A method for establishing lung infections in immunocompetent rodents is described. With proficiency, this method can be performed quickly and easily to induce stable infection with many isolates of S. pneumoniae, H. influenzae, P. aeruginosa, K. pneumoniae and A. baumannii.
उम्मीदवार जीवाणुरोधी उपचार की प्रभावकारिता, खोज और विकास की प्रक्रिया के हिस्से के रूप में संक्रमण के पशु मॉडल में प्रदर्शन किया जाना चाहिए अधिमानतः मॉडल जो इरादा नैदानिक संकेत नकल में। असुरक्षित चूहों और चूहों में मजबूत फेफड़ों में संक्रमण उत्प्रेरण के लिए एक विधि का वर्णन किया जो एस निमोनिया, एच इन्फ्लुएंजा, पी aeruginosa, लालकृष्ण निमोनिया या ए baumannii की वजह से गंभीर निमोनिया के एक मॉडल में उपचार के मूल्यांकन के लिए अनुमति देता है। पशु anesthetized हैं, और एक आगर-आधारित inoculum nonsurgical intratracheal इंटुबैषेण के माध्यम से फेफड़ों में गहरी जमा है। जिसके परिणामस्वरूप संक्रमण, लगातार प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य है, और कम से कम 48 घंटे के लिए स्थिर और सबसे वियोजन के लिए 96 घंटे तक है। विपणन antibacterials के साथ अध्ययन में विवो प्रभावकारिता के बीच और इन विट्रो संवेदनशीलता में अच्छे संबंध का प्रदर्शन किया है, और फ़ार्माकोकायनेटिक / pharmacodynamic लक्ष्यों के बीच सामंजस्य चुना गयाइस मॉडल और नैदानिक स्वीकार कर लिया लक्ष्यों में देखा गया है। हालांकि वहाँ एक प्रारंभिक समय के निवेश जब तकनीक सीख रहा है, इसे जल्दी से और कुशलता से किया जा सकता है एक बार प्रवीणता हासिल की है। मॉडल के लाभ न्यूट्रोपेनिया आवश्यकता के उन्मूलन, वृद्धि की मजबूती और reproducibility, और अधिक रोगज़नक़ों और आइसोलेट्स, एक असुरक्षित मेजबानी में अध्ययन डिजाइन और एक चुनौतीपूर्ण संक्रमण की स्थापना में सुधार लचीलापन का अध्ययन करने की क्षमता शामिल है।
संक्रमण के पशु मॉडल में संभावित दवा उम्मीदवारों की प्रभावकारिता का मूल्यांकन जीवाणुरोधी दवाओं की खोज की प्रक्रिया का एक महत्वपूर्ण घटक है। विवो में प्रभावकारिता के अध्ययन के लिए महत्वपूर्ण डेटा उपलब्ध कराने के निर्णय लेने की खोज के प्रयासों के अंतराल के पार, संरचना गतिविधि रिश्तों elucidating से (एसएआर) और निर्धारित फ़ार्माकोकायनेटिक-pharmacodynamic (पी / पीडी) के माध्यम से नेतृत्व रासायनिक श्रृंखला के अनुकूलन यौगिकों की विशेषताओं और के लिए खुराक चयन समर्थन नैदानिक विकास और नियामक की मंजूरी। कई पशु संक्रमण मॉडल इन उद्देश्यों के लिए साहित्य में वर्णित हैं। सबसे आम है और व्यापक रूप से इस्तेमाल मॉडलों में से एक न्यूट्रोपेनिया माउस जांघ संक्रमण है, जो ईगल 1, 2 ने बीड़ा उठाया गया था और बाद में Vogelman और क्रेग 3, 4 से विस्तार किया है। यह मॉडल बैक्टीरियल संवेदनशीलता ब्रेकप्वाइंट का दृढ़ संकल्प के समर्थन के लिए और पी / पीडी लक्ष्यों को उपलब्ध कराने के लिए मानव खुराक मार्गदर्शन करने के लिए अमूल्य है। कई परीक्षा रहे हैंमंदिरों में जहां इस मॉडल का भविष्य कहनेवाला क्षमता 4-7 सिद्ध किया गया है। हालांकि, जांघ संक्रमण मॉडल की खामियों में से एक फेफड़ों में संक्रमण के लिए प्रत्यक्ष प्रासंगिकता की कमी है। वहाँ अब मानव में संक्रमण की साइट के लिए पशु मॉडल में संक्रमण की साइट मिलान पर ज्यादा जोर दिया है; और इस तरह, निमोनिया के इलाज के लिए यौगिकों का अध्ययन करने के लिए, यह पशुओं में फेफड़े में संक्रमण मॉडल का उपयोग करने के लिए आदर्श है।
