit kökenli DH'ler rutin dermal DC'ler için bir model olarak kullanılmaktadır. Bu hücreler, geleneksel miyeloid dendritik hücrelerin fizyoloji, morfoloji ve fonksiyon benzerlikler göstermektedir. Bunlar, sağlıklı vericilerden 12,15-18 izole monositlere interlökin 4 (IL-4) ve granülosit-makrofaj koloni stimüle edici faktör (GM-CSF) eklenerek oluşturulur. Dendritik hücreler, doğrudan dermal ya da mukozal biopsiden izole edilmiş ya da olabilir b edilebilire CD34 + eski utero elde göbek kordonu kan örneklerinden izole edilen hematopoetik progenitör hücrelerden geliştirdi. Burada, monositler izole edilmiş ve yoğunluk dereceli santrifüj yoluyla periferal kan tek-çekirdekli hücresi (PBMC), zenginleştirme sonra anti-pıhtılaşmış insan kanından uyarılır gösterilmektedir. 5 gün için inkübe edildikten sonra, özel koşullar altında insan monositleri iDH'ler ayrılırlar olmayan bir klinik deney prosedürleri için hazırdır.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Etik deyimi: bilgilendirilmiş onam Yazılı Kan Transfüzyon & İmmünolojik Bölümü, Innsbruck, Avusturya Merkez Enstitüsü tarafından tüm katılımcı kan vericilerden elde edildi. bilimsel amaçlarla anonim artık örneklerinin kullanılması Innsbruck Tıp Üniversitesi Etik Kurulu tarafından onaylandı.

Periferal Kan Tek Çekirdekli Hücreleri 1. zenginleştirilmesi (PBMC)

  1. Santrifüj ile PBMC'lerin konsantre.
    1. Alınan kan miktarına göre steril 50 ml santrifüj tüplerine kan paketi ve split kan açın.
    2. Gerekirse, steril Dulbecco Fosfat Tamponlu Salin (D-PBS) ile her bir tüp için 50 ml göre ayarlayın.
    3. Bir santrifüj tüpleri yerleştirilir ve fren oda sıcaklığında (RT) 15 dakika boyunca 400 x g'de bunları dönerler.
    4. boundar bırakarak, steril 10 ml serolojik pipet kullanarak plazma ve trombosit içeren üst katman kapalı Beraberliky tabakası rahatsız.
      Not: FCS yerine otolog plazma kültür ortamının ek kullanılırsa, plazma toplandı gerekir ve bu adımda ısı ile inaktive edilmiş.
    5. iki adet 50 ml'lik santrifüj tüplerine alınan mononükleer hücreler (sınır tabakaları) toplamak ve bir steril 10 ml serolojik pipet kullanılarak bir steril 50 ml tüp içine transfer edin.
    6. Steril D-PBS kullanarak her bir tüp için 50 ml ses seviyesini ayarlayın.
    7. Bir santrifüj tüpleri yerleştirin ve frensiz oda sıcaklığında 15 dakika boyunca 400 x g'de onları dönerler.
    8. bozulmamış sınır tabakası bırakarak, steril 10 ml serolojik pipet kullanarak plazma ve trombosit içeren üst katman kapalı çizin.
    9. 50 ml santrifüj tüplerine alınan mononükleer hücreler (sınır tabakaları) toplamak ve bir steril 10 ml serolojik bir pipet kullanarak, iki steril 50 mi toplama tüpleri içine aktarın.
    10. Steril D-PBS ile her tüp için 50 ml ses seviyesini ayarlayın.
  2. ayrılıkyoğunluk gradyan santrifüjü ile PBMC'lerin (Şekil 1).
    1. Her tüpe yoğunluk gradyan ortamı dört adet 50 ml tüpler ve pipet 15 mi hazırlayın.
    2. toplama tüpüne (adım 1.1.10) toplanan hücre / kan 25 ml alın ve dikkatle yoğunluk gradyan orta kaplaması.
    3. Bir santrifüj tüpleri yerleştirilir ve fren RT'de 30 dakika boyunca 700 x g'de bunları dönerler.
  3. Toplama ve PBMC saflaştırılması.
    1. steril 10 ml serolojik pipet kullanarak plazma ve trombosit, rahatsız PBMC tabakası bırakarak içeren üst katman kapalı çizin.
    2. Tüm tüplerden PBMC interfaz toplamak ve steril bir 25 ml serolojik pipet kullanarak, iki steril 50 ml tüpler hücreleri havuz.
    3. Steril D-PBS ile her tüp için 50 ml ses seviyesini ayarlayın. Bir santrifüj tüpleri yerleştirilir ve fren ile, 4 ° C'de 15 dakika boyunca 400 x g'de bunları dönerler.
    4. Süpernatantı aspire ve yeniden askıyaSteril, D-PBS içinde hücreleri. Her iki tüpe hücreleri havuz ve steril D-PBS ile 50 ml ses seviyesini ayarlamak.
    5. santrifüj tüpleri yerleştirilir ve fren ile, 4 ° C'de 10 dakika boyunca 400 x g'de bunları dönerler.
    6. Süpernatantı aspire ve steril D-PBS hücrelerin yeniden askıya. D-PBS 450 ul ihtiva eden 1.5 ml bir tüp steril D-PBS ile 50 ml ve pipet 50 ul hacim ayarlayın.
    7. Vortex 1.5 ml tüp şiddetle ve Neubauer odasına veya diğer herhangi bir hücre sayım enstrüman hücreleri saymak.
    8. santrifüje 50 ml tüpler yerleştirin ve fren ile, 4 ° C'de 10 dakika boyunca 400 x g'de bunları dönerler.

