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Medicine

活体显微镜及血栓诱导在无毛小鼠的耳垂

Published: April 2, 2017 doi: 10.3791/55174
* These authors contributed equally

Summary

无毛SKH1-HR hr小白鼠的耳朵模型使而不在检查微血管床之前手术准备微循环和光毒性血栓诱导的活体荧光显微镜。因此,无毛小鼠的耳朵是一个极好的体内模型微血管血栓形成,血栓进化,与溶栓期间学习复杂的相互作用。

Abstract

血管疾病的血栓并发症是工业国家的发病率和死亡率的一个主要原因。由于在血栓形成的细胞和非细胞的血液成分之间复杂的相互作用,生理学和血栓形成的病理生理学的研究可靠只能在体内进行。因此,本文提出了在无毛小鼠耳模型,并专注于微循环,血栓形成,血栓和进化的体内分析。通过使用活体荧光显微镜和相应的荧光染料的静脉内(iv)应用程序,能够容易地进行微循环在耳廓的重复分析,而不需要外科手术制备。此外,该模型可以适合于体内的不同问题的研究,包括伤口愈合,再灌注损伤,或血管发生。综上所述,无毛小鼠的耳朵对于在利沃夫的理想模型在生理学或病理生理学条件和它的不同的全身或局部治疗反应的评估皮肤微循环邻研究。

Introduction

本制品的目的是描述施加到无毛小鼠的耳廓用于直接观察和微循环的分析,血栓形成,和血栓进化活体显微镜的技术。随着1在1000的发病率,静脉血栓形成仍是发病的常见原因。虽然诊断,预防策略和治疗已在近几年得到了发展,静脉血栓形成的三分之一表现为肺动脉栓塞1。动脉血栓形成在心血管疾病,这是在工业化国家死亡的最常见原因至关重要的作用。基于粥样硬化斑块的破裂动脉血栓形成涉及心脏发作,肠系膜梗死,中风和。每个手术暴露属下的结构中血液成分,改变血流动力学,并固定了病人。在下肢,器官的T人工关节手术ransplantation和皮瓣手术血栓并发症的常见原因。尤其是微血管血栓形成经常导致不可逆的损害,因缺乏临床症状。同样,微血管栓塞起着至关重要的规则在几种疾病,包括血栓性血小板减少性紫癜,败血症,弥漫性血管内凝血,抗磷脂综合征,慢性静脉功能不全,等等。

用于治疗和预防血栓形成的一些新的药物,近年来被开发,但抗血小板药物和抗凝药物仍然有副作用,缺乏拮抗剂,并配备持续时间长的效果。这些缺陷导致紧急医疗问题。因此,需要更多的研究来发现血栓形成,这很难在体外模拟过程中发生的复杂过程。

无毛SKH1-HR 人力资源小鼠在伦敦动物园里发现了1926年。由于14号染色体上的基因缺陷,动物失去了它的皮毛10日龄后,这使得对血管的活体显微镜访问的良好血管耳廓。耳的平均厚度为300μm。它由真皮的两层,其通过软骨隔开。对软骨的凸背侧,3个维管束进入耳垂。心尖血管弧和基础分流连接三个包。小静脉具有200微米(基础)和10微米(心尖)之间的直径。关闭网状毛细血管周围的空毛囊2。无毛SKH1-HR 人力资源鼠标的剖析,使耳廓血栓形成研究的强大和高性价比机型。

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Protocol

所有的体内实验(7221.3-1-006 / 15)在符合有关动物保护和NIH指南实验动物的护理和使用(实验动物资源研究所,国家研究理事会)德国法律进行。

1.动物一般饲养

  1. 执行与年龄4至6周雄性SKH1-HR 小时小鼠实验。使用动物用20和25克的重量。
  2. 保持动物在无病原体的设施和24至26℃下在标准条件和约60%相对湿度下,以稳定获得水和食物随意
  3. 跟上只雄性动物在笼子里一个。动物的外壳为他们的幸福过程中提供的床上用品和丰富的材料。