प्रयोगशाला पशुओं में फेफड़ों में संक्रमण उत्प्रेरण के लिए कई तरीकों का वर्णन किया और intranasal साँस लेना, oropharyngeal मार्ग के माध्यम से आकांक्षा, एयरोसोल जोखिम, और शल्य चिकित्सा intratracheal टीका 8 सहित जीवाणुरोधी प्रभावकारिता के अध्ययन के लिए इस्तेमाल किया गया है। कई मामलों में, जानवरों (विशेष रूप से चूहों) पहले के आदेश के एक मजबूत फेफड़ों के संक्रमण को प्राप्त करने के न्यूट्रोपेनिया प्रदान किया जाना चाहिए। इस गंभीर रूप से प्रतिरक्षा राज्य होने के बावजूद, बैक्टीरियल रोगज़नक़ों और दबाव की संख्या जो कृन्तकों में व्यवहार्य के संक्रमण का उत्पादन होता हैसीमित। उदाहरण के लिए, इसे सफलतापूर्वक निमोनिया मॉडल 9, 10, और इस तरह स्ट्रैपटोकोकस निमोनिया, Pseudomonas aeruginosa और क्लेबसिएला निमोनिया के रूप में भी अधिक उग्र रोगजनकों, में हेमोफिलस इन्फ्लुएंजा या असिनेतोबक्टेर स्थापित करने के लिए मुश्किल हो सकता है, चुनौतियों 11-13 खड़ी कर सकते हैं।
1991 में, स्मिथ असुरक्षित weanling चूहों में जो संक्रमण के लिए एक सरल nonsurgical intratracheal इंटुबैषेण विधि 14 के माध्यम से सीधे फेफड़ों में बैक्टीरिया पैदा द्वारा स्थापित किया गया था में एक फेफड़े में संक्रमण मॉडल का वर्णन किया। बेरी एट अल। बाद में चूहों 15 से संक्रमण के लिए विधि संशोधित। एक अगर आधारित inoculum का उपयोग करना, यह टीका तकनीक दोनों असुरक्षित चूहों और एस निमोनिया, एच इन्फ्लुएंजा, लालकृष्ण निमोनिया, पी aeruginosa और ए baumannii के साथ चूहों में मजबूत फेफड़ों में संक्रमण लाती है। यह वियोजन की एक विस्तृत श्रृंखला, शरण विभिन्न विरोध उन सहित करने के लिए उत्तरदायी हैमंजूरी निर्धारकों और उन लोगों के जो अन्य टीका मार्गों के माध्यम से एक व्यवहार्य संक्रमण की उपज नहीं है। यह भी अनुमति देता प्रभावकारिता असुरक्षित पशुओं में निर्धारित किया जाना है, एक शर्त है जिसमें रोगी आबादी है कि गंभीर रूप से प्रतिरक्षा नहीं हैं के लिए पारंपरिक न्यूट्रोपेनिया माउस मॉडल की तुलना में अधिक प्रासंगिक है। स्थिरता और कई रोगज़नक़ों और वियोजन भर में इस मॉडल की विश्वसनीयता जीवाणुरोधी प्रभावकारिता के अध्ययन के लिए यह अच्छी तरह से अनुकूल बनाता है।
इस संक्रमण मॉडल reproducing में इष्टतम सफलता के लिए, निम्न अतिरिक्त सुझाव पर विचार किया जाना चाहिए। एक अध्ययन में उपयोग करने से पहले इन विवो में 3 बार – नई वियोजन की डाह 2 passaging द्वारा बढ़ाया जा सकता है। जमे हुए बैक्टीरियल शेयरों हमेशा मूल से संभव के रूप में कुछ अंश के साथ एक प्राथमिक इन विवो व्युत्पन्न स्रोत से तैयार किया जाना चाहिए, और refreezing या thawed शेयर का पुन: उपयोग को हतोत्साहित किया जाता है। निमोनिया के साथ रोगियों से बरामद हाल ही में नैदानिक वियोजन लॉग चरण विकास में संस्कृतियों का