Anti-insan CD14 Manyetik Parçacıklar tarafından Monositler 2. izolasyonu

  1. Manyetik parçacıklar ile PBMC'lerin etiketleme.
    1. Yalıtım tamponu kullanılarak 8 x 10 7 hücre / ml PBMC konsantrasyonu ayarlayın.
    2. Vorteks anti-insan CD14 manyetik parçacıklar thoroughly ve her 1 x 10 7 PBMC'ler için parçacıkların 50 ul ekle.
    3. İyice hücre partikül süspansiyonu karıştırın ve 30 dakika boyunca oda sıcaklığında inkübe.
  2. Pozitif ve negatif fraksiyonların ayrılması.
    1. izolasyon tamponu kullanılarak 12 ml hacim kadar ayarlayın.
    2. Her tüpe, hücre parçacık süspansiyonu altı steril yuvarlak tabanlı tüp ve pipet 2 ml hazırlayın.
    3. Hemen mıknatıs tüpler yerleştirin. Oda sıcaklığında 10 dakika boyunca inkübe edin.
    4. mıknatıs üzerinde tüpler tutun ve dikkatle süpernatant çizin. Süpernatan negatif kısmını içerir.
    5. mıknatıstan tüpü çıkarın ve izolasyon tampon 2 ml ekleyin.
    6. Hafifçe yukarı ve aşağı pipetleme hücreleri yeniden askıya.
    7. geri mıknatıs üzerinde tüpler yerleştirin. Oda sıcaklığında 5 dakika süreyle inkübe edilir.
    8. mıknatıs üzerinde tüpler tutun ve dikkatle süpernatant çizin. Süpernatan negatif kısmını içerir.
    9. Mıknatıs tüpleri çıkarın ve her bir tüpe yalıtım tamponu 2 ilave edin. Hafifçe yukarı ve aşağı pipetleme hücreleri yeniden askıya.
    10. steril bir 50 ml tüp pozitif kısmını aktarın ve steril D-PBS kullanarak 50 ml ses seviyesini ayarlamak.