2.动物的预先安排

  1. 称重小鼠并装入各自的药物( 例如,大麻素,5米克/千克体重(BW))转换成胰岛素注射器。施用前血栓感应药物30分钟。
  2. 通过保持拇指和食指和用小指的小鼠的尾之间的小鼠的颈部,舒展动物和注射药物腹膜内(IP)到腹部的左下象限。把动物放回笼子15分钟。
  3. 用氯胺酮(90毫克/千克体重)和赛拉嗪(25毫克/千克体重)准备麻醉。前血栓诱导15分钟,麻醉小鼠。把鼠标在笼中,稍拉尾部,并与胰岛素注射器注入麻醉剂的ip。
  4. 把鼠标放回笼子,直到麻醉起效。为了验证足够的麻醉,掐钳尾。
  5. 负载0.05毫升解冻异硫氰酸荧光素标记的葡聚糖(FITC-葡聚糖; 5%,150 kDa)的成胰岛素注射器。虽然填充注射器,确保没有气泡残留,因为即使小intravenouslY(IV)-administered气泡可能是致命的动物。
  6. 放置麻醉小鼠上的面朝下位置的加热板。调节加热板,以37℃。
  7. 把眼膏鼠标的角膜。消毒皮肤,并用消毒器械。
  8. 缝合聚丙烯7/0的两根缝线到右耳的头部和尾部边缘。放置尽可能靠近边缘和邻近基尽可能( 图1B)的线迹。
  9. 移鼠标背的位置。修复所有的腿用胶粘带的acrylglass平台。钩门牙下一个缝合线,并通过粘缝合线与粘合带的acrylglass在背屈定位磁头。
  10. 转运操作体视显微镜下平台上的动物。使用16X放大倍率。

3.左颈静脉和FITC-葡聚糖的注射液的制备

注:MIC右耳的roscopy,准备左颈静脉。

  1. 使用手术刀,创建在脖子上的在头尾方向上的左侧的皮肤上的5毫米切口。解剖用microforceps和microscissors皮下组织。或者结扎血管交叉与聚酯8/0缝合线或与电凝。
  2. 使用自由和microforceps从microscissors外膜静脉不接触容器。
  3. 使用制备的胰岛素注射器将荧光染料的注入。小心地抓住与microforceps血管壁,无穿孔静脉。穿透扩张血管壁与注射器和注入FITC-葡聚糖IV。
  4. 撤销使用棉签,注射器后停止出血。避免血液和染料耳朵的污染。

4.活体荧光显微右耳的定位

  1. 在加热板的动物转移到acrylglassÇ。施工与用于加热板的狭槽和用于定位耳0.5厘米高平面。
  2. 修复动物面朝下放在使用粘合带的加热板。放置相对较强,而凸软骨在耳根0.5厘米高平面旁边的耳( 图1B),使得耳朵的顶端部能够在平面上被定位平面。
  3. 室温的0.9%NaCl一滴添加到acrylglass平面以便放置耳。将右耳,与面临的凹腹侧预先布置的缝合线向下,在0.9%的NaCl的下降。用棉花棒,吸收氯化钠的下降,让毛细力附着耳朵平面到acrylglass。
  4. 大盘缝合到acrylglass修复耳朵的位置。
  5. 0.9%室温下的NaCl一滴添加到耳的凸背侧。小心地把一个盖玻片(直径为0.5厘米)在耳朵上而不压缩进入第基底容器Ë耳朵。使用棉签,以便最小化盖玻片和耳靶血管之间的距离从除去盖玻片下尽可能多的NaCl越好。

右耳的活体5荧光显微镜和诱导血栓

  1. 调整FITC-葡聚糖可视化活体荧光显微镜(450 - 490纳米; FT:510; LP:520)。使用可变100-W汞灯作为光源。高分辨率,黑色和白色的CCD相机连接到DVD刻录机。
  2. 转移在包含与所述固定绑架耳朵到活体荧光显微镜的桌子加热板的acrylglass动物。
  3. 在直径和与400的顺行血流60微米 - - 600微米/秒使用20X放大倍率(20X / 0.95的数值孔径)和20%的光强度,搜索静脉容器50。
  4. 室温水一滴加入盖玻片为63X magnificatio的水浸泡Ñ物镜(63X / 0.95的数值孔径)。用注射器以1毫米直径的套管,并放置在显微镜的物镜的下降。加入足够的水接触盖玻片,客观与水滴。
  5. 水滴的应用后,立即开始与直径和血流的离线测量20%的光强度的记录为20秒的容器中。
  6. FITC-葡聚糖的注射后开始血栓诱导5分钟。为此目的,提高的光强度为100%。
  7. 在血栓感应,关闭时间为30-S内的显微镜的2秒的孔来检查血液流动。在持续的血流量的情况下,再次打开光圈。在停止血液流动的情况下,观察容器30秒。
    注意:作为闭塞该容器被分类如果流静止30秒或更多,或如果血液逆行流动。如果orthograde血流重新开始,完全开放光圈和CONTIN如上所述UE发生血栓感应直到血管闭塞。在早期血栓感应,确保当光圈被关闭以检查血液流动的时间是为了维持几乎连续的落射照明尽可能短。后来,血栓生长期间,将容器灌注有更少的荧光染料,因此可以连续地被观察到。
  8. 选择并堵塞每穗5艘船。限制血栓诱导时在显微镜下大约1小时,FITC-葡聚糖的注射后。