उपयोग करना, और / या तैयारी भी संक्रमण की स्थापना में सुधार करने में मदद कर सकते हैं। अगर (जैसे 2 एमएल खारा निलंबन 8 एमएल अग्रवाल को जोड़ा) में एक पांच गुना कमजोर पड़ने के बजाय इस्तेमाल किया जा सकता बैक्टीरियल inoculum बढ़ाने के लिए दस गुना, और inoculum मात्रा समायोजित जानवर के आकार के आधार पर किया जा सकता है (उदाहरण 200 μL / जानवर आमतौर पर 250 ग्राम चूहों में टीका है)। खारा में जीवाणु निलंबन जोड़ने से पहलेअगर (यानी 2.3 कदम पर), बैक्टीरियल घनत्व भविष्यवाणी या दृश्य निरीक्षण, MacFarland मानकों या ऑप्टिकल घनत्व माप से अनुमान लगाया जा सकता है। यह प्रत्येक विवो प्रयोगों में आयोजित करने से पहले अलग-थलग करने के लिए इन विट्रो विकास विशेषताओं से परिचित बनने के लिए उपयोगी है। विकास और हैंडलिंग में निरंतरता किसी भी अलग के लिए जीवाणु घनत्व का सबसे सटीक आकलन के लिए सक्षम बनाता है। स्टैंडर्ड सूक्ष्मजीवविज्ञानी तरीकों कि इस तरह के वैकल्पिक मीडिया और ऊतक homogenizers के रूप में वर्णित उन लोगों से अलग, inocula तैयारी और संक्रमित ऊतकों से बैक्टीरिया की गणना के लिए उचित रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है।
यह अत्यधिक तैयार है या दिन अगर पिघल प्रयोग से पहले और एक अलग पानी से स्नान 50 डिग्री सेल्सियस के लिए सेट में रात भर यह स्टोर करने की सिफारिश की है। इस प्रक्रिया को सरल और के खिलाफ अगर संक्रमण के समय में भी गर्म किया जा रहा गार्ड में मदद मिलेगी। 41 का तापमान – 42 डिग्री सेल्सियस maintai के बीच एक अच्छा संतुलन को प्राप्त होता हैनिंग अल्पकालिक बैक्टीरियल अस्तित्व के लिए बहुत गर्म किया जा रहा बिना तरल अवस्था में अगर। पोषक तत्व अगर करने के लिए एक संभावित विकल्प के रूप में, नोबल अगर सफलतापूर्वक कुछ प्रयोगों में इस्तेमाल किया गया है। अगर inoculum की एक ट्यूब के एक पूरे प्रयोग के लिए आमतौर पर पर्याप्त है (और सिफारिश की है), लेकिन कई ट्यूबों जानवरों की एक बड़ी संख्या को संक्रमित करने के लिए तैयार किया जा सकता है (जैसे 60 से अधिक) या संक्रमित करने की प्रक्रिया 30 से अधिक समय लेता है जब – 45 मिनट तो कई inoculum ट्यूबों के लिए आवश्यक हैं, अगर की प्रत्येक ट्यूब खारा जीवाणु निलंबन जोड़ने के रूप में यह आवश्यक है। यह जोखिम है कि बैक्टीरियल अस्तित्व और / या फिटनेस एक ऊंचा तापमान टीका करने से पहले करने के लिए विस्तारित जोखिम से प्रभावित हो जाएगा कम कर देता है। यह ध्यान दिया जाना चाहिए कि कई inoculum ट्यूब का उपयोग भी अतिरिक्त पशु यादृच्छिकीकरण प्रक्रियाओं की आवश्यकता हो सकती है। जब भी संभव हो, एक ही inoculum तैयारी से सभी जानवरों को संक्रमित। यह ते साथ प्रवीणता के वर्तमान स्तर को प्रयोगों के आकार से तैयार करने की सिफारिश की हैchnique।
