Abstract
पेरिकार्डियल पैच आमतौर पर जहाजों को बंद करने के संवहनी सर्जरी में इस्तेमाल कर रहे हैं। neointimal हाइपरप्लासिया कि पैच पर रूपों के अध्ययन की सुविधा के लिए, हम पैच एंजियोप्लास्टी है कि या तो एक नस या एक धमनी में इस्तेमाल किया जा सकता है की एक चूहे मॉडल विकसित किया है, एक पैच venoplasty या एक पैच arterioplasty बनाने क्रमशः। इस मॉडल की तकनीकी पहलुओं पर चर्चा कर रहे हैं। बुनियादी गुर्दे आईवीसी या महाधमनी विच्छेदित कर रहे हैं और उसके बाद proximally और distally clamped। एक 3 मिमी venotomy या धमनीछेदन 8 सप्ताह पुरानी Wistar चूहों को अधोमूत्र पिंडीय अवर रग Cava या 6 के महाधमनी में किया जाता है। एक गोजातीय पेरिकार्डियल पैच (3 मिमी x 1.5 मिमी x 0.6 मिमी) तो एक 10-0 नायलॉन सीवन का उपयोग कर साइट को बंद करने के लिए प्रयोग किया जाता है। धमनी पैच की तुलना में, शिराओं पैच पश्चात दिन 7 पर neointimal मोटाई में वृद्धि हुई दिखाने पेरिकार्डियल पैच एंजियोप्लास्टी के इस उपन्यास मॉडल संवहनी biomaterials पर neointimal हाइपरप्लासिया जांच करने के लिए, साथ ही धमनियों और शिराओं के बीच मतभेदों की तुलना करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकतावातावरण।
Introduction
संवहनी सर्जन पेरिकार्डियल पैच, या तो गोजातीय या सुअर, के साथ आमतौर पर बंद रक्त वाहिकाओं restenosis 1, 2 के जोखिम को कम करने के लिए। धमनी की सर्जरी में, पेरिकार्डियल पैच एंजियोप्लास्टी एक प्राथमिक बंद 3, 4 की तुलना में restenosis की दर कम कर देता है। पैच venoplasty भी इसी तरह, नसों बंद करने के लिए हालांकि कम बार धमनी प्रक्रियाओं 5, 6 के लिए जब तुलना में किया जाता है। पैच आम तौर पर उनके ल्यूमिनल सतहों पर neointimal हाइपरप्लासिया विकसित करना; हालांकि, neointimal गठन की व्यवस्था अस्पष्ट बनी हुई है, विशेष रूप से धमनियों और शिराओं वातावरण के बीच neointimal गठन में मतभेदों की तुलना में। हम पहले से पता चला कि पेरिकार्डियल पैच दोनों धमनियों और शिराओं वातावरण और कहा कि शिरापरक पैच एंजियोप्लास्टी में पूर्वज कोशिकाओं को और अधिक आकर्षित एक से पता चलता हैके रूप में धमनी पैच 7, 8 की तुलना में ggressive neointimal गठन।
इस अध्ययन में, हम पेरिकार्डियल पैच एंजियोप्लास्टी दोनों नसों और धमनियों और समापन के लिए आम है कि चूहे के मॉडल का वर्णन है कि neointimal गठन का अध्ययन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है; इस विधि के एक ऑपरेटिव तकनीक सामान्यतः मानव रोगियों में इस्तेमाल की एक छोटी-पशु मॉडल है। चूहे मॉडल सर्जरी के तकनीकी पहलुओं को सुविधाजनक बनाने और मॉडल के लिए सीखने की अवस्था में सुधार माउस मॉडल की तुलना में एक बड़ा व्यास है।
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Protocol
उचित संस्थागत पशु की देखभाल और उपयोग समिति द्वारा अनुमोदन प्राप्त किया जाना चाहिए, यह दर्शाता है कि आपके प्रोटोकॉल अपनी संस्था के पशु अनुसंधान आचार समिति के दिशा निर्देशों का पालन करती है।
1. संज्ञाहरण और प्री-ऑपरेटिव प्रक्रिया