IL-4 ve GM-CSF ile izole edilmiş monositlerin 3. uyarılması

  1. santrifüj tüpü yerleştirin ve fren ile 4 ° C'de 10 dakika boyunca 400 xg'de döndürün.
  2. Aspire süpernatan ve D-PBS, 50 ml hücrelerin yeniden askıya.
  3. D-PBS 450 ul içeren bir 1.5 ml tüp içine Pipet 50 ul. Vortex 1.5 ml tüp şiddetle ve Neubauer odasına ya da başka bir hücre sayım enstrüman hücreleri saymak.
  4. santrifüj içine 50 ml tüp yerleştirin ve fren ile 4 ° C'de 10 dakika boyunca 400 xg'de döndürün.
    NOT: periferik kan lenfositleri (PBL) içeren negatif fraksiyon, ayrıca gerekiyorsa, yıkama gerçekleştirmek ve sayma t benzer adımlarPozitif fraksiyonun hortum (3.1-3.5 adımlar).
  5. Önceden ısıtılmış bir kültür ortamı (RPMI 1640,% 10 ısı ile inaktive edilmiş FBS ve% 1 L-Glutamin çözeltisi ile desteklenen ortamda) ve pipet 3 ml / 6-çukurlu plakalara 1 x 10 6 / ml hücre yoğunluğu ayarlayın.
    NOT: ısı ile inaktive otolog plazma kullanıyorsanız, deneysel set-up göre,% 1-5 otolog plazma ile% 10 FCS değiştirin.
  6. Kültür ortamı içine doğrudan sitokin pipetleme rekombinant insan IL-4 (250 U / ml) ve rekombinant insan GM-CSF (1000 U / ml) ile monositlerini uyarma. 37 ° C'de inkübe edilir ve% 5 CO2.
  7. Kültür ortamı içine doğrudan sitokin pipetleme 48 saat sonra IL-4 (250 U / ml) ve GM-CSF (1000 U / ml) ile hücrelerin yeniden teşvik eder.
    NOT: orta pH göstergesi ile gösterilen asitlenme herhangi bir işaret varsa, önceden ısıtılmış kültür ortamı ile orta yarısı değiştirin.
  8. Hasat için, 5. günde dendritik hücreler olgunlaşmamışaşağı akım 6 oyuklu plaka üzerinden bir 50 ml santrifüj tüpüne kadar kültür ortamı pipetle sonra bir kaç kez aşağı kültürlenmiş hücreler pipetleme deneyler.
  9. hücrelerin sayısı ve CD11b, CD11c karşı anti-insan antikorları izole monositler bir örnek leke ve birlikte bir hücre canlılığı boya ile DC-SIGN / CD209. Yüzey boyama sırasında antikorların özgül olmayan bağlanma önlemek için, reaktif ya da sığır serum albümini (BSA) tampon Fc reseptör bloke edici kullanılması önerilir.
  10. Oluşturulan iDH'lerin saflığını ve canlılığını değerlendirmek için akış sitometri gerçekleştirerek, üreticinin protokolüne göre, hücre canlılığı boya kullanılarak örnek analiz edin.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Bir sükroz yastık kullanılarak anti-pıhtılaşmış kanın santrifüje edilmesinden sonra, periferal kan tek-çekirdekli hücreleri (PBMC), yoğunluk gradyan ortamı (Şekil 1) üstüne bir arayüz içinde zenginleştirilmiştir. PBMC'ler çekilir sonra FACS analizi soyu belirteçler kullanılarak PBMC (örneğin, CD3 T lenfositlerin, CD14 monositler için ve CD19 B lenfositleri için) olan farklı hücre popülasyonları için gerçekleştirilir. Şekil 2A, toplandı ve yoğunluk dereceli santrifüj işleminden sonra lekeli PBMC'ler bir Örnek FACS analizi sonuçlarını göstermektedir. Kapılı nüfus (Şekil 2A, üst arsa) dışında, biz 43.62% T lenfositleri hangi 4.03% B lenfositleri, 28.20% monositler ve 67,62% diğer hücreleri (Şekil 2A, orta arsa), (Şekil 2A tespit alt arsa ).