एक कुशल वैज्ञानिक intubate और कम से कम 30 एस में एक पशु टीका लगाना और 5 के लिए ऊपर टीका लगाना कर सकते हैं – (एक अगर inoculum से भरा सिरिंज के साथ आईई) बैच प्रति 6 जानवरों। तकनीक सीखने वालों के लिए, गति जमना शुरू हो जाएगा अगर के रूप में महत्वपूर्ण है; हालांकि, inoculum के सटीक स्थान ज्यादा महत्वपूर्ण है। प्रति बैच 1 या 2 जानवरों के साथ शुरू, और वृद्धि के रूप में तकनीक को और अधिक परिचित हो जाता है। जानवरों इंटुबैषेण के दौरान सांस लेने के लिए जारी; 3 मिनट – इस प्रकार, टीका के लिए समय खिड़की कैसे जल्दी से पशु isoflurane, जो लगभग 2 होना चाहिए से ठीक हो जाए पर निर्भर करता है। पशु कि प्रक्रिया के दौरान फिर से जगाने anesthetized जा सकता है और एक दूसरी बार प्रयास किया, लेकिन यह तो बार-बार ऐसा करने की सिफारिश नहीं है। पहले ही प्रयास में सफल टीका जानवरों के लगभग 100% में होने की उम्मीद एक बार प्रवीणता हासिल की है। नोट में यह पहली बार चूहों का उपयोग तकनीक सीखना आसान है कि; चूहों और अधिक नाजुक होते हैं और छोटे भीरास अधिक जम अगर साथ रुकावट यदि जल्दी से चालाकी से नहीं होने का खतरा है। पूर्व वार्मिंग सीरिंज, ट्यूबिंग और खारा के रूप में अच्छी तरह से इस तरह के कम सेटिंग पर एक हीटिंग पैड के रूप में एक गर्म (गर्म नहीं) सतह पर इंटुबैषेण डिवाइस रखने, के रूप में, अगर की solidification को रोकने में मदद कर सकते हैं। जब तकनीक सीखने, यह भी एक काले रंग का डाई (जैसे केंद्रित methylene नीले रंग के रूप में) के बजाय अगर में जीवाणु निलंबन का उपयोग कर inoculum के उचित स्थान अभ्यास करने के लिए उपयोगी है। तुरंत डाई का टीका निम्नलिखित (पशु संज्ञाहरण और इच्छामृत्यु के बीच ठीक करने के लिए अनुमति नहीं) के रूप में वर्णित प्रक्रिया को पूरा करें, लेकिन पशु euthanize। निर्धारित जहां डाई रखा गया है, और तदनुसार तकनीक समायोजित करने के लिए काटना।
इस मॉडल में प्राथमिक समापन बिंदु संक्रमित फेफड़ों से CFU है। जीवन रक्षा बैक्टीरियल बोझ का एक अच्छा संकेत नहीं है और एक सिफारिश समापन बिंदु नहीं है। समूह के अनुसार 6 जानवरों के रूप में इस predicte है – प्रभावकारिता पढ़ाई के लिए, सुझाव एन 5घ कम से कम 90% बिजली के साथ ≥1 लॉग समूहों के बीच 10 CFU मतभेद का पता लगाने के लिए। पशु समूहों में संक्रमित हो सकता है कि इस तरह के पिंजरे साथियों को एक साथ रहते हैं, या एक सच्चे randomization प्रक्रिया का पालन किया जा सकता है। (है कि बैक्टीरियल अस्तित्व की पुष्टि के लिए ध्यान दें कि यदि समूहों पिंजरे से आवंटित कर रहे हैं, समूहों अंत के अध्ययन वृद्धि पिछले संक्रमित नियंत्रण के साथ एक यादृच्छिक अनुक्रम में संक्रमित किया जाना चाहिए / फिटनेस एक ऊंचा तापमान के संपर्क में समय की लंबाई से प्रभावित नहीं था नहाने के पानी में)। कोई डेटा नहीं रोक लगाए तरीकों आवश्यक होना चाहिए, और कोई भी किसी भी जानवर है कि स्पष्ट रूप से गलत टीका अध्ययन की शुरुआत में (किसी भी उपचार की दीक्षा से पूर्व) में किया गया है की तत्काल हटाने के अपवाद के साथ की सिफारिश की है। पशु कि अध्ययन के अंत से पहले euthanized हैं जांचा जाना चाहिए और परिणाम डेटा सेट जब तक बहिष्कार के लिए एक वैध कारण भावी पहचान की थी में शामिल (यानी एक घटना संक्रमण या उपचार के लिए असंबंधित)। ड्रग भार एएफएफ मईect के कुछ नमूने और सभी में विवो संक्रमण मॉडल भर में एक महत्वपूर्ण विचार है। एक यौगिक अक्सर, इच्छामृत्यु के समय के करीब दिया या एक लंबे आधा जीवन है जाता है, यह (बैक्टीरियल गणना की प्रक्रिया