- पुरुष Wistar चूहों, लगभग 200 ग्राम वजन वाष्पीकृत 3% isoflurane और 1 एल / मिनट ऑक्सीजन एक एक्रिलिक प्रेरण कक्ष में प्रशासित साथ, anesthetize।
- एक पैर के अंगूठे और पूंछ चुटकी करने के लिए प्रतिक्रिया की कमी के माध्यम से पर्याप्त संज्ञाहरण की पुष्टि करें। सूखापन को रोकने के लिए है, जबकि जानवरों संज्ञाहरण के तहत कर रहे आँखों पर मरहम रखें। निरंतर साँस लेना द्वारा 3% isoflurane - 2 वाष्पीकृत वितरित करने के लिए प्लास्टिक की प्लेट पर आपरेशन प्रत्येक चूहे लापरवाह स्थिति और एक सिलिकॉन मुखौटा स्थिति। एक जानवर की पहुंच से बाहर छोड़ जब तक यह पर्याप्त होश आ गया है स्टर्नल लेटना बनाए रखने के लिए नहीं है।
- जबकि बाँझ दस्ताने पहने हुए, एक बाल पदच्युत का उपयोग कर उदर पेट बालों को हटा दें। Buprenorphine, या तो subcutaneously या intraperitoneally, अक्सर इस बिंदु पर दिया जाता है।
2. ऑपरेटिव प्रक्रिया
- पैच venoplasty
- सर्जरी से पहले, गोजातीय पेरिकार्डियल पैच एक 3 मिमी x 1.5 मिमी x 0.6 मिमी आकार के लिए एक microscissor का उपयोग कर ट्रिम। एक सेल संस्कृति डिश में 5 मिनट के लिए निष्फल खारा के 10 एमएल में पैच लेना।
- अपने संस्थागत प्रोटोकॉल के अनुसार एक सामयिक एंटीसेप्टिक के साथ चीरा साइट को तैयार है और एक शल्य कपड़ा लागू होते हैं। सर्जरी के दौरान सड़न रोकनेवाला तकनीक बनाए रखने के लिए बाँझ दस्ताने और उपकरणों का प्रयोग करें। स्थानीय संज्ञाहरण की योजना बनाई त्वचा चीरा की साइट में इंजेक्ट किया जा सकता है।
- एक छुरी का उपयोग करना, एक midline पेट चीरा सिर्फ pubis ऊपर करने के लिए जिफाएडा के स्तर से देने हैं।
- एक प्रतिकर्षक डालें और सही पक्ष की ओर उदर गुहा से सभी आंत अंतड़ी निकालना। नमक के साथ लथपथ धुंध में आंत लपेटें।
- मैं बेनकाबnfrarenal रग कावा (आईवीसी)। पैच आरोपण की साइट गुर्दे की नसों की मूल के स्तर से नीचे लगभग 2 मिमी है; आईवीसी इस साइट पर मुफ्त काटना। Ligate और इस स्तर 6-0 नायलॉन टांके का उपयोग करने पर सभी काठ और सहायक नदी नसों विभाजित।
- दो microsurgery क्लिप दोनों प्रॉक्सिमल और बाहर infarenal आईवीसी भर में रखें। आईवीसी के पूर्वकाल दीवार puncturing द्वारा एक 25 जी सुई के साथ एक venotomy प्रदर्शन करना, और फिर इसे कैंची (चित्रा 1 ए) का उपयोग लगभग 3 मिमी के लिए करता हूं।
- चल रहा है या बाधित 10-0 नायलॉन टांके (चित्रा 1 बी) का उपयोग पैच के साथ venotomy बंद करें।
- venoplasty बंद को पूरा करें। बाहर का दबाना हटाये पहले पैच को बाहर निकलने और फिर आईवीसी के लिए रक्त के प्रवाह को बहाल करने के लिए समीपस्थ दबाना हटा दें।
- संपीड़न के बिना 30 एस के लिए देख द्वारा रक्तस्तम्भन की पुष्टि करें। उनके प्राकृतिक स्थिति के लिए आंत लौटें। अनुमोदित पशु प्रोटोकॉल के अनुसार एक चल सीवन के साथ पेट को बंद करें।
- पैच arterioplasty
- सर्जरी से पहले, गोजातीय पेरिकार्डियल पैच एक 3 मिमी x 1.5 मिमी x 0.6 मिमी आकार के लिए एक microscissor का उपयोग कर ट्रिम। निष्फल खारा में लेना।
- एक सामयिक एंटीसेप्टिक के साथ चीरा साइट को तैयार है और एक शल्य कपड़ा लागू होते हैं। सर्जरी के दौरान सड़न रोकनेवाला तकनीक बनाए रखने के लिए बाँझ दस्ताने और उपकरणों का प्रयोग करें।
