Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Biology
Click here for the English version

Biology

Kuyruktaki Motor fonksiyonların Biyofiziksel Karakterizasyonu

Published: January 18, 2017 doi: 10.3791/55240
Automatic Translation
1, 1, 1
1Artie McFerrin Department of Chemical Engineering, Texas A&M University

Introduction

Kamçılı motorlar sarmal dışı filamentler çevirerek yüzmeye hücreleri sağlar. Motor flagellum'un (yani, viskoz yük) belirli bir uzunluk için oluşturabilir tork miktarı, yüzme hızlarını belirler. Öte yandan, dönüş yönünü değiştirmek için yeteneğidir kimyasallar, kemotaksis olarak bilinen bir işleme karşılık olarak hücre göçü kontrol eder. Kemotaksis ve hareketlilik olan virülans 1-3, kamçılı motorlar yıllar 4 üzerinde iyi karakterize edilmiştir faktörleri. Montaj kanıtlar motor mekanosensör olarak işlev gördüğünü düşündürmektedir - mekanik katı yüzeylerde 5,6 varlığını algılar. Bu yetenek muhtemelen yüzey kolonizasyonu ve enfeksiyonlara 5,7 tetikleme yardımcı olur. Bunun bir sonucu olarak, motorlu yüzeyleri ve başlatır sinyal algılar ve böylece mekanizmaları önemli 8,9 sahiptir.

Flagellar motoru kolayca flagell tethering ele alınabilirum bir alt tabakaya ve hücre dönme gözlemleyerek. Bu tür bağlama birinci anti-kancalı antikorlar 10 cam alt tabakalar için polyhook E. coli içinde mutant ve başarılı bir şekilde bağlanmış kanca ile çalışmış Silverman ve Simon, elde edildi. gergin hücre deneyi kimyasal uyaranlara çeşitli motor anahtarı yanıtları çalışma etmesini sağlamıştır. Örneğin, Segall ve arkadaşları kimyasal iyontoforetik pipetler yardımıyla gergin hücreleri uyarılır. CW önyargı karşılık gelen değişiklikler kemotaksis ağı 11,12 adaptasyon kinetiği ölçmek için onları etkin (zaman motorların fraksiyonu CW, saat yönünde döndürmek). Gergin hücre deneyi anahtarı yanıtları okuyan etkili iken, sadece viskoz yükleri 13 sınırlı bir aralıkta motorlu mekaniği içgörü sunmayı başardı. Bu sorunu aşmak için, Ryu ve arkadaşları yüzeylere yapışmış hücreler üzerinde koçanları filament için küresel, lateks boncuklar gergin. boncuklar vardıDaha sonra zayıf optik tuzakları 14 ile geri odak interferometrik kullanılarak izlenir. farklı boyutlarda boncuk ile birlikte çalışarak, araştırmacılar yükler çok daha geniş bir aralıkta motoru çalışma olabilir. Bu tahlil, daha sonra lazer karanlık alan aydınlatma ile birlikte photomultiplier tabanlı boncuk izleme tekniğini geliştirdi Yuan ve Berg tarafından geliştirildi. Dış viskoz dirençleri rotasyon 15,16 iç viskoz dirençleri kıyasla düşük olduğunu bu nedenle küçücük gergin altın nanobeads (~ 60 nm) Onların yöntemi etkin izleme. Bu, E. coli içinde elde edilebilen maksimum hızdan (~ 300 Hz) ölçümlerine yol açtı. V. alginolyticus'un olarak, benzer boncuk deneyleri ara viskoz yükler (~ 700 Hz) 17 yaşında iplik oranları ölçümleri sağladı. (Sıfır yükten yakın durak) viskoz yüklerin tüm olası aralığında motor yanıtların ölçümleri sağlayarak, boncuk deneyleri t anlamak için önemli bir biyofiziksel araç sağladıorque nesil süreci 18,19.