के दौरान बैक्टीरिया पूर्व vivo की हत्या के कमजोर पड़ने और चढ़ाना जारी रखने के लिए एक उच्च पर्याप्त एकाग्रता में ऊतक homogenate में मौजूद हो सकता है अगर प्लेटों पर नमूने या रात ऊष्मायन के दौरान)। यही नहीं, सक्रिय लकड़ी का कोयला और / या एक additive जो बैक्टीरियल कोशिकाओं को नुकसान पहुँचाने नमूना homogenization करने से पहले करने के लिए जोड़ा जा सकता है बिना सक्रिय अणु degrades रोकने के लिए। अन्य तरीकों सक्रिय यौगिक (जो सतह पर तैरनेवाला में रहना चाहिए) के बहुमत को दूर करने के लिए नमूने centrifuging और विभिन्न कमजोर पड़ने रोजगार और योजनाओं चढ़ाना पर्याप्त एक गैर निरोधात्मक एकाग्रता के लिए सक्रिय यौगिक को कमजोर करने में शामिल हैं।
चित्रा 2 में दिखाया उदाहरण इसका सबूत है, इस मॉडल को सफलतापूर्वक मैं के रूप मेंउन है कि अच्छी तरह से अन्य मॉडल (जैसे एच इन्फ्लुएंजा) में जाना नहीं है सहित जीवों की एक विस्तृत श्रृंखला के साथ कृन्तकों में फेफड़ों में संक्रमण nduces। इन संक्रमणों सुसंगत और प्रतिलिपि प्रस्तुत कर रहे हैं, संभावना है कि प्रयोगों एक दिया अलग से मॉडल की विफलता और / या खराब प्रदर्शन के कारण बार-बार करने की आवश्यकता होगी कम करने। हालांकि जानवरों असुरक्षित हैं, वे तेजी से संक्रमण को हल करने के लिए अगर सब में असमर्थ हैं। इस अध्ययन की लंबाई में बढ़ लचीलेपन के लिए अनुमति देता है, कई वियोजन दोहराया इंजेक्शन neutropenia बनाए रखने के लिए की आवश्यकता के बिना कम से कम 96 घंटे के माध्यम से एक व्यवहार्य संक्रमण को बनाए रखने के रूप में। असुरक्षित पशुओं में जीवाणुरोधी प्रभावकारिता का अध्ययन करने की क्षमता का लाभ पहले से 20 का उल्लेख किया गया है, 21, और सबूत है कि, कुछ यौगिकों (जैसे ओक्षज़ोलिदिनोनेस) के लिए, गैर न्यूट्रोपेनिया मूषक से डेटा और अधिक सही मानव जोखिम लक्ष्यों को उन प्रदान की गई न्यूट्रोपेनिया के साथ तुलना की भविष्यवाणी कर सकते है 5। टी के बहुउद्देश्यीय उपयोगितावह मॉडल आंकड़े 3 और 4 और टेबल्स 1 और 2 के इन अध्ययनों में प्रदर्शन किया है की तुलना के लिए, प्रकाशित और अप्रकाशित डेटा का एक बड़ा संग्रह है कि नेतृत्व अनुकूलन के प्रयासों 16, 17 का समर्थन करने के लिए इस मॉडल के साथ उत्पन्न किया गया है, 22-24 का हिस्सा हैं और प्रस्तावित मानव खुराक की पुष्टि regimens 19, 25-29 और पी / पीडी लक्षण वर्णन के लिए 18, 30-32 .While इस मॉडल शुरू में अधिक intranasal साँस लेना विधि के साथ तुलना में संचालन करने के लिए जटिल है, वहाँ कई लाभ के रूप में ऊपर वर्णित हैं। अभ्यास और नियमित उपयोग के साथ, तकनीक प्रदर्शन करने के लिए सरल हो जाना चाहिए।
यह कुछ अध्ययन बताते हैं कि आधारभूत में बैक्टीरियल बोझ है कि आम तौर पर अन्य फेफड़े में संक्रमण मॉडल में लक्षित तुलना में कम थी में उल्लेख किया जा सकता है। यह अगर में आवश्यक कमजोर पड़ने और छोटे चुनौती मात्रा, विशेष रूप से चूहों में बड़े हिस्से में कारण है। हालांकि, यह भी ध्यान दिया जाना चाहिएकि बैक्टीरिया विकास के सभी मामलों में भी जब प्रारंभिक बोझ अपेक्षाकृत कम था में देखा गया था। लक्ष्य आधारभूत जीवाणु भार है 6 6.5 10 CFU / फेफड़ों (6.8 