هنا، نقدم بروتوكول للتحقيق في توزيع المضيف الأنسجة، واسطة نقل، والتأثير على اللياقة البدنية المضيف لdensovirus ضمن الأنواع حرشفية الأجنحة، ودودة القطن. ويمكن أيضا أن هذا البروتوكول أن تستخدم لدراسة التفاعل بين الفيروسات التي تنتقل عن طريق الفم الأخرى والمضيفين الحشرات بها.
وقد تم اكتشاف العديد من الفيروسات الجديدة في تستضيف الحيوانات باستخدام تقنيات التسلسل من الجيل التالي. سابقا، أبلغنا فيروس المنفعة المتبادلة، Helicoverpa armigera densovirus (HaDV2)، في الأنواع حرشفية الأجنحة، ودودة القطن، Helicoverpa armigera (هوبنر). هنا، نحن تصف البروتوكولات التي تستخدم حاليا لدراسة تأثير HaDV2 على مضيفه. أولا، ونحن إنشاء مستعمرة القطن دودة اللوز خال من HaDV2 من زوج تربية واحد. ثم، فإننا تطعيم شفويا بعض ذرية اليرقات حديثي الولادة مع HaDV2 التي تحتوي على السائل التي تمت تصفيتها لإنتاج مستعمرتين مع نفس الخلفية الوراثية: واحد HaDV2 المصابة، والآخر غير مصاب. بروتوكول للمقارنة بين المعلمات جدول الحياة (على سبيل المثال، اليرقات، العذراء، وفترات الكبار والخصوبة) بين وتقدم أيضا الأفراد المصابة HaDV2 و-uninfected، وكذلك البروتوكولات لتحديد التوزيع المضيف الأنسجة وكفاءة انتقال HaDV2. هذه البروتوكولات التعليم الجامعييونيتبول أيضا تكون مناسبة للتحقيق في آثار الفيروسات الأخرى التي تنتقل عن طريق الفم على المضيفين الحشرات، وتستضيف حرشفية الأجنحة على وجه الخصوص.
في العقود القليلة الماضية، وتطوير تكنولوجيا التسلسل مثل الجيل المقبل من التسلسل (خ ع) سهلت اكتشاف العديد من DNA و RNA الفيروسات الجديدة والفيروسات وخاصة غير مسببة، ولكن أيضا عزلة جديدة من الفيروسات المعروفة سابقا 1، 2، 3، 4، 5، 6، 7، 8، 9، 10، 11، 12. في نموذج حي ذبابة الفاكهة، تم اكتشاف أكثر من 20 جينوم فيروس جزئية جديدة باستخدام تقنيات ميتاجينومية 13. العديد من متواليات الفيروسية، بما في ذلك الفيروسات الجديدة، كما تم التعرف في غيرها من الحشرات، مثل النحل والعسل، ومosquitoes، psyllids الحمضيات الآسيوية، اليعسوب، والأنواع حرشفية الأجنحة متعددة 14 و 15 و 16 و 17 و 18 و 19 و 20 و 21.
في المستقبل، فإنه يمكن توقع أن أكثر الفيروسات رواية سوف يتم اكتشافها في الحشرات باستخدام هذه التقنيات المتقدمة. وبالتالي، لدينا فهم التفاعل فيروس المضيف قد تتغير وفقا ل6 و 9. على سبيل المثال، تعتبر التفاعلات الفيروسات المضيف أن تكون أكثر تعقيدا مما كان يعتقد سابقا، لأنه يتم تعريف العديد من الفيروسات الجديدة كشركاء المنفعة المتبادلة بدلا من مسببات الأمراض صارمة (22). على سبيل المثال، DplDNV densovirus المنفعة المتبادلة في Dysaphis plantaginea الحث على ضعهن المجنح و يزيد التنقل، وتسهيل تشتت المضيفة، وكذلك الفيروس 23. وعلاوة على ذلك، وقد وصفت الفيروسات المنفعة المتبادلة فيما يتعلق بالصحة الثدييات، والجفاف وتحمل البرودة من النباتات، وتأثير الالتهابات البكتيرية (24). يظهر سينيكا ادي فيروس-001 للتوسط سمية الخلايا انتقائية تجاه الخلايا السرطانية مع سرطان الغدد الصم العصبية يضم 25. التهاب الكبد A العدوى بالفيروس قمع تكرار التهاب الكبد الوبائي وقد تؤدي إلى الشفاء من التهاب الكبد C 26. هربس الكمون يمنح الحماية التكافلية من عدوى بكتيرية 27. بروتين سكري مغلف الإنسان الارتجاعي الذاتية هيرفي-W يدفع المقاومة الخلوية لالطحال فيروس نخر 28. ويشارك Curvularia التسامح الحراري فيروس (CThTV) من نابوت داخلي الفطرية في التفاعل المنفعة المتبادلة بين هذه الفطريات والأعشاب الذعر الاستوائيةالمرجع "> 29. وبالتالي، معرفة التفاعلات بين الفيروسات المكتشفة حديثا ومضيفيهم أن يولد وجهات نظر جديدة في علم الأحياء وإدارتها. ومع ذلك، فإن فيروسات جديدة، وخاصة الفيروسات سرية تظهر أي علامات واضحة نموذجية من العدوى الحادة، يكون نادرا تم التحقيق فيها، ونحن بحاجة إلى خطوط الأنابيب وبروتوكولات للتحقيق في آثار الفيروسات المكتشفة حديثا على مضيفيهم.
سابقا، لدينا الإبلاغ عن انتشار جديدة monosense densovirus Helicoverpa armigera densovirus (HaDV2) في دودة اللوز القطن، Helicoverpa armigera، وقدم أدلة على وجود علاقة المنفعة المتبادلة بين HaDV2 ودودة القطن 30 و 31. في هذه الورقة، فإننا سوف تصف البروتوكول مختبر لدراسة بالتفصيل التفاعل بين HaDV2 والمضيف القطن دودة اللوز لها. قد يكون بروتوكول المعروضة هنا أيضا ذات أهمية كبيرة للباحثين دراسة صأوله من الفيروسات الأخرى التي تنتقل عن طريق الفم، وخاصة في الآفات حرشفية الأجنحة.
في العقود القليلة الماضية، ركزت معظم الدراسات على التفاعلات الحشرات الفيروسات على الصحة عسل النحل 34، 35، 36، ناقلات الأمراض للإنسان 37، مصنع الفيروسات 38، وبعض الفيروسات المسببة للأمراض الحش…
The authors have nothing to disclose.
وأيد هذا العمل من قبل البرنامج الوطني مفتاح الأساسي بحوث الصين (رقم 2013CB127602) وصندوق العلوم للالمجموعات البحثية الإبداعية من مؤسسة العلوم الوطنية الصينية (رقم 31321004).
24-well plate | Corning | 07-200-740 | Multiple suppliers available. |
DNA extraction kit | TIANGEN | DP304-03 | Multiple suppliers available. |
thermal cycler | Veriti; Applied Biosystems | 4375786 | |
PBS | Corning | 21-040-CV | |
0.22 µm membrane filter | Millipore | SLGS025NB | |
pEASY-T Cloning Vector | TransGen, Beijing, China | CT301-02 | |
Tweezers | IDEAL-TEK | 2.SA | |
Premix Ex Taq (Probe qPCR) | Takara | RR390A | |
Probes | Invitrogen | Custom order | |
Primers | Invitrogen | Custom order | |
microspectrophotometry NanoDrop 2000c | Thermo scientific | not available | |
7500 Real-Time PCR system | Applied Biosystems | not available | |
stereomicroscope SZX-16 | Olympus | not available | |
sucrose | Multiple suppliers available. | ||
vitamin complex | Multiple suppliers available. |