6.后续活动

  1. 执行使用经皮聚丙烯6/0缝合颈部的伤口闭合。
  2. 在从麻醉中恢复,把鼠标放回笼子,并使用红外光暖动物。
  3. 从DVD记录器传送所记录的数据到软件允许血管和血液流速的直径的测量。
_title“> 7。左耳的检查

  1. 让动物恢复和消除所有注射FITC葡聚糖48小时。
  2. 重新运行此时间制备右颈静脉和左耳上述步骤。

8.组织Asservation

  1. 左耳的活体荧光显微镜后,样品0.5毫升的来自眼睛的眼球后静脉丛血液用玻璃毛细管。仔细穿透与旋拧运动的内眼睑角度,直到静脉血液流经毛细管。收集在乙二胺四乙酸(EDTA)血管探头。
  2. 血液取样后,通过注射500毫克/公斤体重氯胺酮到尾静脉牺牲动物。
  3. 计数使用血液分析仪用于白细胞,红细胞,血小板,血红蛋白和血细胞比容的定量评估的血细胞。
  4. 离心剩余的EDTA血液在2500×g下和室温下,10分钟英寸吸管和冷冻血浆作进一步调查。
  5. 用剪刀,剪耳和4%的甲醛作病理检查修复。

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Representative Results

在血栓形成大麻素治疗的影响

在0.05 ml的FITC-葡聚糖的的注入,光毒性血栓诱导导致内皮损伤和血小板壁层插头的形成( 图23)。在本研究中,血栓感应大麻素的腹膜内注射(5 mg / kg体重)或载体后导致所有小静脉血栓形成的血管闭塞( 图4)。在载体处理的动物中,时间到血栓形成为430秒(25 百分位:330秒; 75 百分位数:637个或多个)。既不大麻二酚(CBD),也不WIN55,212-2(WIN)给药显示出对血管闭塞次相关影响。然而,内源性大麻素花生四烯乙醇胺显著减少(25 百分位所需的血栓形成和血栓性血管闭塞,以270秒的时间:240S; 75 百分位数:360秒,P <0.05,相对于赋形剂)。

为了测试的anandamide的水解和其产品的后续环氧合酶相关变换,花生四烯酸,是否参与由花生四烯酸乙醇胺血栓形成,非特异性环氧合酶抑制剂消炎痛与花生四烯酸乙醇胺在另一组实验中( 图5)相结合。再次,在0.1 ml的FITC-葡聚糖,花生四烯酸乙醇胺(10 mg / kg体重)的注射减少血栓形成的时间,相比于车辆(P <0.05,相对于赋形剂)。而吲哚美辛单独治疗对小静脉闭塞倍没有影响,环加氧酶抑制花生四烯酸乙醇胺处理的动物显著延长血栓形成至300秒( 25个百分位数:240秒; 75 百分位数:420秒),用160秒的中位数相比, ( 25个百分位数:100秒; 75 百分位数:200秒)花生四烯酸乙醇胺TRE后 atment只(P <0.05与花生四烯酸乙醇胺)。车辆治疗和吲哚美辛/大麻素共同给药后血管闭塞次下没有显著不同2。

图1
图1中的颈静脉(A)和安置在耳的用于活体显微镜(B)的制备。 (A)使用操作立体显微镜,右颈静脉准备。左耳的位置的缝线FITC葡聚糖的注射之前被缝合。从左颈静脉的现有解剖伤口闭合与经皮缝合线(B)。左耳是固定的聚丙烯缝线7/0。盖玻片小心地放在无压缩耳朵的基础容器。的加热板在整个实验期间维持体温的动物。OM /文件/ ftp_upload / 55174 / 55174fig1large.jpg”目标=‘_空白’>点击此处查看该图的放大版本。

图2
图2.活体显微镜和血栓诱导。相同的微静脉中(A)和之后(B)血栓感应在10X,20X,63X和倍率(左到右)前所示。血浆沾有0.05毫升异硫氰酸荧光素标记的葡聚糖(FITC-葡聚糖,5%)的。血栓标有*。 请点击此处查看该图的放大版本。

图3
图3.小静脉血栓感应。相同的微静脉中示出beforË (A),经过100秒(B),和后落射照明的300秒(C)由活体荧光显微镜的装置。反应性氧物质是由蓝色光反射照明产生 - FITC-葡聚糖的(450 490纳米)和损害内皮。因此,血小板被活化并粘附到暴露内皮下结构,导致初级顶叶血栓形成(B)和,接着,在完成血栓血管闭塞(C)。这个数字已经从格兰博3修改。血栓标有*。 请点击此处查看该图的放大版本。

图4
图4.流程图显示实验方案。 </由相应的大麻素(5/10毫克/千克体重)的腹膜内注射强>大麻素治疗进行IVM前30分钟和血栓形成的在第0天右耳IVM仅限于1个小时的诱导。 47个小时后,在第2天,相同的协议被采样血液之前施加到小鼠的左耳。这个数字已经从格兰博3修改。 请点击此处查看该图的放大版本。

图5
图5.单大麻素治疗和抑制环氧化酶后小静脉血栓形成。在经历光/染料血栓诱导小鼠静脉闭塞倍。 (A)将动物用的含DMSO-车辆(VEH)处理或与花生四烯酸乙醇胺大麻素(AEA),WIN55,212-2(WIN),大麻二酚或(CBD)(5 mg / kg体重; N = 5)。 0.05毫升5%FITC-葡聚糖的被血栓诱导前静脉注射。在另一设置中,0.1毫升5%的FITC-葡聚糖(B)花生四烯酸乙醇胺(10 mg / kg体重)与吲哚美辛(印度)(5毫克/千克体重)结合,经评估的环加氧酶依赖性产品上血栓形成的影响花生四烯酸乙醇胺(N = 5)。秩和检验秩单向ANOVA随后唐恩的事后分析(A和B)。的值被给定为中位数和IQR( 5, 25, 75,和 95个百分位数)。 * P <0.05,相对于媒介物,#P <0.05与花生四烯酸乙醇胺,§P <0.05相对于吲哚美辛。这个数字已经从格兰博3修改。 请点击此处查看该图的放大版本。

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Discussion

有对成功血栓诱导SKH1-HR 人力资源小鼠的耳垂几个关键步骤。进行故障排除,协议的各个步骤中括号表示。

考试条件是幼龄动物的理想在4岁 - 6周,与表皮的角化低。在较老的动物中,血管的可视化的质量要差少可比由于皮肤表面和靶血管(步骤1.1)之间的距离更高。

为了防止在考试区域FITC葡聚糖外渗,固定缝线必须尽可能勉强放置越好。在接近的线圈,荧光染料可以外渗和减少血管外空间和容器之间的对比度。染料的这种外渗进展缓慢。如果超过15分钟,如所提到的FITC-葡聚糖的注入,好之前的缝合线被缝合活体显微镜检查条件,确保(步骤2.8)。

FITC葡聚糖正在慢慢消除经肾脏。具有高分子葡聚糖(150 kDa)的荧光染料的组合延迟外渗和排泄。在本研究中,对显微镜和血栓诱导的时间仅限于1个小时,以防止排泄和低荧光染料的血浆浓度对血栓形成时间的影响。

却使注射器,无气泡仍然应该是注射,因为在注射器甚至小静脉给药气泡可能是致命的动物(步骤2.5)。当静脉注射后拉动注射器从颈静脉的,定期出血发生(步骤2.6)。随后检查耳与血液或FITC-葡聚糖的污染使得活体显微镜基本上难以或者甚至不可能。因此,推荐准备对侧耳朵和颈静脉的。

盖玻片必须仔细施加,无需任何额外的压力(步骤4.5)。否则,在整个耳朵的血液流动是由于基底血管的压迫,这可能会诱导血栓期间减少阻塞时间放缓。定位的精确度盖玻片可以用立体显微镜进行验证。小静脉必须不断填补,特别是在盖玻片的边缘。盖玻片必须用来保证与活体荧光显微镜的物镜中的水滴的接触。浸渍有为了确保100%的光强度的容器的落射照明整个血栓感应期间来获得。实现水滴的稳定排名的最好方法是使用盖玻片。把滴上加湿的半透明塑料包装或直接在皮肤上使水和不恒定的浸泡漏极。