7.3 लॉग 10 CFU / औसत फेफड़ों के वजन के आधार पर चूहों में ऊतक के ग्राम) जो गंभीर निमोनिया 33 के साथ मानव रोगियों में अनुमानित घनत्व से मेल खाती करने के लिए लॉग इन करें। एक उच्च आधारभूत बोझ आगे बैक्टीरियल inoculum ध्यान केंद्रित करके या अतिरिक्त बैक्टीरिया विकास की अनुमति के लिए यौगिक प्रशासन की शुरुआत में देरी से प्राप्त किया जा सकता है; हालांकि, बहुत ज्यादा चुनौती लोड बढ़ असामान्य रूप से गंभीर है और गंभीर बीमारी (यानी कम से कम 24 घंटे मृत्यु) कि संवेदनशीलता की परवाह किए बिना सभी जीवाणुरोधी उपचार के लिए आग रोक है हो सकता है। हालांकि शुरू में inoculum जानवर के बाएं फेफड़े में रियायत के तौर पर रखा गया है, संक्रमण आम तौर पर दोनों फेफड़ों भर में फैलता है। प्रगतिशील फेफड़ों के रोग, अन्य अंगों को बैक्टीरिया के प्रसार, और अंततः रुग्णता अक्सर observ हैएस निमोनिया, लालकृष्ण निमोनिया और पी aeruginosa के साथ एड। ब्याज की, एच इन्फ्लुएंजा और ए baumannii साथ संक्रमण आमतौर पर अधिक समाहित कर रहे हैं और शायद ही कभी निर्धारित बैक्टीरियल inocula में मौत का कारण हो।
इस मॉडल से प्राप्त प्रभावकारिता परिणामों में इन विट्रो संवेदनशीलता प्रोफाइल के रूप में अच्छी तरह के रूप में परिभाषित पी / पीडी लक्ष्य के साथ अच्छी तरह से सहसंबद्ध है। बैक्टीरियल बोझ में कटौती नियमित तौर पर, एजेंट के लिए अतिसंवेदनशील परीक्षण किया जा रहा माना वियोजन के लिए मनाया जाता है, जबकि उन पर विचार प्रतिरोधी प्रदर्शनी आधारभूत 16, 17, 19, 24-29 से ऊपर कोई परिवर्तन या बैक्टीरिया का विकास। दो क़ुइनोलोनेस और एक macrolide इस मॉडल का उपयोग कर 32 के मूल्यांकन के चूहों में अध्ययन से पता चला है कि पी / पीडी लक्ष्य के लिए आवश्यक एक 1-लॉग एस निमोनिया में 10 कमी न्यूट्रोपेनिया चूहों में निर्धारित लक्ष्य और अधिक महत्वपूर्ण बात के साथ सहसंबद्ध आधारभूत के साथ तुलना में, के साथ समुदाय का अधिग्रहण बैक्टीरियल Pneum के लिए नैदानिक लक्ष्योंOnia 6, 7, 34, 35। Gepotidacin, एक उपन्यास तंत्र एंटीबायोटिक, कई एस निमोनिया के खिलाफ परीक्षण किया गया था और एक 1-लॉग 10 न्यूट्रोपेनिया जांघ मॉडल में एक 1-लॉग 10 कम करने के लिए आवश्यक है कि इस के रूप में फेफड़ों के संक्रमण मॉडल 31 में कमी के लिए एक समान पी / पीडी लक्ष्य की आवश्यकता 36 जब फेफड़ों के प्रवेश को ध्यान में रखा गया था (फाइल पर डेटा)। इसी तरह, पी / पीडी पी aeruginosa के खिलाफ GSK2251052 के लिए चूहों में निर्धारित लक्ष्यों, 38 ठहराव, 1- और इस फेफड़ों मॉडल 30 और न्यूट्रोपेनिया जांघ संक्रमण मॉडल के बीच CFU में 10 में कटौती 2-लॉग इन करने के लिए संगत कर रहे थे जब फेफड़ों के प्रवेश 37 माना जाता था । एक न्यूट्रोपेनिया फेफड़े में संक्रमण intranasal टीका गरीब था का उपयोग कर मॉडल के साथ संबंध; हालांकि, GSK2251052 कि अध्ययन 38 में एक स्थिर प्रतिक्रिया की तुलना में अधिक उत्पादन नहीं किया था। यह 6 प्रवेश के साथ तुलना के रूप में उच्च बैक्टीरियल inoculum, जो 8 लॉग 10 CFU / माउस था के कारण हो सकता है <sub> 10 CFU / न्यूट्रोपेनिया जांघ 37 और intratracheal इंटुबैषेण 30 मॉडल में माउस। के रूप में यह translational भविष्य कहनेवाला क्षमता का आकलन करने के मौजूदा मॉडल और नैदानिक डेटा के साथ संबंध के साथ प्रत्यक्ष तुलना की अनुमति देता है इस तरह के रूप डेटा का संग्रह, बेंच मार्किंग के लिए महत्वपूर्ण है। intratracheal इंटुबैषेण फेफड़े में संक्रमण मॉडल के अधिक व्यापक उपयोग विश्लेषण के इन प्रकार के लिए अतिरिक्त डेटा प्रदान करेगा।
