Introduction
Malaria er et betydelig globalt helseproblem. 1 Alvorlig malaria er preget av cerebral involvering og er ofte en dårlig prognostisk faktor. Cerebral involvering er vanlig hos barn under fem år i områder med høy malariatransmisjon og representerer den viktigste årsaken til malaria relatert død i denne aldersgruppen. 1 Mens aggressiv behandling kan være livreddende, kan det være vanskelig å påvise cerebral malaria, spesielt i tidlige stadier. De patologiske prosessene som er involvert i cerebral malaria inkluderer mikrovaskulær forstyrrelse og cerebralt ødem, noe som kan føre til alvorlig hjernesvulst. I denne artikkelen presenterer vi en magnetisk resonans imaging (MRI) protokoll som tillater hel hjerne in vivo avbildning av eksperimentell cerebral malaria (ECM). Hele hjernens høyoppløselige billeddannelsesmetoder har blitt mye underutilisert i denne sykdommen, selv om lite er kjent om hvordan ECM initierer i det sentraleNervesystemet eller hvilke spesifikke mekanismer som fører til sykdommen. In vivo MR, som dekker hele hjernen, representerer et viktig forskningsverktøy for å få bedre forståelse av ECM-patologi. MR er i stand til å vurdere global hjernens hevelse, som nylig har blitt anerkjent som en viktig prediktor for død ikke bare i ECM, men også i human cerebral malaria. 2 , 3 Alvorlig hjernesvulst forekommer i dødelig sykdom og representerer en av flere patologiske egenskaper mellom ECM-modellene og den menneskelige sykdommen, en sykdom som preges av både inflammatoriske og mikrovaskulære endringer. 4
ECM kan induceres i CBA eller C57BL mus gjennom infeksjon med dødelig Plasmodium berghei ANKA. 5 Utbruddet av ECM forekommer vanligvis mellom dag 6 og 10 etter infeksjon og resulterer i montering, ataksi, respiratorisk nød og koma, noe som fører til rapId død. 4 Rapid Murine Coma and Behavior Scale (RMCBS) er en nyttig poengsum for å evaluere kliniske symptomer på ECM. Den består av 10 parametere, hver scoret fra 0 til 2, med en maksimal poengsum på 20. 6 Nylig viste vi god avtale mellom alvorlighetsgraden av RMCBS-poengene i ECM-mus og patologiske forandringer demonstrert av MR. 7 I denne protokollen beskriver vi ECM-induksjon i mus og in vivo magnetisk resonansbilder av mus med ECM.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alle dyreforsøk rapportert i denne artikkelen ble utført i henhold til retningslinjene for sammensetning for laboratoriedyrfagforeninger (FELASA) kategori B og retningslinjer for samfunn av laboratoriedyrfag (GV-SOLAS) og ble godkjent av de lokale tyske myndighetene i Karlsruhe (Regierungspräsidium Karlsruhe , Tyskland). Vær oppmerksom på at biosikkerhetsnivå 2 gjelder mygg og Plasmodium berghei ANKA sporozoitt arbeid.
1. Infeksjon
- Infiser Anopheles stephensi mygg med Plasmodium berghei ANKA ved å mate dem i 15 minutter på en gametocytemisk mus. Hold de smittede myggene ved 80% fuktighet og 21 ° C.
- Samle kvinnelige mygg fra buret 17 til 22 dager etter blodmelet. Plasser dem på is for å bedøve dem.
- Ved å bruke pincett, plasser tre til fire mygg på et glassfelt dekket med en dråpe kald RPMI-medium. Sett lysbildet under et mikroskop. <Li> Bruk tau, strøk myggen mellom hodet og kroppen forsiktig. Isoler spyttkjertelen med en sprøyte og en nål. Gjenta denne prosedyren med de resterende myggene.
- Samle spyttkjertlene fra glassruten ved å suge dem opp med en glasspipette og samle dem i et 1,5 ml sentrifugerør.
MERK: Avhengig av infeksjonsratene, kan vanligvis 8.000 til 15.000 smittsomme sporozoitter oppnås per spyttkjertel. - For ca. 3 min, smash de isolerte spyttkjertlene i sentrifugerøret med en liten plastpinne for å isolere sporozoittene fra spyttkjertelen.
- Sentrifuger i 3 minutter ved 1000 xg og 4 ° C for å rense sporozoites fra gjenværende vev.
- Pipetter supernatanten, som inneholder sporozoites (SPZ), til et nytt sentrifugerør og teller de rensede sporozoites i et Neubauer hemocytometer.
- Juster konsentrasjonen av rensede sporozoitter til 10.000 / ml ved å tilsette phOsfatbuffert saltvann.
- Injiser totalt 1000 sporozoitter (0,1 ml) i haleårene av innavlede C57BL / 6-mus for å starte infeksjon. For å lette injeksjonene, plasser C57BL / 6-musene i en sperrebeholder og sett haler i varmt vann (ca. 37 ° C) for å hjelpe til med visualisering av haleårene;
MERK: Injektionen i seg selv er en kort prosedyre som kan utføres innen få sekunder. - En gang daglig, kontroller blodstrøms parasitemi på blodutslipp fra dag 3 og videre etter SPZ-infeksjonen.
MERK: Overvåking parasitemi har tidligere blitt visualisert i en JoVE-artikkel av Mueller et al. 8 - Vurder musene en gang daglig med Rask Murin Coma og Behavior Scale (RMCBS) poengsum, startende fra dag 5 etter sporozoittinjeksjonen.
MERK: En detaljert beskrivelse av denne prosedyren, inkludert en videodemonstrasjon, er publisert av Caroll et al. 6 - VurdereMusene med MR-bildebehandling i henhold til RMCBS-poengsummen og forskningsspørsmålet som skal behandles. 6
2. Oppsett for magnetisk resonansbilder
- Utfør MR på en 9,4-tommers liten dyreskanner ved hjelp av en volumresonator for radiofrekvensoverføring og en 4-kanalsfasettert overflate mottakerspole. Slå på temperaturkontrollert vannbad til 42 ° C for å opprettholde musens kroppstemperatur.
- Inducere anestesi i et kammer ved bruk av 2% isofluran og trykkluft til musen ikke reagerer lenger på tåfinger. Oppretthold anestesien ved 1-1.5%.
- Plasser et haleveinkateter inn i musens svaneveve. Plasser musen for MR ved å plassere den utsatt og med en knust rygg på en dyrebed utstyrt med en hodelås og tannstang for å minimere hodebevegelse. Pass på ikke å rette muskulaturens ryggrad.
- Koble et kontrastmiddelinnsprøytningssystem til halevenekateteret. Bruk et spesialtilpasset injeksjonssystem fylt med en Gd-DTPA (0,3 mmol / kg) sprøyte eller bruk PE-rør som er koblet til en Gd-DTPA (0,3 mmol / kg) sprøyte.
- Påfør dexpanthenol øyesalve til begge øynene. Plasser 4-kanal-faset-array overflaten mottaker hodet spolen på hodet på musen. Plasser en pustepute på baksiden av musen og koble den til en åndedrettsovervåking.
3. Imaging Protocol
MERK: Velg bildesekvenser fra protokollen som er oppført nedenfor, i henhold til de forskningsspørsmålene som skal behandles. Alle listede parametere er gyldige for MR-programvaren, men det kan hende at de må tilpasses dersom andre programvare brukes.
- Begynn med å utføre en lokaliseringsskanning for å sikre at musens hjerne er i magnetens isocenter.
- For å kvalitativt vurdere det vasogene ødemet, bruk 3D T2-vektet bildebehandling ved å velge en multi-slice RARE-sekvens.
- Skriv inn følgende paRammetre i MR-programvaren: repetisjonstid = 2.000 ms, ekkotid = 22 ms, isotrop oppløsning = 0,1 mm, synsfelt = 20 x 10 x 12 mm 3 ; Matrise = 200 x 100 x 120, vinkelvinkel = 90-180 °; (Spin-ekko) og sjeldne faktor = 8. Start sekvensen og vent 10 min 48 s for å skaffe de røde bildene.
- For å kvantitativt vurdere vasogen ødem utfører T2-relaxometri ved å velge en multi-skive, multiple-spin-ekkosekvens.
- Bruk følgende parametere: repetisjonstid = 3.100 ms, ekkotid = 8-136 ms i trinn på 8 ms, antall skiver = 17, skive tykkelse = 0,7 mm, i planoppløsning = 0.116 mm x 0.116 mm, synsfelt 20 X 20 mm 2 , matrise = 172 x 172, flip vinkel = 90-180 grader; (Spin-ekko). Start sekvensen og vent 8 min 53 s for å skaffe de røde bildene.
- For å kvantitativt vurdere både vasogen ødem og cytotoksisk ødem, utfør diffusjonsvektet bildebehandling / tilsynelatende diffusjonskoe(ADC) kartlegging ved å velge en spin-echo EPI diffusjons-sekvens.
- Bruk følgende parametere: repetisjonstid = 3.400 ms, ekkotid = 20 ms, skive tykkelse = 0,7 mm, antall skiver = 17, antall diffusjonsfølsomme retninger = 30, b verdi = 1.500 s / mm 2 , δ = 3 ms , Δ = 9 ms, delvis Fourier-kodende akselerasjonsfaktor = 1,51, synsfelt = 12 x 15 mm 2 , matrise = 96 x 128, oppløsning i plan = 0.125 mm x 0.117 mm, vinkelvinkel = 90-180 grader, og Antall metningsskiver (sagittal) = 1. Start sekvensen og vent 7 min 56 s til råbilder er anskaffet.
- For å vurdere mikrohemorraser, bruk 3D T2 * -vektet bildebehandling. Velg en flytkompensert FLASH-sekvens.
- Skriv inn følgende parametre i MR-programvaren: repetisjonstid = 2.000 ms, ekkotid = 22 ms, isotrop oppløsning 0,08 mm, synsfelt = 32 x 15 x 8 mm 3 , matrise størrelse = 400 x 188 x 100 og fLeppevinkel = 12 grader. Start sekvensen og vent 15 min 40 s for å skaffe de røde bildene.
- For å vurdere arteriell patency, bruk tid for fly angiografi ved å velge en 3D FLASH-sekvens.
- Bruk følgende parametere i MR-programvaren: repetisjonstid = 16 ms, ekkotid = 3,5 ms, skive tykkelse = 0,07 mm, oppløsning i plan = 0.104 x 0.104 mm, synsfelt = 20 x 20 x 10 mm 3 , matrise = 192 x 192 x 142 og flip vinkel = 15 grader. Start sekvensen og vent 7 min 16 s til bildene er hentet.
- For å vurdere blod-hjernebarriereforstyrrelser, bruk 3D T1-vektet bildebehandling før og etter en kontrastmiddelinjeksjon på 0,3 mmol / kg. Velg en radiofrekvent ødelagt FLASH-sekvens med en global radiofrekvens-eksitering.
- Bruk følgende sekvensparametere i MR-programvaren: repetisjonstid = 5 ms, ekkotid = 1,9 ms, isotrop oppløsning = 0.156 mm, synsfelt 20 x 18,7X 18,7 mm 3 , matrise 128 x 120 x 120 og vinkelen vinkel = 8,5 °; Start sekvensen og vent 1 min 14s til bildene er anskaffet.
4. Bildebehandling og analyse
- For å analysere blod-hjernebarriereforstyrrelser trekker du 3D ikke-forbedrede T1-vektede bilder fra forbedrede T1-vektede bilder med det aritmetiske verktøyet eller bilde kalkulatorverktøyet i ImageJ. Evaluer subtraksjonsbildene for en økning av signal, som tilsvarer blod-hjernebarriereforstyrrelser. 9
- For å analysere hjernevolum, bruk innfødte 3D T1- eller 3D T2-vektede datasett. Avgrens hjernen fra olfaktorisk pære til cerebellum ved hjelp av segmenteringsredaktøren. 10
- Vasogen ødem
- Behandle T2-relaxometri-dataene med MRI-programvaren eller bruk en ikke-lineær minst-kvadratisk passordprosedyre. 11 Prosessdiffusjonsveide data for å skaffe ADC-kort ved hjelp av MR-sofTware eller FDT verktøykasse (se Materialebord ).
- Legg områder av interesse manuelt inn i de forskjellige anatomiske områdene.
MERK: Automatisk plassering av interessepunkter kan registrere feil på grunn av betydelig hevelse i hjernen. T2-tider og ADC-verdier av de valgte anatomiske områdene oppnås på denne måten.
- For å analysere mikrohemorrhage, avgrense mikrohemorrhages, som fremstår som ovoid, mørk foki på T2 * -vektede datasett, ved hjelp av segmenteringseditoren.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Hos C57BL / 6-mus kan de første kliniske symptomene på ECM observeres mellom dag 6 og 10 etter infeksjon med P. berghei ANKA sporozoites. ECM utvikler seg hos 60-80% av infiserte mus og utvikler seg raskt til koma og død innen 24 til 48 timer. I motsetning til at mus som ikke utvikler ECM, dør etter den andre uken etter infeksjonen fra alvorlig anemi på grunn av hyperparasitemi. 12
Ved MR-avbildning er de tidligste tegnene på ECM synlige i olfaktorisk pære, som tilhører det luktede systemet av musen og befinner seg i den rostralale delen av hjernen. 7 , 13 En økning i blod-hjernebarriereforstyrrelser (sett på kontrastforsterkede T1-vektede bilder) og en væskestigning (økning av T2-signal på T2-vektede bilder, T2-relaxometri og diffusjonsvekt avbildning) indikerer tidlig vasogen ødemI olfaktorisk pære som allerede er tilstede i mild sykdom (RMCBS score 20-16) og begynner å spre seg etter hvert som alvorlighetsgraden av sykdommen øker. Relative T1-signalbilder bidrar til å oppdage subtile blod-hjernebarriereforstyrrelser ( figur 1 ). Blod-hjernebarriereforstyrrelser og vasogenøs ødem utvikler seg på en bestemt måte. Disse patologiske endringene spredt seg langs rostral migrerende strømmen, en migrerende rute for nevroblaster, mot hjernestammen, som nås i svært alvorlig sykdom (RMCBS sår 9-0). På T2 kart, kan alvorlighetsgraden av vasogen ødem kvantifiseres ved å tegne områder av interesse i spesifikke anatomiske regioner, som vist i figur 2 . For hver region kan en T2-avslappetid som øker med økende ødem, oppnås. Sammen med vasogen ødem og blod-hjernebarriereforstyrrelser, begynner hjernesvulmingen ettersom ECM-alvorlighetsgraden øker. Hjernevolum som indikerer ødem, begynner å øke betydelig hos moderat syke mus som comParet til baseline og ytterligere økning i alvorlig syke mus ( figur 3 ).
Mikrovaskulær patologi, som påvises av mikrohemorrasier og en økning i beholderens følsomhetskontrast (tilsvarende langsom flyt), oppstår etter de første tegn på blod-hjernebarriereforstyrrelse og vasogen ødem og kan visualiseres med T2 * -vektet bildebehandling. Mikrohemorrhages forekommer hovedsakelig i olfaktorisk pære ( figur 4 ). Antallet av mikrohemorrhages øker med progressiv sykdom. Med progressive sykdomsmikroblødninger er det også tydelig i cortex, basal ganglia, cerebellum, hvitt stoff og hjernestamme.
Redusert arteriell patency er sett ved angiografi som angrep av tid for avgang som et tegn på makrovaskulær svekkelse parallelt med mikrovaskulære endringer. Sereinfarkt er ikke et nøkkelfunn i ECM. I svært alvorlig sykdom er imidlertid fokusområder avADC-reduksjon kan identifiseres, hvilket indikerer hjerneinfarkt.
Figur 1: Blood-brain Barrier Disruption. ( A ) Et representativt koronalt 3D T1-vektet bilde. En økning i T1-signalet er synlig i den sentrale delen av olfaktorisk pære. ( B ) På det tilsvarende T1-relativsignalbildet (T1-kontrastbildet subtraheres fra T1 etter kontrastbildet), er kontrasteragens ekstravasering lettere å avgrense. Kontrastmiddel-ekstravasasjon er synlig i de frontale kortikale områdene (hvite piler). Vennligst klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Figur 2: T2 Slapp avometry. Eksempel på T2-kart på forskjellige høyder fra en alvorlig syk mus med en RMCBS-score på 5 ( A ) og fra baseline-skanningen ( B ) vises i fargeskala, i grå skala og i grå skala med ROI som fargede overlegg. Mørkblå = RMS, grønn = cortex, turkis = ekstern kapsel, gul = basal ganglia, lyseblå = DMS, oransje = thalamus og rød = hjernestam Vennligst klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Figur 3: Hjernevolummålinger. Hjernevolumet øker betydelig hos moderat syke mus (RMCBS 15-10). Representative verdier på 10 mus er vist. Data presenteres som gjennomsnittlig standardavvik. En parret Student's t-test ble brukt til å analysere forskjellene i bhI hevelse mellom grupper. Hos moderat / alvorlig syke mus ble hjernevolumet signifikant økt sammenlignet med grunnlinjen (p = 0,021 / 0,001). Vennligst klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Figur 4: Microhemorrhages. Representative T2 * -vektede bilder av en mus før utbruddet av blodstadieinfeksjon ( A ) og på dag 8 etter infeksjon med en RMCBS-score på 14 ( B og C ) vises. I det første bildet er det ingen mikrohemorrhyrer som er tydelige ( A ), mens i andre og tredje bilder er det flere mikrohemorraser som er synlige, med overvekt i olfaktorisk pære (B: plankronografi, C: 3D-projeksjon med segmenterte mikrohemorrhager).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
I denne artikkelen beskriver vi en helhjertet MR-protokoll for å avgrense endringer i eksperimentell cerebral malaria. Vi tror at MR har blitt underutnyttet i malariaforskningen til dags dato, og håper at våre protokoller vil hjelpe andre etterforskere. Vi vil gjerne beskrive noen tilleggspunkter som kan være nyttige.
Hvis alvorlig syke mus er avbildet, er posisjonering avgjørende. På grunn av økt intrakranielt trykk, er musene utsatt for døden, og derfor bør den cervicale ryggraden ikke strekkes. Anestesi bør også holdes til et minimum. Hvis mus med mild sykdom er avbildet, er det beste tidspunktet for MR 12-24 timer før forventet utgang av de første kliniske symptomene. Mildt vasogent ødem i olfaktorisk pære er synlig hos mus som ikke har noen kliniske tegn på ECM (RMCBS score på 20).
Lengden på MR-protokollen i seg selv kan tilpasses i henhold til det spesifikke spørsmålet. Den minimale protoCol bør inkludere en T2-vektet sekvens eller T2-relaxometri og en T2 * -vektet sekvens for å bedømme nærværet av vasogen ødem og mikrohemorrhagebelastning / mikrovaskulær nedsattelse. For å få bilder av god kvalitet, bør bevegelsesartefakter holdes til et minimum. Bevegelsen vil bli redusert gjennom riktig posisjonering av musen og ved å holde pusten på ca 60-80 puste per minutt.
Andre in vivo avbildningsmetoder, som intravital mikroskopi, viser løfte om å visualisere patologiske endringer i ECM på cellulært nivå. 14 , 15 , 16 , 17 Sammenlignet med MR, kan intravital mikroskopi tilby høy romlig oppløsning på bekostning av kun å dekke et begrenset kortikalt område. I motsetning kan MR dekke hele hjernen med en oppløsning på opptil 80 μm. MR kan derfor veilede ytterligere cellulære undersøkelser ved å identifiserePredileksjonsstedene - begynnelsen av sykdommen - så vel som sykdomsstadiet, som deretter kan vurderes ved hjelp av ytterligere metodikker. MR-funn i ECM kan sammenlignes med patologiske endringer oppdaget med MR i human cerebral malaria. Både human og eksperimentell cerebral malaria viser vasogent ødem i områder av neurogenese, samt mikrovaskulær patologi, som sekundær cerebral infarkt i vannsektoren. 7 , 18 Hvit og grått stoff er påvirket på lignende måte, og hjernens hevelse i både human og eksperimentell cerebral malaria involverer hjernestammen i alvorlig sykdom, og forklarer komatosstaten. 2 , 7
Vi håper at in vivo imaging vil bidra til å løse den underliggende patologiske mekanismen for cerebral malaria, som for tiden forblir unnvikende. Som ødem og hjernehevelse er knapt synlige ex vivo, megThods å visualisere denne patologien in vivo er nøkkelen og vil bidra til å forbedre evalueringen av nye terapier og vaksinasjoner.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Acknowledgments
Sakkyndig teknisk assistanse fra Miriam Reinig er takknemlig. AH mottok finansiering fra et postdoktoralt stipendiat fra Det medisinske fakultet ved Universitetet i Heidelberg. MP støttes av et memorial stipend fra Else-Kröner-Fresenius Foundation. AKM er mottaker av barselsorlov ved DZIF-akademiet for det tyske senter for infeksjonsforskning (DZIF). JP er mottaker av en Heidelberg Research Center for Molecular Medicine (HRCMM) Karriereutvikling fellesskap. Vi anerkjenner også takknemlig Julia M. Sattler og Friedrich Frischknecht for å gi en eksemplarisk film av sporozoittbevegelse.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Isoflurane | Baxter | 1001747 | for anesthesia |
| Dotarem | Guebert | 1086923 | Gd-DTPA contrast agent; 0.5 mmol/mL |
| Amira (Image Processing Program) | FEI Group | Version Amira 5.3.2 | |
| MATLAB | The MathWorks, Inc., | Release 2012b | |
| FDT toolbox | FMRIB's Software Library | http://www.fmrib.ox.ac.uk/fsl/fdt/index.html |
References
- World Health Organization. World Malaria Report. , (2014).
- Seydel, K. B., et al. Brain swelling and death in children with cerebral malaria. N Engl J Med. 372 (12), 1126-1137 (2015).
- Penet, M. F., et al. Imaging experimental cerebral malaria in vivo: significant role of ischemic brain edema. J Neurosci. 25 (32), 7352-7358 (2005).
- de Souza, J. B., Riley, E. M. Cerebral malaria: the contribution of studies in animal models to our understanding of immunopathogenesis. Microbes Infect. 4 (3), 291-300 (2002).
- Curfs, J. H., van der Meide, P. H., Billiau, A., Meuwissen, J. H., Eling, W. M. Plasmodium berghei: recombinant interferon-gamma and the development of parasitemia and cerebral lesions in malaria-infected mice. Exp Parasitol. 77 (2), 212-223 (1993).
- Carroll, R. W., et al. A rapid murine coma and behavior scale for quantitative assessment of murine cerebral malaria. PLoS One. 5 (10), (2010).
- Hoffmann, A., et al. Experimental Cerebral Malaria Spreads along the Rostral Migratory Stream. PLoS Pathog. 12 (3), e1005470 (2016).
- Mueller, A. K., Behrends, J., Blank, J., Schaible, U. E., Schneider, B. E. An experimental model to study tuberculosis-malaria coinfection upon natural transmission of Mycobacterium tuberculosis and Plasmodium berghei. J Vis Exp. (84), e50829 (2014).
- Hynynen, K., McDannold, N., Sheikov, N. A., Jolesz, F. A., Vykhodtseva, N. Local and reversible blood-brain barrier disruption by noninvasive focused ultrasound at frequencies suitable for trans-skull sonications. Neuroimage. 24 (1), 12-20 (2005).
- Nag, N., Mellott, T. J., Berger-Sweeney, J. E. Effects of postnatal dietary choline supplementation on motor regional brain volume and growth factor expression in a mouse model of Rett syndrome. Brain Res. 1237, 101-109 (2008).
- Giri, S., et al. T2 quantification for improved detection of myocardial edema. J Cardiovasc Magn Reson. 11, 56 (2009).
- Engwerda, C., Belnoue, E., Gruner, A. C., Renia, L. Experimental models of cerebral malaria. Curr Top Microbiol Immunol. 297, 103-143 (2005).
- Zhao, H., et al. Olfactory plays a key role in spatiotemporal pathogenesis of cerebral malaria. Cell Host Microbe. 15 (5), 551-563 (2014).
- Nacer, A., et al. Experimental cerebral malaria pathogenesis--hemodynamics at the blood brain barrier. PLoS Pathog. 10 (12), e1004528 (2014).
- Nacer, A., et al. Neuroimmunological blood brain barrier opening in experimental cerebral malaria. PLoS Pathog. 8 (10), e1002982 (2012).
- Pai, S., et al. Real-time imaging reveals the dynamics of leukocyte behaviour during experimental cerebral malaria pathogenesis. PLoS Pathog. 10 (7), e1004236 (2014).
- Shaw, T. N., et al. Perivascular Arrest of CD8+ T Cells Is a Signature of Experimental Cerebral Malaria. PLoS Pathog. 11 (11), e1005210 (2015).
- Potchen, M. J., et al. Acute brain MRI findings in 120 Malawian children with cerebral malaria: new insights into an ancient disease. AJNR Am J Neuroradiol. 33 (9), 1740-1746 (2012).