- एक छुरी का उपयोग करना, एक midline पेट चीरा सिर्फ pubis ऊपर करने के लिए जिफाएडा के स्तर से देने हैं।
- एक प्रतिकर्षक डालें और सही पक्ष की ओर उदर गुहा से सभी आंत अंतड़ी निकालना। नमक के साथ लथपथ धुंध में आंत लपेटें।
- महाधमनी बेनकाब। पैच आरोपण की साइट गुर्दे धमनियों की उत्पत्ति के स्तर से नीचे लगभग 2 मिमी है; महाधमनी इस साइट पर मुफ्त काटना। Ligate और इस स्तर 6-0 नायलॉन टांके का उपयोग करने पर सभी काठ धमनियों विभाजित।
- अधोमूत्र पिंडीय महाधमनी दबाना। puncturi द्वारा एक धमनीछेदन प्रदर्शन करने के लिए एक 25 जी सुई का प्रयोग करेंमहाधमनी के पूर्वकाल दीवार एनजी, और फिर इसे लगभग 3 मिमी का उपयोग कर कैंची (चित्रा 1 सी) के लिए करता हूं।
- पैच 10-0 नायलॉन टांके (चित्रा -1) चल उपयोग कर के साथ धमनीछेदन बंद करें। arterioplasty बंद को पूरा करें। बाहर का दबाना हटाये पहले पैच को बाहर निकलने और फिर महाधमनी में रक्त के प्रवाह को बहाल करने के लिए समीपस्थ दबाना हटा दें।
- संपीड़न के बिना 30 एस के लिए देख द्वारा रक्तस्तम्भन की पुष्टि करें। उनके प्राकृतिक स्थिति के लिए आंत लौटें। अनुमोदित पशु प्रोटोकॉल के अनुसार एक चल सीवन के साथ पेट को बंद करें।
3. पोस्ट ऑपरेटिव प्रक्रिया
- पेट के बंद होने के बाद, संज्ञाहरण बंद। संस्थागत पशु की देखभाल और उपयोग समिति द्वारा सिफारिश के निर्देश के साथ पीड़ानाश और घाव देखभाल सहित पोस्ट ऑपरेटिव केयर, अनुसार, लागू करें।
- analgesia के लिए, 0.1 मिलीग्राम पर buprenorphine का उपयोग / किलो पेशी कोई 24 घंटे के लिए हर 12 घंटे से भी कम समय का पालन करेंशल्य चिकित्सा प्रक्रियाओं हैैं। पशु कमरे में हर दिन जानवर की स्थिति की जाँच करें, पेरी-ऑपरेटिव अवधि से उचित वसूली के साथ ही शल्य चिकित्सा के बाद दर्द की पर्याप्त उपचार सुनिश्चित करने। एक जानवर जब तक यह पूरी तरह से ठीक हो गया है कि अन्य जानवरों की कंपनी के लिए सर्जरी आया है वापस नहीं है।
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Representative Results
पैच एंजियोप्लास्टी के बाद, वहाँ या तो शिरापरक (एन = 42) या धमनी (एन = 24) पैच समूहों में कोई घनास्त्रता था। 7 दिन में जीवन रक्षा या तो एक शिरापरक या धमनी पैच के साथ दोनों समूहों में 100% थी।
पैच 7 दिन पर काटा गया और hematoxylin और eosin के साथ दाग, और neointimal मोटाई के रूप में पहले 7 वर्णित तुलना में था। पैच और neointima के बीच स्पष्ट अंतर रूपात्मक के कारण, यह neointima भेदभाव करने के लिए बहुत आसान है। शिरापरक पैच में, वहाँ पैच, और अधिक neointima (चित्रा 2A, 2 सी) में जमा की कोशिकाओं के साथ ल्यूमिनल पक्ष पर मोटी neointima की एक अलग परत थी; धमनी पैच में, वहाँ एक बहुत पतली परत neointimal, केवल कुछ पैच (चित्रा 2 बी, 2 डी) के ल्यूमिनल तरफ से जुड़ी कोशिकाओं के साथ किया गया था। neointima वा काफी धमनी पैच (चित्रा 2 ई) की तुलना में शिरापरक पैच में मोटा है। इसी तरह के परिणाम 14 दिन में प्राप्त किया गया (डेटा) नहीं दिखाया। ये परिणाम बताते पैच venoplasty मॉडल समय की एक छोटी सी अवधि में एक मोटी neointima प्राप्त करने के लिए अन्य मॉडलों पर बेहतर है।
चित्रा 1: चूहा पेरिकार्डियल पैच एंजियोप्लास्टी। (ए) प्रतिनिधि आईवीसी venotomy दिखा तस्वीर। (बी) के प्रतिनिधि पैच नियुक्ति के बाद आईवीसी दिखा तस्वीर। (सी) प्रतिनिधि महाधमनी धमनीछेदन दिखा तस्वीर। (डी) प्रतिनिधि पैच नियुक्ति के बाद महाधमनी दिखा तस्वीर। ए, महाधमनी; आईवीसी, अवर रग Cava; पी, पेरिकार्डियल पैच; *, आईवीसी या महाधमनी के पीछे intima; शासक चिह्नों 1 मिमी हैं।3fig1large.jpg "लक्ष्य =" _blank "> यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
चित्रा 2: आक्रामक Neointimal Hyperplasia पैच Venoplasty में 7 दिवस पर पैच Arterioplasty की तुलना में।
(ए) दिन के 7, जो एच ई के साथ सना हुआ था पर पैच venoplasty दिखा प्रतिनिधि कम बिजली तस्वीर। (बी) के 7 दिन पर पैच एंजियोप्लास्टी, जो एच ई के साथ सना हुआ था दिखा प्रतिनिधि कम बिजली तस्वीर। (सी) प्रतिनिधि उच्च शक्ति पैच venoplasty पर neointimal गठन दिखा तस्वीर। (डी) प्रतिनिधि उच्च शक्ति पैच arterioplasty पर neointimal गठन दिखा तस्वीर। स्केल बार = 0.5 मिमी, उच्च शक्ति = 100 माइक्रोन। पी, पैच; एल, आईवीसी या महाधमनी लुमेन; एन, neointima। (ई) बार ग्राफ showiएनजी arterioplasty की तुलना में venoplasty neointimal मोटाई में वृद्धि हुई। त्रुटि पट्टी SEM अर्थ; * पी = 0.0015, टी परीक्षण; एन = 4. यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
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Discussion
हम चूहा है कि या तो नसों या धमनियों में इस्तेमाल किया जा सकता है में एक पैच एंजियोप्लास्टी मॉडल का वर्णन है, एक पैच venoplasty या पैच arterioplasty बनाने, क्रमशः। इस पेरिकार्डियल पैच मॉडल का उपयोग करना, हम महाधमनी arterioplasty (चित्रा 2) 7, 8 की तुलना में चूहे आईवीसी venoplasty में आक्रामक और स्थिर neointimal हाइपरप्लासिया दिखाया।
कई तकनीकी पहलुओं उल्लेखनीय हैं। महाधमनी arterioplasty में, यह महत्वपूर्ण है कि टांके तंग और संख्या और / या रिक्ति में पर्याप्त धमनी पर्यावरण के उच्च दबाव में खून के रिसाव को रोकने के लिए कर रहे हैं। आईवीसी venoplasty में, यह के रूप में आईवीसी दीवार अत्यंत पतली और नाजुक है विशेष देखभाल और नम्रता के साथ ऑपरेटिव युद्धाभ्यास के सभी प्रदर्शन करने के लिए महत्वपूर्ण है। इसके अलावा, आरोपण साइट के चारों ओर काठ और छोटी सहायक नसों ध्यान से विच्छेदित और खून बह रहा रोकने के लिए ligated किया जाना चाहिए। दोनों Arte मेंरियाल और शिराओं प्रक्रियाओं, बाहर का दबाना पहले किसी भी ल्यूमिनल हवा बाहर निकलने के लिए और एक फेफड़े के दिल का आवेश हवा से बचने के लिए निकाल दिया जाता है। समीपस्थ दबाना तो बाहर का रक्त प्रवाह को बहाल करने के लिए निकाल दिया जाता है। अंत में, जब महाधमनी या आईवीसी दीवार puncturing, पीछे की दीवार पंचर नहीं है; यदि पीछे की दीवार की हवा निकाल दी है, एक 10-0 सीवन छेद बंद करने के लिए इस्तेमाल किया जाना चाहिए।
महाधमनी में पैच एंजियोप्लास्टी का एक नुकसान यह बाद में समय (जैसे, पोस्ट ऑपरेटिव दिन 30) पर pseudoaneurysms का विकास है। हालांकि, वहाँ शायद ही कभी पोस्ट ऑपरेटिव दिन 7 या 14 को मनाया किसी भी pseudoaneurysms थे, प्रक्रिया के बाद पहले 2 हफ्तों के दौरान इस मॉडल की उपयोगिता का सुझाव दे सकते हैं या तो शिरापरक या धमनी पर्यावरण 7, 9 में neointimal गठन का अध्ययन करने के लिए।
छोटे जानवर पैच एंजियोप्लास्टी क्षेपक भ्रष्टाचार मॉडल की तुलना में कई फायदे हैं। सबसे पहले, मेजबान पोत डो, Transected जा के रूप में केवल एक पूर्वकाल दीवार चीरा किया जाता है की जरूरत नहीं है; इस शल्य चिकित्सा के लिए समय कम कर देता है और खून बह रहा है के जोखिम को कम करता है। दूसरा, क्षेपक भ्रष्टाचार दो anastomoses, ऑपरेटिव समय और जटिलताओं के लिए खतरा बढ़ रही है, साथ ही सीखने की अवस्था को विस्तार देने की आवश्यकता है। पैच एंजियोप्लास्टी ऑपरेटिव समय और जटिलताओं के जोखिम को कम करने, केवल एक ही सम्मिलन की आवश्यकता है। तीसरा, पैच एंजियोप्लास्टी आंतरिक रूप से एक प्रकार का रोग के जोखिम को anastomotic स्थल पर, संभावित पश्चात अवलोकन 10 के लिए एक बढ़ा समय की अनुमति कम कर देता है।
अंत में, हम पैच एंजियोप्लास्टी पेरिकार्डियल पैच का उपयोग करता है कि छोटे-व्यास वाहिकाओं को बंद करने के लिए प्रदर्शन करने के लिए एक विधि का वर्णन; प्रक्रिया दोनों नसों और धमनियों को समान रूप से लागू होता है। पेरिकार्डियल पैच venoplasty जल्दी पश्चात कई बार arterioplasty मॉडल की तुलना में अधिक आक्रामक neointimal गठन से पता चलता है। इस परिणाम के इस मॉडल में खोज की उपयोगिता का सुझावn शिराओं और implantable biomaterials के साथ धमनी वातावरण के बीच बातचीत में मतभेद का निर्धारण। इसके अलावा, पैच रचनाओं के विभिन्न प्रकार इन विभिन्न सामग्रियों के जवाब का परीक्षण करने के लिए जांच की जा सकती है।
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Acknowledgments
इस काम के स्वास्थ्य अनुदान R56-HL095498, R01-एच एल-095498 (ई), R01-HL128406, मेरिट समीक्षा पुरस्कार दिग्गजों मामलों बायोमेडिकल प्रयोगशाला अनुसंधान के संयुक्त राज्य अमेरिका विभाग से I01-BX002336 के राष्ट्रीय संस्थानों द्वारा समर्थित किया गया था विकास कार्यक्रम (ई), सर्जरी Ohse पुरस्कार के एक येल विभाग (ई), एक Sarnoff हृदय फाउंडेशन फैलोशिप (JMS करने के लिए), और संसाधनों के माध्यम से और दिग्गजों मामलों कनेक्टिकट स्वास्थ्य प्रणाली (पश्चिम Haven, सीटी पर सुविधाओं का उपयोग )। गोजातीय पेरिकार्डियल पैच उदारता LEMAITRE संवहनी इंक (बर्लिंगटन, एमए) द्वारा प्रदान किया गया।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Bovine pericardial patch | LeMaitre Vascular | ||
| Vascular clamp | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-5424 | |
| Clamp applying forceps | Roboz Surgical Instrument Co | RS-5410 | |
| 10-0 Prolene suture | Arosurgical Co. | T05A10N10-13 |
References
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