PBMC'ler daha sonra W kuluçkalanırbir mıknatıs üzerinde inkübasyondan sonra i CD14 manyetik parçacıklar ve periferik kan lenfositleri (PBL'ler) ihtiva eden negatif fraksiyon yukarıda sözü edilen soy işaretlerinin seçimi kullanarak FACS ile analiz edilir. PBMC'ler karşılaştırıldığında, biz (B lenfositleri (% 4.65, Şekil 2B, orta arsa) benzer yüzdeleri, diğer hücrelerin yüksek oranlarda (88,61% Şekil 2B, orta arsa), ve monositlerin şiddetle azalır yüzdeleri ölçülen% 6.59, Şekil 2B orta arsa). Pozitif kısım (Şekil 3) karakterizasyonu izole hücrelerinin saflığı% 97 (Şekil 3, sol arsa), burada 99,56% arasında (Şekil 3 doğru arsa) üzerinde olduğu için, yüksek bir ayırma verimliliği gösterdi CD14 yüksek seviyelerini ifade etti hücre yüzeyi üzerinde.

5 gün için monositlerin IL-4 ve GM-CSF uyarımı monosit türevli dendritik hücre farklılaşma ile sonuçlanırkarşılaştırılabilir s, morfoloji, davranış ve reseptör ifadesi 19 dendritik hücrelerin dermal. 5. günde monosit türevli dendritik hücrelerin FACS analizi CD11b, CD11c, (gösterilmemiş olan) ve C-tipi lektin DC-SIGN yüksek seviyelerde ifade eden bir homolog popülasyonu (Şekil 4 sol arsa) göstermektedir. DC olgunlaşma işaretleyici CD83 hiçbir ifadesi (Şekil 4, sağ arsa) tespit edilir, ve hücreler de monosit işaretleyici CD14 (gösterilmemiştir) kaybedersiniz.

şekil 2
Şekil 1: yoğunluk gradyan santrifüjü ile kan bileşiklerinin ayrılması. PBMC yoğunluk gradyan santrifüjü ile ayırma ortamı üzerine bir arayüz içinde zenginleştirilmiştir. (Solda) ve sonra (sağda) santrifüj önce Katmanlar gösterilir. LütfenBu rakamın büyük halini görmek için buraya tıklayın.

şekil 2
Şekil 2: Akış sitometrik PBMC'ler (A) ve PBL'ler (B) analiz eder. (A) PBMC soy belirteçleri (fare anti-insan CD3, CD14 ve CD19 antikorları) boyanmış, hasat edilir, ve akış sitometrisi ile analiz edilir. temsili bir sonuç Dot araziler gösterilmektedir. (B) PBL'ler ihtiva eden negatif fraksiyon soy belirteçleri (fare anti-insan CD3, CD14 ve CD19 antikorları) ile karakterize edilen ve akış sitometrisi ile analiz edilir. temsili bir sonuç Dot araziler gösterilmektedir. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.

Şekil 3,

Şekil 4,
Şekil 4: Akış sitometrik monosit türevli dendritik hücrelerin analiz eder. Monositler IL4 ve GM-CSF ile 5 gün boyunca uyarılır ve CD11b, CD11c (gösterilmemiştir), C-tipi lektin DC-SIGN ve olgunlaşma işaretleyici CD83 gibi karakteristik DC belirteçler için lekeli. temsili bir sonuç Dot araziler gösterilmektedir.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Bu protokol, manyetik nanopartikül bazlı analiz kullanılarak anti-pıhtılaşmış kandan alınan insan monosit yalıtımla monosit türevli dendritik hücreler (MDDCs) üretimini tarif eder. Bu protokol, santrifüj adımları PBMC fraksiyonu bir zenginleşmeye yol açan hücre izolasyon prosedürü, üst baş tarafında ifa edilir. Hücreler santrifüj sırasında kaybolur, ancak, yoğunluk gradyanlı ortamının 200-300 ml gerektirecektir yoğunluk gradyan ortamında bütün bir kan paket içeriğini kaplamak için ve bu nedenle de düşük maliyetli olarak kabul edilemez. Buna ek olarak, pozitif yalıtım işlemi sırasında, anti-insan CD14 manyetik parçacıkların yapışmasını etkilediği temiz bir hücre popülasyonu içinde santrifüj sonuçları PBMC'lerin zenginleştirme. Ayrıca çeşitli DC alt-veya makrofajlar in vitro farklılaşması için kullanılabilir uygun bir monosit popülasyonda monositler sonuçlar, manyetik-nanopartikül izolasyonu.

Alternatif olarak, dendritik hücreler, doğrudan dermal ya da mukozal biopsiden izole edilebilir veya CD34 + Ex utero elde göbek kordonu kan numunelerinden izole hematopoietik projenitör hücrelerinden geliştirilebilir.

biyopsilerinden DClerin direkt izolasyonu gerçekleştirmek için daha karmaşık olduğu Bununla birlikte, MDDCs, dendritik hücreler için en yaygın olarak kullanılan modeldir. Aynı zamanda, genellikle verici kalitesinde farklılıklar nedeniyle değişir verimsiz hücre sayıları yol açabilir. DC'ler kordon kanından izole CD34 + kök hücrelerinden oluştuğunda benzer sorunlar ortaya çıkabilir.

Gelecekteki uygulamalarda, uyarılabilir pluripotent kök hücreler (iPSCs) kullanılarak kandan monositlerin CD14 manyetik boncuk izolasyon kullanılabilir. iPSCs kullanmanın avantajları bu sadece DC alt-gruplar, ancak ilgi duyulan bütün hematopoietik hücreler, tek bir donörden elde edilebilir (T hücreleri, B hücreleri ve NK Cıarşın) ve hastaya özel iPSCs kişiselleştirilmiş bir şekilde otolog immün hücrelerin etkileşimlerini karakterize etmek için kullanılabilir.

santrifüj fren kapatıldığında kırmızı ve beyaz kan hücrelerinin doğru ayrılması sadece elde edildiğinden monositlerin izolasyonu sırasında en önemli adımı, yoğunluk gradyanlı santrifüj adımdır. Bu aşağı akım izolasyon verimi sonucunu belirler.

Sonuç olarak, bu protokol, bir anti-pıhtılaşmış kandan alınan insan monositleri izolasyonu ile uygulanabilir ve homojen bir monosit türevli dendritik hücre kümesi oluşturmak için çok hızlı, verimli ve maliyet etkin bir yöntemdir.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
APC Mouse Anti-Human CD19 Clone HIB19 BD Biosciences 555415
APC Mouse Anti-Human CD83 Clone HB15e BD Biosciences 551073
BD Imag Anti-Human CD14 Magnetic Particles BD Biosciences 557769
BD Imagnet BD Biosciences 552311
BSA (Albumin Fraction V) Carl Roth EG-Nr 2923225
Costar 6 Well Clear TC-Treated Multiple Well Plates Costar 3506
Density gradient media: Ficoll-Paque Premium GE Healthcare Bio-Sciences 17-5442-03
Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline (D-PBS) Sigma-Aldrich D8537
Falcon 10 ml Serological Pipet Corning 357551
Falcon 25 ml Serological Pipet Corning 357525
Falcon 50 ml High Clarity PP Centrifuge Tube Corning 352070
Falcon Round-Bottom Tubes Corning 352054
FITC Mouse Anti-Human CD3 Clone HIT3a BD Biosciences 555339
Ghost Dye Violet 510 (Cell Viability Reagent) Tonbo biosciences 13-0870
GM-CSF MACS Miltenyi Biotec 130-093-862
Heat Inactivated FBS (Fetal Bovine Serum), EU Approved Origin (South America) Gibco 10500-064
Hettich Rotanta 460R Hettich ---
IL-4 CC PromoKine C-61401
Isolation buffer: BD IMag Buffer (10x) BD Biosciences 552362
L-Glutamine solution Sigma-Aldrich G7513
Microcentrifuge tubes, 1.5 ml, SuperSpin VWR 211-0015
PE Mouse Anti-Human CD14 Clone M5E2 BD Biosciences 555398
PE Mouse Anti-Human CD209 Clone DCN46 BD Biosciences 551265
RPMI-1640 medium Sigma-Aldrich R0883
UltraPure 0.5 M EDTA, pH 8.0 Invitrogen 15575020

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Banchereau, J., Steinman, R. M. Dendritic cells and the control of immunity. Nature. 392, 245-252 (1998).
  2. Steinman, R. M., Hemmi, H. Dendritic cells: translating innate to adaptive immunity. Curr Top Microbiol Immunol. 311, 17-58 (2006).
  3. Steinman, R. M., Inaba, K., Turley, S., Pierre, P., Mellman, I. Antigen capture, processing, and presentation by dendritic cells: recent cell biological studies. Hum Immunol. 60, 562-567 (1999).
  4. Schwarz, J., Sixt, M. Quantitative Analysis of Dendritic Cell Haptotaxis. Methods Enzymol. 570, 567-581 (2016).
  5. Weber, M., Sixt, M. Live cell imaging of chemotactic dendritic cell migration in explanted mouse ear preparations. Methods Mol Biol. 1013, 215-226 (2013).
  6. Sixt, M., Lammermann, T. In vitro analysis of chemotactic leukocyte migration in 3D environments. Methods Mol Biol. 769, 149-165 (2011).
  7. Randolph, G. J., Angeli, V., Swartz, M. A. Dendritic-cell trafficking to lymph nodes through lymphatic vessels. Nat Rev Immunol. 5, 617-628 (2005).
  8. Wilflingseder, D., Banki, Z., Dierich, M. P., Stoiber, H. Mechanisms promoting dendritic cell-mediated transmission of HIV. Mol Immunol. 42, 229-237 (2005).
  9. Pope, M., Gezelter, S., Gallo, N., Hoffman, L., Steinman, R. M. Low levels of HIV-1 infection in cutaneous dendritic cells promote extensive viral replication upon binding to memory CD4+ T cells. J Exp Med. 182, 2045-2056 (1995).
  10. McDonald, D., et al. Recruitment of HIV and its receptors to dendritic cell-T cell junctions. Science. 300, 1295-1297 (2003).
  11. Pruenster, M., et al. C-type lectin-independent interaction of complement opsonized HIV with monocyte-derived dendritic cells. Eur J Immunol. 35, 2691-2698 (2005).
  12. Wilflingseder, D., et al. IgG opsonization of HIV impedes provirus formation in and infection of dendritic cells and subsequent long-term transfer to T cells. J Immunol. 178, 7840-7848 (2007).
  13. Kapsenberg, M. L. Dendritic-cell control of pathogen-driven T-cell polarization. Nat Rev Immunol. 3, 984-993 (2003).
  14. Mills, K. H. TLR-dependent T cell activation in autoimmunity. Nat Rev Immunol. 11, 807-822 (2011).
  15. Banki, Z., et al. Complement as an endogenous adjuvant for dendritic cell-mediated induction of retrovirus-specific CTLs. PLoS Pathog. 6, e1000891 (2010).
  16. Posch, W., et al. Antibodies attenuate the capacity of dendritic cells to stimulate HIV-specific cytotoxic T lymphocytes. J Allergy Clin Immunol. 130, e1362 1368-1374 (2012).
  17. Posch, W., et al. Complement-Opsonized HIV-1 Overcomes Restriction in Dendritic Cells. PLoS Pathog. 11, e1005005 (2015).
  18. Wilflingseder, D., et al. Immediate T-Helper 17 Polarization Upon Triggering CD11b/c on HIV-Exposed Dendritic Cells. J Infect Dis. 212, 44-56 (2015).
  19. Grassi, F., et al. Monocyte-derived dendritic cells have a phenotype comparable to that of dermal dendritic cells and display ultrastructural granules distinct from Birbeck granules. J Leukoc Biol. 64, 484-493 (1998).
Tüm kan İnsan monosit türevli dendritik hücrelerin oluşumu
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Posch, W., Lass-Flörl, C., Wilflingseder, D. Generation of Human Monocyte-derived Dendritic Cells from Whole Blood. J. Vis. Exp. (118), e54968, doi:10.3791/54968 (2016).More

Posch, W., Lass-Flörl, C., Wilflingseder, D. Generation of Human Monocyte-derived Dendritic Cells from Whole Blood. J. Vis. Exp. (118), e54968, doi:10.3791/54968 (2016).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter