Summary
Для изучения прогрессии опухоли яичников в физиологически соответствующей модели, многоклеточные сфероиды культивировали в микроустройство в смоделированных потоке текучей среды. Эта динамическая 3D модель эмулирует внутрибрюшного среду с клеточными и механических компонентов, где происходит яичников раковых метастаз.
Abstract
Рак яичников характеризуется широким перитонеального метастазирования, с опухолевыми сферами обычно встречаются в злокачественных асцит. Это связано с плохими клиническими результатами и в настоящее время не хватает эффективного лечения. И трехмерные (3D) окружающая среда и динамические механические силы являются очень важными факторами в этом метастатического каскада. Тем не менее, традиционные клеточные культуры не Повторим этот естественный микросреды опухоли. Таким образом, в естественных условиях -как модели , которые могут эмулировать внутрибрюшной среды имеют очевидное значение. В этом исследовании, новая платформа Микрожидкостных брюшины была создана, чтобы имитировать ситуацию яичников сфероидов рака в брюшной полости во время метастазирования. Яичниковые сфероидов рака, сгенерированные под неприлипающими состоянии культивировали в микроканалов, покрытых перитонеального мезотелиальной клеток, подвергнутых физиологически соответствующего напряжения сдвига. Таким образом, эта динамика 3D-рак яичников Мезотелия микрофонrofluidic платформа может предоставить новые знания по основам биологии рака и служить в качестве платформы для потенциального скрининга и разработки лекарственных средств.
Introduction
Рак яичников является наиболее летальной гинекологический рак и характеризуется широко распространенной перитонеального распространения и образование злокачественных асцит 1. Эта обширная перитонеальный метастаз представляет собой серьезную клиническую проблему и связано с плохими клиническими результатами. В отличие от большинства твердых карцином, которые метастазируют через кровь, рак яичников, прежде всего, рассеивает в брюшную полость. Опухолевые клетки существуют как многоклеточные агрегаты / сфероиды в процессе метастазирования 2. Тот факт , что подвеска культура может обогатить овариальных стволовых рак / опухолевые инициирующие клетки далее предположить , что эти сфероиды могут быть связаны как с опухолевой агрессивностью и усиливается химиорезистентность 3, 4. Существуют различия в ответ наркотиков между 2D и 3D культур, которые , предположительно , имеют разные молекулярные механизмы 5.
_content "> Существенное взаимодействие с мезотелием создает первичный микросреду для прогрессии опухоли яичников. Эти мезотелиальной клетки лежат на внеклеточного матрикса (ЕСМ), где фибронектин является вездесущим компонентом. Связь между увеличением экспрессии мезотелиальной клеток, полученных фибронектина и прогрессирование опухоли было показано. фибронектина в изобилии присутствует в злокачественных асцит 6, 7. Яичниковые раковые клетки также способны индуцировать секрецию фибронектина из мезотелиальной клеток для того , чтобы способствовать раннему метастазирования рака яичников 8.Все новые данные показывают , что механические стимулы, в том числе напряжения сдвига, могут модулировать морфологии клеток, экспрессию генов, и, таким образом, фенотипы опухолевых клеток 9, 10, 11. Как злокачественного асцита развивать и накапливать в течение тumor прогрессии, овариальные опухолевые клетки подвергаются потока жидкости и в результате напряжения сдвига. Ряд групп, включая и наши, показали влияние напряжения сдвига на прогрессирование рака яичников, в том числе модификации цитоскелета, эпителиально-к-мезенхимальных переходы и стволовости 12 рака, 13, 14, 15. Таким образом, физиологически соответствующие микросреда имеет важное значение для исследования опухоли перитонеальные метастазы. Однако современные гидродинамические культурах клеток имеют ограничения на пародирование и контроль постоянной, низкий, физиологически соответствующее напряжение сдвига 16, 17, 18, 19. Обычные в пробирке подходы , ориентированные либо на клеточном или механической среде по - прежнему ограничены вимитируя сложность внутрибрюшинного микросреды с правильной физиологической значимости.
Вот для того, чтобы спроектировать новую модель брюшины, чтобы преодолеть ограничения традиционных стратегий и продвигать исследование внутрибрюшинного отделение в метастазирования рака, 3D Микрожидкостных на основе платформы с регулируемым потоком жидкости был разработан. В этой модели, овариальные сфероидов рака совместно культивировали с первичными перитонеальных мезотелиальных клеток человека в микрофлюидальных чипсов при непрерывном жидкостный поток (рисунок 1А). Мезотелиальной клетки высевали на фибронектином. Неприлипающие яичников сфероидов рака были посеяны в микроканалов с непрерывным потоком среды перфузируемом с помощью шприца. Оба 3D окружающей среды и динамические механические силы являются очень важными факторами, метастатического каскада. Эта платформа может быть использована для исследования внутрибрюшной микросреду с точки зрения комплексного CELlular и совместного взаимодействия культур, а также в отношении динамических механических сигналов.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. Микрожидкостных Конструкция устройства и изготовление
- Микрожидкостных мастер-дизайн
- Дизайн и рисовать микрожидкостных шаблон канала с любой компьютерной системы автоматизированного проектирования (САПР).
Примечание: Как правило, САПР чертеж может быть отправлен в фотошаблон компании для производства фотошаблона. Микрожидкостных конструкция состоит из трех идентичных параллельных каналов, каждый со следующими размерами: 4 мм × 25 мм × 250 мкм (ширина × длина × высота) и установить 2 мм друг от друга. На обоих концах канала были разработаны с 127 ° углами для облегчения жидкости вход и выход (рис 1B). Канал , используемый в данном протоколе сообщалось в предыдущей публикации 13. - Промыть кремниевой пластины с ультразвуком (500 Вт / 42 кГц), в ацетоне, изопропанола и деионизированной воды в течение 15 минут каждый. Сушат пластины при использовании сжатого газа азота. Нагреть кремниевой пластины на горячей плите при 250 ° С в течение 15 мин полностью высохнутьЭто.
- Спин-пальто слой SU-8 2075 фоторезиста (125 мкм толщиной) на кремниевой пластине со скоростью прядения 1800 оборотов в минуту. Выпекать фоторезиста покрытием пластин непосредственно на горячей плите при температуре 65 ° С, а затем при температуре 95 ° C, для удаления избытка растворителя, в течение 5 и 25 мин, соответственно (в соответствии с инструкцией продукт SU-8).
- Повторите шаг 3 и спин-пальто еще один слой SU-8 2075 фоторезиста, чтобы получить конечную толщину 250 мкм. Выпечка фоторезиста покрытием пластины непосредственно на горячей плите при температуре 65 ° С в течение 7 мин и затем при 95 ° С в течение 30 мин. Медленно охладить пластины до комнатной температуры. Не охлаждать воздухом под давлением.
- Выравнивание и поставить фотошаблон непосредственно на верхней части пластины. Подвергать его воздействию УФ света в течение 20 секунд, чтобы сшивать образец.
- Выпекать пластины с фоторезистом при 65 ° С и 95 ° С на плитке в течение 5 и 12 мин, соответственно, для удаления растворителя для полимеризации (в соответствии с инструкцией продукт SU-8). Затем охлаждают до облаткукомнатная температура.
- Удалите несшитый фоторезиста путем погружения пластины в СУ-8 разработчика в течение 25 мин. Промыть пластины с изопропилового спирта и высушить его сжатым воздухом.
Примечание: Если млечный раствор наблюдается при промывая изопропанолом, что указывает на неполное развитие, погрузить пластину обратно в СУ-8 разработчика в течение более длительного времени разработки. - Поместите пластину на горячей плите при 180 ° С в течение 10 мин, чтобы излечить образец от потенциальных трещин. Выключите горячую плиту и медленно охладить пластины до комнатной температуры, оставив его на горячей плите.
- Добавляют несколько капель трихлор (1H, 1H, 2H, 2H-перфтороктилтриэтоксисилана) силана в флакон крышкой. Поместите флакон крышкой в вакуумной сушилке. Поместите пластину рядом с флакон крышкой, чтобы silanize пластины в течение 10 мин.
- Дизайн и рисовать микрожидкостных шаблон канала с любой компьютерной системы автоматизированного проектирования (САПР).
- изготовление чипа PDMS
- Оберните пластину с алюминиевой фольгой, чтобы создать держатель.
- Смешайте полидиметилсилоксана (PDMS) основы и отвердителя в соотношении 10: 1 массс помощью центробежного смесителя под функцией смешивания и дегазации. Поток смесь PDMS медленно на пластину на высоте около 5 мм. Дегазировать PDMS под вакуумом в течение 40 мин. Вылечить PDMS в духовке при температуре 65 ° С в течение 2 ч.
- Тщательно очистите плиту PDMS выключить мастера и обрезать PDMS вдоль каналов до тех пор, пока размер предметного стекла. Пробить PDMS с трепанобиопсия 1 мм, чтобы создать входы и выходы устройства.
- Очистите поверхность PDMS с воздухом под давлением и клейкой лентой для удаления пыли и мусора PDMS.
- Поместите плиту PDMS, с боковым каналом был обращен вверх, в очистителя плазмы. Поместите чистую предметное стекло в пылесос плазмы наряду с плитой PDMS.
- Лечить PDMS и предметное стекло под воздушной плазмы на высоком уровне РФ в течение 1 мин. Свяжите PDMS к стеклу, чтобы создать необратимую ковалентную связь.
- Поместите чип PDMS на горячей плите при 150 ° С в течение 1 ч, чтобы повысить прочность соединения и вернуть hydrophobicity из PDMS перед использованием.
2. Посев Микрожидкостных чип с первичными перитонеальном Мезотелиальной клеток (НРМС)
- Фибронектина покрытие микроканалов
- Стерилизовать микрожидкостных канал с 30 мкл 75% этанола. Удаления этанола и дважды полоскание с 30 мкл стерилизованной фосфатно-солевым буферным раствором (PBS) с использованием кончика пипетки. Тщательно аспирата PBS в каналах.
Примечание: Для того, чтобы свести к минимуму загрязнение, Микрожидкостных культура клеток должна быть тщательно проводить при полностью асептических условиях через использование колпака с ламинарным потоком. - Подготовьте 10 мкг раствора / мл фибронектина в бессывороточной M199: MCDB105 (1: 1) средний. Пипетировать решение вверх и вниз, с особой тщательностью, чтобы избежать образования пузырьков. Не вихрь.
- Медленно заполнить каждый канал с 30 мкл раствора фибронектина. Уплотнение каналы с лентой и инкубировать чип в течение ночи при температуре 4 ° С.
- Стерилизовать микрожидкостных канал с 30 мкл 75% этанола. Удаления этанола и дважды полоскание с 30 мкл стерилизованной фосфатно-солевым буферным раствором (PBS) с использованием кончика пипетки. Тщательно аспирата PBS в каналах.
- Культура НРМС в 10% фетальной бычьей сыворотки (FBS) , культуральной среды (M199: MCDB105 не с добавлением 10% FBS и 100 ед / мл пенициллина / стрептомицина) в атмосфере 5% СО 2 при температуре 37 ° С до 80% слияния.
- Промыть НРМС с 3 мл PBS и Trypsinize с 2 мл 0,05% трипсина / 0,01% раствора в течение 30 с ЭДТА (TE). Нейтрализовать с 4 мл 10% -ного среды ФБС культуры и спином вниз клеток при 1000 х г в течение 5 мин.
- Ресуспендируют НРМС в 2 мл 10% -ной среды ФБС культуры. Подсчитайте количество клеток с гемоцитометра и регулировать концентрацию клеток до 3,5 × 10 6 / мл.
- Подогреть фибронектина покрытием микрожидкостных чип в C инкубаторе 37 ° в течение 5 мин перед использованием. Полностью аспирация решение фибронектина.
- Медленно пипеткой 30 мкл НРМС суспензии в каждый канал. Уплотнение каналов с лентой и размещения устройств в CO 2 инкубаторе в течение ночи.
- Образование Рак яичников сфероида
- Поддерживать человека эпителиального рака яичников клеток линии SKOV-3 в 5% FBS культуральной среды (M199: MCDB105 с 5% FBS и 100 ед / мл пенициллина / стрептомицина) при 5% CO 2 при 37 ° С до экспериментов.
- Растворить 0,5% агарозы в стерилизованной воде при кипячении. Распределить 50 мкл раствора агарозы в каждую лунку 96-луночных планшетов. Оставьте пластины в вытяжном шкафу в течение 20 мин, чтобы позволить агарозном затвердевать; Затвердевший агарозы покрытие лунки может предотвратить адгезию клеток и указывает на то, что плиты готовы к использованию.
- Промыть клетками SKOV-3 с 3 мл PBS. Trypsinize с 2 мл раствора TE в течение 3 мин. Нейтрализовать с 4 мл 5% -ного среды ФБС культуры и спином вниз клеток при 1000 х г в течение 5 мин.
- Подсчитайте число SKOV-3 клеток с помощью гемоцитометра и клетки вновь суспендируют в 5% FBS культуральной среде при плотности 5000 клеток / мл. Трansfer 200 мкл суспензии клеток в каждую агарозы-лунке и культивированию в 5% СО 2 при 37 ° С в течение 48 ч.
- Рак сфероид загрузки
- Передача рака сфероиды в центрифужную пробирку на 50 мл предварительно смачивать 1 мл бессывороточной среды и спином вниз со скоростью 750 мкг в течение 5 мин.
Примечание: Предварительно смачивают пипеток и центрифужные пробирки могут предотвратить нежелательное присоединение сфероида на центрифужные пробирки. - Приготовьте 2,5 мкг / мл раствора 5-chloromethylfluorescein диацетатной (CMFDA) в бессывороточной M199: MCDB105 среду. Ресуспендируют рака сфероиды в 1 мл раствора CMFDA и инкубировать при 37 ° С в течение 30 мин. Центрифуга при 750 мкг в течение 5 мин.
- Промыть сфероидов рака с 2 мл не содержащей сыворотки среды и центрифуге при 750 мкг в течение 5 мин. Повторите этот шаг в два раза для удаления оставшейся флуоресцентного красителя из среды.
Примечание: Флуоресцентный сигнал может быть сохранен в сфероиды в течение более чем 96 часов. - Ресуспендируют раксфероиды в бессывороточной M199: MCDB105 средних и подсчитать число сфероид с помощью гемоцитометра. Регулировка концентрации до 2000 сфероидов / мл не содержащей сыворотки среде.
- До сфероида загрузки, медленно вводят 100 мкл бессывороточной M199: MCDB105 среды, чтобы смыть не-придерживалась мезотелиальной клетки внутри каналов.
Примечание: быстрый впрыск, стремление, или образование пузырей приведет к отрыву мезотелиальной монослоя. - Нагрузка 30 мкл флуоресцентного меченных сфероида суспензии в каждый канал. Поместите микрожидкостных чип в CO 2 инкубаторе.
- Передача рака сфероиды в центрифужную пробирку на 50 мл предварительно смачивать 1 мл бессывороточной среды и спином вниз со скоростью 750 мкг в течение 5 мин.
- Платформа Перфузия сборки и совместного культивирования
- Приложить шприц с загруженными свежей, свободной от сыворотки M199: MCDB105 среде до 1 м длиной трубы.
- Поместите шприц на шприцевой насос и закрепить поршень и корпус шприца. Установить шприцевой насос в горизонтальном положении на той же высоте, что и микрожидком чип внутри инкубатора.
NОТЕ: Число и размер шприцев зависит от количества используемых каналов и продолжительность эксперимента. - Быстро влить всю трубку со средой, нажав и удерживая кнопку перемотки вперед, пока среда не переливается трубку.
- Запуск инъекции с требуемой скоростью потока. Оценить напряжение сдвига стены, используя следующее уравнение:
где τ представляет собой напряжение сдвига стенки внутри камеры, ǫ = скорость потока, р = вязкость (0,01 г) -1 КМВ; Высота камеры ч = расход, а W = ширина потока камеры. - Подсоедините силиконовую трубку к впускному отверстию канала. Поместите избыточную впускной трубки в инкубаторе, чтобы гарантировать, что среда, подогревают перед тем вводили в каналы. Для облегчения соединения между трубой и каналом, соответствующие разъемы могут быть выбраны. Примечание: Осторожно, чтобы не вводить какие-либо пузырь на СиринGE, трубы и соединения.
- Подключение выхода канала в конической трубе 50-мл для сбора вытекания среды с короткой выходной трубкой.
Примечание: Полная динамическая система совместного культивирования показана на рисунке 1D.
4. Наблюдение НРМС и рака сфероидов после перфузии
- Обратите внимание на НРМС и рак сфероиды с ярко-поле или флуоресцентного микроскопа и делать снимки через 1 ч перфузии.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Используя этот протокол, микрожидком платформа была создана для моделирования яичников сфероидов рака с мезотелиальной клеток в условиях гидродинамической. Первичные перитонеальные мезотелиальные клетки человека культивировали в микроустройство в течение 16 ч и наблюдают под ярко-поле микроскопа. Как показано на фигуре 2А, нижний канал был успешно покрыт монослоем НРМС. Важно отметить, что образование пузырьков во время фибронектина или НРМС кучность приведет к отказу канала покрытия. Благодаря неприлипающими суспензионной культуре, многоклеточные сфероиды с диаметром около 100 мкм, которые близки по размерам к найденным в асцит пациентов, были созданы и помечены зеленым флуоресцентным красителем, CMFDA. Сфероиды затем переносили в НРМС покрытием микроканалов и остались в виде суспензии. Клеточные морфологией наблюдались под микроскопом и изображения были захвачены (Рис 2Б). Флуоресцентные меченных сфероиды рак можно легко отличить от мезотелиальной клетки под флуоресцентным микроскопом (фиг.2с).
Рисунок 1. Динамический 3D перитонеального микроустройство для моделирования рака яичников многоклеточных сфероида поведений. (A) Принципиальная схема микрожидком чипа , используемого для совместного культивирования яичников сфероидов рака с НРМС при условии потока. (Б) Принципиальная схема , показывающая конструкцию Микрожидкостных каналов. (C) Фотография микрожидком чипа , используемого в протоколе, с его каналами вливали раствор красителя для четкой визуализации. Bar = 1 см. (D) Фотография показывает экспериментальную установку. Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию Oе эта цифра.
Рисунок 2. Образы рака яичников Сфероид-мезотелиальной клетки Dynamic Co-культуры модели. (А) Изображение монослое НРМС , выращенной в микрожидком канале. (B) Изображения яичников сфероидов рака в микрожидком канале , покрытого перитонеального мезотелиальной клеток в условиях фазового контраста микроскопии (левая панель) или (С) флуоресцентной микроскопии (зеленый, CMFDA; правая панель). Бар = 100 мкм. Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Этот анализ предлагает гибкую и физиологически соответствующую модель, которая может быть объединена с различными биохимическими и клеток на основе анализов, в том числе, но не ограничиваясь ими, анализов адгезии, мезотелиальной анализов очистки, а также скрининга лекарственных средств. Он может быть применен к оценке влияния внутрибрюшинного микросреды на прогрессирование рака. Тем не менее, некоторые экспериментальные условия , возможно , необходимо оптимизировать, в зависимости от целей проекта (например, количество НРМС и рака сфероидов , посеянных на канал, во время совместного культуры и т.д.). Другие типы клеток в внутрибрюшинного микросреды, такие как фибробласты, эндотелиальные клетки, или клетки иммунной системы, также могут быть включены в систему с целью изучения существенных взаимодействий между яичниках сфероидов рака и соседних клеток. Другие компоненты ECM, такие как ламинин, витронектина, или коллаген, также могут быть использованы. Одним из недостатков этого протокола, который, возможно, необходимо учитывать, что, в то время какСочетание питательных веществ и пополнению напряжения сдвига напоминает , что видели в естественных условиях, не существует отдельного контроля питательных веществ и пополнению напряжения сдвига в нашей нынешней системе. Кроме того, такие методы, как на чипе трипсином в сочетании с флуоресцентной активированный сортировки клеток будет необходимо отдельно собирать клеток рака яичников и НРМС для дальнейших молекулярных исследований о различных типах клеток.
Этот метод обладает рядом преимуществ по сравнению с традиционными подходами. Во- первых, 3D совместно культуры лучше имитирует в естественных условиях межклеточной коммуникации между клеток рака яичников и мезотелиальной клеток. Во- вторых, клетки культивируют в жидкостном потоке , но не в статическом состоянии, генерируя клеточный ответ , который потенциально представитель ситуации в естественных условиях 12, 13. Кроме того, поток текучей среды может быть точно контролироваться, имитируя hydrodynamiC условия на разных стадиях развития опухоли.
Таким образом, динамический 3D-рак яичников Мезотелия модель совместного культивирования, представленный здесь обеспечивает гибкую структуру для поведения опухоли моделирование в брюшную полость. С помощью этой модели взаимодействие между раковыми клетками и мезотелиальными клетками при динамическом гидродинамического состояния могут быть всесторонне проанализированы. Это может значительно продвинуть наше понимание основных механизмов метастатической прогрессии, а также может способствовать развитию терапевтического.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Авторы не имеют ничего раскрывать.
Acknowledgments
Эта работа была поддержана исследовательских грантов Совета Гонконга (гранты 17122014, C1013-15G, 719813E и 17304514). АСТ Вонг является получателем Croucher старшего научного братства.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Silicon wafer | University wafer | #1196 | 100 mm |
| SU-8 2075 photoresist | Microchem | ||
| SU-8 developer | Microchem | 108-65-6 | |
| Trichloro (1H, 1H, 2H, 2H-perfluorooctyl) silane | Sigma | 448931 | |
| Sylgard 184 | Dow Corning | 1673921 | Polydimethylsiloxane (PDMS) + curing agent kit |
| Biopsy punch | Miltex | 33-31AA | 1 mm diameter |
| Plasma cleaner | Harrick Plasma | PDC-002 | |
| Polyethylene tubing | SCI | BB31695-PE/5 | 0.86 mm (inner diameter) |
| Syringe | Terumo | ||
| Syringe pump | Longer precision pump | LSP01-2A | |
| Medium 199 | Invitrogen | 31100-035 | Add 2.2 g/L sodium bicarbonate |
| MCDB 105 Medium | Sigma | M6395 | |
| Fetal bovine serum (FBS) | Hyclone | SH30068.02 | |
| Penicillin/streptomycin | Invitrogen | 15070-063 | |
| Trypsin EDTA solution | Gibco | 25300-054 | 0.05% Trypsin - 0.01% EDTA, phenol red |
| Fibronectin human | BD | 354008 | |
| Agarose | Invitrogen | 15510-027 | |
| 5-chloromethylfluorescein diacetate | Life technologies | C7025 | Green CMFDA |
| CO2 incubator | SANYO | MCO-18AIC | |
| Centrifuge | Hitachi | CT15RE | |
| Fluorescent microscope | Nikon | Model: 80i or ECLIPSE Ti; software: SPOT | |
| SKOV-3 | Gift from Dr. N Auersperg (University of British Columbia) |
References
- Jemal, A., et al. Global cancer statistics. CA: Cancer J. Clin. 61, 69-90 (2011).
- Burleson, K. M., et al. Ovarian carcinoma ascites spheroids adhere to extracellular matrix components and mesothelial cell monolayers. Gynecol. Oncol. 93, 170-181 (2004).
- Chau, W. K., Ip, C. K., Mak, A. S., Lai, H. C., Wong, A. S. c-Kit mediates chemoresistance and tumor-initiating capacity of ovarian cancer cells through activation of Wnt/beta-catenin-ATP-binding cassette G2 signaling. Oncogene. 32, 2767-2781 (2013).
- Zhang, S., et al. Identification and characterization of ovarian cancer-initiating cells from primary human tumors. Cancer Res. 68, 4311-4320 (2008).
- Tang, M. K. S., Zhou, H. Y., Yam, J. W. P., Wong, A. S. T. c-Met overexpression contributes to the acquired apoptotic resistance of nonadherent ovarian cancer cells through a cross talk mediated by phosphatidylinositol 3-kinase and extracellular signal-regulated kinase 1/2. Neoplasia. 12, 128-144 (2010).
- Ksiazek, K., et al. Senescent peritoneal mesothelial cells promote ovarian cancer cell adhesion: the role of oxidative stress-induced fibronectin. Am. J. Pathol. 174, 1230-1240 (2009).
- Hafter, R., Klaubert, W., Gollwitzer, R., Vonhugo, R., Graeff, H. Crosslinked Fibrin Derivatives and Fibronectin in Ascitic Fluid from Patients with Ovarian-Cancer Compared to Ascitic Fluid in Liver-Cirrhosis. Thromb Res. 35, 53-64 (1984).
- Kenny, H. A., et al. Mesothelial cells promote early ovarian cancer metastasis through fibronectin secretion. J. Clin. Invest. 124, 4614-4628 (2014).
- Jain, R. K. Normalization of tumor vasculature: An emerging concept in antiangiogenic therapy. Science. 307, 58-62 (2005).
- Chang, S. F., et al. Tumor cell cycle arrest induced by shear stress: Roles of integrins and Smad. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 105, 3927-3932 (2008).
- Rutkowski, J. M., Swartz, M. A. A driving force for change: interstitial flow as a morphoregulator. Trends Cell Biol. 17, 44-50 (2007).
- Rizvi, I., et al. Flow induces epithelial-mesenchymal transition, cellular heterogeneity and biomarker modulation in 3D ovarian cancer nodules. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 110, E1974-E1983 (2013).
- Ip, C. K., et al. Stemness and chemoresistance in epithelial ovarian carcinoma cells under shear stress. Sci. Rep. 6, 26788 (2016).
- Avraham-Chakim, L., et al. Fluid-flow induced wall shear stress and epithelial ovarian cancer peritoneal spreading. PloS one. 8, e60965 (2013).
- Burkhalter, R. J., et al. Peritoneal mechanobiology and metastatic success in epithelial ovarian cancer. Faseb Journal. 26, (2012).
- Lane, W. O., et al. Parallel-plate flow chamber and continuous flow circuit to evaluate endothelial progenitor cells under laminar flow shear stress. Journal of visualized experiments : JoVE. , (2012).
- Botta, G. P., Manley, P., Miller, S., Lelkes, P. I. Real-time assessment of three-dimensional cell aggregation in rotating wall vessel bioreactors in vitro. Nat. Protoc. 1, 2116-2127 (2006).
- Ismadi, M. Z., et al. Flow characterization of a spinner flask for induced pluripotent stem cell culture application. PloS one. 9, e106493 (2014).
- Yu, W., et al. A microfluidic-based multi-shear device for investigating the effects of low fluid-induced stresses on osteoblasts. PloS one. 9. 9, e89966 (2014).