意义和无毛SKH1-HR 人力资源的耳垂鼠标的限制

所述SKH1-HR 小时无毛小鼠允许使用活体显微镜2,4在耳垂血管的直接功能成像 2的解剖结构。整个网络微血管,包括静脉,动脉和毛细血管的高达100微米的直径,可以可视化和实时检查。这使得无毛小鼠的耳用于伤口愈合6,7,轴向图案襟翼2,5,大分子泄漏5,和微血管血栓形成8,9,10的研究的合适模型。船只的高达100微米的直径的可用性是对模型的限制。剪应力,血液流动,和血管结构在小和大血管不同。因此,与颈动脉或股血管模型可更适合于研究集中于大血管血栓形成。

微循环的活体可视化的所有替代模式,如仓鼠11的脸颊,鼠标12,13,或大鼠9的提睾肌的背部皮肤褶室,10需要外科手术的准备。无毛老鼠的耳朵的血管是不通过手术组织损伤的危险接近,因此对炎症,血管收缩,止血的激活测量参数的无毛小鼠14的耳垂没有影响。即使没有手术准备是必要的,图像分辨率和清晰度可媲美其它型号( 例如,背部皮肤褶腔和提睾准备)。为了达到高的成像质量,该协议必须彻底其次,和年轻小鼠吨的较少角化他真皮必须使用。

由于他们的肤浅的本地化,耳朵的血管很容易被活体荧光显微镜研究。他们通过他们的血管直径的调整能够在动物体温。因此,无论室温和体温必须进行标准化,以实现可重复的结果。所有耳垂血管代表真皮组织外周血管。相比中央容器,周围血管是由不同组织学结构和受体表达为特征。因此,其他车型( 例如,肠系膜静脉和动脉的制剂)是有关中央血管特定问题的审查更加合理。

所描述的模型的另一个限制是与使用无毛SKH1-HR 小时的小鼠,其不作为其它小鼠品系作为共同相关联的限制。因此,转基因育种无毛小鼠可劳动白条和昂贵。化工和机械脱毛可引起局部炎症,并且不移除发根,这可能会损害视觉质量。表面和靶血管之间由于良好的可视化质量和低距离为可靠血栓诱导关键;其它模型( 例如,背皮褶室)鼠标的可能更适合于需要用毛皮某些小鼠品系研究。在另一方面,耳垂模型使的各种病理状况的模拟。例如,在危重灌注组织微循环可以两三个神经血管束15的结扎后进行检查。伤口愈合过程中的微循环的分析是使用无毛小鼠模型16的耳的另一种合适的示例。

对于一些实验性的问题,必须研究在不同时间点相同的动物ASSE是非常重要的SS的处理的时间序列。在最近出版的实验研究,在左耳血栓感应不是由右耳3事先治疗改变。因此,该模型的另一优点是血栓感应在同一小鼠的每只耳朵的在两个不同的时间点的可能性。关于动物保护,实验过程是动物微创,和老鼠没有从手术中恢复或进行实验之间的背部皮肤褶室。在每一个动物,每穗至少五个适当的船只可以通过光毒性血栓感应被遮挡,这么多的数据可以用少量的动物被收集。

意义和活体显微镜和血栓感应的局限

活体荧光显微镜使微循环的实时5可视化。静脉内给药,FITC-dextra后Ñ染色血浆。它使血栓增长从感应到完整血管闭塞的开始观察。白色和红色的血细胞可以被认定为在造影剂的空白。为进一步的研究( 例如,粒细胞-内皮相互作用),白血细胞可以用罗丹明-6G被染色。

该实验的记录和离线分析使得能够红细胞速度,小动脉血管舒缩,毛细血管密度,和微血管直径的体内测量。这些参数起到血栓形成,瓣灌注和伤口愈合显著的作用。观察活体显微镜可以在实验中5直接和持续量化这些动态灌注参数及其变化。其它技术,如氙洗出,组织氧水平,激光多普勒,或染料扩散,也微创,但它们是由吨限制他的血流量的间接测量。这可能会影响实验结果的有效性。因此,直接的方法是优选的。

所述荧光染料的反应和一定波长导致活性氧物质的释放,这局部地损坏内皮17的光。相比于内皮当流利血液粒子的曝光时间是1000倍以下。因此,形成血栓的效果主要由于光毒性内皮损伤,而不是由于直接光毒性的血小板活化18。血小板通过接触到暴露的内皮下基质激活并形成血小板插头19( 图3)。血栓形成的这种机制在许多情况下,如不稳定型心绞痛和血管吻合了杰出的作用。

光/染料血栓感应比ALT侵入性较小通过球囊导管20中 ,电流21,激光器22,或炎症19创建内皮病变的ernative方法。血栓诱导光/染料也是在物镜的光束严格局部作用。因此,相邻的容器不直接受影响的,并且可以被用于随后的血栓诱导。光/染料血栓诱导可以在两个小静脉和动脉中进行。在本研究中,小静脉被专门处理的,因为小动脉的落射照明可引起血管痉挛,这可能会影响到闭塞倍19。

麻醉,用甲苯噻嗪和氯胺酮,这是建立在兽医和实验医学的组合来执行。这些药物腹腔注射。与上述剂量,足以麻醉手术公差30分钟和睡眠1.5 - 2小时达到。

无毛SKH1-HR 人力资源鼠的耳朵是公认的在伤口愈合和襟翼研究。一些研究已经成功地使用型号为诱导血栓及溶栓3,23,24,25,26。如果适当地执行该协议,在无毛SKH1-HR hr小白鼠的耳垂活体显微镜为微循环和血栓形成研究的可靠,容易和有效的工具。这是简单的,以模拟各种病理条件,而该模型提供了一个极好的实验设置,以评估体内微循环的关键参数。

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Disclosures

作者什么都没有透露。

Acknowledgments

作者没有确认。

Materials

Name Company Catalog Number Comments
SKH-1/hr mice Charles River 477 can be purchased from other vendors 
standard laboratory food ssniff Spezialdiaeten V1594-0  can be purchased from other vendors 
operation stereomicroscope Leica  M651/M655  can be purchased from other vendors 
intravital microscope Zeiss Axiotech Vario 100  can be purchased from other vendors 
objective (20X/0.95)  Zeiss 20x/0,50 W; Plan-NEOFLUAR  can be purchased from other vendors 
objective (63X/0.95) Zeiss 63x/0,95 W; ACHROPLAN  can be purchased from other vendors 
black and white CCD-camera  Pieper  FK 6990 IQ-S  can be purchased from other vendors 
DVD-recorder Panasonic DMR-EX99V  can be purchased from other vendors 
sodium chloride Braun 5/12612055/1011 can be purchased from other vendors 
Ketamine 10% Bela pharm F3901-6 can be purchased from other vendors 
Xylazine 2% Bayer 6293841.00.00 can be purchased from other vendors 
FITC-dextran 5% Sigma  46945-100MG-F can be purchased from other vendors 
dexapanthenol 5% eye ointment Bayer 6029009.00.00 can be purchased from other vendors 
formaldehyde 4% Sigma HT501128-4L can be purchased from other vendors 
DMSO Sigma 472301 can be purchased from other vendors 
coverslips 5 x 5 x 1 mm Menzel L4339 can be purchased from other vendors 
Adhesive strips Leukosilk 4683400 can be purchased from other vendors 
centrifuge Beckman Coulter CLGS 15 can be purchased from other vendors 
hematology analyzer Sysmex KX-21 A6980 can be purchased from other vendors 
EDTA-blood tube Sarstedt 201,341 can be purchased from other vendors 
cotton swabs Sanyo 604-A-1 can be purchased from other vendors 
infrared light Beurer 5/13855 can be purchased from other vendors 
single use synringe Braun  2020-08 can be purchased from other vendors 
insulin syringe Braun 9161502 can be purchased from other vendors 
disposable hypodermic needles Braun 465 7640 can be purchased from other vendors 
end-to-end capillary Sarstedt 19,447 can be purchased from other vendors 
heating plate Klaus Effenberg OP-T 185/03 can be purchased from other vendors 
scissors 14.5 cm Aesculap BC259R can be purchased from other vendors 
needle Holder Aesculap BM081R can be purchased from other vendors 
microforceps Aesculap BD331R can be purchased from other vendors 
microscissors Aesculap OC496R can be purchased from other vendors 
scalpel 21 Dahlhausen 11.000.00.511 can be purchased from other vendors 
Prolene 7-0 Ethicon XNEH7470 can be purchased from other vendors 
Prolene 6-0 Ethicon XN8706.P33 can be purchased from other vendors 
electrocautery Servoprax H40140 can be purchased from other vendors 
acrylglass pad integrated heating, 0.5 cm high plane

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

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活体显微镜及血栓诱导在无毛小鼠的耳垂
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Strüder, D., Grambow, E., Klar, More

Strüder, D., Grambow, E., Klar, E., Mlynski, R., Vollmar, B. Intravital Microscopy and Thrombus Induction in the Earlobe of a Hairless Mouse. J. Vis. Exp. (122), e55174, doi:10.3791/55174 (2017).

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