Son zamanlarda, bireysel motorlar 6 hassas mekanik uyaranlara uygulamak için etkin optik cımbız içerecek şekilde Yuan-Berg tahlil güncellenmiştir. Onlar viskoz yüklerde değişikliklere tepki olarak pişmanlık - Bu tekniği kullanarak, biz motoru döndürmek kuvvet jeneratörler dinamik mechanosensors olduğunu göstermiştir. Mekanizmaları tam olarak bilinmemektedir, ancak böyle bir yük algılama, kaynıyordu bakterilerin içine hücre farklılaşmasını tetikler mümkündür. Doğrudan bir kanıt yoktu, ancak diğer türlerdeki flagellar motorlar da 20 mechanosensitive olması da muhtemeldir. Burada, kamçılı filamentler 15 gergin lateks boncuk dönüşünü izlemek için photomultiplier tabanlı (PMT) yaklaşımları tartışıldı. gerçek zamanlı olarak ve uzun dura üzerinde tek boncuk izlemek için nispeten basittir, çünkü çok hızlı kameralarla izlemeye karşılaştırıldığında, photomultiplier-Kur avantajlıleri. Nedeniyle çevresel uyaranlara 21 Flagellar motoru komplekslerinde biçimlenme uzun süre eğitim zaman özellikle yararlıdır. Özel olarak, E. coli için ayrıntılarıyla protokolleri rağmen, hali hazırda diğer türlerdeki flagellar motorlar çalışmak için adapte edilebilir.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

1. Hücre Hazırlanması

  1. 10 ml taze TB 100 seyreltme: 1 ile inokülasyon ardından Tryptone Broth (TB,% 1 pepton,% 0.5 NaCl) alleli 15,22 yapışkan Flic taşıyan istenen gerginlik gecede kültürleri büyütün. OD 600 = 0.5 kadar bir çalkalama inkübatöründe 33 ° C'de kültür büyütün.
  2. 1,500 xg'de hücreleri Pelet 5-7 dk yeniden disperse pelet kuvvetli bir şekilde süzülerek sterilize motilite tamponu 10 mL (MB; 10 mM fosfat tampon maddesi ile: 0,05-0,06 M NaCl, 10 4 M EDTA, 1 uM metionin pH 7.0).
  3. Adımı yineleyin 1.2 iki kez daha ve 1 mL MB son pelet yeniden dağıtmak.
  4. (- 12 cm uzunluğunda, 0.58 mm iç çapı 7) polietilen boru ile bağlı 21 ila 23 ölçü adaptörleri ile iki şırınga arasında ileri ve geri ~ 75 kez geçerek süspansiyon kayma. 45 s - 30 kesme için toplam süreyi sınırlayın.
  5. 5-7 dakika boyunca 1.500 xg'de makaslanmış hücreleri Santrifüj ve yeniden dağıtmakMB 500 ul - 100 pelet.

2. Slayt Hazırlama

  1. Bir kapak kayma ve bir mikroskop lamı arasında iki çift taraflı yapışkan bantlar sandviç ile bir görüntüleme odası hazırlayın. kemotaksis deneyleri için, MB ve kimyasal uyarıcılar alışverişini sağlayan herhangi bir mikroakışkan odasını kullanır.
  2. odası içinde% 0.01 poli-L-lisin solüsyonu ilave edin ve 5 dakika sonra yavaşça MB yüzeyleri yıkayın (80-100 ul).
  3. odasına hücre süspansiyonu 40 ul ekleyin ve cam yüzeyine bağlanması için yeterli bir süre sağlar (7-8 dakika). Diğer taraftan bir filtre kağıdı ile çözelti emme ise, odacığın bir tarafında 100 uL MB eklenerek yapışmamış hücreleri dışarı akar.
  4. odasına lateks boncuk 15 mcL ve boncuk yerleşmek ve hücrelere takmak için yeterli zaman tanımak - 10 Ekle (7-8 dk). boncuk ayrılmak kaldırmak için, adım 2.3 anlatıldığı gibi yavaşça, MB 100 uL ile yıkayın. boncuk-si bir dizi kullanıniyi bir kontrast mevcut sürece deneyler için zes.

3. Boncuk İzleme

  1. Bir mikroskop sahnede örnek yerleştirin ve motorlara bağlı boncuklar için yüzey taraması. Faz mikroskopi gerekli değildir, ancak gözlem yapmaya 40X fazlı amacı kullanın. Alternatif olarak, bu kadar uzun yeterli kontrast açıkça karanlık bir arka plan üzerinde parlak boncuk ayırt etmek korunur olarak parlak alan görüntüleme kullanır.
  2. Bir kordon seçildikten sonra, Şekil 1B 'de gösterildiği gibi önceden belirlenmiş bir köşesinde boncuk konumlandırmak için yanal olarak sahne hareket ettirin. aynı köşede Pozisyon boncuk tanenin dönme yönü doğru bilinen emin olmak için. İdeal boncuk yörünge yaklaşık dairesel ama eliptik yörüngeleri kabul edilebilir.
  3. aliasing ile ilişkili hataları önlemek için motorun iki dönme frekansı daha örnekleme frekansı yüksek koruyun. Bu çalışmada, dönen bir motor kullanmak10 kat daha yüksektir (500 Hz) olan frekanslarda 50 Hz ve örnek, düzgün bir sinyal elde edildi.