इस असुरक्षित निमोनिया मॉडल के कई सीमाएं हैं। सबसे पहले, यह नहीं सहज प्रतिरोध के उद्भव का मूल्यांकन क्योंकि उच्च बैक्टीरियल inoculum आम तौर पर बहुत गंभीर एक संक्रमण में इस तरह के अध्ययन के परिणामों के लिए आवश्यक करने के लिए अच्छी तरह से अनुकूल है। प्रयासों के बाद (फाइल पर डेटा) पूर्व मौजूदा विषाक्त पदार्थों को दूर करने के लिए inocula के पूरी तरह से धोने के बावजूद (में कम से कम 24 घंटे मरणासन्न बनने यानी जानवरों) 7 या 8 लॉग बेस लाइन पर 10 CFU, तेजी से रुग्णता देखा गया है की बैक्टीरियल बोझ को प्राप्त करने के लिए। यहबड़े मूषक का उपयोग करके इस मुद्दे पर काबू पाने के लिए संभव हो सकता है। चूहे, विशेष रूप से भारी चूहों (> 250 ग्राम), बेहतर रूप में चूहों के साथ तुलना में उच्च inocula बर्दाश्त करने के लिए दिखाई देते हैं और अध्ययन के इन प्रकार के लिए उपयुक्त हो सकता है। रोगज़नक़ बातचीत: एक दूसरी सीमा है कि एक संक्रमण-बढ़ाने के रूप में अगर के उपयोग के कुछ मेजबान के मूल्यांकन के लिए मॉडल का उपयोग कर छीन सकता है। यह माना जाता है कि अगर एक संरक्षित केन्द्र बिन्दु तक संक्रमण पूरी तरह से फेफड़ों के भीतर स्थापित किया है प्रदान करता है। बल्कि यह अगर मदद करने के लिए इस मुद्दे पर काबू पाने से खारा में inoculum वितरित करने के लिए संभव है; हालांकि, यह ध्यान दिया जाना चाहिए कि यह केवल कुछ वियोजन के साथ संक्रमण का उत्पादन होगा। तीसरा, वहाँ एक तेजी से सीखने की अवस्था तकनीक में कुशल बनने के लिए आवश्यक है। प्रक्रिया नाजुक हो सकता है, विशेष रूप से चूहों में। यह गलती से घेघा में धातु प्रवेशनी जगह के लिए आसान है, और अत्यधिक बल या तो घेघा या श्वासनली के पंचर करने के लिए नेतृत्व कर सकते हैं। inoculum की सावधानी स्थान भी हैआवश्यकता है या जानवरों या तो ठीक हो या नहीं हो सकता है नहीं पर्याप्त रूप से संक्रमित हो। हालांकि, धैर्य और दृढ़ता के साथ, एक अत्यधिक कुशल हो और जल्दी तकनीक का प्रदर्शन कर सकते हैं, आसानी से और सही।
neutropenia के लिए आवश्यकता को दूर करने, मजबूती और reproducibility बढ़ रही है, जांचकर्ताओं अधिक रोगज़नक़ों और वियोजन अध्ययन करने के लिए अनुमति देता है, प्रयोगात्मक डिजाइन के लचीलेपन में सुधार और निमोनिया के लिए फार्माकोडायनामिक्स को चिह्नित करने के लिए एक चुनौतीपूर्ण संक्रमण प्रदान करके, इस असुरक्षित फेफड़े में संक्रमण मॉडल एंटीबायोटिक की खोज करने के लिए पर्याप्त मूल्य कहते हैं समुदाय। अतिरिक्त जांचकर्ताओं द्वारा इस मॉडल के उपयोग में वृद्धि में मदद मिलेगी आवश्यक बेंच मार्किंग प्रदान इसे और अधिक व्यापक स्वीकृति हासिल है और उचित व्याख्या के लिए सहायक सूचना उपलब्ध कराने के लिए जारी करने के लिए।
The authors have nothing to disclose.
झा स्वीकार करते हैं और हमें पहले इस मॉडल को पढ़ाने के लिए गुरु, मित्र और पूर्व प्रबंधक वैलेरी बेरी का शुक्रिया अदा करना चाहता है; और गैरी Woodnutt, जो हमें की नींव पढ़ाया जाता है और जीवाणुरोधी पी / पीडी के क्षेत्र के लिए हमारी प्रतिबद्धता को प्रेरित किया। सभी लेखकों ने अपने समर्थन और हमारे विज्ञान के लिए प्रशंसा के लिए डेविड पायने का शुक्रिया अदा करना चाहते हैं। हम विवो माइक्रोबायोलॉजी उनके सहयोगियों ने जो इन तरीकों, विशेष रूप से पीट DeMarsh, रोब स्ट्रॉब, Roni पेज और Nerissa साइमन का उपयोग कर उत्पन्न डेटा के शरीर के लिए योगदान में हमारे पूर्व स्वीकार करना चाहते हैं। अंत में, हमारे धन्यवाद हमारे इन विट्रो माइक्रोबायोलॉजी सहयोगियों को उनकी सहायता के लिए, विशेष रूप से सभी mics हम अनुरोध करते हैं (लिन मैकक्लोस्की, जोश पश्चिम और शेरोन मिन) प्रदान करने के लिए जाना; और हमारे नैदानिक सूक्ष्म जीव विज्ञान टीम है जो विशेषज्ञ सलाह और समर्थन (लिंडा मिलर, निकोल Scangarella-ओमान और डेबोरा बटलर) प्रदान करता है।
TSA II Trypticase Soy Agar with 5% Sheep Blood | Becton Dickinson and Company | 4321261 | |
Chocolate II Agar | Becton Dickinson and Company | 4321267 | |
BBL Brain Heart Infusion Broth Modified | Becton Dickinson and Company | 299070 | |
BBL Trypticase Soy Broth with 20% Glycerol | Becton Dickinson and Company | 297808 | storage media for frozen stock |
Inoculating loop | Nunc | 251586 | |
0.9% Sodium Chloride, USP | Baxter Healthcare Corporation | NDC 0338-0048-04 | |
Difco Nutrient Agar | Becton Dickinson and Company | 213000 | |
30 ml free standing centrifuge tube with cap | EverGreen Scientific | 222-3530-G80 | |
50 ml Polypropylene Conical Tube 30 x115mm | Falcon, a Corning Brand | 352070 | |
14 ml Polypropylene Round-Bottom Tube 17 x 100mm | Falcon, a Corning Brand | 352059 | |
Guide Tool | Intek Services Ltd | GT01 | custom-made metal cannula for rats |
90' Portex tubing | SAI | POR-080-100 | plastic cannula for rats |
1 ml TB syringe slip tip | Becton Dickinson and Company | 309659 | |
PrecisionGlide Needle 25G x 5/8 | Becton Dickinson and Company | 305122 | |
Animal feeding needle – straight 20×3" 2-1/4 | Popper and Sons, Inc | 7903 | used to create metal cannula for mice |
Intramedic polyethylene tubing | Clay Adams brand – Becton Dickinson and Company | 427401 | plastic cannula for mouse |
75 TN 5.0ul syringe 26s/2"/2 | Hamilton | 87930 | HPLC glass injection syringe |
Pyrex tube, culture 25×150 screwcap with rubber liner | Corning | 9825-25 | to autoclave/store metal cannulae |
70% isopropyl alcohol | Vi-Jon (Swan) | NDC 0869-0810-43 | |
Isoflurane, USP | Piramal Healthcare | NDC 66794-013-10 | |
Stomacher | Seward | Stomacher80 | |
Stomacher 80 classic bags | Seward | BA6040 | |
Assay plate, 96 well, round bottom | Costar, Corning Inc | 3795 | optional, for serial diluting |
Blood Omni Plates | Hardy | #A127 | optional, rectangular blood plates |