4. Veri Analizi

  1. 23 Gerekirse Merkezi afin dönüşümler yörüngelerde PMT çıkış gerilimleri ve doğru ekliptiğinde ölçek ve. Rotasyon oranlarını 17 belirlemek için bir güç spektrum analizi kullanın.
  2. polar açıları, θ (t) = Atan (y (t) / x (t)) belirler. motor devir değişimleri belirlemek ve omega hesaplayarak zamanla geçiş denklem 1 14.
  3. Motor hız verilerini düzeltmek için bir medyan filtresi kullanır. Iki tam rotasyonlar üzerinde bir filtre penceresi 23,24 tavsiye edilir.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Photomultiplier kurulumu Şekil 1A'da gösterilmiştir. Proje Yönetim Ekipleri ilgi boncuk tarafından dağınık dalga boyları aralığında yüksek hassasiyetleri sahip olması önemlidir. Burada kullanılan Proje Yönetim Ekipleri görünür ve yakın kızılötesi aralıkları faaliyet ve halojen ışık kaynağı tarafından aydınlatılan boncuk tarafından saçılan ışık tespit başardık. Optimum aydınlatma koşulları ve stok gerilimleri bir kurulum diğerine değişecektir. Bu çalışmada kullanılan kurulum, bir PMT kazanç ~ için 10 Nisan-10 Mayıs yeterli olduğunu kanıtladı. Her photomultiplier foto çoğaltıcı önüne yerleştirilmiş bir 3 x 1 mm yarık dışında kaplandı. Yarıklar ışık fotoçoğaltıcılar girebilir olan hücre numunesinde bölge sınırlar ve iki yarık, birbirine ortogonal olan. Dönen boncuk doğru konuma (Şekil 1B) yerleştirilmiş olduğunda, photomultiplier artar giren ışık miktarı boncuk geliyordairesel yol olarak görünümü ve azalır uzak görünümden alır. sinüzoidal PMT gerilim çıkışlarının frekansları dönme hızını gösterir ve iki sinyal arasındaki faz farkları dönme yönünü gösterir. PMT çıkışları görüntülemek için bir osiloskop kullanımı gerçek zamanlı olarak boncuk yörüngeleri görselleştirme sağlar.

Temsili bir motordan zamanla değişen PMT sinyalleri, y (t) X (t), Şekil 2A'da gösterilmiştir. İki yarıkların diklik iki sinyal arasında bir faz boşluğu getirmektedir. sinyal amplitüdleri, sinyal-gürültü oranı hem de dönme eksantrikliği bağlıdır. Boncuk mukabil yörüngeleri Şekil 2B'de gösterilmiştir.

Bir Chey bir Örnek motorundan ölçülen hızları histogram - silinmiş streyn Şekil 3A'da gösterilmiştir 25 ile gergin motorlar için önceki raporlarda ile tutarlıdır. Şekil 1B şematik olarak görüldüğü gibi kordon İlk olarak, sağ alt köşesinde yerleştirildi. Karşılık gelen açısal hızı Şekil 3B'de (üst panel) 'de gösterilmiştir. bitişik sol alt köşesine boncuk konumlandırma motor hızının işareti (alt panel) ters sonuçlandı. Bu durumda, bitişik bir köşe boncuk hareket motorunu dönme gözlenen yönünü değiştirecektir. Bu bağlamda, çapraz köşe aynıdır. Doğru anahtarlama dinamikleri belirlemek için ölçümler sırasında boncuk yerini bilmek çok önemlidir. Şekil 3C, dönme iki yönde doğal tipte bir motor tekrarlanan geçişleri gösterir.

Veri toplama yazılımı için özel kodlar bir bilgisayarda 15 veri kaydetmek için önce işten adapte edilmiştir. PMT çıkış AC ile birleştirilmiş ve alçak geçiren 100 Hz kesme frekansı ile filtre edilmiştir. Gerçek zamanlı izleme bir osiloskop süzülmüş çıkışlarını bağlayarak sağlanmıştır.

Şekil 1
Şekil 1: Boncuk izci Kur. PMT tabanlı izleme kurulumu A) şematik. B) iki ortogonal yarık boncuk (siyah küre) akrabası ideal konumu. Yörünge noktalı çizgilerle gösterilir. Dışmerkezlik e noktalı dairenin yarıçapı. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.

ove_content "fo: keep-together.within sayfa =" 1 "> şekil 2
Şekil 2: PMT Çıkışlar. A) Alçak geçiren merkezleme / ölçeklendirme sonra, iki fotoçoğaltıcılar çıkışlarını süzülür. B) 3 saniye boyunca örneklenmiş PMT verileri, elde edilen boncuk yörüngeleri. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.

Şekil 3,
Şekil 3: Boncuk Yörüngeler. A) temsili bir motor CCW sadece hız Histogram. B) sağ alt köşesinde (üst panel) görüntülü bir CCW sadece motorun dönme hızı. Aynı motorun dönme hızları sol alt köşesinde (alt panel) konumlandırılmış zaman. C) Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

gergin boncuk izleme ve motor tork doğru tahmin kolaylaştırmak amacıyla, aşağıdaki bilgiler gözden geçirilmelidir. flagellated hücrelerle bu ölçümleri yaparken, kesme kritik bir adımdır. Kesme ve böylece motordaki viskoz yük boncuk ağırlıklı nedeniyle ve% 10 hata 16 içinde tahmin edilebilir olmasını sağlamak, sadece saplama flagellar filamanın azaltır. Kesme de sıkı dağıtılan dışmerkezliliğinden (<boncuk çapı 14) ile dairesel yörüngeleri bulma şansını artırır. izleme ve yapışkan drags hesaplanmasında yanı sıra zayıf sinyal-gürültü oranı ile sonuçlanan hataları birleştirmeler şımarık yörüngeleri, uygunsuz kesme sonuçları. Bir osiloskop kullanımı gibi verilerin hızlı eleme sağlar. kamçılı ipliklerin biyomekanik özellikleri türleri ile değiştirilmesi için beklendiği için, kesme yöntemleri olasılıkla t yeterli kesme sağlanması için uygun olması gerekirO ilgi bakteriler. makaslama ile ilişkili hataları azaltmanın etkili bir yoludur lif proteinlerini kodlayan genlerden yoksun hücreler ile çalışmaktır. Prob boncuklar daha sonra anti-kancalı antikorları ile kanca doğrudan bağlı olabilir.

uygun zor olabilir gergin bir boncuk bulma. görüş alanında en boncuklar ya hücre gövdeleri veya cam yüzeyine yapışmış olacak olmasıdır. Bu tür boncuklar kolayca keskin odak haline getirilebilir. Diğer boncuklar titremesini görünür ya da büyük genlikleri veya büyük dışmerkezliliğinden ile gözle görülür döner (> 1.5 - 2x boncuk çapı). Bunlar tipik olarak tam olarak kesilmiş veya fokal düzleme eğimli bir düzlemde döner edilmemiştir filamanlar flagella gergin bulunmaktadır. Bu tür boncukların örnekleme tipik olarak daha yüksek gürültü ile sonuçlanır, ve yapışkan yükleri zaman varyasyonlar belirli bir tane boyutunda için motorlar torkların düşük hesaplanmasına sebep olabilir. gergin boncuk küçük bir kısmı rastgele uğrayacaktırhareket; Bu sadece Brown rotasyon geçiyor. boncuk bir kısmı bulanık görünecektir ve kolayca odak getirdi olamaz. Bunlar uygun gergin ve ilgi motorlardır edilmiş motorlar olması muhtemeldir.

Burada açıklanan gibi izleme tek motor sınırlamalar arasında yüksek verimlilik deneyler için yetersizliğidir. Bu görüntüler yüksek hızlı bir kamerası, ilgili daha geniş bir bölgesi bu konuda avantajlı olabilir. Diğer sınırlamalar birden fazla sinyal Proje Yönetim Ekipleri görüş alanında, birbirine yakın döner boncuk kaynaklanan ilişkili hata içerir. Son olarak, iki foto çoklayıcı yarıkları ile ilgili olarak kaydedilen boncuk doğru konumunun belirlenmesinde hatalar sviçleme dinamikleri kesin tahmin neden olur.

Burada tarif edilen kurulum avantajları, uzun süreler boyunca gerçek zamanlı olarak boncuk dönüşünü izlemek için yeteneğini içerir. Buhata eğilimli yörüngeleri hızlı eliminasyonu, belki zor ultra hızlı kamera ile elde şey sağlar. Buna ek olarak, bir kaç değişiklik ile ayar çeşitli uyaranlara hücrelerin maruz için tasarlanmış tahliller ile entegre edilebilir. Termoelektrik 26 Soğutma ile birlikte, teknik termal uyaranlara tek tek motorlar tepkilerini ölçmek için kullanılabilir. Son zamanlarda 6 yapıldığı gibi optik cımbız ile entegrasyon, mekanik uyaranlara tepki olarak bireysel motorların yeniden ölçümlerini etkinleştirebilirsiniz. Son olarak, kimyasal uyarıcıların motorun adaptasyon uygun bir perfüzyon odasının kullanımı ile ölçülür ve 11 pompa olabilir.

Bilinen bakteri türlerinin büyük bir kısmı hareketli ve flagellar aracılı motilite doğada baskındır. Burada gösterilen yöntemler yapısal-yeniden içine anlayışlar geliştirilmesi ve uyum o yardımcı devam etmesi bekleniyorflagellar motora ön.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Poly-L-lysine Solution (0.1%) Sigma-Aldrich P8920 http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/p8920?lang=en&region=US
Polybead Microspheres Polysciences, Inc. 7307 http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/p8920?lang=en&region=US
1 mL Luer Slip Tip Syringe Exel Int. 26048 http://www.exelint.com/tuberculin_syringes.php
Clay Adams Intramedic Luer-Stub Adapter 23-gauge Becton, Dickinson and Company 427565 http://www.bd.com/ds/productCenter/ES-LuerStubAdaptors.asp
Polyethylene tubing Harvard Apparatus 59-8325 http://www.harvardapparatus.com/laboratory-polye-polyethylene-non-sterile-tubing.html
Photomultiplier Tubes Hamamatsu R7400U-20 Spectral response range of 300 to 920 nm, Peak wavelength 630 nm,  0.78 ns response time 
http://pdf1.alldatasheet.com/datasheet-pdf/view/212308/HAMAMATSU/R7400U-20.html
3 x 1 mm precision slits Edmund Optics NT39-908 2 slits mounted at right angles to one another on photomultiplier tubes
Oscilloscope Tektronix TBS 1032B Alternative brands are acceptable. Digital Oscilloscope, TBS 1000B Series, 2 Analogue, 30 MHz, 500 MSPS, 2.5 kpts 
http://www.tek.com/oscilloscope/tbs1000b-digital-storage-oscilloscope
8 Pole LP/HP Filter Krohn-Hite 3384 Alternative brands are acceptable. A frequency range from 0.1 Hz to 200 kHz is recommended.   
http://www.krohn-hite.com/htm/filters/PDF/3384Data.pdf
Optiphot microscope Nikon NA Any upright or inverted phase microscope can be used.
https://www.thorlabs.com/newgrouppage9.cfm?objectgroup_id=754
50:50 (R:T) Cube Beamsplitter ThorLabs BS013

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Emody, L., Kerenyi, M., Nagy, G. Virulence factors of uropathogenic Echerichia coli. Int J Antimicrob. Ag. 22, 29-33 (2003).
  2. Lane, M. C., et al. Role of motility in the colonization of uropathogenic Escherichia coli in the urinary tract. Infect Immun. 73 (11), 7644-7656 (2005).
  3. Kao, C. Y., et al. The complex interplay among bacterial motility and virulence factors in different Escherichia coli infections. Eur J Clin Microbiol Infect Dis. 33 (12), 2157-2162 (2014).
  4. Berg, H. C. The rotary motor of bacterial flagella. Annu Rev Biochem. 72, 19-54 (2003).
  5. McCarter, L., Hilmen, M., Silverman, M. Flagellar Dynamometer Controls Swarmer Cell Differentiation of V. parahaemolyticus. Cell. 54 (3), 345-351 (1988).
  6. Lele, P. P., Hosu, B. G., Berg, H. C. Dynamics of mechanosensing in the bacterial flagellar motor. Proc Natl Acad Sci U S A. 110 (29), 11839-11844 (2013).
  7. Gode-Potratz, C. J., Kustusch, R. J., Breheny, P. J., Weiss, D. S., McCarter, L. L. Surface sensing in Vibrio parahaemolyticus triggers a programme of gene expression that promotes colonization and virulence. Mol Microbiol. 79 (1), 240-263 (2011).
  8. Kearns, D. B. A field guide to bacterial swarming motility. Nat Rev Microbiol. 8 (9), 634-644 (2010).
  9. Belas, R. Biofilms, flagella, and mechanosensing of surfaces by bacteria. Trends Microbiol. 22 (9), 517-527 (2014).
  10. Silverman, M., Simon, M. Flagellar rotation and the mechanism of bacterial motility. Nature. 249, 73-74 (1974).
  11. Block, S. M., Segall, J. E., Berg, H. C. Adaptation Kinetics in Bacterial Chemotaxis. J Bacteriol. 154 (1), 312-323 (1983).
  12. Segall, J. E., Block, S. M., Berg, H. C. Temporal comparisons in bacterial chemotaxis. Proc Natl Acad Sci U S A. 83, 8987-8991 (1986).
  13. Blair, D. F., Berg, H. C. Restoration of torque in defective flagellar motors. Science. 242 (4886), 1678-1681 (1988).
  14. Ryu, W. S., Berry, R. M., Berg, H. C. Torque-generating units of the flagellar motor of Escherchia coli have a high duty ratio. Nature. 403, 444-447 (2000).
  15. Yuan, J., Berg, H. C. Resurrection of the flagellar rotary motor near zero load. Proc Natl Acad Sci U S A. 105 (4), 1182-1185 (2008).
  16. Yuan, J., Fahrner, K. A., Berg, H. C. Switching of the bacterial flagellar motor near zero load. J Mol Biol. 390 (3), 394-400 (2009).
  17. Sowa, Y., Hotta, H., Homma, M., Ishijima, A. Torque-speed Relationship of the Na+-driven Flagellar Motor of Vibrio alginolyticus. J Mol Biol. 327 (5), 1043-1051 (2003).
  18. Xing, J., Bai, F., Berry, R., Oster, G. Torque-speed relationship of the bacterial flagellar motor. Proc Natl Acad Sci U S A. 103 (5), 1260-1265 (2006).
  19. Meacci, G., Tu, Y. Dynamics of the bacterial flagellar motor with multiple stators. Proc Natl Acad Sci U S A. 106 (10), 3746-3751 (2009).
  20. Lele, P. P., Roland, T., Shrivastava, A., Chen, Y. H., Berg, H. C. The flagellar motor of Caulobacter crescentus generates more torque when a cell swims backwards. Nat Phys. 12 (2), 175-178 (2016).
  21. Lele, P. P., Shrivastava, A., Roland, T., Berg, H. C. Response thresholds in bacterial chemotaxis. Sci Adv. 1 (9), e1500299 (2015).
  22. Berg, H. C., Turner, L. Torque Generated by the Flagellar Motor of Escherichia coli. Biophys J. 65, 2201-2216 (1993).
  23. Bai, F., et al. Conformational Spread as a Mechanism for Cooperativity in the Bacterial Flagellar Switch. Science. 327, 685-689 (2010).
  24. Reid, S. W., et al. The maximum number of torque-generating units in the flagellar motor of Escherichia coli is at least 11. Proc Natl Acad Sci U S A. 103, 8066-8071 (2006).
  25. Chen, X., Berg, H. C. Torque-Speed Relationship of the Flagellar Rotary Motor of Escherichia coli. Biophys J. 78, 1036-1041 (2000).
  26. Turner, L., Caplan, S. R., Berg, H. C. Temperature-induced switching of the bacterial flagellar motor. Biophys J. 71, 2227-2233 (1996).

Tags

Biyofizik Sayı 119 partikül izleme bakteriyel motilite kemotaksis tork anahtarlama mechanosensing
Kuyruktaki Motor fonksiyonların Biyofiziksel Karakterizasyonu
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Ford, K. M., Chawla, R., Lele, P. P. … More

Ford, K. M., Chawla, R., Lele, P. P. Biophysical Characterization of Flagellar Motor Functions. J. Vis. Exp. (119), e55240, doi:10.3791/55240 (2017).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter